(优选)小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验

小鼠骨髓细胞的采集与处理
小鼠麻醉
将小鼠麻醉，并固定在 操作台上。
暴露骨髓
用消毒手术刀切开小鼠 的腿骨，暴露骨髓腔。
采集骨髓细胞
用注射器吸取生理盐水， 冲洗骨髓腔，收集骨髓
细胞。
细胞处理
将采集的骨髓细胞进行 洗涤、离心、分离等处 理，得到所需的细胞样
本。
骨髓细胞的培养与观察
细胞培养
将处理后的骨髓细胞接种在细胞 培养皿中，加入适量的细胞培养 基，在适宜的温度和湿度条件下 进行培养。
率之间存在正相关关系。
本实验为进一步研究致突变物的 致突变作用提供了有力证据，有 助于深入了解致突变物的致癌机
制。
对实验结果的理解与讨论
本实验结果表明，致突变物能够诱导小 鼠骨髓细胞微核的形成，这可能是致突 变物导致基因突变和细胞恶性转化的重 要机制之一。
实验结果还提示，致突变物的致突变作用可 能与其在体内的代谢活化有关，因此需要进 一步研究致突变物的代谢活化过程及其与微 核形成之间的关系。
实验五小鼠骨髓细胞 微核试验
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 结论与讨论
01 实验目的
了解微核试验的原理
微核试验是一种用于检测染色体畸变和DNA损伤的细胞遗传 学方法。它通过观察细胞中微核（微小的细胞核）的数量， 来评估细胞受到的遗传损伤程度。
染色体结构畸变
分析实验组和对照组的染色体结构畸变类型，如断裂、倒位、重 复等。
染色体数目畸变
观察染色体数目畸变情况，包括非整倍体、多倍体等。
畸变类型与实验条件关系
探讨不同实验条件下染色体畸变类型的差异及其与实验条件的关系。
实验结果与预期结果的比较

固定15min，晾干。 4、染色：用新鲜配制的10%Giemsa染色 10min。 5、观察计数：先在低倍镜下观察，再用 油镜观察计数。PCE细胞呈蓝灰色，正染 红细胞（NCE）呈桔黄色。计数1000个 PCE细胞中含有微核的细胞数，并且计数 200个细胞中PCE与NCE的比例。
注意事项
Giemsa染液pH6.8是细胞染色质量的重要 保证； 推制良好的骨髓涂片是本试验的关键步骤； 正确区分PCE细胞、NCE细胞及白细胞； 正确区分微核与染料颗粒。
材料
试剂：甲醇、冰乙酸、吉姆萨（Giemsa） 染液、小牛血清、磷酸盐缓冲液pH6.8， 环磷酰胺。 器材：晾片架、1ml注射器及针头、载波 1ml 片及推片、显微镜（具油镜头），细胞计 数器。 动物：小鼠，体重24-28g，雄鼠。
试验方法
1、给药：将小鼠称重随机分成二组，一 组为生理盐水组（腹腔注射0.2ml/10g.W)， 一组为环磷酰胺组（腹腔注射 1mg/10g.W)。 2、涂片：给药24h后用颈椎脱臼处死小鼠， 取出股骨，用滤纸擦净，纵形剪去1/4-1/3， 用针头挑出骨髓，放在已滴好一小滴小牛 血清的载波片上（血清宜滴在载玻片的一 端），用眼科镊头将骨髓团充分分散，推 片，在空气中晾干。
小鼠骨髓细胞微核试验 Micronucleus Test for Bone Marrow Cell in Mouse
西南大学药学院
目的
学习小鼠骨髓多染红细胞（ PCE）微核测 定方法，了解环磷酰胺对骨髓细胞染色体 的损伤作用
原理
微核是指细胞中主核之外的颗粒，染色与细胞核 一致，相当于细胞直径的1/20-1/5，呈圆形或杏 仁状。微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响 而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质， 因而微核试验能检测药物或其它物质诱导产生的 染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传 学终点。 微核试验可用多种细胞，但在有核细胞中难于与 正常核的分叶及核突出物区分，故常计数PCE中 的微核，因为红细胞在成熟之前最后一次分离后 数小时将主核排出而微核被保留下来。

小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。

实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。

经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。

首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。

这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。

其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。

而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。

这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。

此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。

结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。

这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。

综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。

这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。

在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。

希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。

０ ５ ０ １０ ０
２ ００ １０ １０
毒效应 表现 无异常 无异常 无异常 无异常 轻微竖毛 竖毛 ， 软便 死亡 无
注射前 体重 均数 士标准差
２ ９＋ ０． ２ ０． ８ ２ ９ １０． ４ ０． －－ ７
注射后 体重 均数 士标准差
２ ． 士０ ８ ０ ９ ．２ ２ ． 土０ ６ ０ ５ ．９
５ ， ０ ２ ０ ３ ０ ４ ０ ５ ０ ／ ｇ体 重 ６个 ０ １ ， ， ， ， ｍｇ ｋ ０ ０ ， ０ ０ ０
１ ８
１ ）阿克苏市东城医 院。
本文于 １８ 年 ４月 ２日收至 ９７ ‘
下注射 Ｐ ＨＡ 量取 ２０ ／ｇ 重，ＭＭＣ 给 ０ｍｇｋ 体 结 果 与 讨 论 药量按标定 的 Ｌ ｓｉ － ｇｋ 体重）的 Ｄｏ ． ５ ／ｇ （ｖ ｍ １２ １４ １８ １１ 取 量， ２ ， ５ ０ ２ ， ／， ， ／， ／６ ／ 即 ． １ ， ５ ５ ． ． ２ ６ （ 一）不同剂盆 Ｐ Ａ 刺激小鼠 Ｈ 脾脏、骨 ０ １５ ／ｇ体重。考虑到 ＭＭＣ 诱发 Ｄ Ａ 髓细胞的分裂指数 ． ２ｍｇｋ ３ Ｎ 损伤通常是在 Ｓ 期的特点〔， Ｈｅｄ 推荐的 ７按 ３ ｄｌ ｅ 如表 １ 所示，Ｐ Ａ 各剂量组脾脏和骨髓 Ｈ 一次染毒方案Ｌ 待 Ｐ Ａ注射４ 小时将生理 细胞分裂指数均高于相应对照组，差异非常显 ， Ｈ ６
分裂相的影响
动物分７ 每组 １ 只，雌 组， ０
Ｙｎ ｅ ｎ ａ．Ａ ａｙｉ ｏ ＭＮ ｄ ｉ ｓ Ｘ ｆ ｅ ｌ ｎ ｌｓ ｆ ａ Ｃ ｎ ｕ ｕ ｌ ： ｓ ｎ Ａ
Ｍｏ ｓ Ｓ ｌｅ ａｄ ｏ ｅ ａｒ ｗ ｅ ｌ ｕ ｅ ｅｎ Ｂ ｎ Ｍ ｒ ｏ Ｃ ｌｓ ｐ ｎ
雄各半， 逐一称重。Ｐ ＨＡ 以生理盐水稀释， 按

剂量选择：以1/5 LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组，同时设阳 性和阴性对照。
染毒途径：经口、经皮、经呼吸道、注射。
染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样） 两次染毒法（第一次染毒24h后进行第二次染毒，6h取样）
五、操作步骤
本次实验染毒处理： 环磷酰胺
剂量：0.8mg/10g 每次染毒(腹腔注射） 次数：多次染毒法（4次）----最佳浓度及作用时间
五、操作步骤
骨髓液制备 ↓
涂片 ↓
染色 ↓
观察与计数
五、操作步骤
骨髓液制备及涂片 猝死：颈椎脱臼、麻醉 取组织：胸骨、股骨 获取骨髓液：在胎牛血清中迅速制取骨髓液 涂片：均匀
五、操作步骤
染色 涂片充分晾干后 染色：1. 平置涂片于染色架上，滴加试剂一5滴，
迅速均匀盖满涂片，染色1.5 min 2. 不要丢弃试剂一，直接滴加试剂二10滴， 轻轻均匀摇晃涂片使染液均匀覆盖涂片，染色8 min 3. 水洗涂片30s, 待干后镜检
到严重抑制，实验结果不可靠
2. 微核率：含有微核的嗜多染红细胞数，以千分率（‰）表 示
（若一个PCE中出现两个或两个以上微核，仍按有一个微核细胞计数）
3.阴性对照组和阳性对照组的微核发生率，根据实 验对象的不同，应与相关文献报道或研究历史数 据相一致。
4.统计分析（Poinsson分布、二项分布、X2检验等）
试验组微核率与阴性对照组相比有显著差异时， 可认为受试物为具有遗传毒性。
骨髓微核观察的步骤
取胸骨
擦净血污，剔去肌肉
剪去骨骺端
小牛血清
混匀、推片
晾干
Giemsa应用液 反面冲洗、晾干 细胞计数
六、注意事项
骨髓液制备：迅速。在胎牛血清中迅速制取骨 髓液。

小鼠骨髓细胞微核试验一、目的与要求1. 熟悉微核的概念、微核的来源、体内微核试验的实验设计、微核试验检测的遗传学终点。

2. 学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验基本方法步骤，嗜多染红细胞及微核细胞镜下观察。

3. 了解微核试验数据整理、分析方法及结果的评价。

二、实验原理微核与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称微核。

无论是断片还是整条染色体，其实质都是遗传物质，一但发生畸变，就有能形成遗传物质方面的问题，造成突变，因此，微核的检测实质上就是遗传物质突变的检测，现已被卫生部定为外来化合物毒理检测的—个必检指标。

微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。

主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。

传统的微核试验是体内试验，它观察骨髓嗜多染红细胞（PCE）中的微核。

微核可位于多种细胞，但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区分，所以只有在无核的红细胞中才易辨认。

在骨髓中无核的红细胞有嗜多染红细胞或称晚幼红细胞（呈灰蓝或浅蓝色）和成熟红细胞（呈粉红或桔红色）两种，正常情况下嗜多染红细胞占多数，所以观察骨髓嗜多染红细胞。

PCE指在红细胞成熟之前，最后一次分离后数小时将主核排出而微核仍保留在细胞质中的细胞，但由于嗜多染红细胞的胞质内含有核糖体，因此Giemsa染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡橘红色，使嗜多染红细胞在染色上与正常RBC（NCE）有所不同。

微核可以由染色体诱裂剂导致的染色体无着丝粒片段所构成，也可以由非整倍体诱发剂所导致的落后染色体形成。

三、实验设计1. 动物选择：常用小鼠，体重18~20 g，7~12周龄，每组10只，雌雄各半。

2. 染毒途径：原则上与人接触化学毒物相同或相近的途径。

3. 染毒次数及取样时间：一般采用两次染毒或多次染毒。

两次染毒：第1次染毒后24小时进行第2次染毒，6小时后取样；多次染毒：每天染毒1次，连续染毒5天，末次染毒后24小时取样。

推片 固定 染色 观察并记数
动物骨髓细胞染色体畸变分析
目的和意义:
1、学习动物骨髓细胞染色体标本的制作 2、了解动物体内染毒及染色体畸变类型
染色体畸变：
指染色体的结构改变，它是指遗传物质大的 改变，一般可用光学显微镜检查适当细胞 有丝分裂中期的染色体来发现
染色体畸变分析： 指观察染色体形态结构和数目改变，又称为 细胞遗传学实验
注意事项： 1、剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块 胸骨取下来，以防不小心把胸骨剪断 2、挤出骨髓处的肌肉要剔除干净 3、滴到玻片上的小牛血清不要太多，涂时 要涂匀，以便推片 4、染色前可以先看一下整体涂片情况，细 胞分散度是否良好 5、关键步骤是制作良好的骨髓涂片以及优 良的染色
流程图
处死小鼠，取胸骨
图 1：正常精母细胞（× 1000 ） 图 2 ：精母细胞染色体环（× 1000 图 3 ：精母细胞链状四价体（× 1000 ） 图 4 ：精母细胞染色体数目减少（× 1000 ）
注意事项：
低渗是本实验的关键，控制好低渗时 间，做出分散良好的染色体标本，关系到 实验结果的准确性
流程图
处死小鼠，取股骨 取骨髓，离心
结果分析与评价
结果： 以每只动物为观察单位，每只动物观察100个中 期分裂相，计算其畸变细胞率 分析与评价： 1 阴性和阳性对照组的畸变率应与所用动物 的种属及有关资料相符 2 试验结果可以用多种统计方法处理，所得 结果应该是相同的 3 各实验组即便细胞率与阴性对照组相比较， 应该有显著性差异，还应有剂量反应关系
注：在主核排除时，微核仍保留在细胞中
操作步骤：
一 染毒：
染毒途径：腹腔注射环磷酰胺，染毒二次， 0、24小时各染毒一次，6h后取样 染毒剂量：50mg/kg

Giemsa染色时网织红细胞呈蓝灰色，称为多染红细胞；而成熟红细 胞染色呈橘红色，称为正染红细胞。
三.实验步骤 1.染毒：昆明种小鼠，环磷酰胺100mg/kg腹腔注射。 2.骨髓液制备和涂片：颈椎脱臼处死动物。解剖后取胸骨或股骨， 去除肌肉，剪去骨骺，将骨髓挤出或冲洗出，滴于载玻片推片。 3.固定：晾干后甲醇固定15秒，取出晾干。 4.染色：晾干后以新鲜配制的Giemsa染液染色5-10分钟，自来水冲 洗，晾干。 5.观察计数：低倍镜选择分布均匀、染色较好的区域，油镜下观察 计数。含有微核的PCE/1000个PCE；PCE/NCE。
实验三 小鼠骨髓多染红细胞微核试验
重庆医科大学实验教学管理中心 公共卫生实验原理 3.掌握镜下辨认微核的技术
二.实验原理： 细胞分裂过程中在染色体断裂剂或纺锤体毒物作用下，细胞染色体 断裂产生不含着丝粒的断片，或者整条染色体遗失在细胞质中，形 成微核。 染色与主核一致，大小相当于细胞直径的1/20-1/5，圆形或椭圆 形，一个或多个。 在多种细胞中出现。 在红细胞成熟前组后一次分裂后数小时主核排除而微核保留。
红细胞发育过程： 骨髓多能干细胞→定向干细胞→原红细胞→早幼红细胞→中幼红细 胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞 从原红细胞到晚幼红细胞需分裂3-4次。形成晚幼红细胞后即不再 分裂，在发育过程中主核排出形成网织红细胞。网织红细胞含有少 量RNA，甲酚蓝染色成蓝色丝网状。网织红细胞进一步发育，RNA消 失成为成熟红细胞。
四.结果分析与评价 1.PCE/NCE比值约为1（0.6-1.2）。比值小于0.1表明PCE生成严重 受抑制，染毒剂量过大。 2.用统计方法分析结果。 五.实验成功的关键 1.制作良好的骨髓涂片 2.优质的染色

素C（10mg/Kg)腹腔注射一次到二次。阴性对照组使 用等体的容积。
操作步骤
• 1.取材：实验动物最后一次染毒后，按确定的时间将 小鼠颈椎脱臼（大鼠断头）处死后，剪取一侧股骨， 剔净肌肉，用纱布擦掉附在股骨上的血液和肌肉，剪 掉股骨头，露出骨髓腔。用带７号针头的注射器吸取 小牛血清（小鼠需１ml，大鼠需２ml），插入骨髓腔
微核。
试验设计
• 1.动物选择 一般常用的实验动物为大、小
鼠。以小鼠用的最多，要求体重18-20g，
7-12周龄。每组小鼠数量10只，雌、雄各
半。
试验设计
• 2.染毒途径 根据研究目的或受试化学毒物
性质不同，可分别选用经口、经皮、经呼
吸道及注射等染毒途径。但原则上应尽可
能采取如人接触化学毒物相同的途径。
原 理
• 微核试验是用于检测染色体损伤和干扰细
胞有丝分裂的化学毒物的快速方法。微核
是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒，
大小相当于细胞直径的1/20~1/5，呈圆形或
杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细
胞中可以出现一个或多个。
原 理
• 一般认为微核使细胞内染色体断裂或纺锤
丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细
10min。如当日不染色，也需固定好保存。
• 4.染色：片子固定后，滴加瑞氏-姬姆萨A溶液于涂
片上，让染液覆盖整个标本涂片染色1分钟；再将
B溶液滴加于A液上面（滴加量为A液的2~3倍），
以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液
充分混合，染色8分钟；水洗、干燥、镜检。
• 注意：（不要把细胞冲洗掉）
胞核外的遗传物质。所以，微核试验能检
测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体

五、作业
1. 观察并记数细胞微核率； 2. 用统计学软件SPSS统计结果。Biblioteka 三、实验材料小鼠骨髓
四、实验步骤
1. 实验前6小时用对苯二酚80mg/kg注射于小鼠腹腔内， 处死动物，用0.85%的生理盐水吹出股骨骨髓，离心1000 转/分5分钟，除上清液，滴入少量小牛血清混匀后涂片。 2. 固定：放入甲醇和冰醋酸固定液中固定5-10分钟； 3. 染色：直接在Gimsa染液中染色10分钟，然后冲洗； 用滤纸擦干载片背面的水分，再用滤纸轻轻吸干载片上面 的水分，取出盖上盖片； 4. 观察：嗜多染红细胞呈灰兰色，成熟红细胞呈桔红色， 每只动物计数1000-2000个嗜多染红细胞，微核率为千分 之2.58+0.41。
小鼠骨髓细胞微核试验
一、实验目的
1． 观察诱变物质产生的微核； 2． 了解微核测定的方法与意义，计算微核 率。
二、实验原理
微核（Micronuclei）是真核类生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间 期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主 核1/3 以下。 已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，这一点和染色体畸变一样。所以，可用间期的微 核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 目前国内外不少部门已经把微核测试用于辐射损伤，辐射 防护，化学诱变剂，新药实验，染色体遗传疾病及癌症前 期诊断等各方面。

磺胺间甲氧嘧啶钠对小鼠精子畸形及骨髓细胞微核的影响作者：王月娇王伟来源：《科技资讯》 2012年第36期王月娇1 王伟2(1.吉林省食品药品检验所吉林长春 130033; 2.吉林大学第一医院二部儿科吉林长春130031)摘要:目的:研究磺胺间甲氧嘧啶钠对小鼠的精子畸形及骨髓细胞微核的影响。

方法:取昆明种雄性小鼠50只,随机分为实验高、中、低剂量组,空白对照组和阳性对照,每组10只。

实验组分别以磺胺间甲氧嘧啶钠水溶液5.67、2.83、1.42g/kg·BW灌胃。

空白对照组和阳性对照分别以等量的生理盐水和环磷酰胺50 mg/kg·BW灌胃,每天1次,连续5天。

研究磺胺间甲氧嘧啶钠对小鼠精子畸形的影响;另取昆明种小鼠50只,随机分为实验高、中、低剂量组,空白对照组和阳性对照,每组10只。

实验组分别以磺胺间甲氧嘧啶钠水溶液5.67、2.83、1.42 g/kg·BW灌胃,空白对照组和阳性对照分别以等量的生理盐水和环磷酰胺50 mg/kg·BW灌胃,每天1次,连续4天。

评价磺胺间甲氧嘧啶钠对小鼠骨髓细胞微核的影响。

结果:实验组磺胺间甲氧嘧啶钠高、中剂量对小鼠精子畸形率与空白对照组比较差异显著;实验组磺胺间甲氧嘧啶钠高剂量对小鼠微核率与空白对照组比较差异极显著。

结论:磺胺间甲氧嘧啶钠对小鼠的精子畸形与骨髓细胞微核均有影响,具有潜在的致畸、致突变作用。

关键词:磺胺间甲氧嘧啶钠精子畸形骨髓细胞微核中图分类号:R114 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2012)12(c)-0072-01磺胺间甲氧嘧啶钠(Sulfamonome thoxineSodium)是新一代长效磺胺类药,从抗菌作用来讲,名列磺胺药的首位。

由于其具有双重药理作用:既能抗菌,又能抗原虫,对革兰氏阳性菌及一些阴性菌有较强的抑菌作用而被广泛运用于家禽等畜牧产业。

由于磺胺类药物广泛具有一定的急慢性毒性以及潜在的三致作用,但对磺胺间甲氧嘧啶钠的毒性作用特别是对精子畸形以及骨髓细胞微核的影响究较少。

四、染色
将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的Giemsa应 用液(Giemsa储备液l份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9 份)染色10-15min，然后冲洗掉玻片上的染色液， 臵晾片架上晾干。
南京晓庄学院
上一张
下一张
开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
南京晓庄学院
上一张
下一张
开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
4. 实验步骤
二、骨髓液的制备和涂片
试验动物最后一次染毒后，按确定的时间用颈 椎脱臼或麻醉的方法将其处死，四肢固定于解剖 板，将腹中线被毛浸湿，剖开胸腹部，取下胸骨， 擦净血污，剔去肌肉，剪去股骨两端，用小型弯 止血钳将骨髓挤于有一滴小牛血清的清洁载玻片 上，混合均匀后推片。也可在动物处死后，迅速 用手术剪将其两腿股骨取下，剔去肌肉，用生理 盐水洗去血污和碎肉，剪去股骨两端，用带针头 的2ml注射器吸取小牛血清，插人骨髓腔内，将骨 髓冲人离心管，然后用吸管吹打骨髓团块使其均 匀，以1000r／min离心10min，弃去多余的上清液， 留下约0.5ml
南京晓庄学院
上一张
下一张
开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
4. 实验步骤
求在接触化学毒物后设立不同的采样时间点。 考虑到以上两方面的原因，建议采用多次染毒 的方法。其中以4次染毒比较方便合理。即每天 染毒一次，连续4天，第5天取样。这样，取样 一次就能覆盖24～72h高峰，如果高峰延迟到 96h也不会漏掉。 4.剂量选择：受试化学毒物的最大剂量除受溶 解度大小所限外，应达到最大耐受量。一般情 况下，应设3～5个或更多剂量组，剂量覆盖的 范围要达到3个数量级以上。同时还应设立阳性 对照组和阴性对照组。阳性对照组可用环磷酰 胺(50-100mg/kg)或丝裂霉素C(10mg/kg)腹腔注 射1次或2次。阴性对照组使用等体积的溶剂。

小鼠骨髓细胞微核试验金一和大連理工大学環境与生命学院微核形成机理微核实验原理微核是染色体断裂或纺锤丝受损, 在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。

RBC在成熟之前最后一次细胞分裂后，主核排出细胞外，微核仍滞留在PCE细胞中。

因此，可以根据PCE细胞中微核出现率，观察环境污染物对染色体完整性和染色体分离改变的影响，判定其有无遗传毒性。

实验目的1.掌握小鼠骨髓细胞微核试验方法2.掌握骨髓多染红细胞（PCE）中微核的观察方法实验器材1.手术刀2.手术剪3.无齿镊4.小型弯止血钳5.干净纱布6.带橡皮头吸管7.台式离心机8.刻度离心管9.电吹风机10.玻璃蜡笔11.2ml注射器及针头12.载玻片及推片13.定时钟14.带油镜头显微镜15.细胞计数器16.玻璃染色缸17.晾片架主要试剂甲醇（分析纯）生理盐水小牛血清pH6.8的磷酸盐缓冲液分别取1/15 mol/L的磷酸二氢钾溶液50.40ml和1/15 mol/L的磷酸氢二钠溶液49.60ml，两者混合均匀。

阳性对照物环磷酰胺或丝裂霉素C实验操作步骤•染毒次数连续 4 次染毒取样时间最后一次染毒后，经过24h，取骨髓制作骨髓涂片骨髓涂片的固定、染色和封片微核观察和细胞计数骨髓细胞染色方法取胸骨剪去骨骺端擦净血污，剔去肌肉小牛血清Giemsa 应用液10~15min 甲醇中，固定15min 混匀、推片冲洗、晾干晾干冲洗、晾干细胞计数嗜多染红细胞和微核微核率计算方法结果分析与评价阳性判断实验组中至少一个剂量组微核阳性率显著大于对照组，并具有重现性和剂量-反应关系。

阴性结果试验剂量不够、采样时间不合适、细胞计数量不足、实验动物自发微核率高等原因，均可以造成实验结果阴性。

当实验设计符合标准，试验剂量足够大，其他染毒方式的微核试验结果仍为阴性时，可认为受试物微核试验阴性。

注意事项1. 实验所用的器具必须洁净，小牛血清无污染。

2. 骨髓涂片上，细胞疏密程度要合适，细胞之间互不重叠。

五、操作步骤
染色 涂片充分晾干后 染色：1. 平置涂片于染色架上，滴加试剂一5滴， 迅速均匀盖满涂片，染色1.5 min 不要丢弃试剂一，直接滴加试剂二10滴，轻轻均匀摇晃涂片使染液均匀覆盖涂片，染色8 min 水洗涂片30s, 待干后镜检
五、操作步骤
观察 显微镜的使用 低倍镜：细胞群 高倍镜：分布均匀、染色良好 油镜：细胞形态、微核
微核成因 染色体或染色单体的无着丝点断片 纺锤丝受损而丢失的整个染色体 细胞分裂后期遗留在胞质中，单独形成规则的次核
植物细胞微核实验（蚕豆根尖）
淋巴细胞微核实验
双核微核实验
小鼠骨髓微核实验
嗜多染红细胞（PCE）
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞，由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段 特点： 无主核、易识别微核（有核细胞中微核与正常核叶及核的突起难以鉴别） 胞内含核糖体，染色后成灰蓝色（区别于成熟红细胞，其无核糖体、染色呈淡橘红色） 骨髓中PCE数量充足，满足实验计数的要求
检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
01
检测能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物（DNA断裂剂和非整倍体诱变剂）。
02
辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
03
三、意义及应用
器材：手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器
六、注意事项
镜下观察
03
01
正染红细胞
嗜多染红细胞
微核
有核细胞
镜下观察
有微核的嗜多染红细胞
有核细胞 正染红细胞

小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介微核（micronucleus），与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质中，比主核小，故称微核。

故微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。

实验目的1.学习和掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核测定方法2.了解细胞染色体损伤情况，掌握检测断裂剂和部分非整倍体致突变剂的测定方法3.进一步熟练制片和镜检操作器材与试剂1.器材手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、载玻片、玻璃染色缸、定时钟、晾片架、显微镜（带油镜）、注射器及针头、干净纱布、乳头吸管、玻璃铅笔、电吹风机2.试剂甲醇、Giemsa储备液、磷酸盐缓冲液（PH6.8）环磷酰胺操作步骤1.试验动物及处理（1）动物选择：一般选用大小鼠，小鼠最常用，18-20g，每组10只，雌雄各半。

（2）染毒途径：根据研究目的或受试物性质不同，原则上可尽量采用人类接触受试物的途径：通常采用灌胃法和腹腔注射。

（3）染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样）或两次染毒法（处死前30h+处死前6h）（4）剂量及对照选择据受试物的LD50，以1/2LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组。

同时设立阳性（环磷酰胺）和阴性对照（溶剂组）2.骨髓细胞制片和涂片：最后一次染毒后，在确定时间脱颈椎处死动物，迅速剪取其胸骨，剔去肌肉，用干净纱布擦拭，剪去每节骨骺端，用小型弯止血钳挤出骨髓液，点在载玻片一端预先滴好的一滴小牛血清中。

混匀后推片。

长度为2-3cm。

3.固定：将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇固定15min,取出晾干。

4.染色：Giemsa应用液染色15min.冲洗染色液，晾干。

5.观察计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分布均匀、疏密适度、形态完整、染色良好的区域，再在油镜下按一定顺序进行PCE和微核计数。

（三）PCE及其微核形态
MN
NCE
MN
MN
MN
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二、正常精子及畸形形态
精子畸形
• 精子畸形如圆锥形头､双头､双尾､尾卷曲等
• 精子畸形率的增高,往往间接反映了睾丸生精功能的障 碍,也必然影响到精子的活力和受精能力｡
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无
香
钩
蕉
头
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胖 头
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双头
双尾
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尾折叠
无定型
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双头双尾
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无定型
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无钩
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一、小鼠骨髓细胞形态及微核形态
（一）基本概念
• 微核（Micronucleus，MN）：是在细胞的有丝分裂
后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍 然滞留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝点 断片，或因纺锤体受损而丢失的整条染色体。它在 末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包 含在子细胞的胞质内而形成，因比主核小，故称为 微核。
成熟红细胞，因其核糖体已消失，可通过选择性的染 色而与未成熟红细胞区别开来。
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PCE与NCE在光镜下的区别
胞
名称
胞体
核
PCE 椭圆或圆盘状 无
NCE 圆盘状
无
胞 着色 灰蓝色 桔黄色
质 分布 不均匀 均匀来自当前3页，共22页，星期二。

小鼠精子畸形实验报告本实验旨在研究小鼠精子畸形对生育能力的影响，通过对小鼠进行精子畸形实验，观察其繁殖能力和后代健康状况，以期为人类生殖健康提供参考依据。

实验方法：首先，我们从实验室中选择了一组健康的雄性小鼠作为实验对象。

然后，我们对这些小鼠进行了一段时间的观察和饲养，以确保它们的身体状况良好。

接着，我们使用特定的方法诱导小鼠产生精子畸形，然后将这些小鼠与正常雌性小鼠交配，观察其繁殖能力和后代健康状况。

实验结果：经过一段时间的观察和记录，我们得出了以下实验结果：1. 精子畸形对小鼠的生育能力产生了显著影响。

精子畸形的小鼠在交配过程中出现了较低的交配成功率，且受孕率也明显降低。

2. 精子畸形对后代健康状况产生了一定影响。

经过观察发现，由精子畸形小鼠交配后所生的后代中，出现了较多的畸形现象，且部分后代的生长发育也受到了一定程度的影响。

实验结论：综合以上实验结果，我们得出了以下结论：1. 小鼠精子畸形对生育能力存在着显著的负面影响，这一影响主要表现在交配成功率和受孕率的降低上。

2. 精子畸形对后代健康状况也产生了一定的不良影响，这表明精子畸形可能会对后代的遗传健康产生一定的影响。

实验意义：本实验结果对人类生殖健康具有一定的参考价值。

精子畸形作为一种常见的生殖健康问题，其对生育能力和后代健康的影响一直备受关注。

通过本实验，我们对精子畸形的影响有了更深入的了解，这有助于人类更好地预防和治疗精子畸形相关的生殖健康问题。

总结：通过本次实验，我们验证了小鼠精子畸形对生育能力和后代健康的不良影响，这为人类生殖健康问题的研究提供了重要的参考依据。

希望本实验结果能够为相关领域的研究和临床实践提供一定的借鉴和指导。