金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别

4522023肉兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验牛群孟庆福黄敏董旭陈小密王华*周孝琼*（龙岩学院生命科学学院福建龙岩364000）摘要为了诊断福建省龙岩市某兔场乳房炎的具体病原，试验对兔脓肿液进行细菌分离纯化培养、革兰氏染色、显微镜观察、自动微生物鉴定系统鉴定、16S rDNA序列测定以及对所分离菌株进行药敏试验和耐药性分析。

结果表明，所分离菌株为金黄色葡萄球菌。

药敏试验结果显示，分离的金黄色葡萄球菌对青霉素G、青霉素钾、氨苄西林、红霉素、庆大霉素和磺胺甲氧嘧啶高度敏感；对磺胺异亚唑中度敏感；对环丙沙星、卡那霉素、克林霉素等6种药物不敏感。

关键词肉兔金黄色葡萄球菌16S rDNA药敏试验文献标识码：A文章编号：1003-4331（2023）02-0017-04Isolation,identification and drug sensitivity test of Staphylococcus aureus from meat rabbitsNiu Qun Meng Qingfu Huang Min Dong Xu Chen Xiaomi Wang Hua*Zhou Xiaoqiong*(School of Life Sciences,Longyan University,Fujian Longyan364000)Abstract In order to diagnose the specific pathogen of mastitis in a rabbit farm in Longyan city,Fujian province,the experiment was conducted to isolate and purify the bacteria from rabbit abscess fluid,observe it with a Gram staining microscope,identify it with an automatic microbial identification system,determine the16S rDNA sequence,and analyze the drug sensitivity and drug resistance of the isolated strains.The results showed that the isolated strains were Staphylococcus aureus.The drug sensitivity test showed that the isolated strains were highly sensitive to penicillin G,penicillin potassium,ampicillin,erythromycin,gentamycin and sulfamethoxazole; moderately sensitive to sulfamethoxazole;It is insensitive to6drugs such as ciprofloxacin,kanamycin and clindamycin.Key words Meat rabbit Staphylococcus aureus16S rDNA Drug susceptibility test葡萄球菌病是由葡萄球菌属致病性葡萄球菌感染引起人和动物多种疾病的总称。

一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。

二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。

（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。

（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。

2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。

（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。

（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。

（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。

四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。

2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。

3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。

4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。

5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。

五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。

实验金黄色葡萄球菌的分离培养一．实验目的；1．掌握Baird-Parker 培养基的配制方法2．掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法二．实验内容1 原理；Baird-Parker 培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。

但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。

利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。

2 仪器与试剂250ml 三角瓶灭菌锅量筒Baird-Parker 氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤3 操作步骤3.1 培养基配制Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml, 121 C高压灭菌15分钟,冷至50C左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml ，摇匀后倾入无菌平皿。

7.5% 氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g 蒸馏水1000mlph7.4 ）将上述成分加热溶解，调节pH,分装，每瓶225 mL, 121 C高压灭菌15 min。

3.2 增菌及分离培养3.2.1挑取金黄色葡萄球菌接种于7.5%NaCI肉汤培养基内，置于（37C）恒温箱中培养6-8h.3.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板，于36 C±1 C培养18 h〜24h 或45 h 〜48 h。

3.3 观察菌落形态4、结果判定根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类三、实验结果实验金黄色葡萄球菌的染色镜检一．实验目的; 掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。

二．实验内容1 原理; 革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。

2 仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml 将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

实验金黄色葡萄球菌的检验实验5金黄色葡萄球菌的检验1目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。

此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。

因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。

绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA 酶。

3实验材料3.1检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。

3.3培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。

3.5仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。

4检样程序5操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。

若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。

5.1.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。

金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。

一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。

2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。

3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。

二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。

该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。

实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。

三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。

2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。

3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。

四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。

2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。

（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。

3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。

（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。

4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。

金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。

本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。

二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。

2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。

3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。

2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。

临床样本：直接进行涂片或适当稀释。

2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。

3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。

4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。

观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。

5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。

7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。

五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。

在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。

实验检测牛奶中是否感染有金黄色葡萄球菌并鉴定实验目的1、认识金黄色葡萄球菌；2、学习运用PCR方法检测金黄色葡萄球菌。

实验原理金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)属于葡萄球菌属（Staphylococcus），无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。

微生物学方法是鉴定牛奶中病原菌的“金标准”，传统方法是进行细菌分类培养，通过生化试验、血清型、各种酶试验分析细菌的表型特点。

对牛奶中病原微生物培养需要很长时间用生化试验的方法进行种属特异性的鉴定至少需要48h以上传统的鉴定技术时间较长，从国外进口诊断试剂费用相对较高。

因此，本文建立了直接从牛奶中鉴别病原菌的PCR检测技术，这种快速、准确、有效、直接从牛奶中检测致病菌的方法将为检验检疫、食品安全质检系统以及兽医检疫提供技术支撑，从而为乳制品病原菌的检测提供一定的帮助。

建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

方法是根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物，通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法。

结果是与细菌的常规分离方法相比，PCR 法敏感性高与其它型葡萄球菌无交叉反应，特异性达100%，检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/L（纳克每升），能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定，可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测。

所以，建立了一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法。

实验仪器、试剂与材料仪器：冰箱、摇床、显微镜、PCR反应管、PCR仪、微量加样器、高速离心官、水平电泳槽、恒压电泳仪和凝胶自动成像系统、紫外检测仪、电热恒温水浴槽。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。

金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。

以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。

金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。

样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。

分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。

金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。

培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。

常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。

金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。

培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。

鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。

鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。

形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。

金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。

生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。

一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。

分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。

金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。

金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。

金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。

金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。

普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。

二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。

三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。

1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。

2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。

（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。

金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。

3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。

（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。

金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。

金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，包括肺炎。

金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的疾病，正确的鉴别诊断对于及时治疗至关重要。

下面将介绍金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断方法。

症状金黄色葡萄球菌肺炎的症状可以包括：•发热•咯痰•咳嗽•胸痛•呼吸困难这些症状也可能出现在其他呼吸系统感染中，因此需要进一步的鉴别诊断。

临床表现金黄色葡萄球菌肺炎患者常有肺实变的体征，如叩诊浊音、气管移位及胸膜叩击痛等。

另外，患者可能出现胸部X线片上的阳性表现，包括肺实变灶或渗出影。

实验室检查金黄色葡萄球菌肺炎的确诊通常需要从痰液或血液中分离出金黄色葡萄球菌。

痰培养和血培养是常用的方法，通常在细菌培养基上施加青霉素试验可以确定金黄色葡萄球菌。

诊断注意事项金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断中需注意以下几点：•与其他细菌性肺炎病原菌进行鉴别，如军团菌、肺炎链球菌等。

•注意与病毒性肺炎的区分，病毒性肺炎患者常出现明显的呼吸道症状，如流感样症状、喉炎等。

•考虑与肺结核、真菌感染等进行鉴别，这些疾病也可能引起相似的症状。

治疗金黄色葡萄球菌肺炎的治疗通常包括使用青霉素类抗生素，如青霉素G或青霉素V。

对于对青霉素耐药的金黄色葡萄球菌感染则需要选择其他抗生素治疗。

结语金黄色葡萄球菌肺炎的鉴别诊断对于及时治疗和防止病情加重至关重要。

医生需要根据患者的症状、临床表现和实验室检查结果来进行综合判断，明确诊断并制定合理的治疗方案。

平时要注意保持良好的卫生习惯，及时就医，有助于预防金黄色葡萄球菌肺炎等呼吸系统感染疾病的发生。

金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。

饲料中金黄色葡萄球菌的分离与鉴定李宗辉【摘要】随机采取民和某饲料厂的仔猪颗粒料40份,进行常规的细菌分离培养,结果分离出金黄色葡萄球菌阳性菌株18株,阳性率高达45％ (18/40),表明该仔猪颗粒料中的金黄色葡萄球菌带菌率较高,应引起有关部门的重视.【期刊名称】《青海畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2017(047)004【总页数】3页(P18-20)【关键词】饲料;金黄色葡萄球菌;分离鉴定【作者】李宗辉【作者单位】青海省民和县畜牧兽医工作站,民和,810800【正文语种】中文【中图分类】S855.1+1Abstract:40 samples of foodstuffs were collected by random method in Minhe foodstuff factory.These samples were isolated and identified by routine bacterial isolation and culture technique. The results showed that 18 positive strains of Staphylococcus aureus were obtained, positive rate is 45%(18/40),which indicates that there is a lot of Staphylococcus aureus in the foodstuffs, the situation must be taken something seriously by relative government department.Key words: Foodstuffs；Staphylococcus aureus；Isolation and Identification金黄色葡萄球菌作为一种引起食物中毒和造成人及动物感染的主要病原菌，可引起局部化脓感染。

实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定一、实验目的金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到;因而,食品受其污染的机会很多;近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌;金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多;为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害,我们要分离出它们并研究;二、实验原理典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径左右,显微镜下排列成葡萄串状;金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性;金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长,干燥环境下可存活数周;平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1—2mm;血平板菌落周围形成透明的溶血环;金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10—15%NaCl肉汤中生长;可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气;甲基红反应阳性,V—P反应弱阳性;许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶;金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感;对碱性染料敏感,十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长;三、实验材料和设备1.培养基牛肉膏蛋白胨培养基13%NaCl：牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠130g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min后倒平板;肉汤培养基：酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠10g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min;甲苯胺兰-DNA平板2.试剂磺胺类药物、革兰氏染液3.仪器和设备显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环;四、实验方法金黄色葡萄球菌的分离：1.称取5g土样,在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中,加入50ml蒸馏水,再加入200ul磺胺类药物,振荡10min,使土样充分混匀;利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性,杀死其他细菌;2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中,30℃,200rpm,24h;3.取培养好的菌液,按梯度稀释法稀释土壤悬液,依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后,分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上,置于37℃培养箱中培养24h;利用高盐培养基抑制其他细菌的生长,从而分离金黄色葡萄球菌;金黄色葡萄球菌的鉴定：1.菌落形态：菌落较小,较湿,较透明,边缘整齐,隆起;2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列、无芽孢、荚膜,直径—1um;3.血浆凝固酶试验：吸取兔血浆与金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性;同时做阴阳性对照;4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性;本试验金黄色葡萄球菌为阳性;。

固体金黄色葡萄球细菌培养接种法结果观察1、用普通平板，从脓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。

2、在显微镜下观察时，这两种细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。

3、结合菌落的颜色，可以初步断定，这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。

4、通过血浆凝固酶试验，观察到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒性物质，说明为凝固酶阳性；白色菌落则没有凝集反应，说明其为凝固酶阴性。

5、最后进行的是药敏试验，从培养基上可以观察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同。

其中青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。

对粪便中细菌的分析讨论1、用伊红美蓝平板分离菌落时，可以从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落。

2、在显微镜下观察时，这两种菌均为G-杆菌，排列不规则，从形态上不能鉴别是什么细菌。

3、经糖发酵试验，可以观察到，紫黑色的细菌能使葡萄糖和乳糖的试管变色和产生气体；粉红色的细菌只能使葡萄糖的试管变色。

4、经半固体动力试验，观察到紫黑色的细菌使半固体培养基成浑浊状态，粉红色的细菌只在接种针插入的方向聚集。

5、综上所述，紫黑色的细菌为大肠埃希菌，粉红色的细菌为志贺菌。

6、最后进行药敏试验时，发现大肠埃希菌对青霉素不敏感，对庆大霉素和链霉素都敏感。

综上所述，脓汁标本中分离得黄色菌落为金黄色葡萄球菌，白色菌落为白色葡萄球菌，致病菌为金黄色葡萄球菌；粪便标本中分离得紫黑色菌落为大肠埃希菌，粉红菌落为福氏志贺菌，致病菌为福氏志贺菌。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、大肠埃希菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS琼脂、伊红-美蓝平板等），选择培养基时应根据需要尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌—金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。