生工 细胞核蛋白提取试剂盒
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UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒产品编号:SK1321/SK1322包装规格:20次/100次试剂盒组成组分 SK1321,20次 SK1322,100次纯化套件(吸附柱+收集管) 20套 100套Trizol Reagent 12 ml 60 mlRPE Solution 5 ml 25 mlDEPC-treated ddH2O 1 ml 5 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项试剂盒于常温运输,试剂请按照要求分别保存。
有效期见包装。
Trizol是强腐蚀性物质,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
产品介绍该试剂盒采用Trizol提取总RNA,得到的总RNA通常不含有siRNA、 snRNA、5.8S rRNA、5S rRNA和tRNAs等200 nt以下的RNA。
该试剂盒采用的Trizol具有超强的裂解能力和抽提灵敏度,结合试剂盒采用特殊的吸附膜,大大增强了RNA 的得率。
得到的RNA纯度好,完整性高。
该试剂盒适用于各种细胞或组织中的RNA的抽提,提取的总RNA没有DNA和蛋白污染,可用于Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
本产品具有以下特点:1. 适用范围广。
2. 操作简单快速,整个过程20分钟左右完成。
3. 纯度高,污染少。
试剂准备1. 自备试剂:无水乙醇、氯仿等。
2. 按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇,混匀后在瓶身做好标记。
于室温密封保存。
每次使用后将瓶盖盖紧,以保持RPE Solution中的乙醇含量。
若RPE Solution由于运输或保管不当造成容量不准,请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
3. 去酶处理:RNase是导致RNA降解最主要的物质,非常稳定。
石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒 FFPE Total Protein Extraction Kit产品编号:C500058 包装规格:50 Assays 产品简介石蜡包埋组织是很重要的临床材料,研究其正常细胞和疾病相关的细胞,特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平,对于判断癌化的进展,癌症的类型的判定,以方便于诊断和治疗有重要的意义,然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水平并不能够真实反映体内细胞的真实状况,因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且加以研究有很重要的意义,本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试剂,在两种不同的温度条件下温育,可以将被铰链的蛋白质释放出来,经过简单的离心步骤,上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后,可以用于Western Blot 、SDS-PAGE 、ELISA 、2D 电泳或蛋白质芯片分析等,本试剂盒可以使用50次左右。
产品特点 1. 不含有去污试剂,适用于非染色的标本。
2. 可以适用于甲醛浸泡的组织标本。
3.不需要超速离心,可以同时处理多个标本。
运输和保存条件所有试剂常温下运输,收到后DTT 和提取试剂 4℃保存,盛装预处理试剂A 的瓶子已经密封,请在使用后,将剩余的预处理试剂A 倒入一个有内盖的瓶中,同时盖紧内外盖,以防止挥发。
盛装预处理试剂A ,B 和沉淀试剂的瓶盖要盖紧,同时避免火源。
产品组成使用前将DTT 完全溶解于提取试剂中,使用完毕后剩余的溶液在4℃的环境中保存。
成分C500058 预处理试剂 A 100 mL 预处理试剂 B 5 mL 提取试剂 5 mL 沉淀试剂 75 mL DTT80 mg操作步骤 1. 取两块大约10-15 μm 厚,100 mm 2石蜡包埋组织切片到1.5 mL 的干净离心管中,加入1mL 预处理试剂A ,高速涡悬震荡30 sec ,室温静置5 min ,期间偶尔颠倒离心管数次。
2. 加入100 μL 预处理试剂B ,涡悬震荡10 sec ,再10000 rpm (10000 g )离心2 min ,移去上下两层的液体。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介:在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份,而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。
分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白,不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位,而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究,例如EMSA(也称gel shift),footprinting等。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。
约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。
抽提得到的蛋白可以用于Western,EMSA,footprinting,报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50个样品,如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。
保存条件:-20ºC保存,一年有效。
注意事项:需自备PMSF。
PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。
PMSF(ST506)可以向碧云天订购。
抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4ºC进行。
本试剂盒对于组织样品,仅适合于新鲜组织,对冻存过的组织抽提效果很差。
可以抽提的组织样品数通常不足100个。
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。
但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
蛋白提取试剂盒选择指南蛋白提取试剂盒选择指南样本动物细菌植物真菌酵母昆虫应用I II I II I II I II I II I II蛋白部位应用I:WB、1D电泳、活性检测、纯化;应用II:等点聚焦、2D电泳、质谱总蛋白3101 3181 3123/8 3182 3124 3183 3127 3189 3125 3185 3126 3193膜蛋白3103/16 3188 3151 3187 3152 3184 3156 3190 3157 3192 3153核蛋白3102 3154 3159 3168胞浆蛋白3113 3180磷酸化蛋白3105/8 G+菌3129 核/质3169 藻类-总3131 核/质31681 液体-总3133糖蛋白3107 G-菌3130 叶绿体3179 藻类-膜3170 土壤-总3132膜/胞浆/核分步提取3104 细菌外膜31512 叶绿体膜3175 血浆3137膜/胞浆3111 线粒体3172 血清3138核/胞浆3112 线粒体膜3173线粒体3176/7线粒体膜3158核膜3174石蜡包埋3164甲醛固定3165冻存样品31211 脑组织31227骨组织总蛋白3161 脂肪组织31226蛋白提取试剂盒选择指南相关产品:蛋白提取BB-3101 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒BB-3102 BestBio贝博生物核蛋白提取试剂盒BB-3103 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒BB-3104 BestBio贝博生物膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒BB-31042 BestBio贝博生物细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒BB-3105 BestBio贝博生物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-31051 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-3106 BestBio贝博生物活性蛋白提取试剂盒BB-3108 BestBio贝博生物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-31081 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-3109 BestBio贝博生物糖蛋白富集试剂盒BB-3111 BestBio贝博生物膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3112 BestBio贝博生物核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3113 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒BB-3114 BestBio贝博生物细胞跨膜蛋白提取试剂盒BB-3115 BestBio贝博生物细胞核蛋白提取试剂盒BB-31152 BestBio贝博生物组织核蛋白提取试剂盒BB-3116 BestBio贝博生物细胞膜蛋白提取试剂盒BB-31161 BestBio贝博生物细胞质膜蛋白提取试剂盒BB-3117 BestBio贝博生物组蛋白提取试剂盒BB-31171 BestBio贝博生物植物组蛋白提取试剂盒BB-31172 BestBio贝博生物昆虫组蛋白提取试剂盒BB-31173 BestBio贝博生物酵母组蛋白提取试剂盒BB-3118 BestBio贝博生物胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒BB-3121 BestBio贝博生物细胞蛋白提取试剂盒BB-31211 BestBio贝博生物冻存细胞蛋白提取试剂盒BB-3122 BestBio贝博生物组织蛋白提取试剂盒BB-31226 BestBio贝博生物脂肪组织蛋白提取试剂盒BB-31227 BestBio贝博生物脑组织蛋白提取试剂盒BB-3123 BestBio贝博生物细菌蛋白提取试剂盒BB-3124 BestBio贝博生物植物蛋白提取试剂盒BB-31241 BestBio贝博生物植物根茎蛋白提取试剂盒BB-3125 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒BB-3126 BestBio贝博生物昆虫蛋白提取试剂盒BB-31262 BestBio贝博生物昆虫胞浆蛋白提取试剂盒BB-3127 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-31272 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-3128 BestBio贝博生物大肠杆菌蛋白提取试剂盒BB-3129 BestBio贝博生物革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒BB-3130 BestBio贝博生物革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒BB-3131 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒BB-3132 BestBio贝博生物土壤蛋白提取试剂盒BB-3133 BestBio贝博生物液体样本蛋白提取试剂盒BB-31332 BestBio贝博生物乳清蛋白提取试剂盒BB-3134 BestBio贝博生物白细胞蛋白提取试剂盒BB-3135 BestBio贝博生物血液单核细胞蛋白提取试剂盒蛋白提取试剂盒选择指南BB-3136 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒BB-3137 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒BB-3138 BestBio贝博生物血清蛋白提取试剂盒BB-3139 BestBio贝博生物血细胞蛋白提取试剂盒BB-3140 BestBio贝博生物全血蛋白提取试剂盒BB-31401 BestBio贝博生物血小板蛋白提取试剂盒BB-31452 BestBio贝博生物溶酶体蛋白提取试剂盒BB-31453 BestBio贝博生物高尔基体蛋白提取试剂盒BB-31454 BestBio贝博生物内质网蛋白提取试剂盒BB-3141 BestBio贝博生物厚壁微生物蛋白提取试剂盒BB-3151 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒BB-31511 BestBio贝博生物细菌跨膜蛋白提取试剂盒BB-31512 BestBio贝博生物细菌外膜蛋白提取试剂盒BB-31515 BestBio贝博生物支原体膜蛋白提取试剂盒BB-3152 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒BB-31521 BestBio贝博生物植物跨膜蛋白提取试剂盒BB-3153 BestBio贝博生物昆虫膜蛋白提取试剂盒BB-31531 BestBio贝博生物昆虫跨膜蛋白提取试剂盒BB-3154 BestBio贝博生物植物核蛋白提取试剂盒BB-3155 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒BB-3156 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒BB-3157 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒BB-31572 BestBio贝博生物酵母膜蛋白/细胞质蛋白提取试剂盒BB-3158 BestBio贝博生物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3159 BestBio贝博生物真菌核蛋白提取试剂盒BB-3160 BestBio贝博生物大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒BB-3161 BestBio贝博生物骨组织蛋白提取试剂盒BB-3162 BestBio贝博生物高脂肪样本蛋白提取试剂盒BB-3163 BestBio贝博生物神经元蛋白提取试剂盒BB-3164 BestBio贝博生物石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒BB-3165 BestBio贝博生物甲醛固定组织蛋白提取试剂盒BB-31651 BestBio贝博生物固定细胞蛋白提取试剂盒BB-3166 BestBio贝博生物冻存样本核蛋白提取试剂盒BB-3167 BestBio贝博生物植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒BB-3168 BestBio贝博生物酵母核蛋白提取试剂盒BB-31681 BestBio贝博生物酵母核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3169 BestBio贝博生物植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3170 BestBio贝博生物藻类膜蛋白提取试剂盒BB-3171 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31711 BestBio贝博生物组织线粒体蛋白提取试剂盒BB-3172 BestBio贝博生物植物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31721 BestBio贝博生物丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒BB-3173 BestBio贝博生物植物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3174 BestBio贝博生物细胞核膜蛋白提取试剂盒BB-3175 BestBio贝博生物植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒BB-3176 BestBio贝博生物线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3177 BestBio贝博生物组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3178 BestBio贝博生物线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3179 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒BB-31791 BestBio贝博生物植物膜蛋白/叶绿体蛋白提取试剂盒BB-3180 BestBio贝博生物植物胞质蛋白提取试剂盒BB-3181 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)蛋白提取试剂盒选择指南BB-31812 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-31813 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3182 BestBio贝博生物细菌总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3183 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-31836 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3184 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-31841 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3185 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3186 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3187 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3188 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3189 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3190 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3191 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3192 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3193 BestBio贝博生物昆虫总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-3194 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-31951 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒(2D电泳用)BB-31961 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31962 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31963 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31964 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31965 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31966 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31967 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31968 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)BB-31981 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31982 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31983 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31984 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31985 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31986 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31987 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)BB-31988 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法,2D电泳用)。
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒描述Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的细胞裂解和抽提方法,可在两个小时之内完成胞浆蛋白与核蛋白的分离操作。
NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒的特性:• 快速—在两个小时之内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分• 可靠—NE-PER试剂盒已经被950篇以上的发表文献引用• 通用–适用于培养细胞或组织(仅适用于新鲜样本)的核蛋白抽提• 可扩展—两种规格试剂盒,满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求• 方便—操作简单,无需超速梯度离心• 兼容性好—获得样本适合于多种下游应用,包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析NE-PER试剂盒为用户提供了高效的核蛋白抽提方法,用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器,进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。
NE-PER试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分,交叉污染以及基因组DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。
一旦经过脱盐或稀释,分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验,如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下实验。
分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多,但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时,并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析,而这些都可能影响核蛋白的完整性。
NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案,能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核,然后再从基因组DNA与mRNA中抽提核蛋白。
这一温和的过程可在两小时之内完成,且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。
此外,用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。
本试剂盒能够从两百万个细胞中提出200至500µg胞浆蛋白和100至200µg的核蛋白(浓度为1mg/mL)。
核蛋白提取试剂盒说明书货号:R0050规格:50T/100T产品内容:试剂盒组成50T100T浆蛋白抽提试剂25ml50ml核蛋白抽提试剂5ml10mlPMSF(100mM)300μl1ml保存:核/浆蛋白抽提试剂4℃保存,PMSF于-20℃保存。
产品简介:本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。
整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。
得到的蛋白可以用于Western blot等实验。
本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂,释放出胞浆蛋白,再通过离心得到细胞核。
然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织)。
操作方法:裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞:1.根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
PMSF需现用现加,若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸,可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。
2.对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS洗一遍,用细胞刮刀收集细胞,或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化,以免胰酶消化目的蛋白)。
500g离心2~3分钟收集细胞,吸尽上清留下沉淀备用。
3.对于悬浮细胞:用PBS洗一遍,500g离心2~3分钟收集细胞,吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
4.每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg)。
5.用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长),必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。
细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6.冰浴10分钟。
7.最高转速剧烈涡旋10秒,4℃12000~16000g离心10分钟。
8.上清即为抽提得到的细胞浆蛋白,立即吸取上清至预冷的样品管中备用,进行后续的PAGE、Western等实验,但蛋白浓度较低,可根据需要进行相应浓缩。
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)第一篇:胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catalog #DBI-1021;DBI-1022;Store kit at 4℃)描述: 本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A,蛋白抽提抽提试剂B,蛋白抽提试剂C 三种具有独特组分的缓冲液。
所有试剂采用PIPES缓冲系统。
通过实验,可以得到:细胞胞浆蛋白(其中含有含有可溶性的骨架蛋白);细胞膜蛋白(其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白);细胞核蛋白;其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。
提取方法简单,可靠,快速。
获得的各种部分蛋白纯度高,可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。
该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法(DBI生物产品:DBI-1045,1046)蛋白定量和BCA方法(DBI生物产品:DBI-1047,1048)进行定量。
II 试剂盒组分: III.蛋白质抽提步骤: A.注意事项和试剂准备: • 打开试剂盒后,于4度保存蛋白抽提液;于-20度保存蛋白酶抑制剂,样品缓冲液(6×)。
• 使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A);加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B);加2ul 的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C);试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装 50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A 蛋白抽提试剂A-1 蛋白抽提试剂B 蛋白抽提试剂C 混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml 500ul 50ml 25ml 1支 5支100ml 1000ul 100ml 50ml 1支 10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色• 在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。
Minute TM核膜蛋白提取试剂盒目录号:NE-013描述:核膜蛋白是一种非常复杂的膜蛋白系统,由于核膜与细胞核细胞质相连所以非常难以分离和纯化。
传统方法提取和纯化需要非常大的样本量,并且过程乏味冗长。
Minute TM核膜蛋白提取试剂盒是第一个可以快速分离天然核膜蛋白及相连蛋白的商业试剂盒,无需使用梯度离心,超速离心。
由于使用专利离心管柱技术,使得操作简单,快速,易用,并有效富集核膜蛋白。
不像传统方法那样需要大量样品,起始样品量仅需10-20million个细胞,缓冲液不含表面活性剂和EDTA,操作时间<45分钟,并可获得10-50ug蛋白/样品。
应用:试剂盒提取的核膜蛋白可应用于SDS-PAGE,immunoblottings,ELISA,IP,蛋白质运输分析,酶活性测定及其他应用。
试剂盒提供了一个快速富集天然核膜蛋白的方法。
试剂盒组份:1. 25 ml裂解液A2. 15 ml 裂解液B3. 50个离心管柱4. 50个收集管储存:-20℃储存所需附加材料1XPBS涡旋震荡仪台式离心机重要产品信息1.仔细阅读整个操作说明。
将缓冲液A和缓冲液B完全解冻后摇匀,放置于冰上。
将离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。
2.所有离心步骤都需要在4℃室温下或者低温离心机中进行。
3.研究蛋白磷酸化,磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液A中。
蛋白酶抑制剂可以选择添加或不添加。
4.推荐使用BCA试剂盒用于蛋白浓度测定。
核膜蛋白分离步骤1.将离心管柱放入接收管中,放置冰上预冷2.低速离心(500-600Xg,5分钟)收集10-20million细胞或组织中分离出的细胞。
从动物组织中获取单细胞推荐使用Minute TM 单细胞分离试剂盒(Cat# SC-012)。
3.用1ml预冷的PBS清洗细胞一次,去除上清,加入0.5ml Buffer A中重悬细胞。
冰上孵育10分钟。
涡旋大力震荡10-20秒。
迅速将细胞悬液转入离心管柱中。
细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Extraction Kit
产品编号:C500009 包装规格:50 Assays 产品简介
本试剂盒提供独特的组份,采用特殊的非离子型去污剂,以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂,能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞,经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白,释放的细胞核能够保持完整,再用Lysis Buffer 对
细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性,因此该产品可合适用于SDS-PAGE 电泳、Western Blot 、免疫共沉
淀、EMSA 、Pull Down 和转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究,每次可以从107
个培养细胞或200 mg 动物
组织提取核蛋白质,本试剂盒可以使用50次。
产品特点 1. 提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性,可以用于EMSA ,转录因子分析的实验。
2. 可以从50x107
个培养细胞或50x200 mg 动物组织提取核蛋白。
3. 整个实验过程只需要45分钟左右。
4. 在提取的过程中,最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染。
5.
不需要超速度离心,可以同时处理多个样品。
运输和保存条件
常温下运输,在收到后,将磷酸酶抑制剂,PMSF 和DTT 在-20℃的环境中保存,其余2-8℃保存,保质期一年。
产品组成 成分 C500009 Lysis Buffer 10 mL Hypotonic Buffer 50 mL 磷酸酶抑制剂 300 μL PMSF 600 μL DTT
60 μL
操作步骤
A 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL 冷Hypotonic Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,10 μL PMSF 和1 μL DTT 混匀。
冰上保存数分钟待用。
2.
将100-200mg 固体组织置于培养皿中,手术剪将小块充分剪碎,尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,用PBS 洗涤两次,离心,取沉淀后加入0.6 mL 冷Hypotonic Buffer 混匀, 4℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50 次。
或超声破碎细胞,每次30 sec ,3~4 次,每次间隔1 min ,置于冰上冷却。
均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于90%,同时没有明显的组织小块。
3. 转移到1.5 mL 预冷的离心管,手指弹管壁使沉淀悬起,冰浴10 min ,震荡10 秒钟,混匀。
4.
在4℃,800g (3000 rpm)离心5 min ,立即弃上清,再加0.4 mL 冷Hypotonic Buffer 震荡洗涤沉淀 30sec ,再 4℃,2500 g (5000 rpm) 离心5 min ,弃掉上清。
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ü 在做实验步骤A2-4的过程中,要保持动作的连续性,以免对细胞核的完整性产生影响。
5.
再沉淀中加0.2 mL Lysis Buffer (每1 mL Lysis Buffer 冷加入5 μL 磷酸酶抑制剂, 10 μL PMSF 和1 μL DTT )震荡将沉淀悬起,冰浴 20 分钟,再4℃15000 rpm (20000g) 离心10分钟,弃沉淀。
上清为核提取物,分装后-70℃保存。
ü 尽量不要吸取到沉淀,以免影响下游的某些实验。
B 培养细胞蛋白提取 1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10 mL/150 mm 培养板的冷PBS 洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液。
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中,4℃,800 g (3000 rpm) 离心10 min ,再用10 mL/150 mm 培养板的冷PBS ,800 g (3000 rpm) 离心5 min 洗两次。
3. 在每1 mL 冷Hypotonic Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂和10 μL PMSF 和1 μL DTT ,混匀。
冰上保存数分钟待用。
4.
在上述培养板或离心管的细胞中,加入上述配制好的冷Hypotonic Buffer ,加入量如下表所示:
细胞数量 培养瓶或培养板的规格 Hypotonic Buffer 加入量 5×106
个 60 mm 培养板或75 cm 2
培养瓶 0.30 mL ~0.45 mL 1×107个 100 mm 培养板或150cm 2培养瓶
0.60 mL ~0.90 mL
5. 冷室或冰上操作,贴壁细胞用细胞刮子刮下,连Hypotonic Buffer 一同转移至新的预冷的离心管中。
悬浮培养或裂解前刮下的贴壁细胞连Hypotonic Buffer 一同转移至新的预冷的离心管中。
6. 手指弹管壁使沉淀悬起,冰浴10min ,震荡10sec ,混匀。
7.
以下步骤同实体组织蛋白的提取中的A4-5 步骤。
注意事项 1. 所有接触样品的用具及试剂均需预冷。
以免蛋白质的降解与失活。
2. 因为不同蛋白质和不同的实验,所需要的缓冲体系不同,提取后的蛋白质样品,如有必要,可透析除去其它一些盐份。
3. 可以使用(C500090)Sephadex 重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
4. 本试剂盒只提供磷酸酶抑制剂和PMSF 蛋白酶抑制试剂,可以根据实验的需要在Lysis Buffer 和Hypotonic Buffer 中加入一定浓度的其它蛋白酶抑制试剂,例如我公司生产的C600386,C600387或C510009。
5. 对于提取的蛋白质可以采用我公司生产的改良型BCA 蛋白质浓度定量试剂盒(C503051)或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(C503071)或改良型Lowry 法蛋白质浓度定量试剂盒(C504041)对提取样品中的蛋白质进行定量。
6.
如果用于蛋白质质谱研究,请用请用我公司生产的铜染(C510017)或锌染(C510019)或质谱用快速银染试剂盒(C500021)对胶上的蛋白质进行染色,这些染色方法对蛋白质没有修饰作用,所以对质谱图没有影响。
对于一般的染色,可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(C503011)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(C510041)来染色。
7. 使用后,请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
8.
本试剂盒只能用于体外实验,不能用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果,概不承担责任。
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