NK活性测定

nk细胞检验标准NK细胞检验标准NK细胞是一种重要的免疫细胞，它能够识别并杀死病毒感染的细胞和癌细胞。

因此，检测NK细胞的数量和功能状态对于诊断和治疗某些疾病具有重要意义。

下面将介绍NK细胞检验的标准。

1. NK细胞数量检测NK细胞数量检测是通过流式细胞术或细胞计数器进行的。

正常人的NK细胞占外周血淋巴细胞的10%至15%。

如果NK细胞数量低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

2. NK细胞功能检测NK细胞功能检测是通过测量NK细胞的杀伤活性来进行的。

常用的方法是使用靶细胞，如K562细胞，来评估NK细胞的杀伤能力。

正常人的NK细胞杀伤活性应该在10%至50%之间。

如果NK细胞杀伤活性低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

3. NK细胞表面标志物检测NK细胞表面标志物检测是通过检测NK细胞表面的分子来评估NK 细胞的功能状态。

常用的标志物包括CD56、CD16、NKG2D等。

正常人的NK细胞应该表达这些标志物。

如果NK细胞表面标志物异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

4. NK细胞基因检测NK细胞基因检测是通过检测与NK细胞功能相关的基因来评估NK 细胞的功能状态。

常用的基因包括KIR、NKG2A等。

正常人的NK 细胞应该表达这些基因。

如果NK细胞基因异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

NK细胞检验是评估免疫功能的重要方法之一。

通过检测NK细胞数量、功能、表面标志物和基因等指标，可以帮助医生诊断和治疗某些疾病，如感染、肿瘤等。

因此，对于需要进行免疫功能检查的患者，建议进行NK细胞检验。

免疫细胞功能检测的方法
免疫细胞功能检测的方法主要包括以下几个方面：
1. 淋巴细胞转换试验：这是一种测定机体免疫功能的指标，通过淋巴细胞转化率的高低反映机体细胞免疫水平。

淋巴细胞转化率正常值一般为60.1%±7.6%，如果不在这个范围内，可能是患有出血热、麻疹等疾病。

2. FBC玫瑰花试验：这是一种检测人体T淋巴细胞的方法。

如果结果异常，可能是患有麻疹、鼻咽癌等疾病。

3. 淋巴细胞毒试验：这一般可以作为体外测定肿瘤患者细胞免疫的指标。

如果结果异常，可能是患有肾病综合征、药疹等疾病。

4. NK细胞活性测定：自然杀伤（NK）细胞是一群异质性多功能的免疫细胞，是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞。

如果结果异常，可能是患有小儿X-连锁严重联合免疫缺陷病、先天性肿瘤等疾病。

此外，还有淋巴因子产生试验、细胞介导的细胞毒试验、抗体分泌细胞的检测、嗜中性粒细胞吞噬功能的检测、嗜中性粒细胞NBT 还原试验、巨噬细胞吞噬功能的测定等方法。

需要注意的是，患者在做细胞免疫检查的前3日，最好禁止食用
肉类以及含动物血的食物，另外检查当天的早晨一般需要空腹，否则可能会影响检查结果。

以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业医师。

nk细胞免疫组化指标NK细胞（自然杀伤细胞）是一类重要的免疫细胞，具有识别和杀伤肿瘤细胞和病原体的能力。

免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的研究手段，可用于观察组织或细胞中特定抗原的存在、定位以及定量。

在纤维组织、淋巴结、内分泌器官、脾脏、肝脏及肾脏等组织中，NK细胞的丰度和活性会受到免疫组织化学指标的影响。

NK细胞免疫组化指标主要涉及与NK细胞相关的标记物，可用于定位和分析NK细胞的存在和活性水平。

其中包括CD56抗原、CD57抗原、Perforin、Granzyme B、CD16抗原等。

CD56抗原是NK细胞的特异标记物之一。

免疫组化染色显示的CD56抗原阳性细胞是活性NK细胞的显著特征，能够帮助鉴定和定位NK细胞在组织中的分布情况。

临床研究表明，CD56阳性的NK细胞在肿瘤浸润中的水平升高可能与其抗肿瘤作用有关。

CD57抗原也是NK细胞表达的一种标记物。

免疫组化显示CD57阳性的细胞可能是活性NK细胞的标志。

CD57阳性的NK细胞在机体免疫应答和免疫相关疾病中发挥着重要的作用。

因此，研究NK细胞中CD57抗原的表达情况对于了解NK细胞的功能和调节机制具有重要意义。

Perforin和Granzyme B是NK细胞杀伤目标细胞的效应分子。

Perforin在NK细胞活化和释放细胞毒素的过程中起着重要作用。

Granzyme B是一种蛋白酶，通过进入目标细胞并诱导细胞凋亡，发挥NK细胞的杀伤作用。

免疫组化研究中，Perforin和Granzyme B的表达水平可以帮助评估NK细胞的活性水平和参与免疫反应的程度。

CD16抗原是一种与吞噬功能相关的受体，广泛表达于NK细胞的表面。

CD16抗原通过结合抗原-抗体复合物介导NK细胞的ADCC（抗体依赖的细胞介导的细胞毒性）活性。

因此，通过检测CD16抗原的表达情况，可以评估NK细胞介导的免疫活性。

总之，NK细胞免疫组化指标能够辅助研究人员对NK细胞的存在、分布和活性进行评估。

NKLAK细胞活性原理及操作步骤自然杀伤细胞（nature killer cell，NK cell）是一类既不表达TCR，也不表达BCR的淋巴细胞。

来源于骨髓，属于固有免疫细胞。

NK细胞杀伤靶细胞体现MHC非限制性，是抗病毒感染和抗肿瘤免疫的第一道天然防线。

淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cell，LAK）是PBMC经体外IL-2培养后诱导产生的一类新型杀伤细胞，其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏，也无MHC限制性，其来源可能为NK细胞，临床上用于肿瘤和慢性病毒感染的非特异性免疫治疗。

51Cr释放试验1.原理效应细胞（NK或LAK细胞）和不同的51 Cr标记靶细胞按适当的效∶靶（E：T）比值进行混合，引起效应细胞对靶细胞的溶细胞作用。

通过检测上清中靶细胞内释放出的放射活性来判断NK或LAK细胞活性。

试验时必须同时设立仅有51 Cr标记靶细胞（无效应细胞）的自发释放管以及和含51 Cr标记靶细胞和Triton X-100最大释放管，从而确保检测活性的准确性。

2.材料（1）效应细胞：NK细胞、LAK细胞或通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心从肝素抗凝血中分离获得的PBMC。

（2）靶细胞：推荐测定NK细胞活性的靶细胞株是K562。

K562是一种NK细胞敏感的慢性髓细胞性白血病细胞株；对于LAK细胞活性的测定，常用到对NK细胞抵抗，而对LAK细胞敏感的一种肿瘤靶细胞系，即Daudi细胞。

培养细胞使其处于对数生长期，进行细胞毒性检测的前一天，调整细胞浓度至2×105/ml。

（3）RPMI-10培养基。

（4）用PBS配制5%（v/v）Triton X-100。

（5）10ml圆底聚丙烯管。

（6）96微孔圆底微孔反应板。

（7）8通道微量移液器。

（8）含有H-1000B型转子的Sorvall RT-6000离心机。

（9）γ闪烁计数器和计数管。

3.操作步骤所有操作步骤必须在一个特定的有防护条件的指定为放射性核素使用的区域内进行，51 Cr的使用和处理必须遵循有关生物安全规则。

NK细胞的活力测定与意义
51Cr释放法：自然释放率<10%～15%;自然杀伤率为47.6%～76.8%;51Cr利用率为6.5%～47.8%。

酶释放法：细胞毒指数为27.5%～52.5%。

流式细胞术法为13.8%±5.9%。

NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一。

(1)NK细胞总数正常但活力下降：血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染患者，慢性多发性硬化症。

(2)NK细胞总数和活力均下降：急性多发性硬化症、系统性红斑狼疮。

NK细胞的活力与哪些因素有关 NK细胞很容易受到年龄、精神压力、食物等因素的影响。

也就是说，NK细胞在我们的生活中既可以变强大，也会变得弱小。

在一天中，早上9点左右和晚上5点左右的时候，NK细胞的活性是非常高的，一旦到了晚上9点左右，它的活力就会降低。

睡觉的时候，其活性就更低了。

因此，我们大多数情况下都是在睡觉的时候患上感冒的。

精神压力是一种能够强力降低NK细胞活性的因素。

我们了解到，精神压力越大，NK细胞的活性就越低。

一旦有精神压力，NK细胞的活性就会在几分钟内迅速降低。

抗衰老的研究在世界各地都非常盛行。

在“现代文明促使人类衰老”这一点上，各个国家得出的研究结果都是一致的。

各个国家都推荐人们“适当地运动”、“采取有价值的生活方式”、“多摄取具有抗氧化作用的植物性食品”。

研究得知：这些有助于抗衰老的生活习惯均有助于提高所有NK细胞的活性，这一点受到了大家的广泛关注，NK细胞有助于抗衰老这一点应该是确定无疑的。

NK细胞活性测定：同位素法原理和实验步骤一、原理将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时，靶细胞可被NK细胞杀伤。

同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来，其释放的量与NK细胞活性成正比。

通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。

二、仪器和材料液体闪烁仪、多头细胞取集器、二氧化碳培养箱、3H-TdR、RPMI1640 完全培养液、Hank's液（pH7.2～7.4）、YAC-1细胞、Triton X-100三、实验步骤1、靶细胞的标记取传代后24h生长良好的YAC-1细胞（存活率>95％）按1×106/mL YAC-1细胞悬液加3H-TdR 10uCi进行标记，于37℃、5％CO2培养箱中培养2h，每30min振荡1次。

标记后的细胞用培养液洗涤3次，重悬于培养液中，使细胞浓度为1×105个/mL。

2、脾细胞悬液的制备（效应细胞）无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，制成单细胞悬液。

经200目筛网过滤，用Hank's液洗3次，每次离心10min（1000r/min）。

然后将细胞悬浮于2mL的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数（应在95%以上），最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107个/mL。

3、NK细胞活性测定在96孔培养板中每孔加100μL标记的靶细胞，实验孔加100μL效应细胞，空白对照孔加100μL培养液，最大释放孔加100μL 2.5% Triton X-100。

每个样品设3个复孔，置5%CO2、37℃培养箱内温育4h，用多头细胞收集器将细胞收集在玻璃纤维滤纸上，用液体闪烁仪进行测量。

按下式计算NK细胞活性：实验孔cpmNK细胞活性（%）=（1－──────────────────）×100%空白对照孔cpm －最大释放孔cpm4、数据处理及结果判定NK细胞活性需进行数据转换，X＝Sin-1 ，式中P为NK细胞活性，用小数表示。

T、B淋巴细胞增殖能力测定、NK细胞活性测定及T淋巴细胞亚群测定的方法一、T、B淋巴细胞增殖能力测定无菌条件下取大鼠的脾脏，加适量Hank’s液研磨，以200目不锈钢网滤过，1500r/m离心5分钟，弃上清，加Hank’s液重复洗涤2次。

收集脾细胞，加适量RPMI 1640培养液混悬，以0.4%台盼兰拒染法计数，活细胞数不小于95%，加RPMI 1640完全培养液稀释，并调整细胞浓度至1×107个/mL。

于96孔微量板中，每孔加100 L脾细胞悬液（1×107 cell/mL）和等体积的ConA溶液（终浓度为5μg/mL）、LPS溶液（终浓度为10μg/mL）或RPMI1640培养液，重复3孔。

另设空白对照组。

37℃、5%CO2培养44h后，各孔加入50μL MTT溶液（2mg/mL），继续培养4h。

1000r/min离心5分钟，弃去各孔上清，分别加150μL酸性DMSO溶液，振荡，于室温暗处放置15min，以酶标仪于波长578nm处测定OD值，并按下式计算刺激指数（SI）：SI（刺激指数）=加有丝分裂原培养物的OD值/不加有丝分裂原培养物的OD值。

二、NK细胞活性测定实验前24h将靶细胞YAC-1传代培养，应用前以Hank’s 液洗3次，用RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为2×105个/mL。

无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10 min（1000 r/min）。

弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水裂解红细胞，20 s后再加入0.5 mL 2倍Hanks液及8 mL Hanks液，离心10 min（1000r/min），用1mL 含10 %小牛血清的RPMI1640 完全培养液重悬，用1 %冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度为1×107个/ mL 。

将靶细胞加入96孔培养板，每孔100μL，试验孔加入100μL 脾细胞（效靶比50：1），自然释放孔加入100μL培养液，最大释放孔加入100μL 2%NP40，37℃培养 4 h，离心，取上清100μL置96孔酶标板中，加入LDH 基质液100μL，反应8 min，以30μL 1mol/L的HCl终止反应，在酶标仪492nm 处测定OD值。

nk细胞检测方法NK细胞检测方法引言：自然杀伤细胞（Natural Killer cell，NK cell）是一类重要的免疫细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染细胞的能力。

NK细胞检测方法是一种重要的检测手段，可以帮助医生评估患者免疫功能，及时发现异常情况并采取有效的治疗措施。

本文将详细介绍NK细胞检测的常用方法及其原理。

一、流式细胞术流式细胞术（Flow cytometry）是一种常用的NK细胞检测方法。

它通过单细胞悬浮液中细胞表面或细胞内的特定标记物进行定量分析和定性鉴定。

在NK细胞检测中，可以将特定的抗体与细胞表面的CD56和CD16等标记结合，然后通过流式细胞术进行检测和分析。

利用流式细胞仪可以精确计算NK细胞的数量，并评估其功能状态。

二、酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，也可以用于NK细胞检测。

ELISA方法可以通过特异性抗体与待测样品中的NK细胞结合，然后通过酶标记二抗的作用，产生荧光或颜色反应，从而定量测定NK细胞的含量。

ELISA方法具有灵敏度高、操作简便等优点，被广泛应用于NK细胞的检测与研究。

三、实时荧光定量PCR实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR）是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测方法，也可以用于NK细胞的检测。

通过选择特异性引物和探针，可以在样品中扩增和定量检测NK细胞特定基因的表达水平。

实时荧光定量PCR方法具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点，被广泛用于NK细胞的鉴定和研究。

四、细胞毒性测定细胞毒性测定是一种常用的NK细胞功能检测方法。

该方法通过将待测NK细胞与靶细胞共同培养，观察和测定NK细胞对靶细胞的杀伤作用。

常用的细胞毒性测定包括荧光素钠酸盐释放试验（Lactate Dehydrogenase Release Assay，LDH）和Cr^51释放试验。