实验一 小鼠精子畸形试验

小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。

实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。

经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。

首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。

这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。

其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。

而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。

这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。

此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。

结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。

这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。

综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。

这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。

在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。

希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。

一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。

二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。

2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。

3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。

三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。

2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。

3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。

4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。

5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。

6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。

7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。

8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。

9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。

10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。

11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。

12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。

四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。

2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。

3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。

4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。

5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。

五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。

2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。

歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。

方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。

结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。

结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。

关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。

小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。

小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。

三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。

溶媒为灭菌蒸馏水。

1实验动物及饲养环境小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。

饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。

温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。

SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。

实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。

饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。

喹胺醇对小白鼠精子致畸性试验张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【期刊名称】《中兽医医药杂志》【年(卷),期】2001(20)5【摘要】用昆明小白鼠为靶动物 ,进行了小鼠精子畸形试验 ,研究了喹胺醇的致畸作用。

选择成年健康雄性昆明种小鼠 30只 (体重 2 8～ 32 g) ,随机分成 6组。

喹胺醇分为 4 5 0 mg/ kg(1/ 2 0 LD50 ) ,75 0 mg/ kg(1/ 12 L D50 ) ,10 0 0 mg/ kg(1/ 9L D50 )和 15 0 0 mg/ kg(1/ 6 L D50 ) 4个剂量组 ,用 2 %吐温- 80配成混悬液灌胃 ,阴性对照组用 2 %吐温 - 80灌胃 ,阳性对照组用环磷酰胺 (40 mg/ kg)腹腔注射 ,连续 5 d。

结果表明 ,喹胺醇对小白鼠精子无致畸作用。

【总页数】2页(P11-12)【关键词】喹胺醇;小白鼠;精子;致畸性【作者】张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所;甘肃农业大学【正文语种】中文【中图分类】S859.7【相关文献】1.喹胺醇对小白鼠的抗感染试验 [J], 周丽霞;张力2.喹胺醇对小白鼠致畸作用的研究 [J], 张力;梁剑平;曹随中;刘宗平;周丽霞;魏春梅;周学辉;牛晓荣;苗小林3.喹胺醇饲喂肉仔鸡急性毒性试验及病理形态学研究 [J], 张力;梁剑平;袁莉刚;周丽霞;魏春梅;周学辉;常寅龙4.喹胺醇对断奶仔猪的亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;程富胜;赵四喜;周学辉;牛晓荣;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平;石旭东5.喹胺醇对肉用仔鸡亚急性毒性试验 [J], 张力;梁剑平;周丽霞;周学辉;程富胜;苗小林;袁莉刚;张德寿;刘宗平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

连翘对小鼠精子畸形的影响王跃（西安文理学院生命科学系，陕西西安 710065）摘要: 目的：研究连翘水煎液对小鼠精子畸形的影响。

方法：应用小鼠精子畸形实验，观察一定浓度的连翘水煎液对雄性小鼠生殖细胞的畸变情况。

结果：连翘水煎液能明显诱发小鼠精子产生畸形。

结论：在剂量较大时，连翘水煎液具有明显致突变性。

关键字:连翘精子畸形雄性小鼠Study on Sperm Abnormality of Forsythia suspense Vahl in MiceFu Juan(The department of Life Sciences,Xi'an University of Arts and Science, Xi'anShaanxi, 710065)Abstract: Objective:This paper studied the effect of Sperm abnormality by Water boiled juice of Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl in mice . Methods:the test of sperm abnormality(SA) was applied to determine the abnormality of Forsythia suspense Vahl in the germ cells of male mice. Result: Water boiled juice of Forsythia suspense Vahl can obviously reduced the sperm abnormality. Conclution: Forsythia suspense V ahl is a potential mutagen . It can obviously reduced the Sperm abnormality when used in a large dose。

小鼠精子畸形试验方法的改良与效果评价
魏青;范瑞泉;杨杏芬;陈铁江;杜柳涛
【期刊名称】《中国公共卫生》
【年(卷),期】2002(18)7
【总页数】1页(P835-835)
【关键词】小鼠;精子畸形试验;改良;效果评价
【作者】魏青;范瑞泉;杨杏芬;陈铁江;杜柳涛
【作者单位】中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R994.6
【相关文献】
1.用小鼠精子畸形试验评价生物羊膜遗传毒性的研究 [J], 孙立魁;朱雪涛
2.用小鼠精子畸形试验评价正海生物膜遗传毒性的研究 [J], 孙立魁;黄经春;朱雪涛
3.昆明小鼠与纯系小鼠杂交仔一代在精子畸形试验中动物试材的效果比较 [J], 谢明
4.昆明种与杂交仔1代（CBA×BALB／C）F1小鼠在精子畸形试验中的动物试材效果比较 [J], 谢明;王家督;单玉秀;张文双
5.小鼠精子畸形试验改良法与传统法效果比较 [J], 范瑞泉;魏青;丘钦英;陈铁江;刘移民;徐琳;赵杰
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十三、精子畸形试验Sperm Malformation Test1 范围本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。

本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。

2 引用标准GB 14924 试验动物与饲料标准GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序3 定义精子畸形（sperm malformation）指精子形态的异常改变。

4 原理已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。

常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。

小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。

5 试验的基本原则通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。

6 仪器和器械生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。

7试剂7.1 1%伊红染色液称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。

7.2 生理盐水、甲醇（A.R）8 实验动物和饲养环境常规使用动物是雄性小鼠。

6周~8周龄，体重为30g ~35g。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

9 剂量分组受试物至少设三个剂量组。

分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。

当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。

另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。

常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。

阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/日。

每组至少有5只存活动物。

10 染毒途径和方式染毒途径视实验目的而定。

常用途径为经口灌胃方式。

受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。

一般于首次染毒后的第35d处死动物。

11 试验方法11.1 制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。

小鼠精子畸形实验报告本实验旨在研究小鼠精子畸形对生育能力的影响，通过对小鼠进行精子畸形实验，观察其繁殖能力和后代健康状况，以期为人类生殖健康提供参考依据。

实验方法：首先，我们从实验室中选择了一组健康的雄性小鼠作为实验对象。

然后，我们对这些小鼠进行了一段时间的观察和饲养，以确保它们的身体状况良好。

接着，我们使用特定的方法诱导小鼠产生精子畸形，然后将这些小鼠与正常雌性小鼠交配，观察其繁殖能力和后代健康状况。

实验结果：经过一段时间的观察和记录，我们得出了以下实验结果：1. 精子畸形对小鼠的生育能力产生了显著影响。

精子畸形的小鼠在交配过程中出现了较低的交配成功率，且受孕率也明显降低。

2. 精子畸形对后代健康状况产生了一定影响。

经过观察发现，由精子畸形小鼠交配后所生的后代中，出现了较多的畸形现象，且部分后代的生长发育也受到了一定程度的影响。

实验结论：综合以上实验结果，我们得出了以下结论：1. 小鼠精子畸形对生育能力存在着显著的负面影响，这一影响主要表现在交配成功率和受孕率的降低上。

2. 精子畸形对后代健康状况也产生了一定的不良影响，这表明精子畸形可能会对后代的遗传健康产生一定的影响。

实验意义：本实验结果对人类生殖健康具有一定的参考价值。

精子畸形作为一种常见的生殖健康问题，其对生育能力和后代健康的影响一直备受关注。

通过本实验，我们对精子畸形的影响有了更深入的了解，这有助于人类更好地预防和治疗精子畸形相关的生殖健康问题。

总结：通过本次实验，我们验证了小鼠精子畸形对生育能力和后代健康的不良影响，这为人类生殖健康问题的研究提供了重要的参考依据。

希望本实验结果能够为相关领域的研究和临床实践提供一定的借鉴和指导。

小鼠精子畸形实验报告小鼠精子畸形实验报告引言：生殖健康是人类和动物健康的重要组成部分。

然而，近年来，人类和动物的生殖健康问题日益凸显，其中包括精子畸形现象的增加。

为了更好地了解精子畸形的成因和影响，本实验以小鼠为研究对象，通过实验观察和数据分析，探讨了精子畸形的发生原因及其对生殖健康的影响。

实验设计：本实验选取了30只成年雄性小鼠作为实验对象，分为两组：实验组和对照组。

实验组小鼠每日饮用含有某种特定化学物质的水，而对照组小鼠则饮用普通水。

实验期为8周，期间每两周进行一次采样。

实验结果：经过实验观察和数据分析，我们发现实验组小鼠的精子畸形率明显高于对照组。

在实验组中，精子头部畸形的比例达到了30%，而对照组仅为5%。

此外，实验组小鼠的精子尾部畸形率也明显升高，达到了20%，对照组仅为10%。

这些结果表明，特定化学物质的摄入对小鼠精子的形态产生了显著的影响。

讨论：精子畸形是生殖健康问题中的重要因素之一，它不仅会影响小鼠的生殖能力，还可能对后代的健康造成潜在风险。

通过本实验的结果可以看出，特定化学物质对小鼠精子的形态产生了明显的影响，这可能与该化学物质对小鼠生殖系统的毒性作用有关。

然而，具体的作用机制还需要进一步的研究来探讨。

此外，本实验中使用的小鼠模型虽然能够提供一定的参考价值，但其与人类的差异仍然存在。

因此，对于精子畸形问题的研究还需要进一步扩大样本规模，并结合人类的实际情况进行研究。

只有通过更多的实验和观察，才能更好地了解精子畸形的成因和影响，为人类和动物的生殖健康提供更有针对性的保护策略。

结论：本实验通过观察和数据分析，发现特定化学物质对小鼠精子形态产生了明显的影响，导致精子畸形率的显著升高。

这一结果提示我们，特定化学物质的摄入可能对生殖健康产生不良影响。

因此，我们需要加强对化学物质的监管和控制，以保护人类和动物的生殖健康。

参考文献：1. Smith R, et al. (2013). Human sperm number and morphology in relation to exposure to environmental pollution: a systematic review and meta-analysis. Reproductive Health, 10: 64.2. Carlsen E, et al. (1992). Evidence for decreasing quality of semen during past50 years. BMJ, 305(6854): 609-613.3. Jurewicz J, et al. (2015). Environmental factors and semen quality. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health, 28(2): 179-198.。

小鼠精子畸形实验报告
实验目的：
本实验旨在观察小鼠种公对辐射的敏感性和精子畸形情况，进
一步探究辐射对生殖系统的影响，为人类辐射防护提供科学依据。

实验方法：
选取雄性C57BL/6J小鼠10只，年龄在8~12周之间，均无生
殖系统疾病等慢性病史。

将小鼠随机分为两组：对照组（5只）和辐射组（5只）。

对照组小鼠暴露于正常环境，无额外操作。

辐射组小鼠在对照组操作基础上，于每日9:00-10:00和16:00-17:00左右，接受单次0.5Gy X射线辐射，共连续6天。

辐照前，检测所
有小鼠前列腺并记录体重。

辐射后第11天晚间，左双侧睾丸进行
离体解剖，取出精液供检测精子形态和结构。

实验结果：
与对照组相比，辐射组的平均体重有所下降，辐射组的平均体
重下降了2.3克；对照组的前列腺质量为12.4±2.3（mg），辐射组为10.0 ± 1.2(mg)，辐照组比对照组减轻了19.4%（p＜0.05）。

检
测精液样本可知，辐射组的精子畸形率为15.74±0.8%，对照组的
精子畸形率为7.32±2.6%。

辐射组的畸形率高出对照组8.4% （p＜0.01）。

实验结论：
小鼠对辐射的敏感性显著，在短时间辐射后，辐射组小鼠体重
减轻和前列腺质量流失均有显著差异。

同时，精子畸形率显著提高，证实辐射对生殖系统造成伤害。

因此，对于长期接触辐射工
作者应加强防护，减少辐照量，防止过大辐照对生殖系统的影响。

猪血酶解产物的小鼠初级精母细胞染色体畸变试验通过小鼠初级精母细胞染色体畸变试验评价猪血酶解产物的遗传毒性。

方法采用经口灌胃给药，制备小鼠精母细胞染色体标本，观察染色体畸变类型和畸变率。

结果受试物各剂量组总畸变细胞率、常染色体单价体率和性染色体单价体率与阴性对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；阴性对照组与阳性对照组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论猪血酶解产物在本试验剂量范围内未见遗传毒性，小鼠初级精母细胞染色体畸变试验为阴性。

猪血酶解产物是由胰酶酶解猪血后得到的产物。

猪血是一种高蛋白、低脂肪、低糖、富含微量元素的营养价值很高的肉类工业副产品，其蛋白质含量为18.9%左右[1]，素有“液体肉”的美称。

我国虽然猪血资源丰富，但利用度极低，利用率不超过10％，并且利用猪血资源开发的产品还比较单调，除了小部分被加工成血粉或发酵血粉作为饲料添加剂，以及用于生化制药生产血红素、超氧化物歧化酶、蛋白胨外，大部分都作为废弃物排出，既浪费了宝贵的蛋白质资源，又严重污染了周围的环境[2~3]。

采用酶水解技术可以将猪血中的蛋白质降解为多肽、小肽及氨基酸等，更利于人体消化吸收。

但猪血酶解产物应用于人体之前，应对其进行食品毒理学安全性评价。

目前，国内主要应用小鼠精子畸变试验来评价受试物遗传毒性，但由于该试验结果精度不好且实验周期长等原因，国外已普遍采取哺乳动物染色体畸变试验，我国也有趋势主要采取此试验与国际毒理学安全性评价接轨。

小鼠初级精母细胞染色体畸变试验已应用于食品毒理学安全性评价中，随着卫生监管部门工作的加强，越来越多的健康相关产品进行此项测试。

对小鼠初级精母细胞染色体畸变试验的方法进行了探讨并应用于猪血酶解产物遗传毒性的研究。

1 对象与方法1.1 受试物猪血酶解产物干燥物，由四川农业大学食品系提供。

1.2 实验动物由四川大学医学实验动物中心提供的健康昆明种雄性小鼠，体重为25～30g，医学实验动物合格证号：SCXK（川）2009-09。

DB22/T 396.8—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第8部分：小鼠精子畸形试验
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能得安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施。

并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围
本标准规定了保健用品毒理学精子畸形评价方法。

本标准适用于保健用品毒理学精子畸形检验方法。

2 精子畸形试验
2.1 实验动物
健康成年雄性小鼠，周龄为7 周～12 周，体重25 g～35 g，一般每组至少5 只。

试验前在实验动物房至少适应3 天～5 天。

2.2 仪器和试剂
2.2.1 仪器
2.2.1.1 解剖器械。

2.2.1.2 电子天平。

2.2.1.3 离心机。

2.2.1.4 冰箱。

2.2.2 试剂
2.2.2.1 0.1 %秋水仙素
置于棕色瓶中，冰箱保存。

2.2.2.2 60 %冰乙酸
取60 ml冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。

2.2.2.3 1 %柠檬酸三钠
取1 g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。

2.2.2.4 固定液
甲醇：冰乙酸=3:1，现用现配。

2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。

1。

一：实验材料1 .实验动物选择健康且符合相关要求的小鼠105 只，体重25～30 g，由贵州医科大学合作实验动物技术有限公司提供。

温度：20～25 ℃，湿度：40～70 %RH，每日光照12 h（7∶00~19∶00）。

饲料贵州医科大学生物科技有限公司提供。

2 .主要仪器与试剂赛多利斯电子天平（BS224S），梅特勒电子天平（PB8100 -S），Olympus 生物显微镜（BX51T-32E01）。

以及注射器、量杯、玻璃皿、载玻片，眼科剪、擦镜纸、SPSS 11.5 软件等其他相关实验课配套仪器。

试剂主要有高效氯氟氰菊酯（纯度98.0%）甲醇、环磷酰胺、生理盐水、玉米油，Giemsa 液，伊红染色液等。

二：实验方法1.实验动物分组与剂量选择根据GB 2763-2012《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定的每日允许摄入量（ADI），高效氯氟氰菊酯每日允许摄入量为0.02 mg/kg·BW。

将只健60只健康小鼠随机分为3组，每组20只，雌10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验5只进行小鼠精子畸形试验），雄10只（5只进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，5只进行小鼠精子畸形试验）。

3组分别为溶剂（玉米油）对照组，40 mg/kg·BW 环磷酰胺阳性对照组，0.02 mg/kg·BW 高效氯氟氰菊酯染毒组。

2．小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验将受试农药用玉米油配至所需浓度，充分混匀。

实验小鼠每天同一时间经口染毒1 次，连续4 天。

各组小鼠灌胃量均为0.1 ml/10 g·BW，溶剂对照组经口给予等量玉米油，阳性对照组于第3、4 天经腹腔注射给予环磷酰胺（40 mg/kg·BW），给药量为0.1 ml/10 g·BW。

染毒结束次日，处死小鼠，取出小鼠胸骨骨髓于载玻片上，以1 滴小牛血清混匀后推片，甲醇固定，Giemsa 染色。

采用双盲法，每只小鼠在油镜下观察计数1 000 个嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte, PCE），记录有微核的PCE 数，计算微核率[微核率＝〔含微核的PCE数/嗜多染红细胞数〕×1 000‰]。

实验一精子的制片、活力及密度测定一目的1. 掌握小鼠精子的制片方法。

2.了解评定精液品质的方法。

3. 掌握精子活力的估测方法及血球计数器进行精子密度测定的方法。

二小鼠精子制片及观察1.仪器和试剂眼科手术剪、镊子、玻璃平皿、显微镜、擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、盖玻片、生理盐水、甲醇（分析纯）、2%伊红溶液2.动物选择成熟的大鼠、小鼠均可使用。

一般采用雄性小鼠，年龄6-8周。

3.制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分离并摘取双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml 的生理盐水平皿中，以眼科剪将附睾剪成小块，用吸管将悬液轻轻吹打5-6次，静置3-5分钟，用四层擦镜纸滤除组织碎片，制得精子悬液。

左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取此精子悬液滴至载玻片右侧。

右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。

将载玻片向右拉至精液刚好进入两载玻片形成的角缝中，然后平稳地推至左边（不得再向回拉），做成精液抹片。

必须注意精液抹片不要太厚，同时要防止用力过大而造成人为的畸形精子数增多。

抹片后，使其自然风干。

晾干后用甲醇固定5分钟，干燥后即可镜检。

也可用2%的伊红溶液染色1-2小时后再做镜检。

三精液品质检查(一) 直观检查1. 精液量：将采得的精液倒在有刻度的试管或杯中，测其容量。

各种常用实验动物的射精量平均为：大鼠0.05～0.2毫升，豚鼠0.4～0.8毫升，兔0.4～6.0毫升，犬2.0～15.0毫升。

2. 观察精液的色泽并嗅闻气味。

色泽：正常精液一般为乳白色或白色，密度越高，乳白色程度越浓，其透明度也越低。

其它颜色均为不正常颜色。

气味：一般为无味或略带腥味。

3.精液的云雾状翻腾滚动。

云雾状显著者以“＋＋＋”表示，有云雾状以“＋＋”表示，云雾状不明显者以“＋”表示。

(二)精子活力检查精子的活动有三种类型：前进运动、旋转运动和振摆运动，评价精子活力是根据精液中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。

锰对小鼠精子数量、畸形率和活动度影响(一)【关键词】小鼠精子近年来，随着对锰的生殖毒理、生殖流行病学和生殖生化领域的研究进展，锰对男性生殖系统的损害已渐渐受到重视，并提出以精子数量、精子形态结构和精子运动能力等作为衡量环境有害因素对雄性生殖机能影响的重要观察指标〔1〕。

为此，本文对小鼠精子数量、畸形率和活动度进行了研究。

1材料与方法11实验动物6～8周雄性昆明种小鼠100只，体重23～28g(贵阳医学院实验动物中心)，合格证号为SCXK2002-0001。

随机分为4组，即3个不同剂量MnCl2组(75，15，30mg/kg)和对照组，分别给予腹腔注射MnCl2和等量生理盐水，1次/d，每周5d,每组25只，每周测小鼠体重，调整用锰量。

12主要试剂MnCl2・4H2O(中国医药集团上海化学试剂公司)。

13标本收集分别于染锰3，7，14，28，56d随机每组取5只小鼠，脱臼处死，立即分离附睾。

14精子计数参照文献〔2〕。

15精子活动度参照文献〔2〕。

精子活动度分级参照WHO推荐的方法，按精子游泳状态将精子活动度分为4级〔3〕。

精子活动度=(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ)/(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ)×100%。

16精子畸形率取上述精子悬液500μl，加入2%伊红溶液50μl，染色1min，涂片，甲醇固定。

油镜下观察1000个精子/只，用‰表示精子畸形率〔4〕。

精子畸形分类参照文献〔5〕的方法。

17统计分析采用SPSS110统计软件进行分析。

所得计量资料用±s表示，用F分析进行检验；精子活动度采用χ2检验；精子畸形率用Poisson分布进行检验。

2结果21氯化锰对小鼠精子数量的影响(表1)各组在染锰第3，7d精子计数与对照组比较，差异无统计学意义(P＞005)；染锰14d，30mg/kg组精子计数开始降低，与对照组比较，差异有统计学意义(P005)；染锰28d，3个染锰组精子计数与对照组比较，差异有统计学意义(P005，P001，P001)；至染锰56d，3个染锰组精子计数均显著降低，与对照组比较，差异有统计学意义(P001)，精子数量随染锰剂量增加和时间延长逐渐减少。