绿原酸含量测定(紫外分光光度法)

研究小儿清热利肺口服液中总绿原酸含量的测定方法【分类号】：r286【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量。

方法采用diamonsiltm c18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，乙腈体积分数0.4%h3po4水溶液（体积比10∶90）为流动相，流速为1 ml·min-1，检测波长为327 nm，柱温为30 ℃。

结果绿原酸在质量浓度为16.28～81.4 μg范围内线性关系良好（r=0.999 6，n=5），样品平均回收率为100.31%，rsd为1.45%。

结论本法简便、快速、准确，适用于小儿清热利肺口服液的质量控制。

【关键词】小儿清热利肺口服液；高效液相色谱法；绿原酸；含量测定小儿清热利肺口服液由银翘散和麻杏石甘汤2个古方合方化裁而成，处方由金银花、连翘、牛蒡子、麻黄、等11味中药组成，主治外感风热邪在肺卫或卫气同病之风热咳嗽，用于发热、咳嗽，咯痰、流涕或鼻塞、咽痛、口渴、舌红黄等证候的小儿急性支气管炎。

其中绿原酸为金银花的主要活性成分，在牛蒡子中含量亦较高。

它是一种具有广泛生理和药理活性的物质，具有利胆、抗菌、降压、增加白细胞及兴奋中枢神经系统、抗肿瘤、降脂、清除自由基等多种药理作用。

小儿清热利肺口服液现有质量标准采用紫外分光光度法测定其盐酸麻黄碱含量，并未以绿原酸为含量测定指标。

因此，本实验建立高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量，旨在为完善小儿清热利肺口服液的质量标准提供基础。

1 仪器与试药lc20a高效液相色谱仪（日本岛津），spd紫外检测器，二元高压梯度泵；bp211d电子分析天平（satorius）；uv2450可见紫外分光光度仪（日本岛津）； hh6恒温水浴锅（宏华新佳）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753200413）；小儿清热利肺口服液（广州潘高寿药业股份有限公司提供，批号：e06002、f03002b、f10001b、i11002b）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

返魂草胶囊中绿原酸的含量测定周世友【摘要】目的:完善返魂草胶囊的质量标准,控制药品质量.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定返魂草胶囊中绿原酸的含量.结果:绿原酸在0.040 0～0.320 2 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.01%,RSD为0.93%.结论:本方法简便、快捷、灵敏、准确、重现性好,可作为该制剂质量控制的方法.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2013(030)003【总页数】3页(P355-357)【关键词】返魂草胶囊;绿原酸;高效液相色谱法【作者】周世友【作者单位】广西右江民族医学院附属医院药剂科,百色,533000【正文语种】中文【中图分类】R927.2返魂草胶囊是由《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂）第4册所载返魂草冲剂改剂而来。

由冲剂改剂为胶囊剂，药物剂型外观整洁大方，服用方便，掩盖了药物的不良气味，服用后能迅速崩解释放药物而发挥疗效。

返魂草胶囊由返魂草单味药组成。

具有清热祛痰，镇咳平喘之功效。

用于肺内感染，慢性支气管炎，喘息性支气管炎，急性呼吸道感染等。

在返魂草冲剂的质量标准中无含量测定项，为了完善返魂草胶囊的质量标准和控制药品质量，新增以绿原酸为测定指标的含量测定项。

返魂草主要活性成分为酚酸类化合物，包括绿原酸、咖啡酸、对-羟基苯乙酸等。

而其中的绿原酸［1］（Cyclohexanecar boxylic acid，C16 H 18 O9）具有较强的抗病毒作用，是制剂发挥疗效的主活性成分，选择绿原酸作为含量测定指标，可反映和控制本制剂的质量。

本文参照《中华人民共和国药典》2010年版一部金银花下绿原酸的含量测定方法［2］和文献［3～5］，采用高效液相色谱法对本品中绿原酸的含量进行测定。

1 仪器与试药1.1 仪器：高效液相色谱仪：SPD-10 AVP紫外检测器、LC-10 AT高压泵（日本岛津）紫外可见分光光度计（UV-2550日本岛津），电子天平（BP211D赛多利斯）。

杜仲叶中绿原酸的测定方法比较张凤云1)　毛富春2)　张康健3)　张院民1)(1)西北林学院中心实验室,712100,陕西杨陵;2)基础课部;3)园林系;第一作者:女,39岁,助理研究员)摘　要　通过不同的提取方法和分离方法,对杜仲叶中绿原酸含量的测定结果进行了比较。

认为在常规实验室中,用乙醇提取—纸层析分离—紫外分光光度法测定杜仲叶、杜仲皮或杜仲产品中绿原酸含量的方法简便易行,结果可靠。

关键词　杜仲叶;绿原酸;提取;分离分类号　O 657.32,S 713杜仲皮在我国作为名贵滋补药材已有悠久的历史,但发现杜仲叶与皮具有基本相同的化学成分与药理作用并在国内外取得共识,只不过是近20年内的事。

绿原酸是杜仲有效药用成分之一,具有较广泛的抗菌、利胆、止血及增高白血球数量的作用。

因此,杜仲叶中绿原酸的提取、分离与测定问题,已不单为化学分析与药检工作者所关心,也为杜仲生产厂家和杜仲优树选育工作者所关注。

目前分析杜仲叶中绿原酸含量时的提取方法主要有甲醇提取法,氯仿—乙醇提取法,乙醇提取法,水提取法等〔1〕。

绿原酸的分析测定方法有毛细管电泳、高效液相色谱、可见分光光度法和紫外分光光度法等〔2～6〕。

对于一般常规性实验室,由于不具备大型精密仪器,用分光光度法测定绿原酸含量时还需对提取液进行必要的层析分离。

本文用紫外分光光度法的测定结果对两种提取方法和两种分离方法的效果进行了比较,为基层实验室提供了简易省时,结果可靠的绿原酸研究方法。

1　材料与方法1.1　材料来源杜仲树叶　采自西北林学院校园内。

杜仲优树为5年生,有略41号,湘11号,灌3号和黔8号。

其它优树为2年生,5年生和20年生。

杜仲茶叶　采自校内,2年生幼树的嫩叶,经杀青等处理。

杜仲产品　有杜仲粉、杜仲茶、杜仲咖啡、杜仲口服液等,均购自市场。

1.2　仪器和试剂751G 型分光光度计,UV —1型三用紫外分析仪,超声波发生器。

绿原酸(光谱纯,德国产),硅胶G (薄层层析用,青岛产),层析纸(上海产),其它试剂均为分析纯。

绿原酸提取‎与测定绿原酸（chlor‎ogeni‎ c acid）是一种从双‎子叶植物（如忍冬叶、咖啡豆、向日葵）的叶和果实‎分离得到的‎酚类,也是许多中‎草药（如杜仲、金银花、茵陈等）及中药复方‎制剂抗菌消‎炎、清热解毒的‎主要活性成‎分，目前已成为‎中草药制剂‎质量控制的‎主要指标之‎一。

绿原酸是植‎物体在有氧‎呼吸过程中‎经莽草酸途‎径产生的一‎种苯丙素类‎化合物。

它是一种由‎咖啡酸(caffe‎ic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quini‎ c acid,即1-羟基六氢没‎食子酸)缩合而成的‎缩酚酸,异名咖啡鞣‎酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼‎酸(3-O-caffe‎oylqu‎inic acid),分子式为C‎16H18‎O9,分子量:345.30，半水合物为‎针状晶体，110℃时变为无水‎化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸‎乙酯，常温下呈淡‎黄色固体。

绿原酸在植‎物中分布广‎泛,从高等双子‎叶植物到蕨‎类植物均有‎报道，但含量较高‎的植物不多‎，主要存在于‎忍冬科忍冬‎属(Lonic‎era)、菊科蒿属(Artem‎isia)植物中，其中包括杜‎仲、金银花、向日葵、咖啡、可可树。

植物的不同‎品种、发育阶段、同一植株的‎不同部位、存放时间、生长环境等‎均能影响植‎物中绿原酸‎的含量。

以杜仲为例‎：叶中绿原酸‎的含量高于‎皮中含量数‎倍之多；用不同干燥‎方法对绿原‎酸含量的影‎响研究中,用阴干、晒干、直接烘干所‎测绿原酸含‎量分别是2‎.21%、2.17%和2.24%;鲜叶绿色含‎绿原酸3.52%,放臵1年后‎,叶色棕绿,绿原酸含量‎为2.47%。

由于绿原酸‎是极性较强‎的有机酸，易溶于醇、水，难溶于氯仿‎、乙醚,因此绿原酸‎的提取方法‎较多，有醇（甲醇、乙醇）溶法、水提醇沉、醇提铅沉、石灰乳沉淀‎法及聚酰胺‎柱层析法等‎。

下面介绍几‎种提取方法‎。

醇溶法：先用氯仿进‎行连续提取‎至流出液呈‎无色;再改用95‎%工业乙醇提‎取,提尽绿原酸‎;将所得乙醇‎提取液减压‎浓缩成浸膏‎,与干净细沙‎拌合后,用热水提取‎数次,使绿原酸转‎溶于水中,弃去残渣;所得水溶液‎用乙醚萃取‎,进一步除去‎脂溶性杂质‎;向脱脂后的‎水溶液中加‎入饱和无机‎盐溶液,至沉淀完全‎,并稍有过量‎为止。

绿原酸标准曲线的绘制一、实验目的1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；二、原理2.1 绿原酸简介绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。

2.2 高效液相色谱仪的工作原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

三、试剂与仪器3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。

四、实验步骤4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。

精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。

紫外光谱法测定未知样液中绿原酸浓度专业班级：制药一班姓名：黄春宇课程名称：仪器分析摘要：目的建立紫外光谱法测定绿原酸含量的方法。

该方法操作简单、准确，可用于测定绿原酸浓度。

关键词：绿原酸样液；绿原酸；紫外光谱法三叶草中富含绿原酸及其异构体（异绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸等），它们的理化性质与药理作用相似。

本品工艺提取方法能够将该类有机酸有效地提取出来，因此对绿原酸进行质量控制研究是非常必要的。

除了绿原酸外，其余成分在３５２ｎｍ以上紫外吸收几乎没有。

，采用紫外分光光度法可不经分离直接测定绿原酸的浓度。

１仪器与试药紫外可见分光光度计。

电子天平；标准绿原酸对照品，蒸馏水。

1CM比色皿；乙酸乙酯；乙醇；２方法与结果２．１紫外扫描光谱及波长的选择称取标准绿原酸对照品，用蒸馏水溶解，稀释成适宜浓度，记样液A、取蒸馏水稀释至刻度记样液B，放入1CM比色皿中，在２００～４００ｎｍ范围内扫描。

通过紫外分光光度法测定绿原酸的谱图２．２标准曲线的绘制精密称取于１０５℃干燥至恒重的绿原酸对照品２３．３５ｍｇ于１００ｍｌ容量瓶中，加入蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，使之成为绿原酸标准储备液。

分别精密吸取该储备液２．０，４．０，６．０，８．０，１０．０ｍｌ分别置于１００ｍｌ容量瓶中，加入蒸馏水定容，制成浓度（C ）为４．６７～２３．３５／ｍｌ的系列工作液，以蒸馏水为空白，分别在３５７．９ｎｍ波长处测定其紫外光谱的吸光度与浓度C 关系。

呈良好线性关系。

得到线性相关方程。

2.3 未知样液的配制用浓度70％乙醇和水做预试验确定提取溶剂，然后通过正交试验考察三叶草中绿原酸提取工艺的最佳条件。

在纯化试验中选用乙酸乙酯萃取法和聚酰胺层析法，；吸附有绿原酸的聚酰胺以浓度30％的乙醇得到的绿原酸纯度为33．2％。

记未知绿原酸样液C，2.4 未知样液中绿原酸浓度的测定用1cm吸收池取未知样液C，以蒸馏水为空白对照，测定其吸光度，带入相关的线性方程测得未知样液中绿原酸的浓度结论紫外分光光度法选择性高、反应灵敏，准确度和精密度良好，试剂稳定且无毒性，操作简便，易于推广应用，是测定未知样液浓度的一个较有实用价值的分光光度法。

紫外光度法测定金银黄中绿原酸含量的改进
何报作
【期刊名称】《广西中医药》
【年(卷),期】1992(015)005
【总页数】3页(P45-47)
【作者】何报作
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R282.710.3
【相关文献】
1.近红外光谱法测定银黄混合液终点黄芩苷和绿原酸含量 [J], 陈艳;刘顺国;肖雪;刘明颖;高建胜;龙晓英;
2.HPLC测定银黄颗粒中绿原酸含量及不确定度分析 [J], 韦国兵;胡奇军;张秀秀;
3.HPLC测定银黄颗粒中绿原酸含量及不确定度分析 [J], 韦国兵;胡奇军;张秀秀
4.高效液相色谱/质谱联用法测定银黄颗粒中绿原酸含量 [J], 丁芳林;彭书练
5.二阶导数光谱法测定银黄清口服液中总绿原酸含量 [J], 周波林;冯国栋
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金银花中绿原酸的分离与测定新方法蔡霄英刘永乐（长沙电力学院食品生物工程系长沙〃410015）摘要：对湖南益阳县黄蜂山所采金银花进行了提取、分离及组分鉴定，解决了绿原酸易分解的问题，得到纯度较高的绿原酸。

关键词：金银花；绿原酸；分解中图分类号：TS201.4 文献标识码：A 文章编号：1005-9989（2003）05-0104-03Separation and identify of the chlorogenicacid in Lonicera japonica thunbCAI Xiao-ying LIU Yong-le(Changsha University of Electric Power,Changsha,410015)Abstract: Carry thr ough separ ation, pur ification and identify. Chlorogenic acid w as isolated from lonicer a japonica thunb. It is collected from vespidhill in yiyang country, hunan prov ince.The problems of oxygenation and disassembly of chlorogenic acid is solved.Key words: lonicera japonica thunb; chlorogenic acid; disassembly0 前言金银花又名忍冬花、银花、双花、茶叶花等，为忍冬科植物忍冬(lonicera japonica tumb) 的花蕾。

金银花中含有绿原酸、异绿原酸、肌醇、黄酮、皂素及多酚类物质等，具有抗菌、抗病毒、消除体内有毒物质、降血压、改善机体免疫功能等多种保健作用。

我国对金银花这一清热解毒中药的研究处于世界领先地位。

我国作为金银花产地，从原料着手，在金银花炮制、有效成分分析、含量测定等方面都有了一定研究。

下,随着球磨时间的增加,其剪切应力显著下降。

用幂方程τ=k γm (其中k 为稠度系数;m 为流动特征指数对曲线进行拟合,结果如表2所示。

由拟合结果可知,在不同温度下,相关系数R 2在0.9850~0.9993之间,这说明方程与曲线有较好的相关性。

同一样品的稠度系数k 随着温度的升高而减小,说明温度升高可以减小体系的稠度,增强淀粉糊的流动性。

在同一温度下随着球磨时间的增加,稠度系数k 显著下降,流动指数m 则是呈现增加的趋势,说明球磨后的绿豆淀粉更趋近于牛顿流体。

3结论上述实验结果表明,机械球磨方法可以有效地将绿豆淀粉非晶化,球磨一定时间后淀粉颗粒的偏光十字消失,X -射线衍射曲线的尖峰衍射特征逐渐减弱,绿豆淀粉颗粒的结晶结构受到严重破坏。

球磨处理后绿豆淀粉糊的流变特性在不同浓度和温度下发生了变化,绿豆淀粉糊随着球磨时间的延长稠度系数k 不断减小,而流动特征指数m 则不断增大,说明球磨处理后绿豆淀粉糊趋向于牛顿流体的特征。

参考文献:[1]Shinji Tamaki,Makoto Hismatsu,Katsunori Teranishi,et al.Structural change of maize starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1998, 50(8:342-348.[2]Shinji Tamaki,Makoto Hisamatsu,Katsunori Teranishi,et al. Structural change of potato starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1997,49(11:431-438.[3]胡飞,陈玲,李琳.马铃薯淀粉颗粒在微细化过程中结晶结构的变化[J].精细化工,2002,19(2:114-117.[4]Sherman P.Food texture and rheology[M].New York:Aca-demic Press,1979.[5]Prentice J H.Measurements in the rheology of foodstuffs [M].London:Elsevier Applied Science Publishers,1984.[6]胡飞,李平凡,陈玲.微细化马铃薯淀粉流变性质的研究[J].粮食与饲料工业,2002,(7:41-43.[7]二国二郎.淀粉科学手册[M].王微青,等,译.北京:轻工业出版社, 1990.31-43,163-167.[8]Mohd Nurul I Muhd,Azemi B M N,Manan D M A.Rheo-logical b ehaviour o f s ago(Metroxylon s agu s tarch p aste[J].Food Chemistry,1999,64:501-505.收稿日期:2004-07-14*通讯作者基金项目:天津市教委科研项目(20039902作者简介:乌兰(1976-,女,硕士研究生,研究方向为食品科学、天然产物开发。