免疫组化ICH

病理报告免疫组化引言病理报告是医疗领域中一份非常重要的文档，它对于疾病的确诊和治疗方案的制定起着至关重要的作用。

另外，免疫组化在病理学中也有着重要的地位，它通过检测组织和细胞中的特定蛋白质的表达情况，帮助医生进一步了解病变的类型和性质。

本文将对病理报告免疫组化进行介绍和解读。

免疫组化的定义免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种常规病理学技术，它利用特异性抗体与病理组织中的抗原发生特异性反应，通过光学显微镜观察和分析，从而确定该病理组织中特定蛋白质的表达情况。

免疫组化广泛应用于临床病理诊断中，可以帮助诊断肿瘤、炎症和自身免疫等疾病，对于临床诊断和预后评估有重要意义。

免疫组化的步骤及原理免疫组化的主要步骤包括取材、固定、包埋和切片等传统病理学处理步骤，以及抗体处理、染色和显微镜观察等免疫组化特有的步骤。

本节将介绍免疫组化的主要步骤及其原理。

抗原修复抗原修复也称为“脱脂获得（unmasking）”步骤，其目的是使因固定而产生的蛋白质交联、脱水和去脂化的病理组织再次恢复其原有的形态和表达情况，以方便抗体对抗原的特异性结合。

一般常用的抗原修复方法包括热诱导抗原修复、酶诱导抗原修复和化学诱导抗原修复等。

抗体处理抗体处理是免疫组化中最重要的一步，其目的是将特异性抗体加入到病理组织切片中，与目标抗原特异性结合。

抗体处理通常分为一抗处理和二抗处理两个步骤。

一抗处理是指将特异性一抗与病理组织切片进行孵育反应，以实现一抗与目标抗原结合；二抗处理是指将与一抗来源介源的二抗标记物（一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等）与处于抗原抗体复合物上的抗原结合，从而实现一抗与二抗间二次反应的串联。

染色与显微镜观察在经过一抗处理和二抗处理之后，需要进行染色以可视化抗原-抗体复合物，进而观察和分析蛋白质的表达情况。

常用的染色方法包括免疫组化酶标法（Immunohistochemistry-Enzyme Labeling Method, IHC-EL）和免疫组化荧光法（Immunohistochemistry-Fluorescence Method, IHC-FL）等。

微卫星稳定免疫组化诊断标准人类错配修复（ＭＭＲ）基因除了检验和校正复制期间发生在微卫星样重复ＤＮＡ序列上小的插入和丢失之外，还防止解旋的ＤＮＡ序列重新结合。

ＭＭＲ基因突变破坏了ＭＭＲ蛋白的功能，引起重复ＤＮＡ序列的产生及ＤＮＡ修复错误，从而导致患者ＤＮＡ出现微卫星不稳定（ＭＳＩ）。

Ｌｙｎｃｈ综合征是一种由错配修复（ＭＭＲ）基因种系突变引起的常染色体显性遗传病。

ＭＳＩ检测具有重要临床意义：１、诊断Ｌｙｎｃｈ综合征：ＭＳＩ是Ｌｙｎｃｈ综合征的重要生物学标记，当ＭＳＩ－Ｈ被证实，该诊断即可成立；２、判断预后及治疗效果：ＭＳＩ－Ｈ的结直肠癌患者对化疗药物５－氟尿嘧啶的疗效不佳；３、鉴别遗传性胚系来源与散发性来源的ＭＳＩ结直肠癌：散发性ＭＳＩ－Ｈ结直肠癌的病因通常是ｈＭＬＨ１基因启动子甲基化，只有小部分为ＢＲＡＦ基因突变致ＭＭＲ基因沉默而免疫组化阴性，并出现ＭＳＩ。

若肿瘤ＭＭＲ基因启动子甲基化或ＢＲＡＦ基因突变阳性，说明为散发性癌；４、筛查：Ｂｅｔｈｅｓｄａ修订指南建议对小于５０岁的患者常规进行ＭＳＩ检测。

根据Ｂｅｔｈｅｓｄａ修订指南，有下列指征的患者需做ＭＳＩ检测：１、患者年龄小于５０岁；２、肿瘤位于右半结肠；３、易发生肠内或肠外其他器官的多发性肿瘤；４、术后易再发其他原发性恶性肿瘤；５、肿瘤有淋巴细胞浸润；６、多分泌黏蛋白或有印戒细胞；７、浸润性生长模式。

ＭＳＩ检测目前有以下两种检测方法：１、ＰＣＲ技术检测方法对石蜡切片进行人工显微切割提取ＤＮＡ，以一些微卫星点为标记指导合成引物进行ＰＣＲ，通过凝胶电泳分析得出ＭＳＩ谱，进行比较分析。

最常用的２个Ｐｒｏｍｅｇａ分析系统由５个单核苷酸标记点（ＢＡＴ－２５、－２６，ＭＯＮＯ－２７，ＮＲ－２１、－２４）构成；而美国国家癌症研究所（ＮＣＩ）参考系统由３个双核苷酸（Ｄ２Ｓ１２３、Ｄ５Ｓ３４６和Ｄ１７Ｓ２５０）和２个单核苷酸（ＢＡＴ－２５和－２６）构成。

当胚系谱中微卫星的长度改变，ＭＳＩ的诊断即可成立。

免疫组化分子病理学检查免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）是一种利用抗体与组织切片中的特定抗原相互作用的技术，用于检测和定位组织中特定蛋白质的存在和表达水平。

免疫组化技术在分子病理学领域有着重要的应用，可以为疾病的诊断和治疗提供有力的依据。

免疫组化技术的原理是利用抗体与组织切片中的目标抗原发生特异性反应，形成抗原-抗体复合物，然后通过染色反应使抗原-抗体复合物显色，以实现对目标抗原的检测和定位。

在免疫组化过程中，首先需要选择与目标抗原特异性结合的一对抗体，其中一种抗体与标记物结合，如酶标记的二抗或荧光标记的二抗，以便使目标抗原的位置可见。

常用的标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

然后，通过特定的染色反应，使标记物显色或发射荧光，从而可视化目标抗原的位置。

免疫组化技术在肿瘤病理学中有着广泛的应用。

通过检测肿瘤细胞中特定蛋白质的表达水平，可以帮助确定肿瘤的类型、分级和预后，指导临床治疗的选择。

例如，通过检测乳腺癌组织中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的表达情况，可以判断患者是否适合内分泌治疗。

另外，通过检测HER2蛋白的表达水平，可以指导HER2阳性乳腺癌患者是否适合接受靶向治疗。

免疫组化技术还可以检测肿瘤标志物如CEA、CA125、PSA等，用于辅助肿瘤的早期诊断和疾病监测。

除了肿瘤病理学外，免疫组化技术在其他疾病的诊断和研究中也有重要应用。

例如，在感染病的诊断中，可以通过检测病原微生物的抗原在组织中的表达情况，快速准确地确定感染的类型和范围，从而指导临床治疗。

在免疫性疾病的研究中，可以通过检测自身抗体在组织中的沉积情况，了解疾病的发病机制和病情进展。

免疫组化技术的优势在于其高度特异性和灵敏性。

通过选择特异性的抗体，可以准确地检测目标抗原的存在和表达水平。

与传统的组织学染色相比，免疫组化技术可以提供更为细致的信息，如亚细胞定位、蛋白质的活性状态等。

免疫组化的原理及应用原理免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过特异性抗体与相应抗原的特异性结合，利用染色反应显示出有关蛋白质在组织或细胞中的位置与数量的技术。

简单来说，免疫组化是通过酶标法或荧光法等方法，利用特异性抗体标记目标蛋白质，从而在组织或细胞中检测和定位目标蛋白质的方法。

免疫组化的原理主要包括以下几个步骤：1.抗原修复：免疫组化一般需要在标本切片前对组织进行抗原修复处理，以恢复和增强抗原的免疫活性。

2.阻断非特异性结合：在免疫组化过程中，为了防止非特异性结合的出现，需要使用非特异性抗体或蛋白质进行阻断。

3.抗体结合：将特异性抗体与标本中的目标抗原进行结合，可采用直接法或间接法。

4.信号显示：对于直接法，特异性抗体上已标记有荧光染料或酶标标记，可直接显示信号；对于间接法，再添加与特异性抗体免疫结合的二抗，二抗上标记有荧光染料或酶标标记，用于显示信号。

5.结果观察与分析：利用显微镜观察标本中信号的形态、分布和强度，进行结果判读和分析。

应用免疫组化在生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域都有广泛的应用。

以下列举一些主要的应用：1.细胞定位：通过使用特异性抗体和荧光染料标记目标蛋白质，可以在细胞水平上观察和定位目标蛋白质的分布和表达情况。

2.组织检测：通过在组织切片上应用免疫组化技术，可以检测和定位特定蛋白质在组织中的表达情况，并用于研究组织的结构和功能。

3.癌症诊断：免疫组化在肿瘤诊断中有重要的应用价值。

通过检测肿瘤标志物的表达情况，可以帮助医生判断肿瘤类型、分级和预后，并指导相应的治疗方案。

4.药物研发：免疫组化可以用于评估新药对蛋白质表达的影响，了解新药的作用机制，以及筛选适合的治疗靶点。

5.神经科学研究：免疫组化在神经科学领域的研究中也有广泛的应用。

通过免疫组化技术，可以观察和定位神经元、神经递质和突触相关蛋白质，帮助研究神经系统的结构和功能。

总的来说，免疫组化技术广泛应用于生命科学研究和临床实践中，为我们研究细胞和组织的结构与功能、研究疾病机制、辅助临床诊断等提供了有力的工具和方法。

免疫组化相关步骤免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种基于抗原抗体反应的方法，用于检测组织或细胞中其中一种特定蛋白质的表达。

下面将详细介绍免疫组化的相关步骤。

免疫组化的步骤包括样品制备、抗原修复、阻断、一抗反应、二抗反应和染色，具体如下：1.样品制备：首先，需要获取组织标本。

通过活体组织切片、细胞涂片或冷冻切片等方法制备标本。

制备好的标本需要保持完整和有代表性，通常要求切片不超过5μm厚。

2.抗原修复：组织切片在固定过程中会损害抗原的完整性，因此需要进行抗原修复，以恢复抗原的表达。

常用的抗原修复方法包括热解修复（如加热、压力煮等）和酶解修复（如胰蛋白酶消化等）。

3.阻断：组织切片会与非特异抗体结合，影响免疫反应的特异性，因此需要进行阻断。

常用的阻断方法包括用牛血清白蛋白（BSA）或奶粉进行阻断，以防止非特异性背景信号的产生。

4.一抗反应：将含有特异性抗体的试剂加到组织切片上，使其与目标抗原结合。

特异性抗体可针对不同的抗原进行选择，如研究一些蛋白质的表达，可以选择该蛋白的特异性抗体。

5.二抗反应：一抗与抗原结合后，需要加入与该一抗来自不同物种的二抗。

二抗通常是免疫出来的，其与一抗结合后，可形成复合物，具有荧光或酶标记。

6.染色：最后，通过染色方法来显示抗原的表达。

染色可以是荧光染色或酶标染色。

荧光染色利用特定颜料对特异性标记的抗体进行荧光标记，并在荧光显微镜下观察。

酶标染色则使用酶标记的二抗，再加入相应的底物进行染色。

除了以上的基本步骤1.控制组：为了验证实验是否准确，通常需要设置阴性和阳性对照组。

阴性对照组通常是替代一抗的种属、浓度和机制抗体；阳性对照组是已知具有目标蛋白表达的组织切片。

2.负载密度和反应时间：一抗的负载密度和反应时间需要优化，以确保对目标蛋白的增强标识，同时最大限度地减少背景信号。

3.显微镜观察和图像分析：观察染色结果时，要选择合适的显微镜，以获得清晰的图像。

免疫组化的基本步骤免疫组化（immunohistochemistry, IHC）是一种常用的实验技术，用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原。

它是一种特异且可靠的方法，通过结合抗体与抗原的特异性相互作用，利用显色或荧光信号来检测特定抗原的存在和定位。

以下是免疫组化的基本步骤。

1.组织样本处理:首先，需要准备适当的组织样本。

组织可以是固定的、冰冻的或者石蜡包埋的。

固定的样本通常使用福尔马林进行固定，并应在切片前进行脱水、透明和石蜡浸渍等处理。

2.抗原恢复：组织样本中的一些抗原可能因为固定和处理过程而被破坏或掩埋。

为了恢复抗原的免疫原性，需要进行抗原恢复步骤。

这一步骤的目的是去除或解开横断的蛋白质交联，以使抗体能够更容易进入细胞或组织内部。

抗原恢复可以使用高温、酶解或化学溶解等方法进行。

3.抗体处理：接下来，需要选择适当的一抗（primary antibody）对特定的抗原进行标记。

一抗通常是由动物免疫系统产生的，可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

抗体的选择是非常重要的，需要确定其与特定抗原的特异性和亲和性。

一次性需要把一抗稀释到合适的浓度，并与特定的缓冲液混合。

4.反应：抗体与抗原的结合需要一定的时间来达到最佳的结果。

实验者需要将一抗混合物加到组织样本上，并进行足够的反应时间。

反应时间可以根据实验条件或需求进行调整，通常为30分钟至几小时。

5.洗涤：反应完毕后，需要对样本进行洗涤以去除未结合的一抗、杂质和非特异性结合物。

洗涤步骤通常使用缓冲液，可重复进行多次，以确保清除掉所有不必要的物质。

6.二抗处理：一抗与目标抗原结合后，需要加入相应的二抗（secondary antibody）对一抗进行检测。

二抗可以与一抗特异性结合，并携带染色剂或荧光标记。

常见的二抗有抗小鼠IgG的免疫球蛋白和抗兔IgG的免疫球蛋白。

二抗也需要适当的稀释并与缓冲液混合。

7.反应：类似于一抗反应，二抗也需要一定时间来与一抗结合和形成复合物。

鼠脑组织ICH实验操作步骤1. 所用试剂及耗材1)一抗：Anti-Tyrosine Hydroxylase, clone LNC1. Millipore. Cat. # MAB318.Lot # NG1899912.2)二抗：Envision TM Detection Kit. Gene Tech (Shanghai) Company Limited.Code No: GK500705/10.3)一抗稀释液：免疫染色一抗稀释液。

碧云天生物技术研究所。

Code No：P0103。

4)PBS：PBS缓冲液(PH 7.2-7.6)。

武汉博士德生物工程有限公司。

Code No：AR00305)枸橼酸盐缓冲液：PH 6.0。

武汉博士德生物工程有限公司。

Code No：AR00246)H2O2：3%(PBS配置）7)病理载玻片、病理盖玻片、免疫组化湿盒、免疫组化笔、切片盒、晾片板。

2. 免疫组化1)二甲苯脱蜡透明：每次10 min，连续2次。

2)梯度乙醇洗脱：100%浓度洗脱5 min，100%、95%、95%浓度洗脱2 min，然后用去离子水冲洗。

3)抗原修复：用去离子水冲洗切片，然后将组织放入枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）中，使用微波炉加热，先高火5 min，然后中低火10 min。

修复后自然冷却到室温。

4)PBS洗片：修复后的切片使用PBS冲洗，每次3 min，连续3次。

5)3% H2O2（PBS配置）封闭：避光孵育10 min，去离子水冲洗。

6)PBS洗片：每次3 min，连续3次。

7)封闭：用滤纸擦干切片组织周围的水，用免疫组化笔画圈。

然后滴加10 %血清（PBS配置）封闭非特异性作用位点，每张载玻片加200 μl到300 μl封闭液，室温孵育1 h。

8)一抗（1:1000）孵育：封闭后的切片，用移液器吸掉封闭液，然后每张切片滴加200 μl的一抗（抗体使用一抗稀释液稀释到所需浓度），湿盒中室温孵育1 h。

免疫组化原理和步骤免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种广泛应用于组织学和细胞学研究中的实验方法，主要用于检测和定位蛋白质在组织或细胞中的分布和表达水平。

它结合了免疫学原理和组织学技术，通过使用特异性的抗体和染色剂来实现对目标蛋白质的检测和可视化。

免疫组化的原理主要是利用抗体的高度特异性与抗原相结合，然后使用染色技术来显示抗原的位置。

该技术的基本原理可分为抗原-抗体反应、信号放大和信号显示三个步骤。

第一步：抗原-抗体反应免疫组化的第一步是选择合适的抗体，通过与目标蛋白质的特异性结合来形成抗原-抗体复合物。

抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

单克隆抗体具有高度特异性，只能结合到特定的抗原上。

多克隆抗体具有高度敏感性，可以结合多个位点，从而实现信号放大。

通常，为了提高抗原的可检测性，需要对组织样本进行抗原修复处理。

这可以通过热处理（如蒸汽加热、微波加热）或酶切处理来实现。

修复可以解除组织样本中抗原与蛋白质结构之间的交联，增加抗体的渗透性和可结合性。

当抗原-抗体反应发生时，可通过一系列化学反应来形成抗原-抗体复合物。

例如，可以使用二抗来与抗原-抗体复合物结合，然后使用辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）标记的二抗来与二抗结合。

该反应可形成稳定的抗体-酶复合物。

第二步：信号放大由于抗原-抗体复合物的信号很弱，通常需要进行信号放大以便更好地检测到目标蛋白质。

放大信号的方法有很多种，其中最常用的是酶免疫标记联合酶放大技术。

酶免疫标记是通过将抗体与酶结合，使其能够催化特定的化学反应来产生荧光、色素或光学信号。

常用的酶免疫标记包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。

这些酶能够催化荧光素、二苯基胺、硝基蓝等底物的氧化还原反应，从而产生可视化的信号。

酶放大技术常用的方法包括：免疫酶化学法（如DAB法）、免疫荧光法和免疫酶学荧光混合法等。

这些方法可通过将底物转化为可见的色素或荧光信号来标记抗原-抗体复合物，从而实现目标蛋白质的检测和定位。

看懂常见免疫组化指标在当前精准医疗的时代，免疫组化（IHC）在肿瘤的诊断中具有极其重要的意义。

在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。

利用好肿瘤IHC，将使肿瘤的诊断与治疗轻松许多。

近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，许多疑难肿瘤得到了明确诊断。

尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断中的准确率可达50%-75%。

免疫组化（IHC）是免疫学与组织化学两种技术的结合，基本原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色以达到标记细胞的某种抗原物质的定性/定位检测技术。

一、上皮源性肿瘤标记细胞角蛋白（CK）：CK7/CK18：标记腺上皮，通常在腺癌中表达。

CK14：标记肌上皮，用于鉴别肿瘤基底细胞上皮和肌上皮。

CK5/6：鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。

CK19：分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，胆管上皮阳性。

CK20：标记胃肠上皮移行上皮Merkel细胞，用于胃肠道腺癌。

上皮膜抗原（EMA）：低/未分化上皮高表达；常存在于间变大细胞/恶性横纹肌样瘤。

P504：前列腺癌的敏感性为97％，特异性为100％。

HMB45：存在于恶性黑色素瘤。

二、间叶源性肿瘤标记波纹蛋白（Vimentin, Vim）：细胞中间死蛋白抗体，多数软组织肿瘤均可表达，但肌纤维较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应，作为间叶与上皮源性鉴别一线抗体。

结蛋白（Desmin, Des）：存在于平滑肌/横纹肌。

肌动蛋白（Actin）：平滑肌/血管内皮/肌上皮。

肌球蛋白（Myotlobin）/肌红蛋白（myosin）：横纹肌。

CD34：血管内皮，通常用于血管源性肿瘤的诊断。

CD117：诊断胃肠间质瘤。

三、神经细胞/神经内分泌肿瘤标记神经内分泌肿瘤标记：Syn 突触素/NSE/嗜铬蛋白颗粒A（CgA）。

免疫组化标准免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，用于检测组织样本中特定蛋白质的表达水平和定位情况。

它结合了免疫学和组织病理学的原理和技术，通过特异性抗体对目标蛋白质进行识别并标记，使其在组织切片中可视化。

在进行免疫组化实验时，需要使用一系列试剂和设备。

以下是常见的免疫组化标准及相关参考内容：1. 标本制备：- 收集组织样本并将其固定在适当的组织固定剂中，如10%中性缓冲福尔马林溶液，并在适当时间内进行固定。

- 将固定的组织样本加工成薄切片，通常为4-5微米厚。

- 将切片贴附在玻片上，通常使用聚-L-赖氨酸涂层的玻片。

2. 抗原恢复：- 如果抗原已被固定或掩盖，需要进行抗原恢复步骤，以增强蛋白质的可检测性。

- 常用的抗原恢复方法包括热诱导抗原恢复、酶诱导抗原恢复和化学诱导抗原恢复。

3. 抗体选择：- 选择合适的一抗体，具有高度特异性和亲和力。

- 需要对一抗体进行充分的优化实验，包括适当的浓度和反应时间。

4. 标记物选择：- 常用的标记物有酶标记、荧光标记和金标记等。

- 选择合适的标记物需要考虑可视化要求、信号持久性和试剂耐久性等因素。

5. 染色步骤：- 彩色染色法：通常使用二抗（与一抗特异结合）来增强免疫反应，并使用染色剂如二亚甲基蓝（DAB）或新洋红等来产生可视化信号。

- 荧光染色法：使用荧光标记的二抗，通过荧光显微镜观察标志物的定位。

6. 阳性和阴性对照：- 需要同时进行阳性和阴性对照实验，以验证免疫反应的特异性和可重复性。

- 阳性对照通常是已知表达目标蛋白的组织样本，而阴性对照则是将一抗体或二抗体替换为非特异的抗体。

7. 图像分析：- 使用合适的显微镜观察和记录免疫组化染色结果。

- 可使用计算机软件进行定量和定位分析。

8. 数据分析和结果呈现：- 对结果进行统计学和图像分析。

- 将结果以数据表格、图形和图片的形式呈现。

以上是免疫组化标准及相关参考内容，这些步骤和指南可用于免疫组化实验的设计和执行，以确保获得准确、可靠和重复性的结果。