细胞培养常用器材与试剂

细胞培养用的仪器
细胞培养用的仪器包括细胞培养皿、细胞摇瓶、细胞计数器、离心机、PCR仪等。

这些仪器的作用分别是：
1. 细胞培养皿：用于细胞培养的实验室器具，一般由玻璃或塑料制成，形状为圆形或方形，用于观察细胞生长和繁殖的情况。

2. 细胞摇瓶：一种用于细胞培养的器具，由玻璃或塑料制成，形状为细长形，内装有细胞和培养基，通过摇晃可以使细胞得到充分的营养和氧气。

3. 细胞计数器：一种用于细胞计数的仪器，可以准确地测定细胞数量，帮助研究人员了解细胞生长和繁殖的情况。

4. 离心机：一种用于分离和纯化细胞的仪器，通过高速旋转将细胞和其他物质分离，可以用于细胞分离、洗涤和浓缩等操作。

5. PCR仪：一种用于DNA扩增的仪器，通过PCR技术可以将特定的DNA片段在短时间内大量扩增，用于基因克隆、突变分析和疾病诊断等领域。

这些仪器在细胞培养实验中是必不可少的，可以帮助研究人员更好地了解细胞生长和繁殖的情况，以及进行基因克隆和疾病诊断等研究工作。

细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。

在显微镜下不同的细胞有不同的形态。

利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。

培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。

生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。

不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。

完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。

由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。

②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。

血清的分类最常用的是胎牛血清。

胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。

③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。

常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。

主要用于悬浮细胞培养。

其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。

MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。

适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。

低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。

F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。

该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。

6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。

配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。

必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。

三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

细胞制备常用耗材材料
细胞制备过程中需要使用多种耗材材料，这些材料对于细胞制备
的成功至关重要。

下面就为大家介绍常用的耗材材料及其作用。

1、细胞培养基
细胞培养基是细胞生长、分化、增殖所必须的基础。

不同类型的
细胞需要使用不同种类的培养基，例如EMEM培养基可用于培养小鼠成纤维细胞，DMEM培养基可用于培养人类细胞等。

在使用培养基时需要注意培养基的配制和储存条件，以保证细胞的健康生长。

2、细胞冻存液
细胞冻存液是将细胞保存在低温条件下的重要介质，可以延长细
胞的寿命。

细胞冻存液的配制要与细胞类型相匹配，含量的浓度、PH
值和添加物的选择具有很大关联。

一般情况下，细胞冻存液中含有10% DMSO和20%人血清可以有效保护细胞。

3、消毒液
消毒液主要用于对培养室、培养箱、培养器、试管等实验室设备
进行消毒。

为防止不同菌株的污染对细胞的影响，消毒液的选择应根
据不同细胞类型和实验要求来决定。

一般工作台、镊子、移液管、培
养板应每天进行消毒。

4、细胞培养器皿
细胞培养器皿一般包括培养瓶、培养箱、平板、离心管等。

正确
选用容器可以确保细胞生长环境卫生、稳定。

注意过期日期，选择质
量可靠的细胞培养器皿，以免对细胞生长带来影响。

细胞制备耗材材料是细胞培养的基础，要保证细胞培养以顺利的
进行，科学的选择和使用这些耗材材料具有重要意义。

选择定期更新，正确使用和保养这些耗材材料，可以更好的保证细胞培养的成功。

实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌，并说明理由。

①材料：微孔滤膜(直径25 cm)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。

②仪器和器材：眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶（或盐水瓶）、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升（或10毫升）吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。

理由：适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。

2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌？1）PBS ：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水，高压灭菌，4℃保存。

（准备试剂瓶）灭菌方法：高压灭菌。

2）干粉培养基过滤除菌（先准备好不锈钢过滤器及滤膜，安装后高压灭菌，适度烘干；铝盒4个，三角瓶2个，容量瓶，不锈钢过滤器一套，酒精灯，酒精棉球3瓶，吸耳球3个，吸量管10毫升和5毫升各5根，分装用瓶，血清，超纯水，抗生素）认真阅读说明书。

说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。

这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。

配制方法（1L）：1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。

2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基。

3）水洗袋内残留培养基，全部转移到容器内，轻轻搅拌，不要加热。

4）完全溶解之后，1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3，1mmoL∕L丙酮酸钠，即0.11g/L，添加双抗。

5）用双蒸水定容到1L，搅拌溶解。

注意不要过分搅拌。

6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。

生物实验室器材清单表一、基本实验器材•称量仪器：电子天平、分析天平、移液器等。

•容器：试管、烧杯、量筒、离心管、培养皿等。

•温度控制设备：恒温水浴锅、恒温培养箱、恒温恶冷冻箱等。

•搅拌设备：磁力搅拌器、振荡器等。

•过滤设备：滤纸、滤液漏斗、滤膜、滤芯等。

•离心设备：高速离心机、台式离心机等。

•加热设备：电热板、电炉、燃气灶等。

•p H计：用于测量溶液的酸碱度。

•光学设备：显微镜、反射显微镜等。

二、分子生物学实验器材•离心管架：用于离心管的固定和摇晃。

•冻存管和冻存管盒：用于样品的长期保存和冷冻。

•培养皿和培养瓶：用于生物样品的培养和生长。

•PCR试管和PCR板：用于聚合酶链式反应(PCR)实验。

•电泳仪和电泳槽：用于DNA或蛋白质的分离和检测。

•转印设备：用于将DNA或蛋白质转移到膜上。

•半自动和全自动PCR仪：用于PCR反应的自动化控制。

•基因测序仪：用于测定DNA序列。

•真空泵和真空过滤器：用于快速过滤和生物样品的处理。

•超低温冰箱：用于存放生物样品和试剂。

三、细胞生物学实验器材•细胞培养器：细胞培养瓶、细胞培养皿等。

•色素和荧光标记试剂：用于细胞成像和染色。

•显微镜和显微摄像系统：用于观察和记录细胞结构和功能。

•细胞计数仪：用于计算细胞数量和密度。

•酶消解试剂：用于细胞的消化和分离。

•均质机和超声波颚化器：用于细胞的破碎和分散。

•细胞培养水浴锅和细胞培养箱：用于细胞培养的温度控制。

•细胞冻存液和细胞恢复液：用于细胞冻存和解冻。

四、免疫学实验器材•免疫试剂盒：用于免疫检测和定量。

•过滤膜和孔板：用于免疫试剂的过滤和固定。

•孵育箱和孵育器：用于免疫试剂的孵育和反应。

•光谱仪和荧光仪：用于测量光信号和荧光强度。

•干燥器和浓缩器：用于免疫样品的脱水和浓缩。

•凝胶电泳仪和蛋白质标记试剂：用于免疫印迹和蛋白质定量。

•细胞悬液和抗体标记试剂：用于免疫细胞的染色和标记。

五、遗传学实验器材•DNA提取试剂盒和RNA提取试剂盒：用于提取DNA和RNA。

细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。

小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。

正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。

下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。

一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。

具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。

2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。

一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。

3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。

二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。

（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。

（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。

配置胰酶需要购买一种过滤器。

（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。

（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。

2、耗材。

吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。

（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。

（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。

（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。

三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。

2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。

3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。

BHK-21传代细胞培养BHK是仓鼠肾细胞[原理]细胞在培养瓶壁上长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。

传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。

同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

[材料和试剂]1、细胞：贴壁BHK-21细胞株2、试剂：0.25％胰蛋白酶、配制好的DMEM培养液、小牛血清、双抗溶液、7.5%碳酸氢钠3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、胶塞、量筒、注射器、针头、酒精灯、污物缸等[操作步骤]1、应需要计算好培养液的总用量，按10%的比例加入血清，按1%的比例加入双抗。

用7.5%的碳酸氢钠调PH至7.0~7.2左右。

2、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

3、加入0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中为宜。

4、瓶口塞好胶塞，平放在实验台上。

约2~3分钟会看到贴壁细胞层出现细针孔空隙，赶紧将胰酶弃去，加入少量培养液终止消化。

5、用注射器将贴壁的细胞反复吹打，使其均匀分散成悬液，再加入足量的培养液，分成两到三瓶。

塞好胶塞，置37℃温箱中继续培养。

细胞培养常用溶液的配制一、青、链霉素溶液青霉素钠盐(80万IU／瓶) 5瓶链霉素(100万IU／瓶) 4瓶将两者溶于400ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-20℃保存。

双抗在培养基中的终浓度为100IU/ml为宜。

二、7.5%碳酸氢钠溶液的配制称取碳酸氢钠7.5g，加入超纯水使总体积为100ml。

高压灭菌，分装于小瓶中，4℃贮存。

三、1%酚红溶液的配制首先配制1mol/L的NaOH溶液。

称取NaOH4.0g，加入100ml超纯水，使NaOH 完全溶解，在室温或4℃贮存（最好现用现配）。

配制好NaOH溶液后，再称取1.0 g 酚红置研钵中，加1mol/L的NaOH（不多于7.0ml），研磨使酚红完全溶解，加超纯水至100ml，高压消毒，在室温或4℃贮存。

四、0.25%胰蛋白酶溶液的配制氯化钠8.0g氯化钾0.2g柠檬酸钠(Na3C6H5O7•5H2O) 1.12g磷酸二氢钠(NaH2PO4•2H2O) 0.056g碳酸氢钠 1.0g葡萄糖 1.0g胰蛋白酶（1：250） 2.5g超纯水加至1000ml放4℃冰箱过夜，待胰蛋白酶充分溶解后，用0.2um微孔滤膜过滤除菌，分装于小瓶中，-20℃保存。

细胞培养的操作步骤(总12页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March传代细胞培养的视频拍摄脚本一、实验准备器材液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、磁力搅拌器、离心机、分析天平、倒置显微镜、超净工作台、弯头吸管（1个）、胶头滴管（9个）、离心管（9个）、带塞培养瓶（不定个）、试管架、量桶、烧杯、酒精灯、抽滤瓶、G6型号细菌过滤漏斗、带塞小玻璃瓶，大三角瓶、无菌冻存管、液氮瓶（一）、器皿1玻璃器皿的清洗灭菌：种类：小玻璃瓶、弯头吸管、滴管（3个）、培养瓶、量桶、烧杯、抽滤瓶、大三角瓶，细菌过滤器接口管药品：5％盐酸溶液、重鉻酸钾120ml、硫酸200ml、蒸馏水200ml （1）浸泡:新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。

以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。

（镜头一：实验人员将器皿放进加有5％盐酸溶液的盆内，并以字幕和配音的形式显示浸泡或煮沸时间和浸泡目的）（2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。

刷洗后经行烘干（镜头二：实验人员刷洗器皿，使用正规的清洗方法，并烘干，只示范其中2--3种即可，实验人员必须介绍操作示范烘干箱的使用方法和相关数据的设置方法）（3）酸浸:刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干，以免造成酸浸液稀释，影响效果。

将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。

清洁液具有极强酸蚀作用，操作过程需戴防护用具。

（镜头三：带好橡胶手套将清洁液加入到盆中，让后进行酸浸，并以字幕的形式显示浸泡时间）（4）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。

细胞培养用的仪器一、介绍细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于培养细胞以便进行细胞生物学、分子生物学和药理学等方面的研究。

细胞培养的成功与否与所使用的仪器设备密切相关。

本文将介绍几种常用的细胞培养仪器，包括培养箱、显微镜、离心机和细胞计数仪等。

二、培养箱培养箱是细胞培养中必不可少的仪器之一。

培养箱能提供恒定的温度、湿度和二氧化碳浓度，以模拟体内的环境条件，使细胞能够正常生长和繁殖。

常见的培养箱有以下几种特点：1. 温度控制培养箱能够精确地控制温度，通常范围在37°C左右，以适应人类细胞的生长需求。

温度控制系统能够保持恒定的温度，以避免温度变化对细胞生长的影响。

2. 湿度控制培养箱能够调节湿度，保持适当的湿度水平，以防止细胞脱水和过度湿润。

湿度控制系统能够稳定细胞培养环境，确保细胞能够在适宜的湿度条件下生长。

3. CO2控制培养箱配备CO2控制系统，能够调节培养箱内的二氧化碳浓度。

二氧化碳的存在可以调节细胞内pH值，促进细胞生长和代谢。

CO2控制系统能够稳定二氧化碳浓度，确保细胞在适宜的环境中生长。

三、显微镜显微镜在细胞培养中起到观察和分析细胞的作用。

显微镜能够放大细胞，使其可见，以进行细胞形态、结构和功能的研究。

常见的显微镜有以下几种：1. 光学显微镜光学显微镜是最常用的显微镜之一，它使用可见光来放大和观察细胞。

光学显微镜具有简单易用、成本低廉的特点，适用于常规的细胞观察和分析。

2. 荧光显微镜荧光显微镜利用荧光染料和荧光探针对细胞进行标记，以观察和研究细胞内的特定分子和结构。

荧光显微镜具有高灵敏度和高分辨率的特点，适用于研究细胞内的生物过程和分子交互作用。

3. 电子显微镜电子显微镜利用电子束来放大和观察细胞，具有非常高的分辨率。

电子显微镜适用于观察细胞内的超微结构，如细胞器、膜系统和细胞骨架等。

四、离心机离心机在细胞培养中用于分离和沉淀细胞和细胞组分。

离心机通过旋转离心管使细胞受到离心力的作用，从而实现细胞分离和沉淀。

细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术。

细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。

细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。

因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。

细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。

细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。

细胞培养专用试剂
细胞培养专用耗材。

细胞培养PBS配方
所需试剂和设备:
-NaCl(氯化钠)
-KCl(氯化钾)
-Na2HPO4(磷酸氢二钠)
-KH2PO4(磷酸二氢钾)
-无菌水
-电子天平
-烧杯和量筒
-反应管和磨研器
步骤:
1.称取所需试剂。

根据下述配方，称取正确比例的NaCl、KCl、
Na2HPO4和KH2PO4、确保所有试剂都是无菌的，并在称取时保持清洁卫生。

2.备制1L的PBS溶液。

将称取的试剂添加到烧杯中，并用无菌水稀
释至1L。

3.搅拌混合。

使用一个电子磨研器或类似的设备，将溶液进行彻底的
混合以确保所有试剂充分溶解。

尽可能避免气泡的形成。

4.pH调节。

使用pH计来测定溶液的pH值。

根据需要，使用NaOH或HCl溶液调节pH值。

PBS的理想pH值为7.4左右。

5.灭菌。

将溶液装入无菌试管中，并将其密封。

以121°C的温度下，在高压蒸汽灭菌器中处理溶液。

处理时间为15-20分钟。

注意事项:
-在制备PBS时务必保持实验室的环境无菌，因为这种溶液广泛应用
于细菌和真菌的生长培养中。

-要使用新鲜的试剂来制备PBS，以避免试剂的老化和变质。

-处理溶液时要小心，避免对溶液的污染。

使用无菌操作来减少污染
的风险。

-在制备PBS溶液之前，请先确保相关设备（如烧杯、磨研器等）已
经过彻底清洁和消毒处理。

试验一：试验器材预备【试验原理】细胞培育技术与其他一般试验室工作的主要区分在于要求保持无菌操作，避开微生物及其他有害因素的影响。

一般标准的细胞培育室应包括配液室、预备室和培育室。

三室既相互连接又相对独立，各自完成培育过程中的不同操作。

【试验目的】①培育室的设置和设备。

②无菌概念和无菌操作要领。

【操作步骤】1.试验室设置（1）配液室（2）预备室（3）培育室培育室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要留意以下几点：①培育室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照耀的地方，防止室内温度增高。

②天花板的高度不要超过 2 米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流淌。

④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角积存灰尘。

2.试验室常用设备（1）预备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。

②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。

③枯燥箱：洗涤完的玻璃器皿用枯燥箱烘干。

④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、局部液体、塑料器具等灭菌。

不同物品其有效灭菌压力和时间不同。

⑤储品柜 1：放置未消毒物品。

⑥储品柜 2：放置已消毒物品。

预备室留意事项：①预防蒸馏器被烤干。

②勿将酸液溅到衣物或地面。

③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。

④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。

（2）配液室的设备①天平〔扭力天平和电子天平〕：称量用②pH计。

③磁力搅拌器。

（3）细胞培育室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，缓缓通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。

依据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，根本原理大致一样，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的干净气流从确定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高干净度工作环境。

细胞培养是一项常用的生物技术，其原理是基于细胞在适当的培养条件下能够维持存活和增殖的能力。

通过细胞培养，可以获得大量的细胞样本，用于研究、药物筛选、疾病治疗等应用。

以下是细胞培养的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。

一、原理细胞培养的基本原理是模拟细胞在生物体内的生长环境，提供细胞生存和增殖所需的基本条件。

这些条件包括适当的温度、湿度、营养物质（如氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等）和气体环境（如氧气、二氧化碳等）。

通过提供这些适宜的条件，细胞可以在体外环境中维持生存和增殖。

细胞培养中涉及的关键生物学过程包括细胞的贴壁、增殖和传代。

细胞的贴壁是指细胞在培养瓶内附着于瓶壁上的过程，这通常发生在细胞悬液加入培养液之后。

细胞贴壁后，会开始进行有丝分裂，进行增殖生长。

当细胞数量增加到一定程度时，需要将培养瓶中的细胞传代到新的培养瓶中，以维持细胞的适宜生长密度。

二、所需试剂和耗材细胞培养所需的主要试剂和耗材包括：1.培养基：为细胞提供基本的营养物质，如胎牛血清、氨基酸、葡萄糖等。

2.添加剂：包括抗生素、抗真菌药物等，用于防止培养过程中的污染。

3.培养瓶：用于细胞的培养，有不同的规格和形状。

4.移液器：用于吸取和转移细胞悬液和培养液。

5.离心管：用于离心收集细胞。

6.过滤器：用于过滤培养液中的杂质和颗粒。

7.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。

8.无菌操作台：用于进行无菌操作，防止污染。

三、实验仪器细胞培养常用的实验仪器包括：1.细胞计数器：用于细胞计数和细胞密度测量。

2.显微镜：观察细胞的生长情况和形态变化。

3.CO2培养箱：为细胞提供适宜的生长温度和气体环境。

4.高压灭菌器：用于消毒处理实验器材和试剂。

5.超净工作台：用于进行无菌操作。

6.分光光度计：用于测量细胞生长的生化指标，如蛋白质含量等。

四、准备工作在进行细胞培养前，需要进行以下准备工作：1.选择适当的细胞：根据实验需求选择适合的细胞，了解其特性、来源和培养条件。

器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。

需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。

用HCl或NaOH调PH到7.4。

移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。

注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。

3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。

不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。

胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。

使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。

因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。

终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。

搅拌混匀，置于4℃内过夜。

用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。