MSI微卫星不稳定

分子病理测序 msi-h
分子病理测序是一种用于分析个体基因组的技术，可以帮助医生诊断疾病、预测治疗效果和制定个体化治疗方案。

其中，MSI-H 是微卫星不稳定性（Microsatellite Instability-High）的缩写，是指肿瘤细胞中微卫星不稳定性明显增加的现象。

微卫星是基因组中的短串联重复序列，而微卫星不稳定性是指这些重复序列在细胞复制过程中发生错配修复错误，导致重复序列长度发生改变，进而引起肿瘤相关基因的突变和失活。

MSI-H在肿瘤中的出现通常与遗传性非息肉病性结肠癌（Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer，HNPCC）有关，也与一些其他癌症如子宫内膜癌、卵巢癌和胃癌等相关。

通过分子病理测序技术，可以检测肿瘤细胞中微卫星不稳定性的程度，从而帮助医生进行肿瘤的诊断和治疗决策。

在临床实践中，MSI-H的检测对于预后评估和治疗策略制定具有重要意义。

对于MSI-H的肿瘤，一些研究表明它们对于免疫治疗药物具有较好的治疗反应，因此MSI-H的检测也可以为免疫治疗的选择提供依据。

此外，MSI-H还可以作为一些遗传性肿瘤综合征的辅助诊断指标之一，对于家族史和遗传咨询也具有指导意义。

综上所述，分子病理测序技术可以帮助检测肿瘤中的MSI-H，
而MSI-H的检测结果对于肿瘤的诊断、治疗选择以及遗传咨询都具
有重要的临床意义。

希望以上回答能够全面、完整地解答你的问题。

msi检测原理今天咱们来唠唠这个MSI检测原理，可有趣啦。

MSI呢，全称微卫星不稳定性。

咱先得知道啥是微卫星。

微卫星就像是基因里的小标记，它们是一小段一小段的DNA重复序列，就像一串串小珠子一样，在基因组里这儿一串那儿一串的。

这些小珠子可重要着呢，正常情况下，它们在细胞每次分裂复制的时候，都能规规矩矩地被复制，数量啊、长度啊都不会有啥大变化。

那MSI检测就是看这些小珠子是不是还守规矩。

要是细胞里负责修复DNA错误的那些小助手，像什么错配修复蛋白啊，出了问题，那微卫星在复制的时候就可能乱套了。

比如说，本来应该复制出五个小珠子的长度，结果可能变成六个或者四个了，这就叫微卫星不稳定性。

这检测的原理啊，就像是给这些小珠子做个小体检。

科学家们有好多巧妙的办法来做这个体检呢。

有一种办法是通过PCR技术，宝子们可能听说过这个PCR，它就像一个超级复印机。

把包含微卫星的那一小段DNA拿出来，然后用PCR技术大量地复制它。

这样就有足够多的样本可以用来检测啦。

复制完了之后呢，就开始比大小啦。

正常的微卫星DNA长度是固定的，就像标准的小珠子串一样。

如果有MSI，那复制出来的DNA长度就会有变化，有的长一点，有的短一点。

就好像原本都是一样长的小绳子，现在有的被拉长了，有的被扯短了。

通过一种叫电泳的技术，就能把这些不同长度的DNA分离开来。

就像跑步比赛一样，短的跑得快，长的跑得慢，这样就能清楚地看到哪些是正常的，哪些是有MSI的啦。

你说这是不是很神奇？这MSI检测可不仅仅是好玩哦，它在医学上可有大用处呢。

比如说在癌症的诊断和治疗方面。

很多癌症的发生就和这个MSI有关系。

如果癌细胞有MSI，那就像是癌细胞有了一个小弱点。

医生们就可以根据这个弱点来制定专门的治疗方案。

像免疫治疗，对于MSI - H（高微卫星不稳定性）的癌症患者可能就特别有效。

再说说这个检测原理里那些隐藏的小秘密。

其实整个过程就像是一场侦探游戏。

科学家们要从细胞这个大迷宫里找到微卫星这些小线索，然后通过各种技术手段来判断这些线索是不是正常。

肿瘤微卫星不稳定性（MSI）检测每年可以指导约 5.8 万 MSI-H 的中国肿瘤患者进行免疫药物治疗。

微卫星不稳定性（Microsatellite Instability, MSI）微卫星 (Microsatellite) 是遍布于人类基因组中的短串联重复序列, 有单核苷酸、双核苷酸或高位核苷酸的重复，重复次数10-50 次。

与正常细胞相比，肿瘤细胞内的微卫星由于重复单位的插入或缺失而导致微卫星长度的改变，就叫做微卫星不稳定性。

大量研究表明，MSI 是由错配修复 (MMR) 基因发生缺陷引起的，与肿瘤的发生密切相关。

临床上已将MSI 作为结直肠癌及其他实体瘤预后和制定辅助治疗方案的重要分子标志物，并应用于协助 Lynch 综合征筛查。

对于不同肿瘤，其存在dMMR/MSI-H 的比率是不同的，具体比例如下图所示：检测意义据文献报道，大约 15% 的结直肠癌中存在 MSI-H 现象，与 MSS 特征的结直肠癌相比，其发病机制、预后和对药物的敏感性均不同。

在非结直肠癌的实体瘤中，也存在着不同比例的 MSI-H 现象，MSI 状态不同的实体瘤在对 Keytruda 响应率方面存在显著性差异。

1. 转移性结直肠癌（mCRC）患者对 PD-1 免疫治疗获益预测2015 年在新英格兰医学杂志发表的 NCT01876511 研究结果表明，PD-1 单抗治疗对 MSI-H 的 mCRC 表现出高缓解率，因此 Keytruda 单抗治疗 MSI-H 的 mCRC 获得 FDA 突破性疗法认定。

右图即是 FDA 批准 Keytruda 治疗 MSI-H 的 mCRC 的临床证据。

图中黑线、红线分别代表 MSI-H 和 MSS 的患者，无论是从无进展生存期还是总体生存率来看，同样是接受 Keytruda 治疗的情况下，具有 MSI-H 特征的比具有 MSS(微卫星稳定性) 特征的 mCRC 患者生存期更长。

2. MSI-H 的实体瘤（非结直肠癌）抗 PD-1 免疫治疗获益预测2017 年，FDA 批准 Keytuda 用于治疗 MSI-H 或 dMMR 的实体瘤患者。

深度解析：关于MSI（微卫星不稳定性）图1 MSI在肿瘤细胞中序列长度发⽣改变根据造成结直肠癌MSI分⼦机制的不同可分为两类：）：常由MLH1启动⼦区域⾼DNA甲基化造成MMR功1. 偶发性MSI结直肠癌（sporadicCRC）：能缺陷引起MSI。

偶发性MSI结直肠癌约占所有结肠癌患者的12%，易发⽣在⽆明显家族遗传史的⽼龄化个体中，MMR缺陷直接发⽣在结直肠癌体细胞中；）：⼜称Lynch综合症，占所有结直肠癌患者的2%-2. 遗传⾮息⾁病性结直肠癌（HNPCC）：5%，家族遗传性疾病，由于⽣殖细胞中携带有MMR基因突变，因⽽MMR功能易缺陷导致MSI结直肠癌出现。

常见Lynch综合症患者中MMR基因突变位点易发⽣在四个相关基因中：MLH1，MSH2，MSH6，PMS2。

根据结直肠癌中MSI被检测出的频率可以将其分为三类（图2）：MSS，⽆明显的MSI出现；MSI-L，MSI出现频率低，⼀般低于30%；MSI-H，MSI出现频率低，⼀般⾼于30%。

图2 美国NCI机构制定的MSI检测分类标准⼀、MSI常⽤检测⽅法：MSI常由MMR基因突变及功能缺失导致。

因此，在检测癌细胞中MSI时，既可以直接检测MSI序列变化，也可以通过检测MMR基因缺失来确定是否发⽣MSI。

两种检测⼀致性很好，MSI检测发现的结直肠癌中近93%也适⽤于MMR基因缺陷检测。

不同的是技术⼿段，MMR基因缺陷检测常依赖于免疫组化（蛋⽩⽔平），⽽MSI检测⼀般依赖于分⼦⼿段，PCR检测(DNA⽔平)（图3）。

图3 MMR免疫组化检测与MSI分⼦检测结果免疫组化检测的优势是可以直接鉴定出导致MSI发⽣的MMR缺陷基因，但是，约5%-11%的MSI发⽣并不会出现MMR蛋⽩的缺陷。

某些MMR蛋⽩错义突变，会损失MMR功能，但能被抗体检测识别，因此这是分⼦检测的优势，⽬前常⽤的检测MSI的⽅法是分⼦检测结合免疫组化检测。

⼆、MSI检测——NCCN指南解读1、MSI检测应在所有结直肠癌史的病⼈中进⾏针对结直肠癌患者的MSI检测准确度⾼图4 MSI分⼦检测结直肠癌常⽤marker⽬前，近15%的偶发结直肠癌及Lynch综合症结直肠癌患者含有MSI特征，通过MSI分⼦检测可以精准的检测结直肠癌中的MSI，尤以对MSI-H患者的检测，近100%准确度。

100篇泛癌研究文献解读之微卫星不稳定性为了分析不同类型、组织起源肿瘤的共性、差异以及新课题。

TCGA于2012年10月26日-27日在圣克鲁兹，加州举行的会议中发起了泛癌计划。

参考：/pmc/articles/PMC6000284/ 为此我也录制了系列视频教程在：TCGA知识图谱视频教程（B站和YouTube直达）发表于JCO Precis Oncol. 2017;的研究Landscape of Microsatellite Instability Across 39 Cancer Types. 系统性的研究了TCGA使用WES数据的微卫星不稳定性。

文献解读属于100篇泛癌研究文献系列，首发于：/4132.html微卫星不稳定性（Microsatellite Instability，MSI），是指由于在DNA复制时插入或缺失突变引起的MS序列长度改变的现象，常由错配修复(MMR)功能缺陷引起。

MSI现象于1993年被Jacobs等人在结直肠癌中首次发现，与癌症发生有关，可用于癌症检测。

结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是全球第三常见的癌症类型，约80-85%的结直肠癌由染色体不稳定性（CIN）引起，而另外15-20%的结直肠癌则主要是由MSI引起。

术语表：MSI诊断检测的方法和应用，包括DNA检测和免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）法根据结直肠癌中MSI被检测出的频率可以将其分为三类•MSS，无明显的MSI出现；•MSI-L，MSI出现频率低，一般低于30%；•MSI-H，MSI出现频率低，一般高于30%。

MSI检测可作结直肠癌预后良好的标志 MSI结直肠癌5年生存率要显著高于MSS结直肠癌，MSI-H结直肠癌比MSS结直肠癌有更好的预后，同时，研究者还发现MSI结直肠癌转化为恶性肿瘤的机率较其他类型低，尤其对年轻的MSI结直肠癌患者来说，治愈机率很大。

微卫星不稳定检测及其结果判定人类错配修复(MMR)基因除了检验和校正复制期间发生在微卫星样重复DNA序列上小的插入和丢失之外，还防止解旋的DNA序列重新结合。

MMR基因突变破坏了MMR蛋白的功能，引起重复DNA序列的产生及DNA修复错误，从而导致患者DNA出现微卫星不稳定(MSI)。

Lynch综合征是一种由错配修复(MMR)基因种系突变引起的常染色体显性遗传病。

MSI检测具有重要临床意义：1、诊断Lynch综合征：MSI是Lynch综合征的重要生物学标记，当MSI-H被证实，该诊断即可成立;2、判断预后及治疗效果：MSI-H的结直肠癌患者对化疗药物5-氟尿嘧啶的疗效不佳;3、鉴别遗传性胚系来源与散发性来源的MSI结直肠癌：散发性MSI-H结直肠癌的病因通常是hMLH1基因启动子甲基化，只有小部分为BRAF基因突变致MMR基因沉默而免疫组化阴性，并出现MSI。

若肿瘤MMR基因启动子甲基化或BRAF基因突变阳性，说明为散发性癌;4、筛查：Bethesda修订指南建议对小于50岁的患者常规进行MSI检测。

根据Bethesda修订指南，有下列指征的患者需做MSI检测：1、患者年龄小于50岁;2、肿瘤位于右半结肠;3、易发生肠内或肠外其他器官的多发性肿瘤;4、术后易再发其他原发性恶性肿瘤;5、肿瘤有淋巴细胞浸润;6、多分泌黏蛋白或有印戒细胞;7、浸润性生长模式。

MSI检测目前有以下两种检测方法：1、PCR技术检测方法对石蜡切片进行人工显微切割提取DNA，以一些微卫星点为标记指导合成引物进行PCR，通过凝胶电泳分析得出MSI谱，进行比较分析。

最常用的2个Promega分析系统由5个单核苷酸标记点(BAT-25、-26，MONO-27，NR-21、-24)构成;而美国国家癌症研究所(NCI)参考系统由3个双核苷酸(D2S123、D5S346和D17S250)和2个单核苷酸(BAT-25和-26)构成。

当胚系谱中微卫星的长度改变，MSI的诊断即可成立。

MSI评分医学1. 简介MSI（Microsatellite Instability，微卫星不稳定性）是一种遗传学特征，常见于一些肿瘤类型，如结直肠癌、胃癌和子宫内膜癌等。

MSI评分医学是通过对肿瘤组织中微卫星不稳定性的检测和评估，来帮助医生判断肿瘤的风险等级、预后以及治疗方案选择等。

2. MSI评分的意义2.1 预后判断MSI评分可以帮助医生判断患者的预后情况。

一般来说，高MSI分数与较好的预后相关联，因为高MSI分数通常意味着免疫系统对肿瘤细胞的较强杀伤作用。

而低MSI分数则与较差的预后相关联。

2.2 治疗方案选择根据患者的MSI评分结果，医生可以更好地选择适合患者的治疗方案。

例如，在结直肠癌中，高MSI分数患者可能会从免疫治疗中获益更多；而低MSI分数患者则可能更适合传统的化疗方案。

2.3 家族遗传性肿瘤综合征筛查高MSI分数也可以提示存在家族遗传性肿瘤综合征的可能性。

例如，Lynch综合征就与高MSI分数相关。

通过MSI评分，可以帮助医生筛查出潜在的家族遗传性肿瘤综合征患者，进一步进行相关的遗传咨询和检测。

3. MSI评分方法目前，常用的MSI评分方法主要有两种：PCR法和免疫组化法。

3.1 PCR法PCR法是一种通过扩增微卫星位点来检测微卫星不稳定性的方法。

该方法需要设计一组特定的引物来扩增肿瘤组织中的微卫星位点，并通过电泳等技术来检测扩增产物的大小变异。

根据不同微卫星位点扩增产物大小变异程度，可以计算出MSI评分。

3.2 免疫组化法免疫组化法是一种直接检测肿瘤组织中mismatch repair（MMR）蛋白表达情况的方法。

MMR蛋白是维持微卫星稳定性的关键蛋白，其表达异常与微卫星不稳定性相关。

通过检测MMR蛋白的表达情况，可以间接评估MSI状态。

4. MSI评分结果解读根据MSI评分结果，可以将肿瘤分为三个等级：高度微卫星不稳定（MSI-H）、低度微卫星不稳定（MSI-L）和微卫星稳定（MSS）。

微卫星不稳定（MSI）检测试剂盒
背景介绍
微卫星不稳定（Microsatallite Instability，MSI）表现为同一微卫星位点在不同个体之间以及同一个体的正常组织与某些异常组织之间，微卫星位点的重复单位的数目不同。

近年来的大量研究表明：MSI与肿瘤发生密切相关，如结直肠癌、胃癌、子宫内膜癌等。

据文献报道，大约15%的结直肠癌中存在MSI现象，与无MSI的结直肠癌相比，携带有MSI的结直肠癌其预后较好，并且二者药物反应也不一样。

故此，MSI检测对结直肠癌患者其意义重大。

在2011年关于结直肠癌筛查的NCCN Guidelines中，MSI已成为首要检测项目。

产品简介
MSI检测试剂盒是以多重荧光PCR技术为基础的基因突变检测系统，含有9对带有荧光标记的混合引物，其中包括6对单核苷酸重复位点（BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、NR27和MONO-27）以及2对5核苷酸重复位点（Penta C和Penta D）以及性别决定位点（Amelogenin）。

技术优势
1.6个基因座检测结直肠癌MSI：
我公司基于NCI标准，推出了结直肠癌MSI检测试剂盒，检测位点为常规
的6个准单态性基因座：NR-21、NR-24、NR-27、BAT-25、BAT-26、Mono-27。

2.8个基因座检测结直肠癌MSI：
在上述基础上再加测两个位点：NR-22、CAT-25，具有更高的准确性。

产品应用
结直肠癌筛查及用药指导。

产品表现
正常组织分形图微卫星不稳定MSI-H型
微卫星不稳定MSI-L型微卫星稳定MSS型方法比较
相关服务。

GeneMarker软件MSI应用概念：微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是指与正常组织相比，在肿瘤中某一微卫星由于重复单位的获得或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。

近年来, 随着微卫星不稳定概念在肿瘤分子生物学中的提出, 越来越多的研究认为肿瘤的发生和发展与微卫星不稳定密切相关, 并在其预后过程中起着重要的作用。

主要机制：①DNA多聚酶的滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配②MS同源重组导致碱基对的丢失和插入微卫星不稳定的检测方法与判断：微卫星不稳定性的研究方法，目前主要以PCR技术为基础研究微卫星不稳定性改变，步骤为：①首先需确定特定染色体上特定微卫星位点标记，并根据其序列合成特异性引物。

引物序列一般可根据特定位点直接从基因库中查询；②收集肿瘤组织及相应正常组织标本，，提取基因组DNA；③PCR扩增；④扩增产物的检测。

⑤判断结果。

GeneMarker软件MSI应用：GeneMarker中，通过肿瘤DNA与正常DNA扩增产物的峰的比对，以直方图（增加/减少）展示出不同。

在电泳图中，肿瘤样本的峰以浅红色与正常样本的峰一起显示，增加或减少的部分用红色直方图显示，极大的方便了用户对微卫星不稳定的检测。

GeneMarker软件MSI应用中，用户可自定义设置，以满足分析要求。

用户自定义设置1：Stutter Filter设置：用户可根据实际需求对Stutter Filter进行设置，若Stutter峰范围设置较小，则“不稳定”峰就会较多；反之亦然。

低Stutter filter(Left: 60, Right: 40)与高 stutter filter (Left: 99, Right: 99).用户自定义设置2：MSI Score设置：MSI Score值为肿瘤样本和参考样本的log2比率，MSI Score设置越小，“不稳定”峰就会越多；反之亦然。

微卫星不稳定性（MSI）在结直肠癌诊断及预后中的应⽤1 微卫星（microsatellites）不稳定性微卫星（microsatellites）⼜称简单重复序列，是存在于基因组中的⼀些⼩⽚段核苷酸的重复序列，重复单位⼀般由1~6个核苷酸组成，重复次数不超过60次，具有⾼突变性。

DNA 在复制过程中，尤其是微卫星，可能会出现碱基错配等错误，这些错误累积起来并⼀代代的传递下去，最终会产⽣基因突变进⽽导致细胞癌变。

这种在DNA复制过程中产⽣的⼀些简单重复序列的插⼊或缺失，被称为微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）[1]。

2 MSI与错配修复（MMR）蛋⽩间的关系DNA错配修复（Mismath repair, MMR）系统由⼀系列特异性修复DNA碱基错配的酶分⼦(MMR蛋⽩）组成。

MMR蛋⽩的主要功能是修复DNA复制过程中产⽣的错配，包括单碱基错配和2个以上的插⼊/缺失错配，从⽽保持遗传物质的完整性和稳定性，避免遗传物质发⽣突变。

据⽬前报道：涉及⼈类DNA错配修复的MMR蛋⽩主要有5个，其编码基因分别为MLH1、 PMS1 、PMS2、MSH2和 MSH6。

MMR系统会对在DNA复制过程中的碱基错配等错误进⾏纠正，⼀旦修复系统失效，基因突变的风险便会提⾼。

因此，MMR基因突变后， DNA复制时的过程中便会发⽣MSI[2, 3]。

3 MSI判定标准MSI的检测⽅法很多。

⽬前较常使⽤的检测技术为聚合酶链反应（PCR）和免疫组化（IHC）检测[4]。

PCR检测，⽬前公认的标志物套餐由BAT25、BAT26、NR21、NR24、NR22或NR27组成。

当检测的微卫星标志物中没有发现异常，标本定义为微卫星稳定性（MSS）；如果有⼀个标志物或低于40%的标志物显⽰异常，则标本被认定为低⽔平微卫星不稳定性(MSI-L)；当测试标志物的40%或超过40%异常时，标本被认定为⾼⽔平微卫星不稳定性（MSI-H）。

肺癌中微卫星不稳定性的病理异质性及临床应用引言肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率都相当高。

随着分子生物学和遗传学的发展，研究人员发现肺癌中微卫星不稳定性（MSI）的存在，并且发现了其在肺癌发生和发展过程中的重要作用。

MSI是一种遗传学上的现象，指的是微卫星序列（通常为1-6个核苷酸重复的DNA序列）在肿瘤细胞中发生插入或删除等改变。

本文将探讨肺癌中MSI的病理异质性以及其在临床上的应用。

肺癌中微卫星不稳定性的病理异质性原因与发生机制肺癌中MSI的发生与一系列的遗传事件相关，包括DNA错配修复系统（MMR）缺陷、DNA甲基化、基因突变等。

MMR缺陷是导致MSI最常见的原因之一，它可以导致肿瘤细胞中的突变累积。

此外，DNA甲基化异常也与肺癌中MSI的发生密切相关。

异质性表现肺癌中MSI的病理异质性主要表现在两个方面：肿瘤细胞中微卫星序列的改变类型和肿瘤组织中不同区域之间的异质性。

- 改变类型：肺癌中MSI的改变类型主要包括插入、删除和重复等。

这些改变会导致肿瘤细胞中一系列的突变和基因组重构。

- 异质性：肺癌组织中不同区域之间的异质性也是肺癌中MSI的一个显著特点。

不同区域的肿瘤细胞中微卫星序列的改变类型和程度可能存在差异，这对于肿瘤的治疗和预后预测都具有重要意义。

肺癌中微卫星不稳定性的临床意义诊断价值肺癌中MSI的检测已经被证明是一种可靠的诊断方法。

通过检测肺癌中MSI的状态，可以帮助临床医生确定肺癌的类型和预后，并指导个体化治疗方案的选择。

预后评估肺癌中MSI的存在与肿瘤的预后密切相关。

一些研究表明，肺癌中MSI的阳性与患者的生存率显著相关，MSI高度不稳定性的肺癌患者具有更好的生存率和预后。

治疗指导肺癌中MSI的检测结果可以指导肺癌患者的个体化治疗方案的选择。

一些研究表明，MSI高度不稳定性的肺癌对一些免疫治疗方法可能更为敏感。

临床应用前景肺癌中MSI的临床应用前景非常广阔。

msisensor2的原理
MSIsensor2是一种用于检测微卫星不稳定性（MSI）的工具，其原理基于肿瘤细胞中微卫星不稳定性的特征。

微卫星是DNA中重复序列的一种，它们在正常细胞中具有稳定的重复次数，但在肿瘤细胞中可能会发生错配修复系统的缺陷，导致微卫星的长度发生变化，从而产生微卫星不稳定性。

MSIsensor2的原理包括以下几个方面：
1. 微卫星标记位点的选择，MSIsensor2通过选择一组已知的微卫星标记位点，这些位点在正常细胞和肿瘤细胞中具有不同的长度，用于检测微卫星不稳定性。

2. 测序数据的分析，MSIsensor2接受来自肿瘤组织和正常组织的测序数据，通过比对这些数据，计算微卫星标记位点的长度差异，从而判断微卫星不稳定性的程度。

3. 样本比对和阈值设定，MSIsensor2会将肿瘤组织和正常组织的测序数据进行比对，根据微卫星标记位点的长度变化情况，设定微卫星不稳定性的阈值，用于判断样本是否存在MSI。

4. 结果输出，最终，MSIsensor2会输出一个MSI分数，用于表示肿瘤样本中微卫星不稳定性的程度，从而帮助临床医生进行肿瘤的诊断和治疗决策。

总的来说，MSIsensor2的原理是基于对肿瘤细胞中微卫星不稳定性特征的分析，通过测序数据的比对和分析，来判断肿瘤样本中微卫星不稳定性的程度，为临床诊断和治疗提供重要参考。