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农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。
二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。
按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。
培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。
灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。
灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。
热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。
湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。
湿热灭菌比干热灭菌效率高。
病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。
本实验是练习在固体培养基上接种。
固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。
接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。
三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。
]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。
四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。
1、标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
2、毒力：是指药剂本身对不同生物发生直接作用的性质和程度。
3、药效：是在田间或接近田间的条件下所测定的药剂对生物的作用效果。
4、致死中量的置信限：即致死中量的可靠范围，亦即供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。
5、内吸杀虫剂：凡是可以通过植物根茎叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随着植物体液传导植株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高毒效的化学物质，称为内吸杀虫剂。
6、内吸杀虫作用：昆虫由于受内吸杀虫剂的毒杀作用而致死亡的过程，称之为内吸杀虫作用。
7、杀菌剂室内生物测定：将杀菌物质作用于细菌、真菌或其它病原物（包括线虫）,根据其作用效果的大小来判断药剂毒力。
8、除草剂的生物测定：利用生物体（作物试材、杂草试材，主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及其效果的基本方法。
9、杀虫剂室内生物测定：在实验室条件下，以昆虫（包括螨类）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或某一类化合物的生物活性测定的一种基本方法。
1、杀虫剂生物测定存在的问题（1）评判标准单一（2）人为地固定检查时间（3）无统一的标准试虫（4）一般用校正死亡率表示核心是没有系统评判生物测定结果的方法和标准。
2、影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析（1）杀虫剂和溶剂杀虫剂：其理化性质是决定毒力的根本原因。
溶剂：对药剂本身的理化性质一般不产生影响，但不同溶剂会影响昆虫表皮。
（2）环境条件温度：影响到处理前---养虫；影响到处理过程中---挥发、吸收等；影响到处理后---昆虫的死亡率。
湿度：一般不影响杀虫剂的穿透性及作用速度，也不影响解毒过程，通常它只影响昆虫对杀虫剂的忍受力。
光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养条件等也会影响到测定结果。
（3）供试昆虫：不同种类的昆虫敏感性不同；同种昆虫不同品系对杀虫剂的敏感性也不同；昆虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性也不同（卵期通常对杀虫剂的敏感性比较低，通常以为有杀虫卵作用的杀虫剂，有很多主要是杀了初孵幼虫）；昆虫的性别与生殖对杀虫剂的敏感性（一般雌性昆虫对杀虫剂的敏感性比雄性昆虫低，但对有机磷杀虫剂来讲，则雌性个体比雄性个体感受性低。
农药生物测定田间试验一个新药物的发现, 必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统, 一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay ）是由biological 和assay 组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。
但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定, 包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。
”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。
2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay ）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。
靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。
包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。
待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。
生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。
生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。
量度：指反应的强度或者大小的指标。
要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。
生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。
如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。
4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
农药生物测定实验指导（自编试用1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药工程专业用山东农业大学植物保护学院2008年9月棉铃虫人工饲料制备一、实验目的学习棉铃虫人工饲料制备技术和方法。
本方法还适合玉米螟等人工饲料的制备。
二、实验用品和仪器设备仪器设备：天平、高压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛子（40目）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：小麦粉、玉米粉、黄豆粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、山梨酸钾、兽用链霉素、水等三、实验方法1. 配方：2. 小麦粉、玉米粉、黄豆粉、酵母粉和棉叶装入罐头瓶中，高压灭菌40min.（120℃）3. 水+琼脂煮开冷却至70℃，加入Vc、防腐剂、棉油混匀，再加入混合好的其他成分，充分混匀。
4. 倒入搪瓷盘，加盖冷却后放入冰箱中备用。
四、质量检查饲料冷却后观察颜色和固化成型情况。
五、实验报告农药生物测定药剂配制一、实验目的学习生物测定药剂配制的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡虫啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施田补EC(w/v)三、实验方法1. 原药母液的配制与稀释（1）用丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。
（2）用丙酮配制1％吡虫啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡虫啉按照5：2的比例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。
2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
（3）33%施田补EC，稀释成150mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理将以上每一种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
杀菌剂生物活性测定-生长速率法一、实验原理将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。
二、实验目的通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。
三、实验材料1．供试药剂：70%甲基托布津 2．供试病原菌：苹果炭疽病菌3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水10 00 mL；pH自然偏酸（5-6）制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。
再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。
采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。
4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。
四、方法与步骤1．菌种准备实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。
对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。
在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。
从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。
2．药液准备将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
（2）、待幼虫长到2龄后，移入装有人工饲料的培养皿（5cm）内，每皿一头，幼虫在内取食，直至老熟。
（3）、幼虫进入预蛹期，即转移到装有无菌细土的养虫缸内，必须保持湿润，以利入土化蛹和蛹的存活。
（4）、成虫羽化后，雌雄配对，放入养虫缸内，缸内放一个内有10%蜂蜜液的培养皿，皿内放脱脂棉，以便蛾子从润湿的棉上吸取蜂蜜。
养虫缸上蒙上纱布，并用橡皮筋扎好。
蛾子在缸内交尾产卵，每日将产于纱布上的卵连同纱布取下，并换新纱布和蜂蜜。
五、实验注意事项：1、注意饲养室及饲养用具的清洁、消毒。
2、注意饲养环境的控制，棉铃虫的幼虫在3龄后具有自相残杀习性，应单独饲养。
3、在棉铃虫饲养过程中，应注意及时更换新鲜的饲料，以防饲料变干。
配制好的饲料必须在低温下储存。
六、实验结果处理：1、每日观察记录棉铃虫的取食、生长情况，并认真填写观察记录。
2、观察棉铃虫的蜕皮生长情况，记录各龄期的生长时间长短及试虫的平均体重。
七、思考题：1、标准目标昆虫的饲养在生物测定工作中有何意义？2、在棉铃虫的饲养过程中应该注意那些问题？并对其饲养条件和方法提出改进意见。
实验二杀虫剂初步毒力测定一、实验目的：1、通过本试验学习掌握杀虫剂室内毒力初筛试验的操作技术。
2、观察昆虫中毒征象特征——兴奋、击倒、抽搐、麻痹、昏迷、死亡等。
3、明确标准目标昆虫代表性的实用意义。
二、实验原理：为了初步确定某些化学物质是否对某些害虫具有毒杀能力，应首先进行一次淘汰试验，或叫初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。
这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，因此，不严格限制用药量和均匀度，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。
一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。
每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致，设置温度一般在20-28℃，相对湿度60-80%，通气良好。
一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。
三、主要仪器及试材：1、试虫：小菜蛾（3龄）。
2、供试药剂：药剂A、药剂B。
3、试验器材：养虫室、potter喷雾塔、量筒、镊子、吸管、烧杯、培养皿、毛笔等。
四、实验方法与步骤1、药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。
2、试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，每处理10头，重复一次。
3、喷布质量检定用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质量达到基本要求。
4、处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清水及欲喷洒的药液大量喷布。
换药前需将受药盘及雾化室底部用布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。
在接有小菜蛾的培养皿中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷洒清水。
待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时后检查结果。
五、实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
六、 实验结果处理：处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。
试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。
%1001%100⨯--=⨯=对照死亡率对照死亡率处理死亡率校正死亡率总虫数死虫数死亡率表1杀虫剂初步毒力试验记载表 试验药剂 浓度(或剂量)处理方法供试昆虫试虫数处理24小时 处理48小时 死虫数死亡率(%)校正死亡率(%)死虫数死亡率(%)校正死亡率(%)七、思考题：1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，并写成报告。
2、 杀虫剂初步毒力测定在杀虫剂的筛选中有什么重要意义。
实验三杀虫剂毒杀作用方式的测定一．实验目的：学习和掌握杀虫剂毒杀作用方式的测定技术。
二．实验原理：经初筛试验后选出杀虫毒力高的农药，需进一步测定它的毒杀作用方式——触杀、胃毒、薰蒸、内吸、忌避以及毒杀作用强度等，进一步明确不同类型杀虫剂的杀虫特性。
三．主要仪器及试材：1．供试昆虫：小菜蛾（4龄）2．供试药剂：药剂A、药剂B四．实验方法与步骤：（一）触杀作用方式的测定：触杀作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫体壁进入虫体的触杀毒效。
常用的方法有浸渍法、药膜法、直接喷撒法、微量点滴法等。
本实验采用药膜法来鉴定农药的触杀毒力作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、滤纸（9cm）、培养皿（9cm）、培养皿（5cm）、具塞小试管等。
2．实验方法与步骤：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）使用药膜法对小菜蛾（4龄）幼虫进行触杀作用毒力测定。
（3）制作滤纸药膜：取一张直径为9cm的滤纸，放插在报纸上的三支大头针上，不使其接触物体表面，吸取0.5ml丙酮药液，围绕滤纸外缘逐渐向内滴加，使丙酮药液均匀分布在滤纸上，同法每药剂浓度及丙酮对照各制备3张滤纸药膜。
（4）将凉干后的滤纸药膜放在培养皿底，每浓度重复三次，操作时避免手摸，随即每张药膜放入试虫20头，任其爬行15-30min。
（5）处理完毕后，将处理过的试虫置于27℃，干净的环境中，并饲喂新鲜的饲料，24小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。
（二）胃毒作用方式的测定：胃毒作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫取食进入消化道的毒杀能力，测定方法是把药加入饵料中饲喂昆虫，或将药液注入昆虫的口腔内，迫使全部吞食，较理想的方法是夹毒叶片法。
其基本原理是在两片叶中夹入均匀分散的药剂，制成夹毒叶片饲喂昆虫，药剂随昆虫取食进入消化道而发生毒杀作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、微量注射器、培养皿（5cm）、淀粉糊、镊子、剪刀、具塞小试管等。
2．实验方法：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）将菜叶剪成直径2cm的小片若干张，用微量注射器将丙酮药液定量（10ul）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用淀粉糊涂在无药的叶片上，用镊子移于带药的叶片上，将上下两张叶片粘合制成夹毒叶片，饲喂试虫，另喂无毒叶片为对照，每浓度处理试虫20头，重复三次。
24小时后观察试虫的死亡情况。
（三）内吸作用方式的测定：内吸作用方式的测定是药剂接触植物的某一部分，如根、茎、叶或种子等，渗入到植物的内部组织，随植物体液传导至全株，在一定的时间内，当昆虫取食带毒的植物或吸取带毒的汁液，而产生致毒反应。
本实验采用根部内吸法。
1．实验仪器及用具：养虫室、烧杯、吸管、培养皿（5cm ）、剪刀、植物苗等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各50ml ，注入烧杯中。
（2） 将植物苗的根部插入药液中，以清水为对照，2小时后，取植物苗的上部未接触药液的叶片饲喂试虫，每浓度处理试虫20头，重复三次，24小时后观察试虫死亡情况。
（四）薰蒸作用方式的测定：薰蒸作用方式的测定是在适当温度下，在固定的空间蒸发成气态，并达到一定的浓度，与试虫接触，在短时间内能杀死试虫。
本实验采用培养皿简易薰蒸测定法。
1．实验仪器及用具：养虫室、培养皿（9cm ）、培养皿（5cm ）、吸管、纱布 烧杯等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各20ml ，注入烧杯中。
（2） 取直径相同的9cm 的磨口培养皿，皿底放10ml 的药剂，用双层纱布密盖皿底，其上放试虫20头，每浓度重复三次，以清水为对照。
（3） 2小时后，将试虫转入培养皿（5cm ）中，培养24小时后，观察试虫死亡情况。
五．实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，重复三次，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
