全蛋白提取试剂盒(中)

PurePlasmid Midi Kit高纯度质粒中提试剂盒Version 04282010‐2.1I 组分说明Catalog no. CW0502CW0502ANumber of preps. 50 6Buffer P1 30 ml 5 mlBuffer P2 30 ml 5 mlBuffer N3 40 ml 5 mlBuffer PB 30 ml 5 mlBuffer PW(concentrate) 15 ml 2 mlBuffer EB 15 ml 1 mlRNase A(10mg/ml ) 600 μl 100μlSpin Column CL 50 6Collection Tube(2ml) 50 6Protocol 1 1II 保存条件该试剂盒室温干燥条件下（15-25℃）可保存一年，更长的保存时间可置于2-8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNaseA可室温(15-25℃)保存，更长时间保存置于2-8℃，加入RNaseA后的Buffer P1置于2-8℃保存，可以稳定保存半年。

III 产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过新型离心吸附柱在高盐浓度下高效、专一结合溶液中的DNA，提取率达85%–90%。

本试剂盒提取的质粒纯度高，质量稳定，最大限度的去除杂质蛋白和细菌中其它有机化合物的污染，一次可处理5-15ml菌液。

所得质粒可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

IV 注意事项1.Buffer P1 在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A 全部加入），混匀，置于2–8℃保存。

2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。

3.使用前请先检查Buffer P2 和Buffer N3 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书产品编号：BTN90707规格：50T产品及特点：本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。

本产品的其主要特点是：1.提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。

2.采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。

3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。

4.得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。

5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。

规格及成分：成分规格溶液A50ml5×SDS-PAGE上样液1ml说明书1份保存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。

使用方法：使用前，最好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。

一：匀浆法注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron式匀浆机匀浆处理。

1.称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。

2.加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。

为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。

3.将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。

4.4℃12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。

如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法（如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。

如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

版本：A2 修改日期：2023.12.26 植物叶片蛋白提取试剂盒产品简介： 蛋白质是构成植物细胞的基本组成物质之一，在植物细胞生长发育的过程中起着重要的作用，植物的根茎叶都有大量蛋白质的合成，尤其在新生的组织和细胞中蛋白质尤其丰富，植物体内的蛋白质是在细胞内的核糖体上合成，合成的蛋白质可以作为细胞结构的组成物质，还可以参与细胞中的酶促反应。

而在茎叶细胞中不断供构建新的细胞组织和器官的蛋白质，被称之为植物叶蛋白(LeavesProteinConcentrates 简称LPC)，它们属于功能性蛋白质类。

由于是存在植物茎、叶中，所以是一种最大的可再生的蛋白质资源。

植物叶蛋白含有17～18种氨基酸，包含了人体所必需的8种氨基酸，还含有维生素，与动物肌肉蛋白不同的是植物叶蛋白不含饱和脂肪酸和胆固醇。

随着食品工业的发展和人民生活水平的提高，绿色食品越来越受到人们的喜爱，从植物中提取叶蛋白，具有可观的应用前景。

Leagene 植物叶片蛋白提取试剂盒可从植物样本中提取植物叶片蛋白，操作简单快捷，含有蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用，该试剂盒主要用于从植物样本中提取植物叶片蛋白，提取的蛋白可用于Western Blot 、免疫组化、酶活性测定等下游实验。

该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：自备材料：1、 液氮、植物叶片、研钵或匀浆器、离心管、离心机操作步骤(仅供参考)：1、称取100mg 植物组织，液氮研磨成粉，放入1.5mlEP 管。

2、加入1ml 蛋白提取试剂。

100℃，金属浴。

（必需用金属浴，EP 管上压放表面水平的重铁块，如果用沸水浴，EP 管受热曝开，叶片蛋白提取液飞溅丢失，实验失败。

）3、关闭电源，冷却到常温，再拿出EP 管。

4、13000rpm, 离心。

5、取上清1ul 测定蛋白浓度；取上清10ul 或者20ul,上样做SDS-PAGE 电泳，胶做考马斯亮蓝或者银染，或者胶转膜做western-blot 。

蛋白免疫印迹杂交〔Western Blot〕技术手册A蛋白样本提取制备蛋白样品制备是Western Blotting 的第一步，更是打算WB 成败的关键步骤，总体原则和留意事项：1：尽可能提取完全或降低样本简洁度只集中于提取目的蛋白〔通过承受不同提取方法或选择不同的试剂盒产品〕2：保持蛋白的处于溶解状态〔通过裂解液的PH 盐浓度外表活性剂、复原剂等的选择〕3：提取过程防止蛋白降解、聚拢、沉淀、修饰等，〔低温操作，参与适宜的蛋白酶和磷酸酶抑制剂〕4：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子〔通过参与核酸酶或实行不同提取策略〕5：样品分装，长期于-80℃中保存，避开反复冻融。

A-1细胞或组织裂解A-1-1细胞裂解裂解液Lysis buffer 或商品化蛋白抽提试剂盒的选择*目的蛋白分布定位推举裂解液Lysis buffe 推举试剂盒全细胞NP-40 or RIPA〔附录1〕全蛋白抽提试剂盒细胞质〔可溶蛋白〕Tris-HCl〔附录1〕胞浆蛋白和核蛋白抽提试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒细胞质〔细胞骨架等不溶蛋白〕Tris-Triton〔附录1〕蛋白分级抽提试剂盒细胞质〔磷酸化蛋白〕磷酸化蛋白抽提试剂盒细胞膜NP-40 or RIPA〔附录1〕膜蛋白抽提试剂盒蛋白分级抽提试剂盒细胞核RIPA〔附录1〕核蛋白抽提试剂盒线粒体RIPA〔附录1〕线粒体蛋白抽提试剂盒亚细胞定位蛋白抽提试剂盒细胞裂解操作方法：1培育的细胞经预冷的PBS 漂洗2 次，裂解液中参与蛋白酶和磷酸酶抑制剂〔种类与量见本节2〕2吸净PBS，参与预冷的裂解液，〔(1 ml per 107cells/100mm dish/150cm2flask; 0.5ml per 5x106cells/60mm dish/75cm2flask).3用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温存地转移至预冷的微量离心管中，44℃摇动30 min54℃离心12,000 rpm，20 min〔根椐细胞种类不同调整离心力〕6轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.A-1-2组织裂解1 用灭菌的预冷的工具分别目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，2 将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf 管中，参与液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，3每约5 mg 参与约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇动2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，〔最终的蛋白浓度至少到达0.1 mg/ml, 抱负的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).44℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀,A-2蛋白酶和磷酸酶抑制剂推举购商品化蛋白酶和磷酸酶抑制剂复合试剂盒或COOKTAIL。

蛋白提取制备相关产品蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)S1250 100 次提取 700 元概述：实体组织如大脑富含磷脂、神经纤维或血管壁含大量结缔组织、而脂肪则有大量油脂，常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。

蛋白抽提试剂盒-I用于从各种实体软组织或细胞快速提取总蛋白。

用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心分离即可得到总蛋白；简便高效，30-60分钟内完成提取。

试剂盒可进行100次提取，可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备。

每次可提取1～100 mg实体组织或1 x 107细胞。

一次从10-100mg实体组织提取的总蛋白的量通常足以进行数十次Western Blot或免疫沉淀。

适用：(1) 各种实体软组织。

如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等。

(2) 各种原代和传代细胞。

组成：(1) 裂解-结合缓冲液100 ml；(2) 抽提试剂100 ml。

每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取100 mg组织或1 x 107细胞。

储存：室温2年。

蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收，100 extraction)S1255 100 次提取 480 元200 次提取 780 元概述：蛋白抽提试剂盒-II 用于液体样品中蛋白浓缩、提取、或脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。

适用于各种液体样品(10 µl～1000 ml)，如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液。

蛋白回收率95%，远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除样品中的脂质，不影响后续SDS-PAGE和Western Blot实验。

可用1.5ml离心管微量提取也可大规模制备，15分钟完成提取，简便高效。

该试剂盒也适于从细胞悬液提取总蛋白。

PAX8蛋白在脑胶质瘤患者组织中表达水平及其与临床病理特征分析孙飞;倪世慧;马艳娇;高言国【摘要】PAX8蛋白在脑胶质瘤患者组织中表达水平及其与临床病理特征分析.选取大连大学附属新华医院确诊的脑胶质瘤患者98例,根据2016年世界卫生组织(WHO)神经系统肿瘤分级标准,分为Ⅰ级12例,Ⅱ级18例,Ⅲ级21例,Ⅳ级47例,使用酶联免疫吸附法、蛋白印迹法及免疫组化等方法测定所有脑胶质瘤患者PAX8蛋白表达.Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅰ级,且Ⅲ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅱ级,Ⅳ级患者PAX8蛋白表达水平高于Ⅱ级、Ⅲ级,差异均有统计学意义;PAX8蛋白表达与年龄、病理学类型相关性不明显,差异无统计学意义;与病理学分级、瘤周水肿、浸润深度相关性明显,且病理学分期越高、瘤周水肿程度越高、浸润深度越深,PAX8蛋白阳性表达率越高,差异有统计学意义;PAX8阴性组总生存率及生存期均明显高于PAX8阳性组,差异有统计学意义.PAX8的表达水平与脑胶质瘤病理分级正相关,PAX8在脑胶质瘤的发生发展过程中起促进作用;PAX8低表达的脑胶质瘤患者能获得较好的预存率及生存期均明显高于PAX8阳性组.%To investigate the expression of PAX8 protein in glioma tissues and its correlation with clinical features and postoperative survival time of patients with glioma.98 patients with glioma diagnosed in Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University were selected,and according to the 2016 WHO nervous system tumor classification standard the cases were divided into grade Ⅰ of 12 cases,grade Ⅱ of 18 cases,grade Ⅲ of 21 cases,grade Ⅳ of 47 cases.The expression of PAX8 protein in all patients with brain glioma was measured by enzyme-linked immunosorbent assay,Western Blot andImmunohistochemical method.The expression level of PAX8protein in patients with glioma of grade Ⅱ,Ⅲ and Ⅳ were higher than those in patients with glioma of grade Ⅰ,and the expression level of PAX8 protein in patients with glioma of grade Ⅲ was hi gher than that of patients with glioma of grade Ⅱ,and the expression level of PAX8 protein in patients with glioma of grade Ⅳ were higher than that of patients with glioma of grade Ⅱ and Ⅲ,and the differences were statistically significant.The correlation between the expression of PAX8 and age and pathological type was not obvious,and the difference was not statisticallysignificant.Theexpression of PAX8 was correlated with the pathological grading,peritumoral edema and infiltration depth.The higher pathological stages,the higher the degree of peritumoral edema and the higher infiltration depth,the higher positive expression of PAX8 protein,and the difference were statistically significant.The total survival rate and survival period of patients with PAX8-were significantly higher than that in patients with PAX8+,and the difference was statistically significant.The expression level of PAX8 protein is positively correlated with the pathological grade of glioma,and PAX8 plays an important role in the occurrence and development of glioma,and the glioma patients with low expression of PAX8 can get better prognosis.【期刊名称】《医学与哲学》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】5页(P46-50)【关键词】PAX8;脑胶质瘤;临床特征;生存期【作者】孙飞;倪世慧;马艳娇;高言国【作者单位】大连大学附属新华医院神经外科辽宁大连 116021;大连大学附属新华医院神经外科辽宁大连 116021;大连大学附属新华医院神经外科辽宁大连116021;大连大学附属新华医院ICU 辽宁大连 116021【正文语种】中文【中图分类】R739.41脑胶质瘤是中国成人较为多见的恶性程度较高的中枢神经系统肿瘤，中国脑胶质瘤发病率逐年递增，从1992年～2005年，脑胶质瘤发病率的增长率为5.3%。

SALL4在肝癌中的表达及其对预后的影响王亚婷;何彩霞;卢振辉;王琦;杨少奇;李洋【摘要】目的检测人类婆罗双树样基因4 (SALL4)在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌(HCC)患者预后的相关性.方法应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学资料及预后的关系;采用荧光定量RT-PCR、Western blot法,分别检测23例新鲜HCC及癌旁肝组织中SALL4 mRNA和蛋白的相对含量.结果HCC组织中SALL4蛋白的表达率(81.67％,49/60)显著高于癌旁组织(6.25％,2/32),差异有统计学意义(x2=48.047,P＜0.01);SALL4蛋白在HCC中的表达与甲胎蛋白水平有关(P＜0.05);SALL4高表达和低表达组患者的平均生存时间分别为(26.20士2.37、34.05±1.26)个月,SALL4高表达组患者的1、3年生存率(75.9％、55.2％)显著低于SALL4低表达组1、3年生存率(95.0％、85.0％,x2=5.044,P＜0.05).肝癌及癌旁组织的SALL4 mRNA的相对量分别为14.80±8.62、0.17±0.13,两组比较差异有统计学意义(t=8.14,P＜0.01).Western blot检测结果显示,SALL4蛋白在HCC中的相对量为0.354±0.103.癌旁组织中几乎不表达.结论 SALL4表达与肝癌患者预后密切相关,可作为肝癌患者判断预后的预测指标.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(037)001【总页数】5页(P113-117)【关键词】肝癌;SALL4基因;免疫组织化学;Western blot;实时荧光定量PCR【作者】王亚婷;何彩霞;卢振辉;王琦;杨少奇;李洋【作者单位】宁夏医科大学,宁夏银川 750004;宁夏医科大学,宁夏银川 750004;宁夏医科大学总医院肝胆外科,宁夏银川 750004;宁夏医科大学总医院肝胆外科,宁夏银川 750004;宁夏医科大学总医院消化内科,宁夏银川 750004;宁夏吴忠新区医院,宁夏银川 751100【正文语种】中文【中图分类】R735.7我国肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)发病率呈逐年上升趋势，肝癌术后复发转移率高居不下，使得其远期疗效并不理想[1]。

Western blot 实验1）蛋白裂解液的配制:Urea（7 M）4.2 g，Thiourea（2 M）1.52 g，CHAPS（4% W/V）0.4 g，DTT （1% W/V）0.1 g，ddH2O加至10 ml，1 ml/管分装-20℃保存备用；1 ml分装的裂解液中用前加入Cocktail（1% V/V）10 μl，混匀后于冰上放置备用。

我们用的是国产的碧云天的全蛋白提取试剂盒2）蛋白样品制备（1）取组织，称重，按照W:V = 1:6的比例加入蛋白裂解液；（2）用匀浆器对组织进行匀浆，匀成糊状。

（3）4 ℃，冰上放置30min，每10 min振荡一次；（4）4 ℃，12000 g 离心30 min，吸上清，分装置于-70 ℃待用。

3）蛋白浓度测定（Bradford法）试剂配制：考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝G250 0.05 g，95%乙醇25 ml，H3PO4 50 ml，ddH2O加至500 ml，过滤后储存于4 ℃。

牛血清白蛋白（BSA）：1 mg/ml步骤：按下列体系配置溶液，混匀后，静置5 min后，测OD值（波长595 nm），将OD值输入Excel进行数据处理，计算出相关系数，当相关系数>0.99才具有可信度。

取待测标本，正确设置reference，取适量标本，进行浓度测定。

管号BSA（1 mg/ml）0.9% NaCl/0.1 M PBS 考染液0 0 200 μl 1 ml1 5 195 μl 1 ml2 10 190 μl 1 ml3 15 185 μl 1 ml4 20 180 μl 1 ml5 25 175 μl 1 ml我们用的是国产碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

4）聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（1）凝胶制备：30.8%丙烯酰胺：丙烯酰胺30 g，甲叉双丙烯酰胺0.8 g，ddH2O加至100 ml，置于通风橱内搅拌直至丙烯酰胺完全溶解，用0.45 μm微孔滤膜过滤后4 ℃保存于棕色瓶中备用。

Minute TM核膜蛋白提取试剂盒目录号：NE-013描述：核膜蛋白是一种非常复杂的膜蛋白系统，由于核膜与细胞核细胞质相连所以非常难以分离和纯化。

传统方法提取和纯化需要非常大的样本量，并且过程乏味冗长。

Minute TM核膜蛋白提取试剂盒是第一个可以快速分离天然核膜蛋白及相连蛋白的商业试剂盒，无需使用梯度离心，超速离心。

由于使用专利离心管柱技术，使得操作简单，快速，易用，并有效富集核膜蛋白。

不像传统方法那样需要大量样品，起始样品量仅需10-20million个细胞，缓冲液不含表面活性剂和EDTA，操作时间<45分钟，并可获得10-50ug蛋白/样品。

应用：试剂盒提取的核膜蛋白可应用于SDS-PAGE，immunoblottings，ELISA，IP，蛋白质运输分析，酶活性测定及其他应用。

试剂盒提供了一个快速富集天然核膜蛋白的方法。

试剂盒组份：1. 25 ml裂解液A2. 15 ml 裂解液B3. 50个离心管柱4. 50个收集管储存：-20℃储存所需附加材料1XPBS涡旋震荡仪台式离心机重要产品信息1.仔细阅读整个操作说明。

将缓冲液A和缓冲液B完全解冻后摇匀，放置于冰上。

将离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。

2.所有离心步骤都需要在4℃室温下或者低温离心机中进行。

3.研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液A中。

蛋白酶抑制剂可以选择添加或不添加。

4.推荐使用BCA试剂盒用于蛋白浓度测定。

核膜蛋白分离步骤1.将离心管柱放入接收管中，放置冰上预冷2.低速离心（500-600Xg，5分钟）收集10-20million细胞或组织中分离出的细胞。

从动物组织中获取单细胞推荐使用Minute TM 单细胞分离试剂盒（Cat# SC-012）。

3.用1ml预冷的PBS清洗细胞一次，去除上清，加入0.5ml Buffer A中重悬细胞。

冰上孵育10分钟。

涡旋大力震荡10-20秒。

迅速将细胞悬液转入离心管柱中。

提蛋白（主要是看所研究的目的蛋白质的位置，如果是在核中，可以用核蛋白提取试剂盒，如果有位于胞质中的，也有膜上的，也有核中的，可以用总蛋白提取试剂盒）1、RIPA细胞裂解缓冲液（强）（含1mM PMS、1mM NaF、2μg/ml Aprotinin、2μg/ml Leupetin）（即细胞培养液量的1/20加入裂解液）2、蛋白酶抑制剂PMSF（99元）产品组成310003310004规格50 assays100 assaysBuffer I25ml50ml蛋白酶抑制剂混合物100ul200ul（1、）裂解液制备：每500ul冷的Buffer I中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

（2）取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞（3）用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

（4）每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

（5）在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。

（6）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

3、SDS-PAGE(SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳)SDS-PAGE凝胶配制试剂盒150.00元4、BCA蛋白定量检测试剂盒5、电泳液5、牛血清白蛋白（BSA）6、一抗（鼠抗人mcl-1）7、二抗（羊抗鼠HRP-IgG）如何选择合适的一抗？请先确定您检测样品的种属，然后查找相关产品，根据说明书上描述的“适用种属和实验方法”来确定合适的抗体。

如果说明书中有明确您要检测的种属和实验方法均经过检测，则您可以放心地购买该产品。

如果说明书中没有注明您用的种属和实验方法经过验证，则要仔细考虑是否购买。

如何选择合适的二抗?针对一抗来源的二抗（比如一抗是小鼠来源的，二抗就要是抗小鼠的）针对一抗Ig亚型的（比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM 的抗体）根据你实验的需要，选择二抗的标记类型。

糖皮质激素（GC ）广泛应用于严重感染、血液病和自身免疫性疾病，发挥其抗炎、代谢调节和免疫抑制的作用［1］。

然而，超生理剂量GC 的应用可导致库欣综合征、骨质疏松和心血管反应等一系列的副作用。

激素性股骨头坏死（SANFH ）是过量使用糖皮质激素的严重后α2-macroglobulin alleviates glucocorticoid-induced avascular necrosis of the femoral head in mice by promoting proliferation,migration and angiogenesis of vascular endothelial cellsZHU Qi,LU Yunxiang,PENG You,HE Jiale,WEI Zeyu,LI Zhiyong,CHEN YuxianDepartment of Joint Surgery,Third Affiliated Hospital,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510630,China摘要：目的探讨α2-巨球蛋白（A2M ）是否对激素性股骨头坏死（SANFH ）具有保护作用。

方法体外实验：用梯度浓度（10-8~10-5mol/L ）地塞米松（DEX ）处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs ）建立糖皮质激素（GC ）诱导内皮细胞损伤体外模型，设置对照组、DEX 组、DEX+A2M （0.05mg/mL ）和DEX+A2M （0.1mg/mL ）4组，采用CCK-8法检测细胞活性，Transwell 实验和划痕愈合实验检测HUVECs 迁移，血管形成实验检测HUVECs 血管形成能力，Western blot 检测HUVECs 中CD31和VEGF-A 蛋白表达水平。

体内实验：将24只BALB/c 小鼠分为对照组、模型组（GC ）和干预组（GC+A2M ），Micro-CT 检测骨小梁情况，HE 染色观察组织学特征，免疫组化染色检测CD31的表达。

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// Plasmid Midi Kit中量质粒提取试剂盒目录号：PL08适用范围：适用于中量高纯或者转染级质粒制备和BAC/PAC大型质粒制备试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存20次（PL0801）40次（PL0802）RNaseA（10mg/ml）-20℃0.75 ml 1.3 ml溶液P1 4℃65 ml 130 ml溶液P2 室温50 ml 100 ml溶液PⅢ室温50 ml 110 ml杂质清除剂A 室温 1.5 ml 3 ml杂质清除剂B 室温15 ml 30 ml内毒素清除剂-20℃ 5 ml 10 ml本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg /ml）置于4℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.内毒素清除剂在4℃可保存一个月，如果要长期保存，建议保存在－20℃!3.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。

纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。

纯化后期过程均在1.5ml 小离心管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯仿抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。

本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。

全蛋白提取试剂盒Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。

获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。

储存条件：2～8℃。

产品特点：1．提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性；2．整个操作过程只需要30分钟左右；3．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取；4．避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性；5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。

编号包装价格产地BSP003 50 Assays 520 生工RIPA裂解液IIRIPA Lysis Buffer II产品说明：RIPA裂解液II对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有中等强度裂解作用，可能是经典但最常用的细胞组织快速裂解液。

使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子检测等。

本产品包括裂解液和蛋白酶和磷酸酶抑制剂组成. 为1倍溶液，可以处理108个细胞或1g 组织。

含有(NaCl,NP-40, deoxycholate, SDS,Tris), proteinase inhibitor and phosphatas inhibitor cocktail 。

凯基全蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at 4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。

获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。

二、 试剂盒组份组份 KGP250 （50 tests） KGP2100（100 tests）储存温度 Lysis Buffer 50 mL 100 mL 4℃磷酸酶抑制剂 250 μL 500μL -20℃蛋白酶抑制剂 50 μL 100 μL -20℃PMSF（100mM）500 μL 1000 μL -20℃L三、 操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入5 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。

冰上保存数分钟待用。

2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入5μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。