微卫星不稳定性的检测和意义 (1)

肿瘤组织基因组msi-h-概述说明以及解释1.引言1.1 概述肿瘤组织基因组msi-h是指肿瘤细胞中微卫星不稳定性（MSI）的状态，它是肿瘤基因组稳定性的一个重要指标。

MSI-h的概念最早提出于1997年，并随着肿瘤免疫治疗的发展，越来越受到关注。

MSI-h通常是由DNA错义修复系统（MMR）缺陷导致的。

MMR系统是维持基因组稳定性的重要机制，它能够修复DNA中的错配配对和插入缺失，防止微卫星区域的累积错配。

因此，MSI-h状态意味着肿瘤细胞中存在大量的微卫星位点错配，这种状态在临床上被广泛认为与肿瘤的发生和发展息息相关。

在本文中，将重点探讨肿瘤组织基因组msi-h的定义、特点、临床意义以及检测方法等内容。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容:文章结构部分旨在介绍本文的结构安排，帮助读者了解全文的逻辑框架和内容安排。

本文分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分将对肿瘤组织基因组msi-h进行概述，介绍文章的目的和意义，为读者提供对后续内容的预期和背景知识。

正文部分将分为三个小节，分别对肿瘤组织基因组msi-h的定义和特点、临床意义以及检测方法进行详细的介绍和讨论。

结论部分将总结肿瘤组织基因组msi-h的重要性，并展望其未来在临床应用中的潜力和发展方向。

通过以上结构安排, 读者将能够系统地了解和理解肿瘤组织基因组msi-h的相关知识，以及其在临床应用中的重要价值和前景展望。

1.3 目的:本文旨在介绍肿瘤组织基因组msi-h（微卫星不稳定性高）的概念、特点和临床意义，以及相关的检测方法。

通过本文的阐述，读者将能够深入了解msi-h在肿瘤发生发展过程中的重要作用，以及其在临床诊断、治疗和预后评估中的应用价值。

希望通过本文的阐述，能够为进一步研究和临床实践提供参考，促进肿瘤精准医学的发展，为肿瘤患者提供更有效的个体化治疗方案。

2.正文2.1 肿瘤组织基因组msi-h的定义和特点肿瘤组织基因组msi-h是微卫星不稳定性的一种表型，通常是由于DNA错配修复系统的缺陷导致的。

乳腺癌微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变的研究的开题报告（一）研究背景和意义乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，对女性的身心健康造成了极大的影响。

目前，乳腺癌治疗主要通过手术、化疗、放射等手段进行，但是这些治疗手段对于乳腺癌的个体化治疗还存在不足。

乳腺癌微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变已经被证实与乳腺癌的发生、发展以及治疗的预后密切相关。

因此，研究乳腺癌微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变的相关机制和治疗策略，对于提高乳腺癌治疗的效果和个体化水平具有重要的意义。

（二）研究内容和目标本研究将通过对乳腺癌微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变进行系统的分析和研究，探讨这些基因变异对于乳腺癌的发生和发展的影响，以及该机制对于乳腺癌治疗的作用。

具体研究内容如下：1.对乳腺癌样本进行微卫星不稳定性检测，筛选出具有微卫星不稳定性的样本进行进一步检测。

2.检测样本中DNA错配修复相关基因的突变情况，分析这些突变与微卫星不稳定性的关系。

3.利用基因芯片分析技术，分析微卫星不稳定性和DNA错配修复相关基因的表达水平，探究这些因素对于乳腺癌的发展和治疗的影响。

4.对上述结果进行综合分析，探讨乳腺癌微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变与治疗的关系，为乳腺癌个体化治疗提供新的思路和策略。

（三）研究方法和技术路线1.样本采集：采用手术切除或穿刺活检的方式获取乳腺癌组织或细胞，进行微卫星不稳定性检测和DNA错配修复相关基因突变检测。

2.微卫星不稳定性检测：采用PCR扩增和电泳分离技术，检测样本中的微卫星不稳定性，筛选出具有微卫星不稳定性的样本。

3.DNA错配修复相关基因检测：采用基因测序技术，检测样本中DNA错配修复相关基因的突变情况，包括MLH1、MSH2、MSH6等常见基因。

4.基因芯片分析：采用芯片探针对于上述基因进行检测，并通过生物信息学技术对于结果进行分析，比较不同样本中的基因表达水平。

5.综合分析：结合上述数据，探究微卫星不稳定性和DNA错配修复基因突变对于乳腺癌治疗的影响，提出新的治疗策略和思路。

肿瘤微卫星不稳定性（MSI）检测每年可以指导约 5.8 万 MSI-H 的中国肿瘤患者进行免疫药物治疗。

微卫星不稳定性（Microsatellite Instability, MSI）微卫星 (Microsatellite) 是遍布于人类基因组中的短串联重复序列, 有单核苷酸、双核苷酸或高位核苷酸的重复，重复次数10-50 次。

与正常细胞相比，肿瘤细胞内的微卫星由于重复单位的插入或缺失而导致微卫星长度的改变，就叫做微卫星不稳定性。

大量研究表明，MSI 是由错配修复 (MMR) 基因发生缺陷引起的，与肿瘤的发生密切相关。

临床上已将MSI 作为结直肠癌及其他实体瘤预后和制定辅助治疗方案的重要分子标志物，并应用于协助 Lynch 综合征筛查。

对于不同肿瘤，其存在dMMR/MSI-H 的比率是不同的，具体比例如下图所示：检测意义据文献报道，大约 15% 的结直肠癌中存在 MSI-H 现象，与 MSS 特征的结直肠癌相比，其发病机制、预后和对药物的敏感性均不同。

在非结直肠癌的实体瘤中，也存在着不同比例的 MSI-H 现象，MSI 状态不同的实体瘤在对 Keytruda 响应率方面存在显著性差异。

1. 转移性结直肠癌（mCRC）患者对 PD-1 免疫治疗获益预测2015 年在新英格兰医学杂志发表的 NCT01876511 研究结果表明，PD-1 单抗治疗对 MSI-H 的 mCRC 表现出高缓解率，因此 Keytruda 单抗治疗 MSI-H 的 mCRC 获得 FDA 突破性疗法认定。

右图即是 FDA 批准 Keytruda 治疗 MSI-H 的 mCRC 的临床证据。

图中黑线、红线分别代表 MSI-H 和 MSS 的患者，无论是从无进展生存期还是总体生存率来看，同样是接受 Keytruda 治疗的情况下，具有 MSI-H 特征的比具有 MSS(微卫星稳定性) 特征的 mCRC 患者生存期更长。

2. MSI-H 的实体瘤（非结直肠癌）抗 PD-1 免疫治疗获益预测2017 年，FDA 批准 Keytuda 用于治疗 MSI-H 或 dMMR 的实体瘤患者。

深度解析：关于MSI（微卫星不稳定性）图1 MSI在肿瘤细胞中序列长度发⽣改变根据造成结直肠癌MSI分⼦机制的不同可分为两类：）：常由MLH1启动⼦区域⾼DNA甲基化造成MMR功1. 偶发性MSI结直肠癌（sporadicCRC）：能缺陷引起MSI。

偶发性MSI结直肠癌约占所有结肠癌患者的12%，易发⽣在⽆明显家族遗传史的⽼龄化个体中，MMR缺陷直接发⽣在结直肠癌体细胞中；）：⼜称Lynch综合症，占所有结直肠癌患者的2%-2. 遗传⾮息⾁病性结直肠癌（HNPCC）：5%，家族遗传性疾病，由于⽣殖细胞中携带有MMR基因突变，因⽽MMR功能易缺陷导致MSI结直肠癌出现。

常见Lynch综合症患者中MMR基因突变位点易发⽣在四个相关基因中：MLH1，MSH2，MSH6，PMS2。

根据结直肠癌中MSI被检测出的频率可以将其分为三类（图2）：MSS，⽆明显的MSI出现；MSI-L，MSI出现频率低，⼀般低于30%；MSI-H，MSI出现频率低，⼀般⾼于30%。

图2 美国NCI机构制定的MSI检测分类标准⼀、MSI常⽤检测⽅法：MSI常由MMR基因突变及功能缺失导致。

因此，在检测癌细胞中MSI时，既可以直接检测MSI序列变化，也可以通过检测MMR基因缺失来确定是否发⽣MSI。

两种检测⼀致性很好，MSI检测发现的结直肠癌中近93%也适⽤于MMR基因缺陷检测。

不同的是技术⼿段，MMR基因缺陷检测常依赖于免疫组化（蛋⽩⽔平），⽽MSI检测⼀般依赖于分⼦⼿段，PCR检测(DNA⽔平)（图3）。

图3 MMR免疫组化检测与MSI分⼦检测结果免疫组化检测的优势是可以直接鉴定出导致MSI发⽣的MMR缺陷基因，但是，约5%-11%的MSI发⽣并不会出现MMR蛋⽩的缺陷。

某些MMR蛋⽩错义突变，会损失MMR功能，但能被抗体检测识别，因此这是分⼦检测的优势，⽬前常⽤的检测MSI的⽅法是分⼦检测结合免疫组化检测。

⼆、MSI检测——NCCN指南解读1、MSI检测应在所有结直肠癌史的病⼈中进⾏针对结直肠癌患者的MSI检测准确度⾼图4 MSI分⼦检测结直肠癌常⽤marker⽬前，近15%的偶发结直肠癌及Lynch综合症结直肠癌患者含有MSI特征，通过MSI分⼦检测可以精准的检测结直肠癌中的MSI，尤以对MSI-H患者的检测，近100%准确度。

MSI评分医学1. 简介MSI（Microsatellite Instability，微卫星不稳定性）是一种遗传学特征，常见于一些肿瘤类型，如结直肠癌、胃癌和子宫内膜癌等。

MSI评分医学是通过对肿瘤组织中微卫星不稳定性的检测和评估，来帮助医生判断肿瘤的风险等级、预后以及治疗方案选择等。

2. MSI评分的意义2.1 预后判断MSI评分可以帮助医生判断患者的预后情况。

一般来说，高MSI分数与较好的预后相关联，因为高MSI分数通常意味着免疫系统对肿瘤细胞的较强杀伤作用。

而低MSI分数则与较差的预后相关联。

2.2 治疗方案选择根据患者的MSI评分结果，医生可以更好地选择适合患者的治疗方案。

例如，在结直肠癌中，高MSI分数患者可能会从免疫治疗中获益更多；而低MSI分数患者则可能更适合传统的化疗方案。

2.3 家族遗传性肿瘤综合征筛查高MSI分数也可以提示存在家族遗传性肿瘤综合征的可能性。

例如，Lynch综合征就与高MSI分数相关。

通过MSI评分，可以帮助医生筛查出潜在的家族遗传性肿瘤综合征患者，进一步进行相关的遗传咨询和检测。

3. MSI评分方法目前，常用的MSI评分方法主要有两种：PCR法和免疫组化法。

3.1 PCR法PCR法是一种通过扩增微卫星位点来检测微卫星不稳定性的方法。

该方法需要设计一组特定的引物来扩增肿瘤组织中的微卫星位点，并通过电泳等技术来检测扩增产物的大小变异。

根据不同微卫星位点扩增产物大小变异程度，可以计算出MSI评分。

3.2 免疫组化法免疫组化法是一种直接检测肿瘤组织中mismatch repair（MMR）蛋白表达情况的方法。

MMR蛋白是维持微卫星稳定性的关键蛋白，其表达异常与微卫星不稳定性相关。

通过检测MMR蛋白的表达情况，可以间接评估MSI状态。

4. MSI评分结果解读根据MSI评分结果，可以将肿瘤分为三个等级：高度微卫星不稳定（MSI-H）、低度微卫星不稳定（MSI-L）和微卫星稳定（MSS）。

GeneMarker软件MSI应用概念：微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是指与正常组织相比，在肿瘤中某一微卫星由于重复单位的获得或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。

近年来, 随着微卫星不稳定概念在肿瘤分子生物学中的提出, 越来越多的研究认为肿瘤的发生和发展与微卫星不稳定密切相关, 并在其预后过程中起着重要的作用。

主要机制：①DNA多聚酶的滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配②MS同源重组导致碱基对的丢失和插入微卫星不稳定的检测方法与判断：微卫星不稳定性的研究方法，目前主要以PCR技术为基础研究微卫星不稳定性改变，步骤为：①首先需确定特定染色体上特定微卫星位点标记，并根据其序列合成特异性引物。

引物序列一般可根据特定位点直接从基因库中查询；②收集肿瘤组织及相应正常组织标本，，提取基因组DNA；③PCR扩增；④扩增产物的检测。

⑤判断结果。

GeneMarker软件MSI应用：GeneMarker中，通过肿瘤DNA与正常DNA扩增产物的峰的比对，以直方图（增加/减少）展示出不同。

在电泳图中，肿瘤样本的峰以浅红色与正常样本的峰一起显示，增加或减少的部分用红色直方图显示，极大的方便了用户对微卫星不稳定的检测。

GeneMarker软件MSI应用中，用户可自定义设置，以满足分析要求。

用户自定义设置1：Stutter Filter设置：用户可根据实际需求对Stutter Filter进行设置，若Stutter峰范围设置较小，则“不稳定”峰就会较多；反之亦然。

低Stutter filter(Left: 60, Right: 40)与高 stutter filter (Left: 99, Right: 99).用户自定义设置2：MSI Score设置：MSI Score值为肿瘤样本和参考样本的log2比率，MSI Score设置越小，“不稳定”峰就会越多；反之亦然。

·275··论著·生殖健康研究·子宫内膜癌患者微卫星不稳定性及其临床意义研究肖婧1，吴颖2*【摘要】　背景　子宫内膜癌是女性常见恶性肿瘤之一，近年来微卫星不稳定性在子宫内膜癌进展中的作用逐渐受到重视，但关于微卫星不稳定与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系研究较少见。

目的　分析子宫内膜癌患者微卫星不稳定性及其临床意义。

方法　选取2015年1月至2020年12月在湖北医药学院附属十堰市人民医院进行手术治疗的子宫内膜癌患者248例，收集其癌组织标本，采用免疫组织化学法检测MutL 同源物1（MLH1）、MutS 同源物2（MSH2）、MutS 同源物6（MSH6）、减数分裂后分离蛋白（PMS2）表达情况。

分析微卫星不稳定性与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。

结果　子宫内膜样腺癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失率分别为32.6%（78/239）、22.2%（53/239）、2.9%（7/239）、65.7%（157/239）；子宫内膜鳞癌患者 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失率分别为5/5、3/5、5/5、4/5；子宫内膜透明细胞癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失率分别为4/4、2/4、3/4、2/4。

不同病理类型子宫内膜癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

子宫内膜样腺癌患者高微卫星不稳定性（MSI-H）、低微卫星不稳定性（MSI-L）、微卫星稳定性（MSS）发生频率分别为19.7%（47/239 ）、34.7%（83/239）、45.6%（109/239）；子宫内膜鳞癌患者MSI-H、MSI-L、MSS 发生频率分别为4/5、1/5、0；子宫内膜透明细胞癌患者MSI-H、MSI-L、MSS 发生频率分别为3/4、1/4、0。

不同病理类型子宫内膜癌患者MSI-H、MSI-L、MSS 发生频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。