PH1788 血液线粒体DNA提取试剂盒实验使用方法 Phygenen

血液线粒体DNA抽提试剂盒说明书近几年,从有报告暗示糖尿病、阿尔茨海默病和线粒体DNA(mtDNA)变异有关开始,mtDNA分析变得盛行1),2),3),4)。

可是，想要抽提高纯度mtDNA，需要繁杂的操作和很多的时间，不适合以多样品处理为目的的研究。

目前进行的mtDNA分析，从细胞中抽提total DNA时，产物中含有微量mtDNA与大量基因组DNA。

mtDNA 抽提WB试剂盒可短时间从全血中容易的抽提出高纯度mtDNA，适合多样品处理。

〔特点〕Ⅰ. 简单操作，可短时间（约90分钟）抽提出mtDNA。

Ⅱ. 可从EDTA 处理血及肝素处理血中抽提出mtDNA。

Ⅲ. 抽提出的mtDNA混入了少量高纯度基因组DNA，可用于限制性内切酶处理或DNA扩增反应。

Ⅳ. 适合少量多样品的DNA扩增反应的预处理。

Ⅴ. 不使用苯酚、氯仿等有害剧毒溶剂。

〔内容〕1) Leukocyte Isolation Solution 5.0 ml 1支2) DNA Extraction SolutionⅠ 26.5 ml 1支3) DNA Extraction SolutionⅡ(A) 1.3 ml 1支4) DNA Extraction SolutionⅡ(B) 1.3 ml 1支5) DNA Extraction SolutionⅢ 1.9 ml 1支6) Sodium Iodide Solution 7.5 ml 1支7) Washing Solution 50.0 ml 1支〔储存方法〕2～10℃保存〔除试剂盒外，实验所必备的东西〕试剂1) 异丙醇（特级，Code 166–04836）12.5 ml2) TE缓冲液（基因工程学研究，Code 316–90025）适量器具1) 1.5 ml 微管（已灭菌）2) 涡流搅拌器3) 微量高速离心机（最大12,000×g）4) 减压干燥机〔使用方法〕(1) 将100μl的人类新鲜血液放入微管中*1。

全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。

2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。

二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。

2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。

三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。

2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。

3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。

4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。

四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。

2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。

3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。

4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。

五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。

2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。

3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。

六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。

2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。

总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。

在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。

该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。

希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。

mtDNA提取流程(1)将待测组织充分切碎(碎片大小:脾脏组织≤10 mg、其他组织≤25 mg),取样品25 mg移入微型离心管。

(2)加入180 μL Buffer ATL、20 μL Proteinase K、缓慢充分混匀,置于56 ℃恒温水浴直到完全溶解(水浴期间间隔摇晃混合)。

在开始下一步前摇晃混合15 s。

(3)加入200μL Buffer AL,充分混合(血液样品需56℃恒温水浴10 min)。

(4)加入200 μL 无水乙醇,混合均匀。

(5)将混合溶液移至2mL收集管中的滤管里,6000 xg条件离心1 min,取出滤管,扔掉收集管。

(6)将滤管放入新的收集管中,加入500 μL Buffer AW1, 6000 xg条件离心1 min,取出滤管,扔掉收集管。

(7)将滤管放入新的收集管中,加入500 μL Buffer AW2, 20000 xg条件离心3 min,取出滤管,扔掉收集管。

(8)将滤管放入新的微型离心管(1.5-2 mL)。

(9)向滤管中心滴加200 μL(100 μL)Buffer AE洗涤DNA,室温放置1 min。

6000 xg条件离心1 min。

(10)重复一边上述步骤,增大DNA产率(重复一遍即可)。

理论25mg原料大概能提取10-20μg DNA.注:摇晃混合和拿起时一定要轻慢,防止DNA断裂。

琼脂糖电泳步骤1. 准备电泳槽:将有机玻璃的电泳凝胶床洗净晾干,插上样品梳。

2. 琼脂糖凝胶的制备:称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中(1%的琼脂糖含量),置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。

3. 灌胶:将冷却60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上(厚度不超过0.5cm)。

待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。

5. 加样:将DNA样品与加样缓冲液按5:1混匀后(取10μL DNA样液与2μL 电泳载样缓或5μL DNA样液与1μL 电泳载样缓冲液混匀,用移液枪将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μL,记录样品的点样次序和加样量。

PH1701 | PhyGet™ 血液 DNA 提取试剂盒 PhyGet™ Blood DNA Kit
Catalog No：PH1701 Size： 50T | 100T | 200T Store at RT

简介
本公司的血液 DNA 提取试剂盒可一次性地处理 1～1000μl 体积新鲜、冷冻或抗凝血液样本，该系列试剂盒同样也用于制 备黄层、血清、淋巴液、口腔或其它体液 DNA。该试剂盒可以在 30 分钟内完成单个或多个样品的操作。该试剂盒不需要 酚氯仿抽抽提，或者耗时的操作（如异丙醇沉淀）。使用该试剂盒提取到的 DNA 可以用于 PCR，Southern 杂交，酶切消 化等实验。

使用参考
注意：以下方案适用于 1～1000μl 体积新鲜或冷冻血液样本，抗凝全血、唾液、血清、黄层等体液均可使用。另外,≤107 的白细胞或培养细胞可使用该方案。DNA Wash Buffer 提供的浓缩液，需按前面的说明进行稀释。 1. 血液的处理（本试剂盒适用于处理 100μl～1ml 抗凝血）。 a. 当血液样品体积小于 250μl 时，可加灭菌去离子水补足至 250μl，再进行下一步实验（如血液样品体积为 250μl，可直接 进行下一步实验）。 b. 当血液样品体积超过 250μl 时，需用 Buffer RL 预先裂解红细。具体步骤如下：在每 1ml 血样中加入 900μl 的灭菌水与 100μl Buffer RL 颠倒混匀，10,000 rpm 离心 1 分钟，吸去上清，留下细胞核沉淀。再加入 900μl 灭菌水与od DNA Kit 在购买后按以下方式储存可保存至少 12 个月；Protease K 储于-20℃，其它组成 储于室温（22-25℃）。BL 在低温下可能会出现沉淀，加热到 37℃溶解沉淀。 实验前准备 请详细阅读该手册并熟悉各个步骤，在开始之前准备好所有的试剂盒组分和必需的器材。 浓缩的 DNA Wash Buffer 需用无水乙醇按如下稀释： 50 assay 需加入 52 mL ；100 assay 需加入 104 mL；200 assay 需加入 208 mL 无水乙醇稀释。