链球菌和葡萄球菌分离鉴定

病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。

⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。

分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。

（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。

（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。

（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。

（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。

金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。

⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。

⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。

⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。

金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。

因而，食品受其污染的机会很多。

金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。

无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。

致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。

培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。

），在麦康凯琼脂平板不生长。

2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。

5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。

6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。

4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。

医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。

本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。

对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。

一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。

然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。

（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。

葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。

链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。

肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。

奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。

脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。

通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。

在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。

（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。

观察菌落的形态。

葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。

形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。

链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。

病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。

G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。

G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。

对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。

常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。

一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。

为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。

(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。

1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。

2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。

(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。

1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。

存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。

有型特异性，分A、B、C三型。

(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。

2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。

(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。

在20%CO2环境中，有利于毒力产生。

最适温度37℃，最适PH7.4。

DNA中G+C含量：30-39%。

1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。

青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定姓名：学院：动物科技学院班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新二0一四年四月十二日链球菌和葡萄球菌分离鉴定班 2012指导教师温建新摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。

关键词：葡萄球菌；链球菌引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。

多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。

代表种有金黄色葡萄球菌。

白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。

典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。

葡萄球菌无鞭毛，不能运动。

无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。

易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。

营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。

致病性菌株能分解甘露醇.链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。

这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。

因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。

链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。

幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。

无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。

能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。

营养要求较高。

【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。

Xxx农业大学兽医微生物学实验报告葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿学号＿＿＿＿＿＿＿＿＿专业班级＿＿＿＿＿＿＿＿＿指导教师＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对A.B两种菌种进行分离鉴定主要方法：通过分离培养形态观察生化试验进行鉴定关键词葡萄球菌链球菌分离鉴定引言葡萄球菌，属微球菌科葡萄球菌属，革兰氏阳性菌。

对生长环境要求不高在普通培养基上生长良好，需氧或碱性厌氧，最适培养温度为37摄氏度。

最适PH7.4.在普通培养基上形成湿润光滑隆起边缘整齐的圆形菌落。

多数菌株能分解葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖，产酸不产气;致病菌株可以分解甘露糖，还可以产生血浆凝固酶。

有致病性的葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌，致病性葡萄球菌的鉴定可通过色素颜色，溶血性，过氧化氢酶实验（触酶试验），凝固酶实验，甘露糖发酵试验等鉴定链球菌，革兰氏阳性菌，老龄菌或被吞噬的的细菌或呈现阴性。

呈圆形或卵圆形，直径为0.5～1.0微米，常呈链状或成双排列。

一般致病性链球菌的链比非致病性的链长。

个别菌株有鞭毛，有的菌株有菌毛，幼龄培养物可形成荚膜。

大多数为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。

致病菌对营养要求比较高，普通培养基中生长不良。

在加入血液血清葡萄糖等的培养基中生长良好。

在血琼脂平板上可长成直径约0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,边缘整齐的小菌落.多数致病菌落可形成溶血现象.强致病菌可形成β溶血.产生α溶血环的链球菌致病性不强,为条件致病菌.γ型溶血菌落周围无溶血现象,一般不治病.1.材料与方法1.1 材料1.1.1 两种未知的实验菌种 A菌 B菌1.1.2 培养基的制作材料（1）药品牛肉膏蛋白胨 NacI 琼脂 0.1mol/L 和1mol/L NaoH溶液,0.1mol/L和1mol/L HCI溶液。

（2）仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌器。

（3）玻璃器材移液管试管烧杯量筒锥形瓶培养皿玻璃漏斗。

（4）其他物品钥匙称量纸 ph试纸记号笔脱脂棉线绳纱布试管塞牛皮纸注射器等。

鉴别葡萄球菌属和化脓性链球菌属的鉴别流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定[摘要] 目的分离鉴定变异链球菌临床分离株。

方法收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养，通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应（pcr）扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原ⅰ/ⅱ（spap）、葡糖基转移酶b（gtfb）和葡聚糖酶（dexa）以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定。

结果从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株，经生物化学，自动微生物分析系统，变异链球菌的特异性基因spap、gtfb 和dexa的pcr扩增均鉴定为变异链球菌，基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同。

结论获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株。

[关键词] 变异链球菌；基因型；分离；鉴定[中图分类号] r 780.2 [文献标志码] a [doi]10.7518/hxkq.2013.01.020 变异链球菌（streptococcus mutans）是人类口腔中最主要的致龋菌[1]。

变异链球菌群中各菌种的分离与鉴定是进行龋病研究的基础。

细菌菌种的鉴定方式经历了由传统的表型、血清型方法到以分子生物学为基础的基因型方法的转变。

本文采用形态学、生物化学、自动微生物分析系统、扩增变异链球菌基因的特异性片段区域以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定，为龋病临床和基础研究提供材料。

1 材料和方法1.1 实验菌株变异链球菌国际参考株ingbritt（首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所提供），金黄色葡萄球菌临床分离株188号（军事医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室提供）。

1.2 病例选择纳入标准：高龋患者，龋失补牙（decayed-mis-sing-filled-tooth，dmft）指数≥6；无龋健康人，dmft指数=0。

排除标准：饮食结构异常，有嗜甜食（饮）及睡前进餐等不良饮食习惯者；接受放疗和化疗的患者；舍格伦综合征患者；严重全身系统性疾病者；近3个月内服用抗生素者；接受正畸治疗者；口腔卫生状况不良者；牙齿结构异常者；涉及取样的牙体有牙髓病变、根面暴露或根面龋、未控制的牙周病变、冠或固定桥等修复体者。

肠球菌普遍存在于自然界，一般栖居在各种温血和冷血动物的腔肠，甚至昆虫体内，也是健康人体的上呼吸道，口腔或肠道的常居菌。

本菌可以引起心内膜炎，胆囊炎，脑膜炎，尿路感染及伤口感染等多种疾病。

在人类粪便中的数量仅次于大肠菌群，每克成人的粪便中约含２×108个。

由于此污染指示菌比较大肠杆菌对外界环境温度适应性强、抵抗力强及耐受性强，甚至可以与多种抗生素相抵抗和生长营养要求不高，因此在自然界分布广，存活力持久。

在无粪便污染的环境中较大肠菌更易发现，所以，即使检出肠球菌也没有粪便污染的指示作用。

此外，即使在冷冻，干燥性和经中等强度加热处理的食品中检出肠球菌也不能提示肠道致病菌的存在，因为肠球菌比沙门氏菌，致病性大肠杆菌抵抗性及存活率均高。

食品微生物检验主要针对在１０℃和４５℃下可生长发育的粪肠球菌与屎肠球菌，二者在生化特性、ＤＮＡ杂交结果有明显不同。

在４５℃条件下，用含叠氮钠成分的培养基检测此类指示菌是其主要特征。

目前该菌多作为生活饮用水，管道水和一些水质的指示菌。

卫生学家认为，肠球菌类似于大肠菌群的生态活动，但其对恶劣的外环境和冷冻条件具有较强的抵抗力，作为监测水质卫生，环境卫生质量的污染指标更具有卫生学意义。

另据有关报道，大量的（１０9以上）肠球菌可以引起食物中毒，作为一个有卫生学意义的细菌（该菌的污染在某些食品中也常被发现），有些国家已经制定了针对肠球菌污染限量标准，大多制定在０／克～１０5／克范围内。

从预防食物中毒方面，保障人民身体健康考虑，借鉴国外标准，制定适宜的污染限量指标，应尽快摆到议事日程上来。

二、生物学性状１、形态与染色肠球菌属的细菌为革兰氏阳性球菌，多数菌种成双或呈短链状排列；一般无芽胞，无荚膜，少数菌种有鞭毛，陈旧培养物或在厌氧状态下有时呈革兰氏阴性。

２、培养特性在普通琼脂及麦康凯琼脂上形成小菌落，在血琼脂上形成较链球菌稍大的菌落，光滑、较湿润、易乳化，依据种的不同，α、β或γ溶血均可出现。

常见革兰阳性球菌鉴别
葡萄球菌属
鉴定及鉴别要点
1、葡萄球菌属与微球菌属的鉴别：
葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小；而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，并且菌体较大。

2、葡萄球菌属与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，触酶试验阳性；链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

表葡萄球菌属与微球菌科其他菌属的鉴别
注：各表中的d 为反应不定。

表常见葡萄球菌的鉴别
链球菌属
触酶试验阴性，分解葡萄糖产酸不产气，除肺炎链球菌外，链球菌不分解菊糖。

鉴定
杆菌肽敏感试验：95%以上的化脓性链球菌对杆菌肽（每纸片含0.04单位）敏感，抑菌环≥10毫米为敏感。

CAMP试验：无乳链球菌CAMP试验为阳性，其它链球菌为阴性。

Optochin敏感试验：几乎所有的肺炎链球菌都对Optochin敏感。

抑菌环≥18毫米为敏感。

β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
表β-溶血性链球菌的主要生物学特性
注：PYR：L-吡咯烷酮-萘酰胺水解。

d：为反应不定。

非β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
肠球菌属：肠球菌属细菌γ或α溶血，触酶试验一般为阴性，有些菌株可产生假阳性。

本属细菌的主要生化特征及鉴别见表表肠球菌属常见菌种的生化特征。