DNA提取试剂盒步骤--最新

QIAGEN试剂盒提取DNA步骤缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热）缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%）1.研磨前擦拭工作台。

2.研钵里加入液氮，预冷。

研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。

液氮预冷离心管后加入材料，加至1/2或2/3处。

若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。

拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。

3.加入440l缓冲液AP1（必须为预热好的），。

盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。

4.加4lRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。

5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。

准备冰盒。

6.加入130l缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。

7.14000rpm/min离心5min.8.仔细缓慢将上层液体（500l）置于QIAshredder Mini Spin Colum（柱）中（紫色）。

14000rpm/min离心2min.9.将上步中的滤液（450l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，注意别吸到管底细胞碎片小球。

10.在溶解清液中仔细缓慢加入1.5倍体积（675l）的缓冲液AP3/E。

一定要仔细，慢慢抽吸至两者充分混匀。

11.将上步中650l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum（柱）中（白色），其余的混合液留着，用于再次抽提。

8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。

准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。

12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum（柱）中，8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。

13.将Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔着塑封袋捏出离心管）。

全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。

2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。

二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。

2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。

三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。

2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。

3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。

4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。

四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。

2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。

3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。

4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。

五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。

2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。

3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。

六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。

2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。

总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。

在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。

该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。

希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。

血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足；注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。

10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。

b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤；c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。

2. 加入20ul Proteinase K，混匀。

a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。

d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。

基因组DNA提取步骤1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，剪碎；2.加入400ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，4℃13000转/分离心10min；5.上清加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上清；9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。

基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。

利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。

加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。

在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。

一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。

而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。

新型大量植物DNA快速提取试剂盒目录号：DN38适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次（DN3801）RNase A(10mg/ml) -20℃500 μl缓冲液AP1 室温50 ml缓冲液AP2 室温20 ml缓冲液AP3/E 室温40 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25ml x2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱AC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3/E加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。

可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。

提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

全血基因组DNA提取试剂盒使用说明DNA提取是生物学、遗传学和分子生物学等领域的一项重要实验操作。

全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样本中提取DNA的试剂盒，本文将详细介绍其使用说明。

一、试剂准备：1.预先将试剂盒从-20℃的冷冻器中转移到4℃的冰箱中解冻，取出所需试剂。

2.将试剂A和试剂B随机摇匀，避免沉淀的产生。

二、样本处理：1.取出需要提取DNA的全血样本，将其加入离心管中。

2.加入适量的蒸馏水和样本量相等体积的10%梳酸混匀，使血细胞溶解。

三、样本裂解：1.准备离心管和4℃的离心机。

2.加入适量的样本处理试剂（试剂A和试剂B），混匀离心管。

4.将裂解后的样本置于冰上放置10分钟。

四、DNA纯化：1.准备离心管和4℃的离心机。

2.将样本离心管中的上清转移至新的离心管中，并加入适量的试剂C，混匀并置于冰上放置5分钟。

4.弃去上清，避免悬浮细胞的干扰。

五、脱脂：1.准备脱脂离心管和4℃的离心机。

2.加入适量的试剂D，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。

4.弃去上清，避免沉淀的干扰。

六、洗涤：1.准备洗涤离心管和4℃的离心机。

2.加入适量的试剂E和试剂F，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。

4.弃去上清，避免沉淀的干扰。

七、DNA溶解：1.准备离心管和4℃的离心机。

2.加入适量的试剂G，混匀并置于冰上放置5分钟。

八、DNA浓缩：1.准备离心管和4℃的离心机。

2.加入适量的试剂H，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。

4.弃去上清，避免纯化后的DNA丢失。

九、DNA溶解：1.加入适量的蒸馏水，混匀使DNA溶解。

十、质检：1.准备质检相关设备和试剂。

2.使用紫外分光光度计检测DNA纯度和浓度。

3.对提取的DNA进行PCR扩增、酶切鉴定等质检步骤。

以上就是全血基因组DNA提取试剂盒的使用说明，希望对您在实验中提取DNA有所帮助。

在操作中，请严格按照试剂盒说明书和实验室操作规范进行操作，确保实验的准确性和可重复性。

磁珠法基因组DNA 提取试剂盒(细胞)样本前处理：细胞用PBS洗两次后，6000rpm/min 离心3min，弃上清，加入500ul Buffer CGP重悬沉淀，12000rpm/min离心1min，弃上清，取沉淀备用。

2.裂解结合：在细胞沉淀中，加入500μLBuffer CGL，室温放置5-10min，再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB) （使用前充分重悬），颠倒混匀，室温放置5min（期间不时颠倒混匀）；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW 0,涡旋振荡5s，重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤1次。

(2)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW I,涡旋振荡5s，重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃尽，不然残留会影响下游实验），晾干2min。

实验准备56°C加热源磁珠用前一定要充分混匀；使用前需在Buffer CGW I中加入相应体积的无水乙醇。

4.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-100μl Buffer EB ，涡旋振荡结合移液器吹打，充分吹散磁珠（一定要完全吹散磁珠，若未充分重悬会影响DNA 得率），56°C 放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20 °C保存备用，保质期为2 年。

纯度效果评价通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量，通常情况下A260值在0.1～1.0之间数据比较可信。

如果不在此范围内，请稀释或浓缩样品调整；通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定DNA纯度，A260/A280比值在1.8-2.0之间，小于1.8表示可能有蛋白质污染。

游离DNA提取试剂盒（磁珠法）说明书【产品名称】通用名称：核酸提取或纯化试剂商品名称：游离DNA 提取试剂盒（磁珠法）英文名称：Magbind CFDNA Kit 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的游离DNA (Free circulating / Cell-free DNA)提取方法，适用于从血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA 。

纯化得到的离DNA 质量稳定、可靠，可用于下游常规实验。

　该试剂盒可与转移液体法的核酸提取仪配套使用，简单、快速地进行大规模提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

【预期用途】　样品裂解后，在高盐存在时，DNA 结合于硅基包被的磁珠表面，漂洗后，高纯度DNA 被洗脱于洗脱缓冲液或去离子水中。

DNA 得率与样品的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。

【检验原理】50次/盒；400次/盒【包装规格】版本号：11/2020【样本要求】1．适用标本类型：新鲜或冷冻的全血（用柠檬酸盐、EDTA 或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）、血浆、血清、淋巴细胞、无细胞体液等样本。

2．标本处理与保存：血清及血浆样本按常规方法制备，新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存，避免反复冻融。

3．样本运输：应采用冰壶或者泡沫箱加冰或干冰密封运输。

【检验方法】实验前准备：向蛋白酶K 中加入指定用量的蛋白酶K 保存液使其溶解，终浓度为20 mg/ml ，-20℃保存。

1．向1.5 ml 离心管中加入20 μl 蛋白酶K 溶液。

2．向上一步的离心管中加入200 μl 血清/血浆样品。

注意：冻存样品需提前在4℃冰箱中放置使其溶化。

溶化过程中反复颠倒样品储存管使其混匀。

3．向上一步的离心管中加入200 μl 裂解缓冲液，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃、1300 rpm 的Thermomixer 上振荡裂解10分钟。

注意：1）如无Thermomixer ，需将离心管放于56℃水浴锅或金属浴中孵育10分钟，期间每隔2分钟涡旋振荡5秒钟。

试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(DN4001) 裂解液DLB 室温20 ml去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个室温储存12个月不影响使用效果，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：采用特异性结合病毒DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA。

该产品可以满足绝大多数的病毒DNA的提取要求，如病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等等。

病毒裂解后，DNA 后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA从硅基质膜上洗脱。

纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR、酶切、杂交等分析。

产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种操作，包括PCR、酶切、杂交等。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1.200μl血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9% NaCl或者PBS补足）转入上述1.5ml离心管，加入400μl 裂解液DLB,立刻涡旋振荡充分混匀。

2.室温(15-25℃)放置10分钟，每隔5分钟，振荡混匀一次。

3.加入450μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。

如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

4.将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12目录编号包装单位DN1201 50次DN1202 100次DN1203 200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次细胞核裂解液室温30 ml 60 ml 120 ml蛋白沉淀液室温10 ml 20 ml 40 mlDNA溶解液室温10 ml 15ml 30 mlRNase A(10mg/ml) -20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、0.5M EDTA和Lysozyme（溶菌酶）(用于革兰氏阳性菌)、lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)、水浴箱。

艾德莱溶液型血液提取操作步骤血样解冻：前一晚将冻存血放置4℃冰箱，实验前提前30min将血样放置室温。

(看天气情况，夏天可放在室温)1、红细胞裂解液：2mL/每个血样（1.5mL+500uL）配液：稀释红细胞裂解液：10x→1x，稀释10倍2、70%乙醇：1mL/每个血样配液：无水乙醇→70%乙醇（70mL无水乙醇加入30mL水。

）3、细胞核裂解液：750uL/每个血样（37℃水浴）4、蛋白沉淀：250uL/每个血样5、异丙醇：1mL/每个血样每个血样（65℃水浴）1、2mL离心管→加入1.5mL红细胞裂解液（1x）→混匀血样，500uL血细胞→颠倒6-8次，倒置轻弹管壁→室温放置10min。

（期间不时颠倒轻弹，裂解完全）2、12,000rpm离心36s，弃上清。

（留下完整的管底白细胞团和大约10uL的残留上清）3、加入500uL红细胞裂解液，颠倒轻弹混匀→室温放置10min。

离心36s，弃上清。

（留下完整的管底白细胞团和大约10uL的残留上清）1、涡旋振荡（15s），重悬、充分分散白细胞团。

2、加入750uL细胞核裂解液，迅速有力吹打混匀，裂解白细胞。

（由于基因组DNA立刻释放出来，混合物会马上变得十分粘稠，立刻停止吹打，以免剪切断基因组DNA）3、颠倒旋转离心管10次。

（保证裂解液和所有的白细胞接触并裂解）30—40min，至裂解完全。

（不要超过一小时）1、冷却至室温→加入250uL蛋白沉淀液→涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25s。

（呈漩涡状25s）2、13,000rpm离心5min16s。

（可见管底暗褐色蛋白沉淀）3、吸取上清1mL至新的2mL离心管。

（若不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清）1、加入1mL异丙醇，轻柔颠倒30次混匀，直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀。

2、12,000rpm离心1min16s，弃上清。

3、加入70％乙醇1mL，颠倒混匀。

4、12,000rpm离心1min16s，弃上清。

一．DNA的抽提（QIAGEN试剂盒）。

（1）标记1.5mlEP管，吸取20ul蛋白酶K加入1.5mlEP管底部。

（2）加入200ul血清至1.5mlEP管。

若血清不足200ul，可加适量PBS 补充。

（余血清-20℃保存）（3）加200ul缓冲液AL至样品管，震荡混匀15s。

（4）56℃孵育10min。

（5）稍微离心，将EP管壁上的液体离心下去。

（6）加200ul无水乙醇至样品管中，震荡混匀15s，稍微离心。

（7）混合液转移至QIAamp螺旋住置于2ml收集管上，小心勿沾湿边缘。

（加样器垂直于螺旋住，将混合液慢慢加至滤膜中间）。

关盖，标记，8000rpm离心1min。

再将QIAamp螺旋住转移至一个清洁的2ml 收集管内，弃含滤液的收集管。

（8）打开QIAamp螺旋柱加入500ul缓冲液AW1，勿沾湿边缘。

关盖，8000rmp离心1min。

再将QIAamp柱转移至一个清洁的2ml收集管内，弃含滤液的收集管。

（9）打开QIAamp柱加入500ul缓冲液AW2，勿沾湿边缘。

关盖，全速12000rpm离心3min。

（10）标记1.5ml离心管，将QIAamp柱置于一个清洁的1.5mlEP管，弃含滤液的收集管。

打开QIAamp柱加入50ul缓冲液AE。

室温孵育3min。

12000rpm离心1min。

继续下一步实验操作或-20℃保存。

二：目的片段的扩增第一轮PCR反应体系30ul（要有一个阳性对照和一个阴性对照），n个标本10×Buffer 3n uldNTP（200ul/ml） 3n ulprimer 上游引物 0.3n ul下游引物 0.3n ulTaq酶 0.5n ulH2O 20n ul模板DNA 3 ul反应条件94℃ 1min94℃ 20sec55℃ 20sec72℃ 1min20sec反应35个循环注意：配体系时先配总反应体系（混匀），分装后，再加标本（一管一枪头）。

防止污染。

配置体系要在超净台内操作。

细菌基因组DNA快速提取试剂盒（溶液型）GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme（d）SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。

首次使用时，将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中，充分混匀备用，加完Boiled RNase A的Digestion Solution，请于4℃保存。

(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水，分装-20℃冻存。

不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中，以免酶失活。

(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热，便于溶解和取液。

(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer，使Lysozyme全部溶解。

分装后-20℃冻存。

三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。

试剂盒DNA提取详细操作步骤一、试剂盒打开后需要准备的工作1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3个小时使其充分消化。

2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。

③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液④加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70℃预热Elution Buffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入Elution Buffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。

三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化① 将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清② 加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③ 加200ul Binding Buffer，40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10分钟。

2、 DNA提取① 加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。

离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
1. 样品的准备
在进行DNA提取之前，首先需要准备样品。

样品可以是血液、唾液、组织、细胞等，但
是需要根据样品的性质选择合适的提取方法。

一般来说，采用离心柱型DNA提取方法的
样品需要先经过离心、洗涤等处理，去除其中的细胞碎片、蛋白质和其他杂质。

2. DNA的溶解
将样品中的细胞溶解在含有离子表面活性剂的缓冲液中，使DNA从细胞核中溶解出来。

通常情况下，使用蛋白酶K进行细胞溶解，加速DNA的释放。

3. DNA的结合
将DNA溶解液加入离心柱中，离心柱上的硅胶膜能够特异性地结合DNA，将其分离出来。

此步骤是离心柱提取法的关键步骤，也是DNA提取的核心步骤。

4. 杂质的去除
经过上一步骤，DNA和其他细胞组分已经成功地分离出来，接下来需要对离心柱中的杂
质进行去除。

通常会使用洗涤缓冲液进行洗涤，从而将杂质彻底去除。

5. DNA的洗脱
经过洗涤之后，将离心柱插入含有洗脱缓冲液的离心管中，通过离心将DNA洗脱出离心柱。

此时，得到的洗脱液中含有纯度较高的DNA，可以用于后续的分子生物学实验。

6. DNA的保存
将洗脱后的DNA溶液保存在-20℃或更低的温度下，以防止DNA的降解。

此外，也可以
将DNA进行分装，并标记好相关信息以便后续实验使用。

总结来说，离心柱型DNA提取试剂盒的基本流程包括样品的准备、DNA的溶解、DNA的
结合、杂质的去除、DNA的洗脱和DNA的保存。

通过这些步骤，可以快速、高效地从样
品中提取出高质量的DNA，为后续的实验研究提供充分的保障。

细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12DN120150次DN1202100次DN1203200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：细胞核裂解液室温30 ml60 ml120 ml蛋白沉淀液室温10 ml20 ml40 mlDNA溶解液室温10 ml15ml30 mlRNase A(10mg/ml)-20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP022.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

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试剂盒dna提取基本步骤（大纲）一、准备工作1.1准备所需试剂和材料1.2配制缓冲液和溶液1.3检查设备和工作台面二、样本处理2.1样本采集2.2样本破碎2.3样本澄清三、DNA提取3.1结合DNA3.1.1添加结合缓冲液3.1.2加入磁珠3.1.3混合均匀3.2清洗磁珠3.2.1加入清洗缓冲液3.2.2清洗磁珠3.2.3去除废液3.3DNA洗脱3.3.1加入洗脱缓冲液3.3.2洗脱DNA3.3.3收集洗脱液四、DNA纯化和检测4.1纯化DNA4.1.1使用纯化试剂4.1.2纯化DNA4.2DNA浓度和纯度检测4.2.1使用紫外分光光度计4.2.2分析检测结果五、DNA保存5.1保存条件5.1.1选择适当的保存温度5.1.2使用适当的保存缓冲液5.2DNA分装和保存5.2.1分装DNA5.2.2存放于指定位置六、实验注意事项和废弃物处理6.1注意事项6.1.1遵循实验室安全规范6.1.2防止交叉污染6.2废弃物处理6.2.1分类收集废弃物6.2.2按照规定处理废弃物一、准备工作在DNA提取的基本步骤中，准备工作是至关重要的一步，它包括以下几个主要内容：1.1 准备所需试剂和材料：首先，需要准备DNA提取过程中所需的各种试剂和材料。