实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定

实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。

此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。

因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。

绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。

3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。

3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。

3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。

4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。

若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。

5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

2016年秋季学期微生物学实验报告1、了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理。

2、熟悉常见病原性球菌及常见肠道致病菌的检查程序，掌握各检查实验操作。

3、了解脓汁和粪便标本中病原菌的检测的临床应用及临床意义。

4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。

5、熟悉抗生素对于不同细菌的作用机理。

6、树立牢固的无菌观念。

二、实验器材：1、培养基：营养琼脂平板、伊红美兰平板、斜面、营养肉汤、半固体琼脂2、标本：脓汁标本、粪便标本、空气细菌培养物、手指皮肤细菌培养物、细菌分离培养物、斜面培养物、营养肉汤培养物、药敏试验培养物3、器材：1）培养基的制备：天平、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、试管、试管架、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、干粉培养基、酒精灯、火机。

2）细菌的分离培养：碘酒棉球，酒精棉球、眼科镊子、接种环。

3）细菌的纯培养: 接种环。

4）细菌的形态学检查：生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、结晶紫染液、芦戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红、染色架、接种环。

5）细菌的生化试验:糖发酵管、抗菌素（青霉素、链霉素、庆大霉素）纸片、眼科镊子、接种针、接种环、小砂轮、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、载玻片。

6）结果分析：尺子。

三、方法与步骤1、营养肉汤培养基的制备取1.1g营养肉汤粉末于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，摇晃锥形瓶使其几乎完全溶解。

将锥形瓶置于电陶炉上加热至沸腾，观察固体是否完全溶解，冷却后分装至试管内。

2、细菌的分离培养（平板划线分离法）甲→脓汁标本→营养琼脂平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板1）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。

2）取标本3～5ul。

3）转动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。

4）接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条5）甲、乙烧掉接种环上多余的标本。

一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。

2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。

3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。

二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。

该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。

实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。

三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。

2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。

3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。

四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。

（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。

2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。

（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。

3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。

（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。

4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。

金黄色葡萄球菌检验1. 概述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境和人体皮肤表面。

虽然大多数的金黄色葡萄球菌对人体无害，但一些菌株具有致病性，可以引起多种感染，包括皮肤感染、肺炎、血流感染等。

因此，对金黄色葡萄球菌的检验具有重要意义，能及早发现和控制感染的传播。

本文将介绍金黄色葡萄球菌检验的一些常用方法和技术。

2. 菌种的采集和处理2.1 采集样本金黄色葡萄球菌通常从病人的感染部位或者其他潜在的感染源采集样本。

常见的样本类型包括：皮肤切口分泌物、鼻拭子、血液、尿液等。

2.2 样本处理在进行金黄色葡萄球菌的检验之前，需要对采集的样本进行适当的处理。

处理方法取决于样本的类型和检验的目的。

常见的处理步骤包括：•鼻拭子：将鼻拭子放置在含有缓冲液的管中，将管子旋紧，并轻轻摇动一段时间，使细菌尽可能地释放到缓冲液中。

•血液：采集静脉血样本，将血液转移到无菌包装的管中，并立即将管子送到实验室进行处理。

•皮肤分泌物：使用无菌棉签或拭子采集患者分泌物，放入管中并送到实验室。

3. 常用的金黄色葡萄球菌检验方法3.1 培养方法金黄色葡萄球菌通常通过培养方法来进行检验。

常用的培养基包括牛肉肝脏套，Columbia血琼脂和Mannitol盐琼脂。

在封闭器具中加热灭菌后，将菌种均匀涂布于培养基上，并在适宜的温度（通常为37摄氏度）下孵育24-48小时，观察是否有金黄色小圆菌落的形成。

3.2 利用PCR技术检测PCR（聚合酶链式反应）是一种敏感且快速的方法，可以检测金黄色葡萄球菌的DNA。

通过PCR技术，可以快速鉴定金黄色葡萄球菌的存在和菌株的特性。

这种方法特别适用于高致病性金黄色葡萄球菌的检测。

3.3 人类源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测金黄色葡萄球菌通常通过其特有的毒力基因来引起感染。

通过PCR技术，可以检测和鉴定菌株中的毒力基因。

常见的毒力基因包括PVL、TSST-1、ETA等。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：14临床输血学号： 3140704004姓名：宁立军组别：第七组合作者：牛恺文黄可秀朱晋辉实验室：第六实验室指导老师：罗军实验的得分：一、实验目的通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段区别和鉴定脓汁标本中和粪便标本中细菌，检测病原微生物，并进行细菌药物敏感性试验。

二、实验器材1器材接种环接种针打火机马克笔酒精灯电热恒温培养箱物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子玻片吸水纸2 试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液 95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片兔血浆福氏志贺菌诊断血清三、方法与步骤1培养基制备称取一定量的肉汤培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸一次，趁热分装；称取一定量的营养琼脂培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸三次（煮至刚刚冒泡，立刻置于台面，半分钟后再煮），使完全溶解，趁热分装。

（平板培养基：以无菌操作，倾注平皿10ml，琼脂完全凝固后，平板倒放，4℃冰箱保存备用。

斜面培养基：培养基趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。

）贴上标签后灭菌使用。

2空气与人体体表细菌学检查根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（CFU），了解空气的污染情况。

平板盖打开，盖朝下放在平板旁，琼脂平板暴露15分钟即可。

在普通平板上接种手指上的细菌。

第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

3细菌分离培养接种前，接种环烧灼灭菌。

取标本在平板表面上方密集涂布5～10 mm²。

烧掉接种环上多余的标本。

冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）。

实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。

此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。

因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。

绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。

3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。

3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。

3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。

4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。

若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。

5.1.2 增菌和分离培养将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。

金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。

具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。

金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。

2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。

金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。

- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。

- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。

3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。

通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。

微生物实验报告题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业2013级临床医学八年制实验者学号小组成员指导老师一、实验目的1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。