小鼠精子畸形试验
一、目的与要求
1. 熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。
2. 学习和掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤，正常精子及畸形精子的镜下观察。
3. 了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。
二、实验原理
精子的畸形主要是指精子形态的异常改变，大、小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。因此精子形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。大、小鼠精子畸形试验可检测受试物对于精子生成、发育的影响，而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性，故精子畸形试验可用作检测受试物在体内对生殖细胞的致突变作用。
三、实验设计
1. 动物选择：一般采用小鼠，因为小鼠比较经济，且有大量的实验结果证实小鼠在该实验系统中对受试物最为敏感。6~8周龄（体重25~35g），雄性。每组应保证至少有5只存活小鼠。
2. 染毒途径：多用腹腔注射，也可采用与人体实际接触化学毒物相同的途径，如经口、吸入及皮肤接触等。
3. 染毒次数及取样时间：可采用1次或每天1次连续5天的方法进行染毒。
各种化学毒物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种化学毒物后不同时间出现精子畸形，故有条件时，可于给受试物后第1、4、10周处死动物，检查精子形态。因为大部分化学毒物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感，故一般均是于首次给受试物后的第35天处死。
4. 剂量选择：至少设置3个剂量组。最高剂量组5天总剂量应能使部分动物死亡，一般可取1/2 LD50为高剂量组，然后以1/2~1/4递减作为中、低剂量组。另设溶剂对照组（阴性对照组）和阳性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺（20 mg/kg）或甲基磺酸甲酯（75 mg/kg）或甲基磺酸乙酯（60 mg/kg）进行腹腔注射，每天1次，连续5天。
四、操作步骤
1. 制片
颈椎脱臼处死小鼠，取出双侧附睾，将附睾放入1 ml磷酸盐缓冲液或生理盐水中。用眼科剪将附睾纵向剪1~2下，静止3~5 min，轻轻摇动。用4层擦镜纸或合成纤维血网袋滤除组织碎片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片一端，均匀推片，待玻片晾干后用甲醇固定5min以上，自然晾干。用1 %~2 %伊红染色1小时，用水轻冲，干燥。
2. 阅片
在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠较少的区域，然后用油镜计数。每只小鼠为一观察单位，计数1000条完整的精子中畸形精子数，计算各组小鼠精子畸变率。其中有头无尾（轮廓不清）、头部与其他精子或碎片重叠及人为剪碎的精子均不计算。
精子畸形主要表现在头部，其次为尾部，可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜的坐标数，以备复查。并分别记录异常类型，以便统计精子畸形率及精子类型的构成比。判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。
五、结果分析及评价
每只动物应按精子畸形类型分别记录，以便计算各实验组的精子畸形发生率（百分率）和精子畸形类型的构成比。利用Wilcoxon秩和检验法和其他适当的统计学方法。将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行比较。
在结果判断时，首先要注意假阳性结果的排除。某些因素可导致机体出现精子畸形率的增高，如变态反应、感染、缺血和体温升高等。
不同品系的小鼠的精子畸形率本底差异值较大，而且影响的因素比较多，故在结果分析时，应该首先观察阳性和阴性的实验结果。阳性对照组精子畸形率的增高应该在实验室的历史记录或文献报道的范围之内，并与阴性对照组的差异具有统计学上的意义；阴性对照组的精子畸形率也应与自己实验室的历史记录或文献报道相接近，否则实验结果可信性较差，需重复试验。一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%，但每个实验室应有自己稳定的精子自发畸形率。
精子畸形试验的阳性的判断标准是精子畸形发生率至少为阴性对照组的两倍或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应关系者。或者至少应该有两个相邻剂量组的精子畸形率达到阴性对照组的
两倍或经检验差异具有统计学上的意义，并且实验结果能够进行重复。如果实验组的染毒剂量已经使动物发生死亡，而精子畸形仍未见增加，则可判定试验为阴性结果。如有以下情况，试验必须重做：①剂量-反应关系不确定；②精子畸形率仅在一个剂量组升高。
食品安全模拟试卷一（第一、二章） 一、选择 1. WHO已将下列_____________列为极危险的有害农药。 A 甲萘威B涕灭威C 甲氰菊酯D 二氯苯醚菊酯 2. 蔬菜对有机磷农药的吸收能力下列正确的是： A 根菜类>叶菜类>果菜类 B 叶菜类>根菜类>果菜类 C 果菜类>叶菜类>根菜类 D 以上都不对 3. 1967年，日本米糠油事件导致5000多人患病，该病由_____________引起。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 4. 下列能引起运动失调、视野变窄的重金属是_____________。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 5. 水俣病是由下列_____________引起的。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 6. 痛痛病是由下列_____________引起的。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 7. 下列具有“世纪之毒”之称的是_____________。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 8. 下列植物最容易受到氟化物污染的是_____________。 A 豆科植物 B 谷类植物 C 十字花科植物 D 山茶科植物 9. 下列植物对重金属吸收能力最强的是___________，最弱的是_____________。 A 小麦 B 大米 C 果类 D 蔬菜 10. 下列物质有类似人体激素作用的是_____________。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 11. 下列不属于有毒蛋白的是_____________。 A 蓖麻毒素 B 巴豆毒素 C 刺槐毒素D龙葵毒素 12. 去除胰蛋白酶抑制剂的方法最简单有效的方法是_____________。 A 用水浸泡至60%含水量 B 干热 C 浸泡后高压 D 高温加热 二、名词解释 1. 食品安全性 2. 食品安全 3. 过敏 4. 农药残留 5. 兽药残留 6. 实质等同性 7. 转基因食品 三、填空 1.影响食品卫生和安全最主要的因素是____________污染，其中包括 _____________和______________。 2.我国食品污染物监测网数据显示，___________、_____________和 ______________3种常见的食源性致病菌检测阳性率逐年上升。 3.环境污染物包括_____________和_____________。 4.二噁英、多环芳烃、多氯联苯等工业化合物都具有_____________和 _____________等特点，对食品安全性威胁极大。 5.食品加工过程中使用的各种包装和容器可能给食品带来有毒物质的污染，如 _____________可从聚苯乙烯塑料包装进入食品；陶瓷器皿表面的釉料中所含的_____________、_____________和_____________等盐溶入酸性食品中； _____________处理的包装纸上残留有毒的胺类化合物；不锈钢器皿存放酸性食品时间较长渗出的_____________、_____________等也可污染食物。 6.食品烹饪过程中因高温产生的_____________、_____________都是毒性极强
正确看待精子畸形率. 来源：邓天勤 黄永汉 日期：2009-1-14 在泌尿、男科门诊，经常遇到病人拿着精子畸形率检查的报告单，问医生：从报告单上看，我的精子畸形率80%左右，那么高，会不会以后生的孩子可能是畸形的？跟患者解释这个跟孩子的畸形是无关的，是与生育及体外受精相关的，但是对这个解释患者还是半信半疑的。 那让我们先了解下，精子畸形率是如何来的？泌尿男科研究室是根据WHO第四版人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册，对精液常规推片，采用改良巴氏染色法进行染色，在光镜下计数200条精子，分析精子形态。WHO将经染色后畸形精子分为：头部缺陷、颈部和中段缺陷、尾部缺陷和胞浆小滴异常4类。我们检查报告通常分为：头部缺陷、中段缺陷、尾部缺陷。其计算例如以下过程： 计数的精子数：200 正常精子数：78 正常精子百分比：（78/200×100%）39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数：110（55%） 中段缺陷精子数：18 （9%） 尾部缺陷精子数：16 （8%） 缺陷总数：（122+18+16） 144 畸形精子指数(TZI)（缺陷总数/缺陷精子数）=144/122 1.18 精子畸形指数(SDI)（缺陷总数/所数精子总数）=144/200 0.72
畸形精子指数（teratozoospermia index, TZI）的数值介于1.00（每个异常精子只有一种缺陷）和3.00（每个异常精子都有头、中段及尾部缺陷），有报道提示，TZI ＞1.6与未经治疗不育夫妇的低生育率有关，而且精子畸形指数(sperm deformity index,SDI )1.6是体外受精失败的阈值。TZI和 SDI预示精子在体内和体外的功能情况。 因为WHO第4版手册中未给出正常参考值，仅说明当正常形态精子率<15%时体外受精率显著降低，所以我们的报告的正常参考值为：正常精子形态>15%, TZI0~1.5, SDI 0~1.5。其临床意义：正常形态精子率>15%；精子畸形率越高，生育机会越低，而流产、死胎的可能性就越大，当精子畸形率>85%或TZI>1.6时，可引起生育障碍，导致不育症。如果正常形态<15%或SDI>1.6时体外受精降低。 通过上述分析，应该知道精子畸形率跟婴儿畸形是不相关，婴儿的畸形应该是与遗传相关。对于一份精子畸形率报告，我们所要看的是：精子正常形态、TZI、SDI，通过这几项指标及综合精液分析报告来说明精子在体内和体外的功能情况，对男性不育症的诊断及治疗具有辅助意义。
须正确看待精子畸形率的态度 精子畸形率检查的报告单显示精子畸形率80%左右，会不会以后生的孩子可能是畸形的？其实这个跟孩子的畸形是无关的，是与生育及体外受精相关的。 精子畸形率是如何来的？根据WHO第四版人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册，对精液常规推片，采用改良巴氏染色法进行染色，在光镜下计数200条精子，分析精子形态。WHO将经染色后畸形精子分为：头部缺陷、颈部和中段缺陷、尾部缺陷和胞浆小滴异常4类。检查报告通常分为：头部缺陷、中段缺陷、尾部缺陷。其计算例如以下过程： 计数的精子数：200 正常精子数：78 正常精子百分比：(78/200×100%)39% 缺陷精子数：(200-78) 122(61%) 头部缺陷精子数：110(55%) 中段缺陷精子数：18 (9%) 尾部缺陷精子数：16 (8%) 缺陷总数：(122+18+16) 144 畸形精子指数(TZI)(缺陷总数/缺陷精子数)=144/122 1.18 精子畸形指数(SDI)(缺陷总数/所数精子总数)=144/200 0.72 畸形精子指数(teratozoospermia index，TZI)的数值介于1.00(每个异常精子只有一种缺陷)和3.00(每个异常精子都有头、中段及尾部缺陷)，有报道提示，TZI>1.6与未经治疗不育夫妇的低生育率有关，而且精子畸形指数(sperm deformity index，SDI )1.6是体外受精失败的阈值。TZI和SDI预示精子在体内和体外的功能情况。 因为WHO第4版手册中未给出正常参考值，仅说明当正常形态精子率<15%时体外受精率显著降低，所以报告的正常参考值为：正常精子形态>15%，TZI0~1.5，SDI 0~1.5。其临床意义：正常形态精子率>15%；精子畸形率越高，生育机会越低，而流产、死胎的可能性就越大，当精子畸形率>85%或TZI>1.6时，可引起生育障碍，导致不育症。如果正常形态<15%或SDI>1.6时体外受精降低。 通过上述分析，应该知道精子畸形率跟婴儿畸形是不相关，婴儿的畸形应该是与遗传相关。对于一份精子畸形率报告，我们所要看的是：精子正常形态、TZI、SDI，通过这几项指标及综合精液分析报告来说明精子在体内和体外的功能情况，对男性不育症的诊断及治疗具有辅助意义。
动物繁殖学试题库 一、名词解释 11隐睾；2副性腺 21生殖激素；2神经激素；3长反馈；4短反馈；5超短反馈；6外激素；7大神经内分泌系统；8小神经内分泌系统；9动物的化学通讯；10动物的物理通讯;11局部激素；12神经内分泌； 31性成熟；2体成熟；3行为系列；4精子发生；5精子发生周期；6果糖酵解；7外源性呼吸；8精子冷休克；9呼吸商；10精子成熟；11精子的趋流性； 41母畜初情期；2发情周期；3季节性发情；4排卵率；5产后发情；6安静排卵；7卵泡期；8黄体期；9自发性排卵;10发情鉴定；11初配适龄;12诱发性排卵； 51人工授精；2精子活率；3精子密度；4精子畸形率；5精液稀释；6变温保存；7液态保存；8冷冻精液；9精液平衡； 61受精；2精子获能；3透明带发应；4卵黄封闭作用；5妊娠识别；6妊娠的建立；7胎盘；8怀孕脉搏；9附植；10精子顶体反应；11卵裂；12子宫拴； 71分娩预兆；2产道；3胎向；4胎位；5胎势；6子宫复原；7产后期；8分娩;9牛胎衣不下;10破水;11努责;12产力;13恶露;14前置； 81发情控制；2同期发情；3诱发发情；4胚胎移植；5超数排卵；6诱发分娩；7核移植；8胚胎分割；9卵子培养；10排卵控制； 91繁殖力；2正常繁殖力；3情期受胎率；4不返情率；5配种指数；6产犊指数；7窝产仔数；8繁殖成活率；9第一情期受胎率；10繁殖率；11总受胎率；12总情期受胎率；13公羊效应； 二、填空题 11家畜的睾丸为（）形； 2成年未孕母牛卵巢的形状为（）形； 3公畜的交配器官是（）； 4母畜的交配器官是（）；
5精子在（）中最后成熟； 6原始卵泡位于卵巢的（）部； 7对分子宫二角基部之间的纵隔有一纵沟，称（）； 8胎儿的发育场所是（）； 21各种家畜孕酮的含量，在卵泡期都低于（）； 2前列腺素是（）分泌的局部激素； 3催产素分泌的调节一般是（）性的； 4调节松果腺激素分泌的主要因素是（）； 5PMSG是由马属动物子宫内膜的（）组织所分泌； 6HCG主要来源于孕妇胎盘绒毛的（）； 7在调节家畜繁殖机能方面起重要作用的前列腺素是（）； 8在所有的家畜中，发情周期内雌激素的含量以（）期最高； 9对生殖活动有间接调节作用的激素称（）； 10控制LHRH分泌调节的高级神经中枢，位于大脑基底部的中枢神经（）；11低等动物中的松果腺是（）； 31雄性动物的性成熟一般比雌性动物（）； 2精子的头部呈（）形； 3精子的呼吸主要在（）进行； 4精子的正常运动型式是（）； 5精子的发生是在睾丸内的（）中进行的； 6对精子起营养、支持作用的细胞称作（）细胞； 7精子蛋白质的分解往往表示精子品质已（）； 8精子的比重比精清略（）； 9新采出的牛、羊精液偏（）性； 10新采出的猪、马精液偏（）性； 11早期幼畜的性腺对微量促性腺激素缺乏（）； 12培育品种的性成熟比原始品种（）； 13公畜的初配年龄主要决定于（）； 14大家畜的性成熟时间比小家畜（）； 15精子向附睾内运行发生的最显著的变化是（）； 16精子最脆弱的部分是（）； 17精清中的磷脂主要来源于（）；
＊ 安徽省教育委员会资助课题 作者单位:233003 蚌埠医学院卫生学教研室 小鼠精子畸形试验方法的改进 ＊ 周纯先 肖 棣 王帮霞 王允滋 摘要 目的:改进检测小鼠精子畸形的试验方法。方法:采用改进的小鼠精子畸形试验方法进行观察,并与有关试验方法作对比研究。结果:两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,环磷酰胺阳性组和生理盐水对照组,其观察结果均以用1ml 0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合小鼠精子畸形分析的试验要求。结论:本法具有操作简便、镜检满意和结果可靠等优点。关键词 精子计数 小鼠 中国图书资料分类法分类号 R 321.1 Improvement in method of sperm aberration test in mice Zhou Chunxian ,Xiao Di ,Wang Bangxia ,Wang Yunzi (Department of Hygiology ,Bengbu Medical College ,Anhui 233003) A bstract Objective :To improve the method of sperm aberration test in mice .Methods :The im proved method for sperm aberration test was used in mice to compare w ith o ther methods .Results :Tests taken from cyclophosphamide mice and norm al saline treated mice w ere used to make sperm suspension in 2different volume (1and 3ml )of 0.9%saline for smear examination of abno rmal sperm under microscope .The result show ed that sperm suspended in 1m l saline w as satisfactory .Conclusions :This method has m any adventages ;it is easy to perfo rm ,the amount of sperm obtained is satisfactory fo r ex amination and the results are reliable .Key words sperm count ;mice 精子畸形试验常用于观察精子头部和尾部的形态异常,是研究外来化学毒物诱发人或动物精细胞突变和判断有无生殖毒性作用的常用方法之一。目前用于检测小鼠精子畸形的试验方法有多种〔1,2〕,但其操作过程过于复杂,有的试验结果甚至不够理想。本文目的是对有关试验方法进行改进,简化操作步骤,建立本实验室条件下的小鼠精子畸形试验 方法,现作报道。1 材料与方法 1.1 动物 选用本院实验动物科提供的昆明种雄性小鼠,体重25～28g 。 1.2 试剂 环磷酰胺(上海产);0.9%生理盐水;1%伊红溶液。 1.3 实验方法 试验分2组,每组4只。Ⅰ组为环磷酰胺阳性组,按40mg /kg 体重腹腔注射;Ⅱ组为0.9%生理盐水阴性对照组,按0.1ml /10g 体重腹腔注射。各试剂物均每 恩医科大学学报,1989,15(5)∶442 3 李柏青,杨贵贞.小鼠胸腺上皮细胞增养上清的生物学活性.中 华微生物学和免疫学杂志,1989,9(4)∶2224 Geenen V ,Legros JJ ,Franchimont P ,et al .Coexsis tenc e of oxytoc in and neurophysin in the human thymus .Science ,1986,232(4749)∶5085 Geenen V ,Defresne M P ,Robert F ,et al .The neurohormonal thymic microenvironment :Immunocytochemical evidence that thymic nurse cell s are neuroendocrine cells .Neuroendocrinology ,1988,47(4)∶365 6 Amsen D ,K ruisbeek AM .T hymocyte selection :Not by TC R alone . Immunol Rev ,1998,165∶2097 M arkwick AJ ,Lolait SJ ,Funder JW .Immunoreactive arginine vasopressin in the rat thymus .Endocrinology ,1986,119(4)∶16908 Geenen V ,Kecha O ,Brilot F ,et al .The thymic repertoire of neuroendocrine -related self antigens :Biol ogical rol e in T -cell selection and pharmacological impl ications .Neu roimmunomodulation ,1999,6(1,2)∶115 9 M artens H ,Kecha O ,Charlet -Renard C ,et al .Neurohypophysial peptides stimulate the phosphorylation of pre -T cell focal adhesion kinases .Neuroendocrinology ,1998,67(4)∶282 10 Geenen V ,M artens H ,Vandersmissen E ,et al .Cellular and molecular aspects of thymic T -cell education in neuroendocrine self principl es .Implications for autoimmunity .Ann NY Acad S ci ,1998,840∶328 〔收稿日期 1999-06-04〕 223 蚌埠医学院学报1999年7月第24卷第4期DOI :10.13898/j .cn ki .issn .1000-2200.1999.04.002
精子畸形指数sdi 【导读】正常的精液的质量是：正凡人精液中也存在异常精子，一般所占百分率低于30%，活力优+良的精子占有比率是>50%，假如畸形精子百分率高于50%，那么就称为精子畸形指数高。精子畸形率标准是检验精子是否健康的指标。精子畸形是临床比较常见的现象。精子畸形过多，常常是不孕不育中的某种疾病。 正常的精液的质量是：正凡人精液中也存在异常精子，一般所占百分率低于30%，活力优+良的精子占有比率是50%，假如畸形精子百分率高于50%，那么就称为精子畸形指数高。受精卵就像一颗种子，要经历精子和卵子相结合以及一系列复杂而奇妙的过程，才会最终成长为一个健康的宝贝。如果，在最初精子和卵子结合的时候，受精卵没有成长好，那么它很可能就会停止继续生长，我们把这种发生在孕早期的胚胎发育异常现象称为“胎停育”，出现这种现象其实就和流产差不多。 而精子畸形是临床比较常见的现象。精子畸形过多，常常是不孕不育中的某种疾病。精子畸形率高，胎停育出现的几率也会比较高。从优生优育的角度，精子畸形率过高，是需要治疗的，应该改善之后再生育，否则往往出现更多的麻烦。 精子畸形指数sdi正常指标 假如畸形精子百分率高于50%，那么就称为精子畸形率高。精子畸形率标准是检验精子是否健康的指标。精子畸形率标准，精子高畸形率出现的一般症状是正常形态的精子数明显少于50%，畸形精子超过了70%的时候，应进行染色体检查，一旦发现问题，就要及时治疗。精液中有支原体、衣原体感染时，精子活力就会降低，精子密度也会减少，畸形精子就会增多。畸形精子检查是对男性精子进行染色涂片然后根据它的形态，所做的诊断。男性精子头部、中部与尾部等，出现形态变异情况，其中，头部畸形主要表现有无定形、巨大头、双头等；中部畸形有体部粗大、折裂、不完整等；尾部畸形有双尾、卷尾、缺尾等。 精子畸形指数sdi高的原因 精子畸形指数高可能是有两种情况。如果形态异常的精子超过７０％，特别是妻子有习惯性流产时，就应该考虑进行染色体核型检查，男方很可能具有染色体异常，需要通过检查排除这种可能性。如果异常精子少于７０％，那么，也许是精索静脉曲张、职业或环境接触毒物、放射线、微波、服用药物、感染及应激等因素影响了睾丸生精过程。无论是哪种情况，都应该去检查并且分析原因，排除可能性，及时治疗。 而引起畸形精子症的原因主要是： 1、因为穿着的裤子、内裤导致阴囊局部长期高热，长期酗酒（特别是高浓度的烈性酒），均可使精子发生畸变； 2、泌尿生殖道感染、腮腺炎并发的睾丸炎、附睾结核、精索静脉曲张等； 3、使用激素或某些化学药物，如抗癌药、利血平、马利兰、呋喃类等，可使精子发育不成熟； 4、生殖腺受到放射线照射，可引起精子的突变。 精子畸形指数sdi高怎么办 精子畸形指数高会导致不育，如果消除可不利因素（药物、放射线、高温、酒等），就应该针对病因进行治疗。由生殖道感染引起的患者，要进行抗炎治疗；如果是内分泌异常所致的患者，就要作出内分泌功能调整；对精索静脉曲张的患者，应考虑手术治疗，并且越早越好。 当精子畸形率超过70%的时候，就应进行染色体检查，如有染色体病，治疗会相对困难。
毒理学实验五 小鼠精子畸形实验 一、实验目的 1、学习观察小鼠精子畸形的实验方法。 2、检测受试物对雄性生殖细胞的遗传毒性。 二、实验原理 小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。 在正常情况下，人与其它哺乳动物的精液中也有少量畸形精子，毒物影响下，数量大大提高。 三、试剂材料 1、健康成年雄性小鼠，体重25 g ~30g 2、器材 剪子、镊子、玻璃小平皿、滴管、载玻片、擦镜纸、染色缸、显微镜 3、试剂 生理盐水、甲醇、2％伊红水溶液、受试物及阳性对照物环磷酰胺 四、实验内容 1、解剖小鼠、摘取附睾、涂片、固定。 2、镜下观察精子形态，记录畸形精子。 3、计算精子畸形率。 4、结果分析与评价。 五、操作步骤 1、染毒：染毒5天，途径（一般经口） 2、处死：35天后颈椎脱臼处死 3、取材：附睾 4、涂片：将附睾所有内容物直接涂片（一滴生理盐水） 5、晾干： 6、固定：甲醇固定5分钟 7、冲洗和干燥
8、镜检：低倍镜----油镜，镜检1000个精子，记录座标。阴性对照组精子畸变率一般为1-3% 精子畸形主要表现： (1)头部：无钩、香蕉形、胖头、无定形、双头 (2)尾部：卷尾、双尾 六、实验设计 剂量和分组方法: 受试物至少设3个剂量组，同时设阳性和阴性对照组。 最高剂量组应能使部分动物死亡，然后以高剂量组的1/2～1/4递减作为中、低剂量组。 阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kgBW～40mg/kgBW)，腹腔注射，连续5d，每天一次。阴性对照组给予等体积的溶剂。 七、实验结果及分析 1、正常小鼠精子涂片：由于是正常小鼠的精子涂片，因其畸形精子比例较低，没有观察到畸形精子，观察到一些正常精子，但由于没有进行固定染色，所以不是非常清晰。 在观察图片过程中，看到了一些条纹状的结构，阻碍了精子的观察，考虑可能是浓度太浓或者除精子外的其他组织被涂在载玻片上所致。 2、通过小鼠染毒的畸形精子样片，在镜下观察到了正常精子及畸形精子。畸形精子包括香蕉型，以及双头双尾等。（在附件图1中可以见到正常小鼠精子及香蕉型畸形的小鼠精子） 八、注意事项 1、涂片时生理盐水不要多，精子密度太稀不易观察。 2、涂片时需将附睾剪碎将所有内容物（精子）都点到整个片子上，然后再推片。 3、阅片时，注意区分人为剪碎的精子与精子畸形。
十三、精子畸形试验 Sperm Malformation Test 1 范围 本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。 2 引用标准 GB 14924 试验动物与饲料标准 GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序 3 定义 精子畸形（sperm malformation） 指精子形态的异常改变。 4 原理 已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。 小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。 5 试验的基本原则 通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。 6 仪器和器械 生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。 7试剂 7.1 1%伊红染色液 称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。 7.2 生理盐水、甲醇（A.R） 8 实验动物和饲养环境 常规使用动物是雄性小鼠。6周~8周龄，体重为30g ~35g。 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。 9 剂量分组 受试物至少设三个剂量组。分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/
日。每组至少有5只存活动物。 10 染毒途径和方式 染毒途径视实验目的而定。常用途径为经口灌胃方式。受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。一般于首次染毒后的第35d处死动物。 11 试验方法 11.1 制片 用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。 11.2 固定 待涂片干燥后，放入甲醇（A.R）液中固定5min。取出晾干。 11.3 染色 将涂片于1%伊红染液中染色1h，然后用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。 11.4 观察与计数 首先，在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域，然后，在高倍镜下观察结构完整的1000个精子，计数其中畸形的精子。精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计数。判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相区别。 12 数据处理和结果判断 每只动物应按精子畸形类型分别记录，以便计算各实验组的精子畸形发生率和精子畸形类型的构成比。 利用Wilcoxon秩和检验法和其他适当的统计学方法。将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行比较。 精子畸形试验阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应关系者。 一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%，但每个实验室应有自己稳定的精子自发畸形率。 13 试验报告 试验报告应包括以下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； （2）动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号和动物级别）； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物室合格证号； （4）剂量分组，染毒途径和方式； （5）试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； （6）结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率和精子畸形类型分析的结果（表1和表2）； （7）结论。
小鼠精子畸形试验 一、目的与要求 1、熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。 2、学习与掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤,正常精子及畸形精子的镜下观察。 3、了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。 二、实验原理 精子的畸形主要就是指精子形态的异常改变,大、小鼠精子畸形受基因控制,具有高度遗传性,许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。因此精子形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。大、小鼠精子畸形试验可检测受试物对于精子生成、发育的影响,而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性,故精子畸形试验可用作检测受试物在体内对生殖细胞的致突变 作用。 三、实验设计 1、动物选择:一般采用小鼠,因为小鼠比较经济,且有大量的实验结果证实小鼠在该实验系统中对受试物最为敏感。6~8周龄(体重25~35g),雄性。每组应保证至少有5只存活小鼠。 2、染毒途径:多用腹腔注射,也可采用与人体实际接触化学毒物相同的途径,如经口、吸入及皮肤接触等。 3、染毒次数及取样时间:可采用1次或每天1次连续5天的方法进行染毒。 各种化学毒物作用于精子的不同发育阶段,可在接触某种化学毒物后不同时间出 现精子畸形,故有条件时,可于给受试物后第1、4、10周处死动物,检查精子形态。因为大部分化学毒物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感,故一般均就是于首次给受试物后的第35天处死。 4、剂量选择:至少设置3个剂量组。最高剂量组5天总剂量应能使部分动物死亡,一般可取1/2 LD50为高剂量组,然后以1/2~1/4递减作为中、低剂量组。另设溶剂对照组(阴性对照组)与阳性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺(20 mg/kg)或甲基磺酸甲酯(75 mg/kg)或甲基磺酸乙酯(60 mg/kg)进行腹腔注射,每天1次,连续5
精子畸形指数 导致男性不孕不育的情况有很多，其中精子畸形就是一种。畸形精子，顾名思义，就是指精子发育出现异常，发育不好。而精子畸形指数就是判断精子是否正常的标准之一啦！下面我们一起来了解一下精子畸形指数是什么吧！ 畸形精子是什么 一般畸形精子表现为头、体、尾的形态变异，头部畸形有巨大头、无定形、双头等；体部畸形有体部粗大、折裂、不完整等；尾部畸形有卷尾、双尾、缺尾等。畸形精子过多症是指在生育年龄的男性畸形精子症使男性不育的常见原因之一。 精子形态大小的正常范围 1、头部 头长3.5-5.0微米，宽2.0-3.0微米；精子头呈规则椭圆形。当精子头的长宽分别超过5和3微米时，称为大头；分别小于3和2微米时，称为小头。具有临床意义的精子头部异常，包括圆椎形（长宽分别小于5和2微米）、不规则形、双头、和梨形头。朽迈型精子头部则出现空泡。 2、体部（中段） 体部长5-7.0微米，宽1.0微米。宽超过2微米多反映胞桨小滴末完全退化，其对不育的影响尚待探讨。假如泡桨小滴大于精子头的一半，意味着精子不成熟，属于异常。 3、尾部 精子尾长45微米。尾部卷曲常与支原体感染有关。也有人报告，精子尾部出现卷曲与锌元素有关。双尾、尾断裂等畸形可能与无症状生殖系统感染有关。因此，出现这一现象可作精液微生物学检查。 畸形精子指数 畸形精子指数（teratozoospermia index，TZI）和精子畸形指数（spenn deformity index，SDI）与不育症男性患者精子密度、活动率、精子形态的关系。畸形精子指数（teratozoospermia index，TZI）的数值介于1.00（每个异常精子只有一种缺陷）和3.00（每个异常精子都有头、中段和尾部缺陷）。有报道提示，TZI 1.6与未经治疗不育夫妻的低生育率有关，而精子畸形指数（spenn deformity index，SDI）1.6是体外受精失败的阈值。因此，畸形精子指数TZI或精子畸形指数SDI小于1.6就属于正常，它代表的是精子在体内积体外受精的能力。 当然，男性朋友们如果发现自己出现了精子畸形的情况，也不用羞于见人，要及时到医院治疗，才能得到尽早有效的帮助。
精子畸形率高吃什么 【导读】畸形精子症是指异常形态的精子数比例过多的一种病症。畸形精子不具备正常的活动能力和受孕能力，是引起男性不育的主要原因之一.一般有如下病因可引起：（1）生殖道感染；（2）精道部分梗阻；（3）先天性畸形；（4）原发性睾丸功能衰竭；（5）免疫因素，如：自身抗精子抗体等；（6）长期接触有毒化学物质，电离辐射；（7）空气、水质、环境污染及吸烟、酗酒等；（8）长期穿紧身裤及热水坐浴等因素有关。那么男人精子畸形率高吃什么好呢，吃什么可以最好最快补精子？精子是衡量健康好坏的重要标准,一旦出问题,可能发展成男性不育。所以补精子行动志在必行。所以吃什么补精子并且可有效提高精子质量进而有效的防治男性不育是至关重要的。 男人吃什么可以改善精子畸形率过高呢？其实在需要补充维生素，平时多吃水果之外还有以下方法哦。 一、富含优质蛋白质的食物 蛋白质是构成抗体、激素、酶和各种组织器官的基本成分，男人体内缺乏蛋白质将对生殖健康产生重要影响。蛋白质是雄性激素的营养来源，蛋白质摄入不足会导致雄性激素分泌受阻，此外，蛋白质也是构成精液的基本原料，它的匮乏将使体内的氨基酸浓度无法得到均衡，影响精液的生成。 二、含硒高的食物 男性体内的硒有20%——40%集中在生殖系统，硒也因此被称为“男人的体内黄金”。它参与了男性睾丸酮的合成和运载活动，帮助提高精子活力以及受精等生殖活动，硒还是影响精子生产和代谢的一系列酶的重要组成，男人缺硒可致精子生成不足、精子活性变低、精子出现畸形等。 三、含锌高的食物 锌对男人的作用想必很多人都知道，睾丸、前列腺、精液都含有很高浓度的锌，它被誉为男性的“生命之花”，是合成人体抗氧化酶的必要营养素，对维系男性健康、加快新陈代谢、增强免疫能力有很大的作用。补锌可改善少精、弱精、精子不液化，还能有效防治前列腺炎等男科疾病。 另外提醒处于正在备孕男性应戒烟戒酒，规律生活，按时作息，而适当运动有利于精子的代谢和生成，帮助提高精子质量。 精子畸形率高的原因 通常情况下，男性精子畸形率高常常会导致一些婴儿出现畸形，那么是什么原因导致精子畸形率高呢。专家介绍，在我们的日常生活中，精子畸形率高的原因有很多，而男性的生殖器感染疾病是导致此现象的主要原因之一。 精子畸形率高的原因有很多，一般多见于泌尿生殖道感染（如：支原体、衣原体、淋菌、G+球菌、G-杆菌等）、先天性睾丸发育不全、腮腺炎并发的睾丸炎、附睾结核、慢性中毒、营养不良、精神过度紧张、性交过频、精索静脉曲张等；以上疾病均可影响精子的发生过程。据有关专家介绍，男性精子的畸形率高具体是指正常形态的精子少于50%，即精液中畸形精子超过50%。畸形精子是指头、体、尾的形态变异，头部畸形有巨大头、无定形、双头等;体部畸形有体部粗大、折裂、不完整等; 尾部畸形有卷尾、双尾、缺尾等。然而引起男性精子的畸形率比较高的原因有泌尿生殖道感染、腮腺炎并发的睾丸炎、附睾结核、精索静脉曲张等，它们均可影响男性精子的质量;使用激素或某些化学药物，如抗癌药、利血平、马利兰、呋喃类等，可使精子发育不成熟;生殖腺受到放射线照射，可引起精子的突变;阴囊局部长期高热、长期酗酒(特别是高浓度的烈性酒)，均可使精子发生畸变。
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