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㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(７):１０~１６ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.０７.００２收稿日期:２０２２－１０－１２基金项目:国家自然科学基金项目(３１８０１６０７)ꎻ广西自然科学基金项目(２０２０ＧＸＮＳＦＡＡ２５９０８７ꎬ２０１７ＧＸＮＳＦＡＡ１９８０８２)ꎻ贺州学院博士科研启动基金项目(ＨＺＵＢＳ２０２１０６)作者简介:许薇(１９９６ )ꎬ女ꎬ广西梧州人ꎬ硕士研究生ꎬ从事果蔬加工与保鲜研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:８４５５２９５７２＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:宋慕波(１９８６ )ꎬ男ꎬ河南洛阳人ꎬ副研究员ꎬ从事果蔬加工与保鲜研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｓｏｎｇｍｕｂｏ１＠１６３.ｃｏｍ三华李ＡＮＳ基因克隆及其在果实采后转色过程中的表达分析许薇１ꎬ２ꎬ陈振林１ꎬ２ꎬ刘英健１ꎬ劳琪珍２ꎬ宋慕波１(１.贺州学院食品科学与工程技术研究院ꎬ广西贺州㊀５４２８９９ꎻ２.大连工业大学食品学院ꎬ辽宁大连㊀１１６０３４)㊀㊀摘要:花青素合成酶(ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｙｎｔｈａｓｅꎬＡＮＳ)是参与植物组织花青素合成的关键酶ꎮ果肉富含花青素是三华李果实的显著特色ꎮ本研究首次克隆得到三华李ＡＮＳ全长ｃＤＮＡꎬ将其命名为ＰｓＡＮＳꎬ并对其在不同组织和果实成熟转色过程中的表达模式进行分析ꎮ结果表明ꎬＰｓＡＮＳ编码区长度为１０７４ｂｐꎬ包含一个长度为２１７ｂｐ的内含子ꎬ可编码一个包含３５７个氨基酸㊁分子量为４０４０１.３７的蛋白质ꎻ该蛋白二级结构以α－螺旋和不规则卷曲为主ꎬ亚细胞定位于细胞质中ꎮ蛋白互作预测发现ꎬ含有ＡＮＳ结构域的蛋白主要与ＴＴ４㊁ＤＦＲ㊁ＵＦ３ＧＴ㊁Ｆ３Ｈ㊁ＴＴ８等存在互作关系ꎮ不同植物的ＡＮＳ蛋白同源性较高ꎬ均包含相似的蛋白催化位点ꎻＰｓＡＮＳ与同属蔷薇科的欧洲李ＡＮＳ蛋白的亲缘关系较近ꎮＰｓＡＮＳ在不同组织中表达差异较大ꎬ果肉中表达量最高ꎮ三华李后熟转色过程中ＰｓＡＮＳ表达呈上升趋势ꎬ乙烯处理进一步上调了ＰｓＡＮＳ的表达ꎬ表明ＰｓＡＮＳ对三华李果实发育和后熟过程中花青素的合成起着重要作用ꎮ关键词:三华李ꎻ花青素合成酶(ＡＮＳ)ꎻ基因克隆ꎻ乙烯ꎻ采后转色过程ꎻ表达分析中图分类号:Ｓ６６２.３:Ｑ７８１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)０７－００１０－０７ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｄｕｒｉｎｇＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＴｕｒｎｉｎｇ￣ＣｏｌｏｒＰｅｒｉｏｄｏｆＡＮＳＧｅｎｅｉｎＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ.ｃｖ.ＳａｎｈｕａＸｕＷｅｉ１ꎬ２ꎬＣｈｅｎＺｈｅｎｌｉｎ１ꎬ２ꎬＬｉｕＹｉｎｇｊｉａｎ１ꎬＬａｏＱｉｚｈｅｎ２ꎬＳｏｎｇＭｕｂｏ１(１.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＨｅｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨｅｚｈｏｕ５４２８９９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＤａｌｉａｎＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＤａｌｉａｎ１１６０３４ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｙｎｔｈａｓｅ(ＡＮＳ)ｉｓａｋｅｙｅｎｚｙｍｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ.ＴｈｅｆｒｕｉｔｐｕｌｐｏｆＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ.ｃｖ.Ｓａｎｈｕａｈａｓｒｉｃｈａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓꎬｗｈｉｃｈｉｓｉｔｓｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｉｎｇｆｅａｔｕｒｅ.Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆＡＮＳｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅꎬｗｈｉｃｈｗａｓｎａｍｅｄＰｓＡＮＳꎬａｎｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｆｒｕｉｔｒｉｐｅｎｉｎｇａｎｄｃｏｌｏｒｔｒａｎｓｆｅｒｗａｓａｎａｌｙｚｅｄ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａ￣ｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆＰｓＡＮＳｗａｓ１０７４ｂｐａｎｄｃｏｎｔａｉｎｅｄａ２１７ｂｐｉｎｔｒｏｎꎬｗｈｉｃｈｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ３５７ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｉｔｈｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔａｓ４０４０１.３７.Ｉｔｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｔｈａｔα￣ｈｅｌｉｘａｎｄｉｒｒｅｇｕｌａｒｃｕｒｌｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｔｈｅｍａｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＰｓＡＮＳｐｒｏｔｅｉｎ.Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｌｏｃａｔｅｄｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍ.ＰｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐｒｏｔｅｉｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＡＮＳｄｏｍａｉｎｍａｉｎｌｙｉｎｔｅｒａｃｔｅｄｗｉｔｈＴＴ４ꎬＤＦＲꎬＵＦ３ＧＴꎬＦ３ＨａｎｄＴＴ８.ＴｈｒｏｕｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎａｌｙｓｉｓꎬｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔＡＮＳｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｈａｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙａｎｄａｌｌｃｏｎｔａｉｎｅｄｓｉｍｉｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｃａｔａｌｙｔｉｃｓｉｔｅｓ.ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰｓＡＮＳｗａｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏＡＮＳｐｒｏｔｅｉｎｏｆＰ.ｄｏｍｅｓｔｉｃａ.Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｆｌｕｏ￣ｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｓＡＮＳｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓꎬａｎｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｉｎｐｕｌｐ.ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｓＡＮＳｉｎｃｒｅａｓｅｄｄｕｒｉｎｇｒｉｐｅｎｉｎｇａｎｄｃｏｌｏｒｔｒａｎｓ￣ｆｅｒꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｓＡＮＳｗａｓｆｕｒｔｈｅｒｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＩｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＰｓＡＮＳｐｌａｙｅｄａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｆｒｕｉｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｒｉｐｅｎｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｏｆＳａｎｈｕａｐｌｕｍ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ.ｃｖ.ＳａｎｈｕａꎻＡｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｙｎｔｈａｓｅ(ＡＮＳ)ꎻＧｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇꎻＥｔｈｙｌ￣ｅｎｅꎻＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔｃｏｌｏｒ￣ｔｕｒｎｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓꎻＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ㊀㊀三华李(ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ.ｃｖ.Ｓａｎｈｕａ)属于蔷薇科李亚科ꎬ是华南地区著名特色水果ꎬ原产自广东翁源县ꎬ后逐渐扩展至南方各省份[１ꎬ２]ꎮ三华李果实为圆形或近圆形ꎬ果肉紫红色ꎬ肉质爽脆ꎬ酸甜可口ꎬ营养价值高[３]ꎮ三华李成熟果实中富含花青素ꎬ这是其重要特点[４]ꎻ有研究表明三华李中总花青素含量仅次于黑布李ꎬ花青素主要成分为矢车菊素[５]ꎮ目前针对三华李果实花青素合成的相关研究较少ꎮ花青素是植物中广泛存在的一种水溶性天然色素ꎬ属于类黄酮化合物ꎬ在新鲜的蔬菜和水果中大量存在ꎬ使其呈现出明亮的颜色ꎬ从而吸引消费者ꎻ同时ꎬ花青素类物质也具有抗氧化㊁清除自由基等多种生理活性功能[６－９]ꎮ花青素的合成主要分３个阶段:第一阶段是苯丙氨酸经过多步反应生成４－香豆酰ＣｏＡꎻ第二阶段是４－香豆酰ＣｏＡ在系列酶的催化作用下生成黄酮类物质(二氢槲皮素㊁二氢杨梅素)和黄酮醇ꎻ第三阶段是二氢槲皮素㊁二氢杨梅素和黄酮醇这三类物质在二氢黄酮醇－４－还原酶(ｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌ－４－ｒｅｄｕｃｔａｓｅꎬＤＦＲ)的作用下生成无色的花青素(无色矢车菊素㊁无色天竺葵素和无色翠雀素)ꎬ然后花青素合成酶(ＡＮＳ)将无色的花青素转化为相应的花青素类物质(矢车菊素㊁天竺葵素和翠雀素)ꎬ再经过糖基化㊁酰基化㊁甲基化等过程的修饰作用ꎬ最终形成稳定可见的花青素[１０]ꎮ可见ꎬＡＮＳ是花青素生物合成途径后期的关键酶ꎬ能催化无色花青素脱水氧化形成有色花青素ꎮ编码ＡＮＳ的基因首先在紫苏中被克隆[１１]ꎬ在多数植物中ꎬＡＮＳ由一个小基因家族所编码ꎮ已有研究发现ꎬ在参薯[１２]㊁紫色不结球白菜[１３]㊁苹果梨[１４]和凤丹牡丹[１５]中ＡＮＳ基因的表达与组织中花青素含量呈正相关ꎮ然而ꎬ草莓果实从转红到完全成熟的过程中ꎬ虽然花青素含量呈上升趋势ꎬ但ＡＮＳ基因表达量却有所下降[１６]ꎮ葡萄果实经乙醇处理后花青素含量增加ꎬ但基因表达水平没有变化[１７]ꎮ由此可见ꎬ花青素的生物合成存在复杂的调控机制ꎮ三华李属呼吸跃变型果实ꎬ后熟过程中花青素快速积累ꎬ但目前尚未有针对三华李花青素合成基因的系统研究ꎮ虽然三月李的基因组测序工作已由国内课题组完成ꎬ为李属果树的分子生物学研究奠定了基础[１８]ꎬ但仍未有针对三华李ＡＮＳ基因的相关研究ꎮ本研究从三华李果实中克隆获得ＡＮＳ基因ꎬ对其序列进行生物信息学分析ꎬ并研究其在三华李不同组织和果实后熟过程中的表达模式ꎬ为进一步探究三华李花青素合成途径及其调控机理奠定基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料供试三华李植株种植于广西贺州市贺街镇三华李驿站果园ꎮ２０２１年６月１日(花后约１３０天)采集七八成熟的果实及茎㊁叶ꎮ果实采后立即运回实验室ꎬ挑选大小均一㊁无病害及机械损伤的果实ꎬ分为两组ꎬ分别作为对照组和乙烯处理组ꎬ分别用自来水和５ｍＬ/Ｌ乙烯利溶液浸泡１ｍｉｎꎬ捞出晾干后自封袋密封２４ｈꎬ之后打开自封口通风透气ꎬ于２５ħ下贮藏ꎻ每两天取样一次ꎬ放入－８０ħ超低温冰箱保存ꎮ茎㊁叶及果皮和果肉各组织用液氮速冻ꎬ－８０ħ保存待用ꎮ１.２㊀试验方法１.２.１㊀ＲＮＡ的提取与ｃＤＮＡ合成㊀利用华越洋植物ＲＮＡ提取试剂盒提取三华李不同组织和不同后熟阶段的总ＲＮＡꎬ具体操作方法依照说明书进行ꎮ得到总ＲＮＡ后通过超微量分光光度计测定其浓度ꎮ以提取的总ＲＮＡ为模板ꎬ利用反转录试剂盒进行反转录合成ｃＤＮＡꎬ合成方法参照试剂盒说明书ꎬ保存于－２０ħ冰箱中ꎬ用于后续１１㊀第７期㊀㊀㊀㊀许薇ꎬ等:三华李ＡＮＳ基因克隆及其在果实采后转色过程中的表达分析实验ꎮ１.２.２㊀ＰｓＡＮＳ基因的克隆㊀从三华李转录组数据库中获得ＡＮＳ序列信息ꎬ利用ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５.０软件设计特异性引物ꎬ引物序列见表１ꎮ以三华李不同后熟阶段的ｃＤＮＡ为模板ꎬ克隆ＰｓＡＮＳ基因的ＣＤＳ序列ꎬ进行ＰＣＲ扩增ꎮＰＣＲ反应程序为:９４ħ预变性３ｍｉｎꎻ９５ħ变性１５ｓꎬ５５ħ退火３０ｓꎬ７２ħ延伸２ｍｉｎꎬ３５个循环ꎻ７２ħ延伸１０ｍｉｎꎬ于４ħ保存ꎮＰＣＲ产物经过回收㊁连接并转化至ＤＨ５α感受态细胞ꎬ鉴定阳性克隆后测序ꎮ引物合成和基因测序全部交由上海生物科技有限公司完成ꎮ㊀㊀表１㊀三华李ＡＮＳ基因克隆和表达所用引物引物用途引物序列(５ᶄ－３ᶄ)全长ＰｓＡＮＳ扩增Ｆ:ＡＴＧＧＴＧＡＧＣＴＣＴＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＣＴＲ:ＴＣＡＣＴＴＧＴＴＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＧＡｑＰＣＲＰｓＡＮＳＦ:ＣＡＧＴＧＡＡＣＴＣＡＡＧＡＧＴＴＧＡＧＡＣＣＴＲ:ＣＴＣＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＧＴＴＣＴＣＡＧＡＧＴ内参１８ＳｒＲＮＡＦ:ＡＴＧＡＴＴＡＡＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＲ:ＣＴＡＧＧＡＣＧＧＴＡＴＣＴＧＡＴＣＧＴＣＴＴＣＧ１.２.３㊀ＰｓＡＮＳ基因生物信息学分析㊀利用ＮＣＢＩ中的ＢＬＡＳＴＮ㊁ＢＬＡＳＴＰ进行基因和蛋白序列比对ꎻ通过Ｅｘｐａｓｙ－ＰｒｏｔＰａｒａｍＴｏｏｌ在线软件对蛋白的基本理化性质进行预测ꎬ初步分析目的基因的功能ꎻ亲疏水性利用ＰｒｏｔＳｃａｌｅ以Ｈｐｈｏｂ./Ｋｙｔｅ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ算法进行预测ꎻ采用ＴＭＨＭＭ２.０进行跨膜结构预测ꎻ采用ＳｉｇｎａｌＰ－５.０预测蛋白质有无信号肽ꎻ采用ＰｒｏｔＣｏｍｐＶｅｒｓｉｏｎ９.０进行蛋白亚细胞定位预测ꎻ采用ＮＣＢＩ的ＣｏｎｓｅｒｖｅｄＤｏｍａｉｎｓ分析功能结构域ꎻ使用ＳＭＡＲＴ在线数据库分析蛋白结构域ꎻ蛋白质的二级结构采用ＥｘＰａＳｙ－ＳＯＰＭＡ在线软件进行分析ꎻ蛋白质三级结构采用ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ进行在线预测ꎮ利用在线软件ＳＴＲＩＮＧ预测ＡＮＳ与其他蛋白之间的互作情况(以拟南芥蛋白数据库为参考)ꎻ蛋白序列和同源比对分别使用ＤＮＡＭＡＮ和ＣｌｕｓｔａＸ软件ꎮ采用ＭＥＧＡ５软件的Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系统进化树ꎮ１.２.４㊀ＰｓＡＮＳ表达分析㊀根据获得的ＰｓＡＮＳ基因ｃＤＮＡ序列设计荧光定量ＰＣＲ特异引物(表１)ꎮ以三华李茎㊁叶㊁果皮㊁果肉不同组织以及三华李后熟过程中的样品ｃＤＮＡ为模板ꎬ参考ＴａＫａ￣Ｒａ公司的ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｑＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ说明书进行荧光定量ＰＣＲ扩增ꎮ试验设置３个生物学重复ꎬ用２－ΔΔＣｔ方法计算ＰｓＡＮＳ的相对表达量ꎬ采用ＳＰＳＳ２６软件进行ＬＳＤ方差分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀三华李ＡＮＳ基因的克隆三华李果实二代有参转录组参考物种为三月李(Ｐｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａ)ꎬ参考基因组版本为ＧＣＡ＿０１４８６３９０５.１＿ＳＣＡＵ＿Ｐｓａｌ＿１.０ꎮ在三华李果实二代有参转录组数据库中筛选初步注释为ＡＮＳ基因的转录本ꎬ其在转录组中的编号为ｅｖｍ.ＴＵ.ＵＴＧ５９９５.３ꎻ在ＮＣＢＩ中的比对结果表明ꎬ该片段与其他物种ＡＮＳ基因的蛋白序列同源性在８０％以上ꎬ其中与日本裸樱(Ｐｒｕｎｕｓｙｅｄｏｅｎｓｉｓｖａｒ.ｎｕｄｉ￣ｆｌｏｒａꎬＰＱＱ１２９９８)和欧洲李(ＰｒｕｎｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａꎬＡＨＺ３０５９７)ＡＮＳ的蛋白序列同源性最高ꎮ参考转录组中该基因序列设计引物ꎬ以三华李的ｃＤＮＡ为模板进行特异性ＰＣＲ扩增ꎬ获得ＡＮＳ基因的ＣＤＳ序列(图１)ꎻ将获得的目的片段与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接并转化ＤＨ５α大肠杆菌ꎬ挑选阳性克隆测序ꎮ经测序后发现该片段长度为１０７４ｂｐꎬ可编码３５７个氨基酸ꎬ将其命名为ＰｓＡＮＳꎬＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＯＰ１３１９１６ꎮ将该ｃＤＮＡ片段与三月李基因组序列进行比对ꎬ发现该转录本对应的ＤＮＡ序列在５１０~７２６ｂｐ间有１个长度为２１７ｂｐ的内含子ꎬ其基因结构如图２所示ꎮＭ:ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒꎮ图１㊀三华李ＡＮＳ基因ｃＤＮＡ片段㊀㊀琼脂糖凝胶电泳图谱图２㊀三华李ＡＮＳ基因ＤＮＡ结构图２１山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀２.２㊀ＰｓＡＮＳ蛋白理化性质分析通过在线软件Ｅｘｐａｓｙ－ＰｒｏｔＰａｒａｍＴｏｏｌ分析ꎬ该蛋白质的分子式为Ｃ１９０１Ｈ３０４８Ｎ５０８Ｏ５６６Ｓ１９ꎬ分子量为４０４０１.３７ꎬ总原子数为５７１７ꎮ组成ＰｓＡＮＳ蛋白的氨基酸中占比最多的是谷氨酸(Ｇｌｕ)ꎬ达１０.９％ꎬ其次为亮氨酸(Ｌｅｕ)ꎬ占比１０.１％ꎮＰｓＡＮＳ蛋白的理论等电点为５.４６ꎬ不稳定系数为４７.９６ꎬ属于不稳定蛋白ꎮ２.３㊀ＰｓＡＮＳ蛋白亲疏水性分析预测发现(图３)ꎬＰｓＡＮＳ的氨基端和羧基端表现出疏水性ꎬ亲水性大部分集中在中心区域ꎻ疏水出现在第１９１位的氨基酸残基ꎬ亲水出现在第６５位氨基酸残基ꎮＰｓＡＮＳ蛋白的亲水性总平均值(ＧＲＡＶＹ)为－０.３７１ꎬ预测该蛋白属于亲水性蛋白ꎮＰｓＡＮＳ蛋白不存在跨膜区ꎬ无信号肽ꎬ为非分泌蛋白ꎮ通过ＰｒｏｔＣｏｍｐＶｅｒｓｉｏｎ９.０在线软件预测ＰｓＡＮＳ蛋白在植物细胞中可能定位在细胞质ꎮ２.４㊀ＰｓＡＮＳ蛋白二级和三级结构预测在线软件ＥｘＰａＳｙ－ＳＯＰＭＡ预测ＰｓＡＮＳ蛋白的二级结构ꎬ结果(图４)表明该蛋白二级结构中图３㊀ＰｓＡＮＳ蛋白疏水/亲水性预测α－螺旋(ｈ)占３５.２９％ꎬβ－折叠(ｔ)占５.３２％ꎬ无规则卷曲(ｃ)占４１.１８％ꎬ延伸链(ｅ)占１８.２１％ꎮ利用ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ以拟南芥ＡＮＳ蛋白为模板构建ＰｓＡＮＳ蛋白的三维结构模型(图５)ꎮ以拟南芥蛋白数据库为参考ꎬ通过ＳＴＲＩＮＧ预测ＰｓＡＮＳ潜在的互作关系ꎬ结果(图６)表明ꎬＡＮＳ蛋白主要与ＴＴ８(ＬＤＯＸꎬ无色花青素双加氧酶)㊁ＴＴ４(ＣＨＳꎬ查尔酮合成酶)㊁ＤＦＲ(二氢黄酮醇－４－还原酶)㊁ＵＦ３ＧＴ(类黄酮３－Ｏ－葡萄糖基转移酶)等存在互作关系ꎮ图４㊀ＰｓＡＮＳ蛋白二级结构预测３１㊀第７期㊀㊀㊀㊀许薇ꎬ等:三华李ＡＮＳ基因克隆及其在果实采后转色过程中的表达分析蓝色:α－螺旋(ｈ)ꎻ红色:延伸链(ｅ)ꎻ橙色:无规则卷曲(ｃ)ꎻ绿色:β－折叠(ｔ)ꎮ图５㊀ＰｓＡＮＳ编码蛋白三级结构模型图６㊀ＡＮＳ蛋白互作网络模型预测２.５㊀蛋白序列保守结构域、同源比对和系统进化分析利用ＮＣＢＩ－ＣＤＤ对ＰｓＡＮＳ蛋白的结构域进行分析ꎬ显示ＰｓＡＮＳ为ＰＬＮ０３１７８(花青素合成酶)多域蛋白ꎬ有１个保守结构域ꎬ属于２－酮戊二酸－Ｆｅ２＋－双加氧酶家族[２ＯＧ－Ｆｅ(Ⅱ)－Ｏｘｙꎬ第２１６~３１１位]ꎻ该保守结构域含有与２－酮戊二酸特异性结合的精氨酸Ａｒｇ(Ｒ２９３ꎬ３０２)和丝氨酸Ｓｅｒ(Ｓ２４０ꎬ２７０ꎬ２８３ꎬ２８９ꎬ３０４)位点７个ꎬ与Ｆｅ２＋结合具有双加氧功能的组氨酸Ｈｉｓ(Ｈ２３６ꎬ２３８ꎬ２４７ꎬ２７４ꎬ２９２)和天冬氨酸Ａｓｐ(Ｄ２７７)位点６个ꎬ这些位点在不同物种的ＡＮＳ序列中高度保守ꎮ通过与其他１２种植物的ＡＮＳ蛋白进行同源性多重比对发现ꎬＡＮＳ氨基酸序列较为保守(图７)ꎬＰｓＡＮＳ与同为蔷薇科的欧洲李更近源(图８)Ә:Ｆｅ２＋结合位点ꎻһ:２－酮戊二酸结合位点ꎻ红色方框区域为２ＯＧ－Ｆｅ(Ⅱ)加氧酶结构域ꎮ图７㊀ＰｓＡＮＳ与其他已知ＡＮＳ蛋白的同源性比较４１山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀图８㊀三华李与其他植物ＡＮＳ蛋白系统进化树２.６㊀ＰｓＡＮＳ在三华李不同组织中的表达分析植物次生代谢合成相关基因往往具有特异性的时空表达模式ꎬ即在代谢旺盛的组织中ꎬ相关基因的表达水平较高[１０]ꎮ由图９可见ꎬＰｓＡＮＳ在三华李的４个不同组织中均有表达ꎬ其表达量在三华李果肉中最高ꎬ其余依次是果皮㊁叶㊁茎ꎬ各组织间存在显著的表达差异ꎮ柱上不同小写字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ图９㊀ＰｓＡＮＳ在三华李不同组织中的表达２.７㊀ＰｓＡＮＳ在三华李果实后熟过程中的表达分析利用荧光定量ＰＣＲ技术分析ＰｓＡＮＳ在三华李后熟过程中的表达变化ꎬ结果(图１０)显示ꎬ对照组和乙烯处理组ＰｓＡＮＳ表达量在后熟过程中都增加ꎬ贮藏６ｄ的表达量分别是０ｄ的３.６倍和６.２倍ꎮ与对照组相比ꎬ乙烯处理组ＰｓＡＮＳ表达显著上调(Ｐ<０.０５)ꎮ贮藏４ｄ时ꎬ乙烯处理组的ＰｓＡＮＳ达到表达高峰ꎬ是０ｄ的８.９倍ꎮ３㊀讨论与结论三华李因富含花青素等抗氧化活性物质深受广大消费者喜爱和科研工作者关注[７]ꎮ研究三华李果实花青素合成关键基因可为培育具有优良外观品质的李子品种提供理论依据ꎮ花青素合成∗表示相同处理时间乙烯处理与对照差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ图１０㊀ＰｓＡＮＳ在三华李后熟过程中的相对表达量酶(ＡＮＳ)是花青素合成通路末端的酶ꎬ参与花青素的合成和累积ꎬ在果实着色及花色形成中具有重要作用[１２]ꎮ本研究首次从三华李果实中克隆获得ＡＮＳ基因ꎬ并将其命名为ＰｓＡＮＳꎬ该序列的编码区长度为１０７４ｂｐꎬ可编码一个由３５７个氨基酸组成的蛋白质ꎻ与同属蔷薇科的苹果梨[１４]ＡＮＳ基因长度一致ꎮ本研究发现ＡＮＳ的氨基酸序列在不同植物中具有较高的保守性ꎬ都具有典型的２ＯＧ－Ｆｅ(Ⅱ)－Ｏｘｙ家族保守结构域和花青素合成酶催化位点Ａｒｇ㊁Ｓｅｒ㊁Ｈｉｓ㊁ＡｓｐꎮＰｓＡＮＳ与其他植物ＡＮＳ蛋白性质相似ꎬ为无跨膜区㊁无信号肽的不稳定亲水性蛋白ꎬ是一种非分泌性蛋白[１９]ꎮ花青素主要贮藏于植物细胞的液泡中ꎬ但其合成主要在细胞质的内质网表面进行ꎬ需经各种修饰后才被运至液泡等部位储存[２０]ꎬ因此ꎬ包括ＡＮＳ在内的一系列酶集中形成多酶复合体在细胞质中催化花青素的合成[２１]ꎮ本研究预测发现ＰｓＡＮＳ也定位于细胞质中ꎮ以往研究发现ＡＮＳ基因表达具有明显的组织特异性ꎬ在植物体的各个组织中均有表达ꎬ但表达量存在差异[１２ꎬ２２ꎬ２３]ꎮ本研究发现ꎬＰｓＡＮＳ基因在三华李不同组织中均有表达ꎬ果肉中的表达量最高ꎬ茎中最低ꎬ暗示ＰｓＡＮＳ在三华李果肉花青素合成过程中扮演重要角色ꎮ花青素含量是判断三华李果实成熟度的显著标志ꎬ在成熟过程中快速上升ꎮ三华李是呼吸跃变型果实ꎬ后熟过程中果肉的花青素快速合成ꎬ而外源乙烯处理能促进果实快速软化和转红ꎮ以往研究表明外源乙烯对果实花青素合成有显著影响ꎬ例如乙烯处理可上５１㊀第７期㊀㊀㊀㊀许薇ꎬ等:三华李ＡＮＳ基因克隆及其在果实采后转色过程中的表达分析调桑椹ＡＮＳ的表达并促进果实花青素合成[２４]ꎻ但红梨和桃果实的花青素合成受乙烯处理显著抑制[２５ꎬ２６]ꎮ可见ꎬ乙烯对不同植物花青素合成的影响较为复杂ꎮ本研究发现ꎬ三华李果实后熟过程中ＰｓＡＮＳ表达呈上升趋势ꎬ外源乙烯处理进一步促进其表达ꎬ表明ＰｓＡＮＳ响应乙烯信号ꎬ在李果实后熟转色过程中起重要作用ꎮ但乙烯信号途径和花青素合成途径中转录因子间的作用机制还需进一步研究ꎮ本研究首次克隆得到三华李果实花青素合成酶基因ＰｓＡＮＳ全长ｃＤＮＡꎬ该序列长度为１０７４ｂｐꎬ编码３５７个氨基酸ꎮＰｓＡＮＳ蛋白具有花青素合成酶的典型结构特征ꎬ氨基酸序列与日本裸樱和欧洲李的ＡＮＳ氨基酸序列相似度高ꎻ三华李花青素合成酶基因的表达存在组织器官差异性ꎬ果肉中表达量最高ꎬ茎中最低ꎻ三华李后熟转色过程中ＰｓＡＮＳ表达呈上升趋势ꎬ乙烯处理进一步上调了ＰｓＡＮＳ的表达ꎬ表明其对三华李果实发育和后熟过程中花青素的合成起着重要作用ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀徐美珍.翁源县三华李产业发展问题研究[Ｄ].佛山:仲恺农业工程学院ꎬ２０１５.[２]㊀王嘉楠ꎬ王雅茹ꎬ叶向库ꎬ等.澄清型三华李果汁饮料加工工艺研究[Ｊ].饮料工业ꎬ２０２０ꎬ２３(４):３９－４２. [３]㊀ＢｏｂｒｉｃｈＡꎬＦａｎｎｉｎｇＫＪꎬＲｙｃｈｌｉｋＭꎬｅｔａｌ.ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｉｎＪａｐａｎｅｓｅｐｌｕｍｓ:ｉｍｐａｃｔｏｆｍａｔｕｒｉｔｙａｎｄｂｉｏａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ[Ｊ].ＦｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌꎬ２０１４ꎬ６５:２０－２６. [４]㊀冯筠庭.三华李果实发育转录组分析及其花青苷生物合成相关基因表达分析[Ｄ].广州:华南农业大学ꎬ２０１６. [５]㊀刘永吉ꎬ郭红辉ꎬ钟瑞敏ꎬ等.高花色苷含量的三华李浓缩果汁加工条件研究[Ｊ].食品研究与开发ꎬ２０１３ꎬ３４(２４):１３９－１４２.[６]㊀齐勇ꎬ赵德刚ꎬ吕立堂.茶树ＣｓＡＮＳ基因的克隆及在转基因烟草中的功能分析[Ｊ].农业生物技术学报ꎬ２０１９ꎬ２７(４):６３６－６４４.[７]㊀李全.三华李果实发育及采后保鲜过程酚类物质组成含量及抗氧化活性的变化规律[Ｄ].广州:华南理工大学ꎬ２０１９. [８]㊀赵维萍ꎬ丁子俊ꎬ王方平ꎬ等. 滁菊 花青素合成酶(ＣｍＡＮＳ)基因的分子特征㊁原核表达与表达分析[Ｊ].植物生理学报ꎬ２０２２ꎬ５８(４):６７７－６８６.[９]㊀ＬｉＱꎬＣｈａｎｇＸＸꎬＷａｎｇＨꎬｅｔａｌ.Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓａｃｃｕｍｕｌａ￣ｔｉｏｎｉｎＳａｎｈｕａｐｌｕｍ(ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬ.)ｄｕｒｉｎｇｆｒｕｉｔｄｅｖｅｌｏｐ￣ｍｅｎｔａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｕｓｅａｓａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇ￣ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１９ꎬ６７(９):２４５９－２４６６. [１０]盛建军ꎬ李想ꎬ何永美ꎬ等.ＵＶ－Ｂ辐射对花青素合成代谢的影响及分子机理[Ｊ].植物生理学报ꎬ２０１９ꎬ５５(７):９４９－９５８.[１１]ＧｏｎｇＺＺꎬＹａｍａｚａｋｉＭꎬＳｕｇｉｙａｍａＭꎬｅｔａｌ.Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｍｏ￣ｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏ￣ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｆｏｒｍａ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃｍａｎｎｅｒｉｎＰｅｒｉｌｌａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙꎬ１９９７ꎬ３５(６):９１５－９２７.[１２]陈跃华ꎬ许云ꎬ吴文嫱ꎬ等.参薯ＤａＡＮＳ基因克隆及表达差异分析[Ｊ].植物生理学报ꎬ２０１５ꎬ５１(６):８５３－８５９. [１３]许玉超ꎬ侯喜林ꎬ徐玮玮ꎬ等.紫色不结球白菜花色苷合酶基因ＢｒｃＡＮＳ的克隆与表达分析[Ｊ].作物学报ꎬ２０１６ꎬ４２(６):８５０－８５９.[１４]王雪ꎬ曲柏宏ꎬ鹿艳新ꎬ等.苹果梨果皮花色素苷合成相关基因ＰｙＡＮＳ的克隆与表达分析[Ｊ].北方园艺ꎬ２０１６(５):１０８－１１２.[１５]辛转霞ꎬ唐豆豆ꎬ李果ꎬ等.凤丹牡丹ＡＮＳ(ＰｏＡＮＳ)基因克隆㊁特性及表达[Ｊ].东北林业大学学报ꎬ２０１６ꎬ７(４４):６４－６９.[１６]ＣａｒｂｏｎｅＦꎬＰｒｅｕｓｓＡꎬＤｅＶｏｓＲＣＨꎬｅｔａｌ.Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌꎬｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｆｌａ￣ｖｏｎｏｉｄｇｅｎｅｓꎬｅｎｚｙｍｅｓａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｉｎｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｆｒｕｉｔｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔꎬＣｅｌｌ＆Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔꎬ２００９ꎬ３２(８):１１１７－１１３１. [１７]王丽辉.苹果果皮花色苷代谢及相关基因调控的研究[Ｄ].北京:中国农业大学ꎬ２０１４.[１８]ＬｉｕＣＹꎬＦｅｎｇＣꎬＰｅｎｇＷＺꎬｅｔａｌ.Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ￣ｌｅｖｅｌｄｒａｆｔｇｅｎｏｍｅｏｆａｄｉｐｌｏｉｄｐｌｕｍ(Ｐｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａ)[Ｊ].ＧｉｇａＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０２０ꎬ９(１２):ｇｉａａ１３０.[１９]盖江涛ꎬ黄建峰ꎬ党志国ꎬ等.芒果ＡＮＳ基因的鉴定及与其他植物的比较分析[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１７ꎬ４５(２０):４３－４９. [２０]金琦芳ꎬ陈志丹ꎬ孙威江ꎬ等.茶树ＣｓＡＮＳ基因及其启动子的克隆与生物信息学分析[Ｊ].茶叶科学ꎬ２０１６ꎬ３６(２):２１９－２２８.[２１]鲁迎青ꎬ祝志欣.花青素代谢途径与植物颜色变异[Ｊ].植物学报ꎬ２０１６ꎬ５１(１):１０７－１１９.[２２]孙玉燕ꎬ段蒙蒙ꎬ杨邱ꎬ等.心里美萝卜花青素合成酶基因ＲｓＡＮＳ克隆及花青素生物合成相关基因表达分析[Ｊ].植物遗传资源学报ꎬ２０１６ꎬ５(１７):８８９－８９６.[２３]杨慧珍.甘薯花青素合成酶(ＡＮＳ)基因的克隆及其组织表达模式分析[Ｊ].山西农业科学ꎬ２０２０ꎬ４８(１１):１７１８－１７２３. [２４]亓希武ꎬ帅琴ꎬ范丽ꎬ等.桑树花青素合成酶(ＡＮＳ)基因的克隆及在２种果色桑树中的表达特征[Ｊ].蚕业科学ꎬ２０１３ꎬ３９(１):５－１３.[２５]ＺｈａｎｇＹＴꎬＬｉｎｇＪꎬＺｈｏｕＨＳꎬｅｔａｌ.１￣Ｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｒｏｐｅｎｅｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｓｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｐｅａｃｈｓｋｉｎａｆｔｅｒｈａｒｖｅｓｔ[Ｊ].ＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ￣ｇｙꎬ２０２２ꎬ１８３:１１１７３７.[２６]ＦｉｇｕｅｒｏａＮＥꎬＧａｔｉｃａ￣ＭｅｌéｎｄｅｚＣꎬＦｉｇｕｅｒｏａＣＲ.Ｅｔｈｙｌｅｎｅａｐ￣ｐｌｉｃａｔｉｏｎａｔｔｈｅｉｍｍａｔｕｒｅｓｔａｇｅｏｆＦｒａｇａｒｉａｃｈｉｌｏｅｎｓｉｓｆｒｕｉｔｒｅ￣ｐｒｅｓｓｅｓｔｈｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗｉｔｈａｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔａｃｃｕ￣ｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｌｉｇｎｉｎ[Ｊ].ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０２１ꎬ３５８:１２９９１３.６１山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀。
几种澄清剂对三华李果酒的澄清条件优化海金萍;童汉清;刘钰娜【期刊名称】《广东石油化工学院学报》【年(卷),期】2017(027)003【摘要】采用果胶酶、明胶、硅藻土、壳聚糖4种澄清剂对三华李发酵原酒进行澄清研究,以透光率为主要评价指标,首先进行了单一澄清剂的澄清效果研究,找出较理想的澄清剂,在此基础上进行复合澄清剂澄清效果的最优条件响应面优化.结果表明,壳聚糖是较理想的澄清剂,其次为硅藻土,最佳添加量分别为每升原酒0.2g和0.4 g,相应果酒透光率分别为90.2％和87.8％.得到最佳复合澄清条件为:每升原酒壳聚糖和硅藻土的添加量分别为0.2g和0.4g、处理时间2.5h,在此条件下得到的果酒的透光率为92.4％.实验结果表明,复合澄清剂的澄清效果更优.【总页数】6页(P13-18)【作者】海金萍;童汉清;刘钰娜【作者单位】广东石油化工学院环境与生物工程学院,广东茂名525000;广东石油化工学院环境与生物工程学院,广东茂名525000;广东石油化工学院环境与生物工程学院,广东茂名525000【正文语种】中文【中图分类】TS261【相关文献】1.猕猴桃果酒澄清剂的选择与处理条件优化 [J], 董瑞丽;明红梅;郭志;薛登文2.几种澄清剂对黑莓果酒中蛋白质的影响 [J], 梁红云;王英;刘小莉;董明盛;周剑忠3.几种澄清剂对三华李果酒的澄清条件优化 [J], 海金萍;童汉清;刘钰娜;4.几种澄清剂对"巴伦比"发酵型余甘果酒澄清效果的比较研究 [J], 黄星源; 朱振雄; 黄星才; 杨清群; 刘功良; 邓毛程; 赵翾; 李南薇; 栗瑞敏; 姚建华5.石榴果酒澄清剂的筛选及澄清工艺优化 [J], 韩希凤;李书启;陈存坤;王俊全;盖旭;陈玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三华李红色素的提取及抗氧化性的测定刘艳灿，朱仕兰，崔燕玲，贺劲锋，高柔敏，许伊妍（佛山职业技术学院，广东佛山 528000）摘 要：本研究以三华李为原料，通过减压蒸馏的方式对色素进行提取并对其抗氧化活性进行系统研究。
通过试验，确定色素提取的最佳工艺条件为加入料液比为1∶1的pH=4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，放置温度50 ℃，放置时间30 min，旋蒸温度50 ℃，旋蒸时间50 min，粗提物通过过滤得到紫红色液体。
同时，三华李红色素对羟基自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）有较好的清除能力，为三华李果的高值化开发提供相应的理论基础。
关键词：三华李；红色素；提取；抗氧化性Extraction of Red Pigment of Sanhua Plum and Determinationof Its Resistance to OxidationLIU Yancan, ZHU Shilan, CUI Yanling, HE Jingfeng, GAO Roumin, XU Yiyan(Foshan Polytechnic, Foshan 528000, China)Abstract: In this study, Sanhua plum was used as raw material to extract pigment by vacuum distillation and to study its antioxidant activity. Through the experiment, the optimum technological conditions for pigment extraction were determined as follows: adding citric acid sodium citrate buffer solution with pH=4 and a ratio of 1∶1, placing at 50 ℃ for 30 minutes, rotating at 50 ℃ for 50 minutes, and filtering the crude extract to obtain a purple red liquid. At the same time, the red pigment of Sanhua plum has good scavenging capacity for hydroxyl radicals and 1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine (DPPH), which provides the corresponding theoretical basis for the high-value development of Sanhua plum fruit.Keywords: Sanhua plum; red pigment; extraction; resistance to oxidation三华李为蔷薇科李属植物，果实为圆形或近圆形，果皮淡紫色，果肉紫红色[1]。
三华李-木瓜复合果醋的发酵工艺研究
苏彩荣;余森艳;黎兰明;李秀秀;覃瑶双;农天霸
【期刊名称】《农产品加工》
【年(卷),期】2024()7
【摘要】以三华李和木瓜为主要原料,对三华李-木瓜复合果醋的发酵工艺进行优化研究。
通过单因素试验探究初始酒精度、果醋菌添加量、发酵温度和发酵时间对复合果醋发酵的影响,在此基础上以总酸为响应值,采用Box-benhnken响应面法进一步优化醋酸发酵工艺。
结果表明,三华李-木瓜复合果醋的最佳发酵工艺条件为初始酒精度9%(V/V),果醋菌添加量3%,发酵温度34℃,发酵时间11 d。
在此工艺条件下,三华李-木瓜复合果醋的总酸含量达5.17 g/100 mL,果醋外观呈棕红色,澄清透亮、酸味柔和、风味独特。
【总页数】5页(P47-51)
【作者】苏彩荣;余森艳;黎兰明;李秀秀;覃瑶双;农天霸
【作者单位】广西民族师范学院化学与生物工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS264.22
【相关文献】
1.番木瓜芒果复合发酵果醋工艺研究
2.木瓜西抽复合发酵果醋工艺研究
3.番木瓜-菠萝复合发酵果醋工艺研究
4.三华李香蕉复合果酒发酵工艺优化及香气成分分析
5.响应面法优化甘蔗番木瓜复合果醋发酵工艺
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天然复合甜味剂的配方研究作者：林薇薇万武波白燕左文健来源：《农产品加工·上》2019年第09期酸、氯化钠和甘氨酸的配方比例。
结果表明，甜菊糖苷复合甜味剂的最佳添加量分别为甜菊糖苷0.25%，罗汉果甜苷0.4%，柠檬酸0.2%，氯化钠0.03%，甘氨酸0.15%。
该甜菊糖苷复合甜味剂的甜度高、热量低，甜度约为蔗糖的480倍。
关键词：甜菊糖苷;罗汉果甜苷;甜味剂;柠檬酸;氯化钠;甘氨酸;复配中图分类号：TS264.9; ; ; 文献标志码：A; ; doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.09.004Abstract：The recipe of stevioside，mogroside， citric acid，sodium chloride，glycine was optimized by single factor and orthogonal experiments. The research results showed that the proportion of compound sweeteners was stevioside 0.25%，mogroside 0.4%，citric acid 0.2%，sodium chloride 0.03%，glycine 0.15%. The stevidside compound sweeteners had high sweetness，low calorie and the sweetness intensity was about 480 times that of sucrose.Key words：stevidside;mogroside;sweeteners;critric acid;soniun chloride;glycine;compound甜味剂是食品、医疗产业中不可或缺的重要材料，其种类较多，按来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂[1]。
新型甜味剂的复合及其在广式凉果中的应用研究的开题报告1. 研究背景及意义随着社会经济的发展和生活水平的提高，人们对食品的品质和口感要求越来越高。
甜味剂是一种广泛应用于食品和饮料中的添加剂，可以替代传统的白糖等甜味剂，使食品更加健康、营养和美味。
近年来，新型甜味剂成为研究热点，其具有甜度高、热量低、不致癌等优点，受到了人们的广泛关注和研究。
广式凉果是粤菜中的一种传统甜点，受到了广大消费者的喜爱。
传统的制作方法中需要添加大量的糖，从而带来过高的热量和健康问题。
因此，研究新型甜味剂在广式凉果中的应用，将有助于减少热量、改善口感和提高健康水平，在广泛的市场需求下具有重要的实际意义。
2. 研究内容和目标本研究的内容主要包括以下两个方面：(1) 复合新型甜味剂的研制。
针对目前市场上的新型甜味剂存在的甜度低、单一等问题，将不同种类的新型甜味剂进行复合，以提高甜度和改善口感，并通过实验室测试和品尝评价等科学方法，筛选出适宜的复合配方。
(2) 新型甜味剂在广式凉果中的应用研究。
以筛选出的新型甜味剂复合配方为探索对象，采用完全随机设计方案，在广式凉果中添加新型甜味剂，评估其对凉果品质、食感和营养成分等方面的影响，以期得到尽可能高的满意度和客户回头率。
3. 预期成果(1) 成功研制出口感更佳、甜度更高、热量更低的新型甜味剂复合配方，具有实用性和市场竞争力。
(2) 探究新型甜味剂在广式凉果中的应用效果，为凉果制作工艺和品质的提升提供新的思路和依据。
(3) 发表2-3篇与本研究相关的高水平学术论文，并申请相关专利。
(4) 推动新型甜味剂在食品行业中的应用及产业化，对社会生产力和人民生活水平的提高具有积极的促进作用。
专利名称：甜味增强剂、甜味增强的增甜剂组合物、它们的配制方法以及用途
专利类型：发明专利
发明人：英德拉·普拉卡什,马尼·厄普雷提,格兰特·E·杜波依斯,乔治·A·金,约瑟夫·库鲁斯克,拉斐尔·I·桑米格尔
申请号：CN201310279427.5
申请日：20080516
公开号：CN103416714A
公开日：
20131204
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明一般涉及能够增强增甜剂组合物甜味的甜味增强剂以及由其产生的增甜剂组合物。
特别地，本发明涉及包括能够增强所述增甜剂组合物甜味的氨基磺酸盐的增甜剂组合物。
申请人：可口可乐公司
地址：美国佐治亚州
国籍：US
代理机构：北京正理专利代理有限公司
代理人：赵晓丹
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