第二节 液相色谱检测方法

文件编号： SC-SOP-00400 第 1 页共 1 页1. 目的：规范液相色谱检测操作2. 范围：适用于抗菌肽有效成分检测3. 职责：实验室人员对本操作规程的实施负责。

4. 内容：4.1 样品制备取300ul样品液加入到1.2ml甲醇中，摇匀浸提60min，然后3500rpm离心15min，取上清用0.22um的一次性过滤器过滤待用，然后将一次性插管置于样品瓶中，加入20ul滤液，盖上盖子。

4.2 流动相配制有机相：乙腈装于带盖玻璃瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

无机相：使用色谱级乙酸铵配制10mmol/L的乙酸铵溶液，用超纯水配制，装于带盖玻璃瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

水：装于带盖玻璃瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

4.3 仪器准备安装色谱柱：将色谱柱按照柱子的箭头指向安装，拧紧固定螺母开机：打开电脑，然后依次打开泵、进样器、柱温箱、检测器电源，电脑端连接仪器。

平衡基线：将泵的吸取头依次插入对应的有机、无机相瓶中，开启泵和进样器的排气，然后电脑端开启主控、柱温箱、泵，开始平衡基线，待基线呈现为直线时即可。

4.4 上样：将装有待检样品的样品瓶放入进样箱内，记录位置和对应样品瓶编号4.5 检测：设定好对应的方法文件，检测波长为210nm，柱温为30℃，设置流动相比例为有机相：无机相=35：65，流速为0.3ml/min，进样10ul。

4.6 结束：检测完成后，关闭泵，将无机泵吸取头取出置于准备好的水中，开启泵的排气，将有机和无机相的比例调整为50%，流速为1ml/L，开启泵，冲洗色谱柱半个小时以上，依次关闭检测器、柱温箱、进样器、泵、电脑，取出色谱柱，清理垃圾。

5. 注意事项5.1 注意所有进入仪器的液体必须超声除去气泡，非色谱级试剂必须使用0.22um的一次性过滤器过滤，水必须使用超纯水。

5.2 设备必须按照操作规程使用，禁止不熟悉的人员单独使用。

液相色谱法药物分析技术的使用方法液相色谱法（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的药物分析技术，可以用于分离、鉴定和定量药物或其他化合物。

该技术具有高效、灵敏、选择性好等优点，被广泛应用于药物研究和制药行业。

本文将介绍液相色谱法药物分析技术的使用方法，包括样品准备、色谱柱选择、色谱条件优化等方面。

1. 样品准备在液相色谱法药物分析中，样品的准备非常关键。

通常，样品需要经过提取、纯化和浓缩等处理步骤。

提取可以采用溶剂提取、固相萃取或液液萃取等方法，根据药物的性质和样品的特点选择合适的提取方法。

纯化可以通过固相萃取柱等固相萃取方法进行，以去除样品中的干扰物。

最后，对样品进行适当的浓缩，使其达到液相色谱分析所需的浓度范围。

2. 色谱柱选择色谱柱是液相色谱法药物分析中的核心部分，其选择直接影响到分离效果和定量结果的准确性。

在选择色谱柱时，需要考虑样品的性质、分离目标、色谱条件等因素。

常见的色谱柱类型包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤色谱柱等。

反相色谱柱适用于一般的药物分析，而离子交换色谱柱则适用于酸、碱性物质的分析。

根据实际需求进行选择，同时也需要注意色谱柱的耐用性和稳定性。

3. 色谱条件优化在液相色谱法药物分析过程中，色谱条件的优化对于分离效果和分析速度至关重要。

色谱条件包括流动相的选择、缓冲剂浓度、pH值、流速等因素。

对于药物分析来说，常见的流动相包括水、有机溶剂或其混合物。

根据药物的亲水性或疏水性进行选择。

同时，缓冲剂的浓度和pH值也需要根据药物的性质进行调整，以实现最佳的分离效果。

流速的选择一般考虑分离效果和分析时间之间的平衡，过快的流速可能导致分离不彻底，而过慢的流速则会延长分析时间。

4. 样品注射和柱温控制在液相色谱法中，样品注射的方式也会对分析结果产生影响。

常见的注射方式包括进样器自动进样、手动微量注射等。

对于样品浓度较高的情况，可以采用自动进样的方式，而对于样品浓度较低的情况，则需要选择手动微量注射。

分析液相色谱仪检定方法和注意事项摘要液相色谱仪是高精度的仪器之一，在物质分离分析中所起的作用日渐重要，针对该仪器的检定，国家颁布了统一的检定标准，检定过程需要严格按照该标准来执行。

本文主要介绍了液相色谱仪的工作原理及其组成，并简单介绍了几个常见项目的检定方法和在检定过程中需要注意的一些问题，为检定人员提供一定的参考。

关键词液相色谱仪；检定；液相色谱法液相色谱仪是广泛应用在研究所，实验室等场所、对所研究样品进行分离分析的常规仪器之一。

它的优点主要有：1）可以在短时间内把样品分析出来；2）对于所分析样品没有太多要求，只要能制成液体即可；3）不需要太多的样品就可以分析出来；4）对于各组分含量很少的样品也能分析出来。

以上优点决定了该仪器在生物、医药、食品、材料等各领域研究工作的广泛应用。

1 液相色谱仪的原理高压泵利用高压把流动相压进系统中，然后样品溶液从进入到流动相中，并跟随流动相运动，最终进入色谱柱中，由于样品溶液的各个组成物质具有不同的性质，在色谱柱中运动时会有一定的差异，经过一段时间的运动以后，运动速度差异会变得越来越大，这样就被分成多个部分分别从色谱柱中流出，这样在检测器中就记录下了这些样品组分的浓度，然后以图谱的形式呈现出来。

2 液相色谱仪的组成液相色谱仪主要由加入样品系统、输送样品系统、分离样品系统、检测结果系统和结果分析处理系统组成。

2.1样品加入系统一般是用安装有隔膜的注射器或者是利用高压来加进样品，为了提高所分析样品的重复性，要在加样时注意使每次加入的样品量保持相同。

2.2样品输送系统高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分组成了输送样品系统。

高压泵的一般压强为14.7MPa～44MPa，如此高的压强可以使待分析样品液体以相当大的速度通过层析柱，较大速度可降低样品在层析柱中向四周扩散。

贮存器和密度梯度仪的作用是使样品流动相随着所用固定相和样品的变化而变化，具体包括改变洗脱液的吸水性、阴阳离子浓度、PH值，这样就可使各种样品成分最终都可以实现有效的分离，增强分离的效果。

液相色谱仪检定方法及注意事项摘要：本文对液相色谱仪检定方法及检定中出现的问题，结合自己的工作经验进行了探讨。

关键词：液相色谱仪 检定1、概述液相色谱仪因分离效率高；应用范围广；分析速度快；样品用量少；灵敏度高等特点，在送药、食品、环境、材料等领域有了广泛的应用，成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。

本文依据JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程，以紫外—可见光检测器为例，结合实际工作对主要检定项目泵流量、柱箱温度、基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、定性定量重复性的检定及检定中的注意事项说几点看法。

2、检定方法按规程要求设定流量、启动仪器，待压力稳定后在规定时间内收集流动相，同时用秒表计时，出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，在天平上称重，重复测量3次，则流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR ，公式如下：%100/)(⨯-=-S S S F F m F S%100/)(min ⨯-=--m S F F x Fma S 式中：F m -F m =（W 2-W 1）/（e t ·t ），流量实测值，ml/min ； W 2-容量瓶+流动相的质量，g ；W 1-容量瓶的质量，g ；e 1-实验温度下流动相的密度,g/cm 3；t-收集流动相的时间，min ；min /，ml F m 值同一组测量的算术平均--；Fs 流量设定值，ml/min ；Fmax-同一组测量中流量最大值，ml/min ；Fmin-同一组测量中流量最小值，ml/min ；2.2注意事项2.2.1收集流相和计时由一个人完成，减少计时误差；因甲醇容易挥发，收集时用封口胶密封容量瓶瓶口，收集完一瓶后立刻称量，收集的流动相在换算成体积后保留小数点后三位，最后结果保留小数点后一位。

2.2.2如果实际流速低于设定值，清洗或更换单向阀，过滤头；如果流速过高，检查流速补偿和压缩补偿调节是否失灵，如果流量不稳，检查泵头内是否聚集气泡，打开放空阀，让泵在高流速下运行，排除报泡；检查泵头是否松动，拧紧泵头固定螺丝，检查输液管路漏液或部分堵塞，需逐段管路进行排除。