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⽤Image-pro_plus（IPP）分析免疫组化图⽚⽤Image-pro plus（IPP）分析免疫组化图⽚免疫组化的定量研究的理论上是可⾏的，但是实际应⽤起来影响因素太多。
国外基本上没有对免疫组化定量的，最多只是半定量研究。
建议只⽤免疫组化做定性和定位研究。
但是⽬前关于免疫组化蛋⽩定量分析也⽐较多⽽且使结果更加直观，简单介绍⼀下使⽤⽅法和注意事项，共同学习。
⽤IPP分析免疫组化图⽚过程选取图⽚上具有染料⾊调的区域（AOI，area of interesting）?测量该区域的IOD。
选择并测量有效统计区域的⾯积计算选择区域内的光密度平均值IOD/area（density mean）计算同⼀实验组切⽚各照⽚的平均及标准差。
⽤统计学⽅法分析各实验组的平均density mean之间是否有显著性差异。
拍照注意事项：正确调整显微镜光源为⽇光⾊温的⽩⾊光。
此时是加蓝⾊滤光⽚，灯丝电压为10V左右。
⼀般的显微镜上都会有指⽰的。
此时的镜下视野会感觉明亮得有点刺眼。
不能通过调整光圈的⽅法减低亮度，这会影响到图象的清晰度。
光圈与聚光镜要按照柯勒⽅法调整以保证照⽚的清晰.不能加过⼤的灰度镜减低亮度。
⽤25%的灰度滤光⽚还⾏。
6%的灰度滤光⽚会导致⾊彩失真。
如果照明光源不⽩，有偏⾊，将直接影响到照⽚⾊彩，从⽽使得测量结果不准确。
为保证显微镜光源的稳定⼀致，所有照⽚应该⼀次拍摄完成。
不能分数次拍摄。
若能给显微镜加上稳压电源就更好了。
这能保证显微镜光源亮度的稳定。
要把相机曝光时间控制到使视野中空⽩的地⽅呈现纯亮的⽩⾊。
拍摄出的照⽚上，没有组织的空⽩处的背景灰度值应达到230左右可以使⽤图象分析软件测量⼀下空⽩处的背景灰度值。
低于230的背景灰度值很容易产⽣⾊彩的偏离，会影响到图像分析数值的偏差。
把空⽩灰度值调到230相当于在分光光度计上调节100%透射。
免疫组化阳性细胞计数⽅法：image pro plus 6.0软件1.打开图⽚，点击count and measure objects 图标2.点击measure3.点击select measurement4.选中area。
