下载文档原格式
膜-胞浆蛋白提取方法膜-胞浆蛋白提取方法膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格试剂 A 试剂 B 试剂 C蛋白酶抑制剂混合物蛋白稳定剂BB-3111-150T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ulBB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。
产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承当各种生物功能，在疾病的发生、开展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析^p 及质谱分析^p 等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和外表活性剂增溶。
去污剂处理睬使膜蛋白丧失其天然构造，因此阻碍了膜蛋白的功能研究。
贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。
本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少穿插污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析^p 、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的'SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。
图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
使用方法：A．细胞蛋白提取①1. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心汲取培养基，尽可能吸干，搜集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中参加200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，2ul蛋白稳定剂，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 产品编号产品名称 包装 P0013M-100ml BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 100ml产品简介：碧云天生产的BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂(BeyoLytic™ Mammalian Active Protein Extraction Reagent)，也称BeyoLytic™ Mammalian Native Protein Extraction Reagent ，是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。
本产品与Thermo 的M-PER ® Mammalian Protein Extraction Reagent 以及Sigma 的CelLytic™ M mammalian cell lysis/extraction reagent 非常相近，使用效果和用途也非常相近，很多时候可以考虑相互替代。
本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(pH7.6)，既确保了蛋白能被高效抽提，抽提效果和碧云天生产的P0013 Western 及IP 细胞裂解液或P0013B RIPA 裂解液(强)相近，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测。
由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。
如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。
对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。
本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。
本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白浓度约为 2.5ug/ul或更高。
抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5X Buffer A 1瓶35ml/瓶2X Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支0.85ml/支User Manual (说明书)1份1份/Kit保存温度： 4℃保存。
Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5X Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备1ml核裂解液：试剂体积2X Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒描述Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的细胞裂解和抽提方法，可在两个小时之内完成胞浆蛋白与核蛋白的分离操作。
NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒的特性：• 快速—在两个小时之内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分• 可靠—NE-PER试剂盒已经被950篇以上的发表文献引用• 通用–适用于培养细胞或组织（仅适用于新鲜样本）的核蛋白抽提• 可扩展—两种规格试剂盒，满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求• 方便—操作简单，无需超速梯度离心• 兼容性好—获得样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析NE-PER试剂盒为用户提供了高效的核蛋白抽提方法，用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器，进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。
NE-PER试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分，交叉污染以及基因组DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。
一旦经过脱盐或稀释，分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下实验。
分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多，但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时，并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析，而这些都可能影响核蛋白的完整性。
NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案，能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核，然后再从基因组DNA与mRNA中抽提核蛋白。
这一温和的过程可在两小时之内完成，且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。
此外，用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。
本试剂盒能够从两百万个细胞中提出200至500µg胞浆蛋白和100至200µg的核蛋白（浓度为1mg/mL）。
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。
制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。
提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、试剂盒组份组份KGP150 （50 test）KGP1100 （100储存温度test）Buffer A 25 mL 25 mL ×24℃Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃DTT 50μL100μL-20℃蛋白酶抑制剂250μL500μL-20℃PMSF（100mM）400μL800μL-20℃三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL BufferA加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mLBuffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明产品编号：C7610包装规格：50Assays产品组成:胞质提取Buffer55mL线粒体溶解Buffer5mL蛋白酶抑制剂60μL磷酸酶抑制剂300μLDTT60μL产品简介胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒提供独特的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。
该方法先将完整的有活性的线粒体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单，可靠，快速。
可用于1D，2D电泳，Western Blot，Elisa等蛋白质实验。
提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体DNA提取，用于基因组学后续研究。
本试剂盒可以每次从1×107个培养细胞或200mg组织中提取所需要的蛋白质，可以使用50次。
产品特点1.整个实验过程大约只需要1小时左右。
2.可以从50×107个培养细胞或50×200mg组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。
3.活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解Buffer提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。
4.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件常温下运输，收到后将线粒体溶解Buffer、DTT和蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂于-20℃保存，胞质提取Buffer于2-8℃保存，保质期1年。
操作步骤1.收集不少于1×107细胞，用冷PBS（pH7.4）洗涤细胞两次，每次3000rpm（800g）离心5min；组织样本（200mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷PBS（pH7.4）洗涤三次。
2.在上述细胞或组织样本中加入1mL胞质提取Buffer（使用前每mL胞质提取Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂，5μL磷酸酶抑制剂和1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，置于冰上冷却。
Abbkine/ExKine™胞浆蛋白提取试剂盒
从细胞质制备提取物，通常是研究细胞质蛋白及其相互作用的第一步。
提取的蛋白可直接用于Western Blot，IP等实验。
Abbkine/ExKine™胞浆蛋白提取试剂盒，可从哺乳动物培养细胞或组织中逐步分离和制备的细胞质提取物。
Abbkine/ExKine™胞浆蛋白提取试剂盒成分：
•细胞浆蛋白溶液A (CES A)
•细胞浆蛋白溶液B (CES B)
•DTT (500X)
•蛋白酶抑制剂(100X)
Abbkine/ExKine™胞浆蛋白提取试剂盒特点如下：
•多用途—适用于新鲜的哺乳动物细胞或组织样品，几乎没有交叉污染。
•方便快捷—非变性，有活性的蛋白质可在不到2小时迅速提取完成。
•兼容性好—提取的蛋白适用于多种下游实验，如Western Blot，蛋白分析以及酶活力测定等。
使用ExKine™胞浆蛋白提取试剂盒对特定蛋白进行蛋白质印迹。
样本：293T细胞裂解物；C1：使用α-tubulin 抗体（A01080）分析细胞质提取物。
C2：使用Histone H3抗体（A01070）分析细胞质提取物。
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒（真核细胞）第一篇：胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catalog #DBI-1021;DBI-1022;Store kit at 4℃)描述: 本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A，蛋白抽提抽提试剂B，蛋白抽提试剂C 三种具有独特组分的缓冲液。
所有试剂采用PIPES缓冲系统。
通过实验，可以得到：细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白（其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白）；细胞核蛋白；其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。
提取方法简单，可靠，快速。
获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。
该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法（DBI生物产品：DBI-1045,1046）蛋白定量和BCA方法（DBI生物产品：DBI-1047,1048）进行定量。
II 试剂盒组分: III.蛋白质抽提步骤: A.注意事项和试剂准备: • 打开试剂盒后，于4度保存蛋白抽提液；于-20度保存蛋白酶抑制剂，样品缓冲液（6×）。
• 使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B)；加2ul 的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C)；试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装 50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A 蛋白抽提试剂A-1 蛋白抽提试剂B 蛋白抽提试剂C 混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml 500ul 50ml 25ml 1支 5支100ml 1000ul 100ml 50ml 1支 10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色• 在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.04.009萝卜硫素激活ERK/NRF1信号通路改善心肌梗死大鼠心室重构的研究徐燕梅1罗远林2吴丽虹1谭志强2王芳娟3（1.乐山职业技术学院医学系，乐山 614000；2.乐山市人民医院心血管内科，乐山 614009；3.陆军军医大学第一附属医院（西南医院）心血管内科，重庆 400038）中图分类号R542.22 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）04-0726-05［摘要］目的：探究萝卜硫素（SFN）通过激活细胞外调节蛋白激酶（ERK）/核呼吸因子1（NRF1）信号通路改善心肌梗死（MI）大鼠心室重构的效果。
方法：48只SD雄性大鼠，随机挑选12只为假手术（Sham）组，剩余大鼠通过冠状动脉左前降支结扎术构建心肌梗死模型，造模后36只大鼠随机分为MI模型组、SFN治疗组（10 mg/kg）、SFN+SCH772984（ERK抑制剂）组（10 mg/kg+15 mg/kg），每组12只大鼠。
采用心脏超声观察各组大鼠心肌结构和心脏功能，采用组织学切片染色观察心肌纤维化及心肌细胞凋亡情况，ELISA检测血清中的炎症因子表达，Western blot实验观察各组大鼠心肌组织中ERK/NRF1通路相关蛋白表达情况。
结果：与Sham假手术组相比，MI模型组大鼠心肌结构紊乱、心肌功能和心脏顺应性下降，组织学上可见大量心肌纤维化组织和凋亡心肌细胞，同时血清中促炎因子水平升高而心肌中ERK/NRF1通路激活水平下降（P<0.05）。
SFN给药治疗以后，SFN组大鼠心肌功能及顺应性明显增强，组织学上心肌纤维化区域及凋亡心肌细胞明显减少，同时血清中促炎因子表达下降伴有心肌组织中ERK/NRF1通路显著激活（P<0.05）。
但在SFN治疗基础上给予SCH772984可明显阻断SFN对MI大鼠心肌的保护治疗作用，心功能和炎症反应显著恶化，心肌纤维化及细胞凋亡水平增高。
PH0710|膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Membrane and Cytosol Protein Extraction KitCatalog No：PH0710Size:□50T □100T◆产品简介膜蛋白与浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。
抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白,通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。
约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。
抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。
不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定。
本试剂盒采用独特的组分，提取细胞及组织中的膜蛋白。
特殊的溶液系统，在裂解细胞的同时，还可以选择性低地分离提取细胞膜蛋白与细胞器膜蛋白。
提取方法简单，可靠，快速，获得的膜蛋白纯度高，可用于SDS-PAGE 电泳、Western Blot、免疫沉淀等后续实验，每次可以提取107个培养细胞或200mg 动物组织。
◆产品组分◆保存条件常温运输，收到后，DTT 在-20℃保存，其余组分4℃保存，一年有效。
产品名称50T 100T 浓缩洗涤液（10X）50ml 100ml 膜蛋白提取液50ml 100ml DTT60μl 120μl 说明书1份1份使用说明1．准备细胞或组织样品：A．细胞贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。
离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
北京普利莱基因技术有限公司 电话：************ 62053186 Email:************************Applygen Technologies Inc. DocRev 1910 Page 1 of 1 细胞核蛋白和胞浆蛋白制备试剂盒(Nuclear-Cytosol Extraction Kit ) P1200描述：用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。
制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度高。
提取的蛋白适于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay, EMSA)、免疫共沉淀、酶活性测定，也适于Western Blot 实验。
组份：试剂盒组成 50次制备 100次制备 提取 储存条件Cytosol Extraction Buffer A (CEB-A) 25 ml 50 ml 4 o C, 1 yearCytosol Extraction Buffer B (CEB-B) 1.5 ml 2×1.5 ml 4 o C, 1 yearNuclear Extraction Buffer (NEB) 5 ml 10 ml 4 o C, 1 year温馨提示：1. 操作应在冰浴中进行，试剂需提前预冷。
2. 根据大致的细胞数，或大致估计离心后的细胞体积(Packed cell volume, PCV)来确定试剂的加入量。
PCV因细胞类型不同而有所差异。
细胞数、PCV 与试剂加入量之间的对应关系，参见下表：培养皿直径35 mm or 或1孔六孔板 60 mm 10 cm 培养皿面积10 cm 2 30 cm 2 75 cm 2 细胞计数5 ×105 1 ×106 5 ×106 相当于PCV(μl)5 10~20 50~100 加入CEB-A (μl)25 50~100 300~500 加入CEB-B (μl) 1.2~1.5 3~6 3~6加入NEB (μl)5~10 20 100 操作步骤1. 裂解：(1) 培养细胞，PBS 洗涤细胞两次，根据细胞计数，或者估计离心后的细胞体积PCV 。
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介：碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。
抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。
本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。
约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。
抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。
膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。
本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
注意事项：需自备PMSF。
PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
PMSF(ST506)可以向碧云天订购。
使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA法蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。
抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。
取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2.准备细胞或组织样品：a. 对于细胞(1) 收集细胞对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。
离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
(2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀细胞。
弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
(3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。
b. 对于组织：取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。
加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。
注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。
3.细胞或组织样品的破碎及破碎效果的鉴定：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。
匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
通常可以在匀浆30次后取约2-3微升细胞或组织匀浆液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完整的细胞形态，说明细胞仍完整。
如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞已经充分破碎，则进行下一步实验。
否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。
同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。
另外需注意特定的匀浆次数和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
注：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用冻融法来破碎细胞。
把步骤2中的样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。
如果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。
4.去除细胞核和未破碎的细胞：4℃，700g离心10分钟，小心收集上清液至一新的离心管中。
吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50微升上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液有较高的纯度。
5.沉淀细胞膜碎片：4℃，14000g离心30分钟，以沉淀细胞膜碎片。
6.收集细胞浆蛋白：吸取上清即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。
吸取上清时可以有30-50微升上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。
7.抽提膜蛋白：4℃，14000g离心10秒，尽最大努力吸尽上清。
可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。
加入膜蛋白抽提试剂B 200微升(如有必要，也可以加大到300微升)，最高速剧烈V ortex 5秒重悬沉淀，冰浴5-10分钟。
重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。
随后，4℃，14000g离心5分钟，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。
可-70℃保存备用。
对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。
使用本产品的文献：1.Wang H, Huang H, Li W, Jin X, Zeng J, Liu Y, Gu Y, Sun X, Wen G, Ding Y, Zhao LNuclear localization of 14-3-3epsilon inversely correlates with poor long-term survival of patientswith colorectal cancer.J Surg Oncol. 2011 Nov 21.2. Longxi P, Buwu F, Yuan W, Sinan G.Expression of p53 in the effects of artesunate on induction of apoptosis and inhibition ofproliferation in rat primary hepatic stellate cells.PLoS One. 2011;6(10):e26500.3. Cao X, Zhou M, Wang C, Hou L, Zeng B.Lectin purified from Musca domestica pupa up-regulates NO and iNOS production via TLR4/NF-κBsignaling pathway in macrophages.Int Immunopharmacol. 2011 Apr;11(4):399-405.4. Li C, Yu M, Sun Y, Wu Y, Huang C, Li F.A nonemissive iridium(III) complex that specifically lights-up the nuclei of living cells.J Am Chem Soc. 2011 Jul 27;133(29):11231-9.5. Xu S, Zhao Y, Yu L, Shen X, Ding F, Fu G.Rosiglitazone attenuates endothelial progenitor cell apoptosis induced by TNF-α via ERK/MAPKand NF-κB signal pathways.J Pharmacol Sci. 2011;117(4):265-74.6. Sun XG, Fu XQ, Cai HB, Liu Q, Li CH, Liu YW, Li YJ, Liu ZF, Song YH, Lv ZP.Proteomic analysis of protective effects of polysaccharides from Salvia miltiorrhiza againstimmunological liver injury in mice.Phytother Res. 2011 Jul;25(7):1087-94.7. Xing ZB, Yao L, Zhang GQ, Zhang XY, Zhang YX, Pang DFangchinoline inhibits breast adenocarcinoma proliferation by inducing apoptosis.Chem Pharm Bull (Tokyo). 2011;59(12):1476-80.8. Liu HT, Huang P, Ma P, Liu QS, Yu C, Du YG.Chitosan oligosaccharides suppress LPS-induced IL-8 expression in human umbilical veinendothelial cells through blockade of p38 and Akt protein kinases. Acta Pharmacol Sin. 2011 Apr;32(4):478-86.9. Zhang JY, Jin H, Wang GF, Yu PJ, Wu SY, Zhu ZG, Li ZH, Tian YX, Xu W, Zhang JJ, Wu SG.Methyl-1-hydroxy-2-naphthoate, a novel naphthol derivative, inhibits lipopolysaccharide-inducedinflammatory response in macrophages via suppression of NF-κB, JNK and p38 MAPK pathways.Inflamm Res. 2011 Sep;60(9):851-9.10.Luo H, Huang J, Liao WG, Huang QY, Gao YQ.The antioxidant effects of garlic saponins protect PC12 cells from hypoxia-induced damage.Br J Nutr. 2011 Apr;105(8):1164-72.11.Choi YH, Jin GY, Li GZ, Yan GH.Cornuside suppresses lipopolysaccharide-induced inflammatory mediators by inhibiting nuclear factor-kappa B activation in RAW 264.7 macrophages.Biol Pharm Bull. 2011;34(7):959-66.12.Yu PJ, Ci W, Wang GF, Zhang JY, Wu SY, Xu W, Jin H, Zhu ZG, Zhang JJ, Pang JX, Wu SG.Praeruptorin A inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response in murine macrophagesthrough inhibition of NF-κB pathway activation. Phytother Res. 2011 Apr;25(4):550-6.13.Chen G, Chen Y, Chen H, Li L, Yao J, Jiang Q, Lin X, Wen J, Lin L.The effect of NF-κB pathway on proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelialcells induced by intermittent high glucose.Mol Cell Biochem. 2011 Jan;347(1-2):127-33.14.Li J, Gong Q, Zhong S, Wang L, Guo H, Xiang Y, Ichim TE, Wang CY, Chen S, Gong F, Chen G.Neutralization of the extracellular HMGB1 released by ischaemic damaged renal cells protectsagainst renal ischaemia-reperfusion injury.Nephrol Dial Transplant. 2011 Feb;26(2):469-78.16.Wang HQ, Xu YX, Zhu CQUpregulation of heme oxygenase-1 by acteoside through ERK and PI3 K/Akt pathway conferneuroprotection against beta-amyloid-induced neurotoxicity. Neurotox Res. 2012 May;21(4):368-78.16.Zhu Y, Tian Y, Du J, Hu Z, Yang L, Liu J, Gu L.Dvl2-dependent activation of Daam1 and RhoA regulates Wnt5a-induced breast cancer cellmigration.PLoS One. 2012;7(5):e37823.17.Wang YZ, Liang QH, Ramkalawan H, Zhang W, Zhou WB, Xiao B, Tian FF, Yang H, Li J, Zhang Y, Xu NA.Inactivation of TLR9 by a suppressive oligodeoxynucleotides can ameliorate the clinical signs ofEAN.Immunol Invest. 2012;41(2):171-82.18.Li CC, Yang CZ, Li XM, Zhao XM, Zou Y, Fan L, Zhou L, Liu JC, Niu YC.Hydroxysafflor yellow A induces apoptosis in activated hepatic stellate cells through ERK1/2pathway in vitro.Eur J Pharm Sci. 2012 Aug 15;46(5):397-404.19.Wu J, Zhou Q, Wang Y, Zhou X, Li JMNT inhibits the migration of human hepatocellular carcinoma SMMC7721 cells.Biochem Biophys Res Commun. 2012 Feb 3;418(1):93-7.20.Liu Y, Zhou D, Zhang F, Tu Y, Xia Y, Wang H, Zhou B, Zhang Y, Wu J, Gao X, He Z, Zhai QLiver Patt1 deficiency protects male mice from age-associated but not high-fat diet-inducedhepatic steatosis.J Lipid Res. 2012 Mar;53(3):358-67.21.Wen JP, Liu C, Bi WK, Hu YT, Chen Q, Huang H, Liang JX, Li LT, Lin LX, Chen G.Adiponectin inhibits KISS1 gene transcription through AMPK and specificity protein-1 in thehypothalamic GT1-7 neurons.J Endocrinol. 2012 Aug;214(2):177-89.22.Li F, Jiang Z, Wang K, Guo J, Hu G, Sun L, Wang T, Tang X, He L, Yao J, Wen D, Qin X, Zhang LTransactivation of the human NME5 gene by Sp1 in pancreatic cancer cells.Gene. 2012 Jul 25;503(2):200-7.23.Yang T, Luo F, Shen Y, An J, Li X, Liu X, Ying B, Liao Z, Dong J, Guo L, Wang T, Xu D, Chen L, Wen F.Quercetin attenuates airway inflammation and mucus production induced by cigarette smoke inrats.Int Immunopharmacol. 2012 May;13(1):73-81.24.Shi J, Yin N, Xuan LL, Yao CS, Meng AM, Hou Q.Vam3, a derivative of resveratrol, attenuates cigarette smoke-induced autophagy.Acta Pharmacol Sin. 2012 Jul;33(7):888-96.25.Wang C, Lu J, Wang Y, Bai S, Wang Y, Wang L, Sheng G.Combined effects of FLT3 and NF-κB selective inhibitors on acute myeloid leukemia in vivo.J Biochem Mol Toxicol. 2012 Jan;26(1):35-43. doi: 10.1002/jbt.20411.26.Cao H, Hu Y, Wang P, Zhou J, Deng Z, Wen J.Down-regulation of Notch receptor signaling pathway induces caspase-dependent and caspase-independent apoptosis in lung squamous cell carcinoma cells. APMIS. 2012 Jun;120(6):441-50.27.Zhang Z, Zheng Z, Luo H, Meng J, Li H, Li Q, Zhang X, Ke X, Bai B, Mao P, Hu Q, Wang H.Human Bocavirus NP1 Inhibits IFN-β Production by Blocking Association of IFN Regulatory Factor 3with IFNB Promoter.J Immunol. 2012 Aug 1;189(3):1144-53.28.Zhong X, Li W, Huang X, Zhang L, Yimamu M, Raiput N, Zhou Y, Wang T.Impairment of cellular immunity is associated with overexpression of heat shock protein 70 inneonatal pigs with intrauterine growth retardation.Cell Stress Chaperones. 2012 Jul;17(4):495-505.29.Wang Y, Ma C, Zhang H, Wu J.Novel protein pp3501 mediates the inhibitory effect of sodium butyrate on SH-SY5Y cellproliferation.J Cell Biochem. 2012 Aug;113(8):2696-703.30.Li R, Hou J, Xu Q, Liu QJ, Shen YJ, Rodin G, Li M.High level interleukin-6 in the medium of human pancreatic cancer cell culture suppressesproduction of neurotransmitters by PC12 cell line.Metab Brain Dis. 2012 Mar;27(1):91-100.31.Yang HY, Zhao L, Yang Z, Zhao Q, Qiang L, Ha J, Li ZY, You QD, Guo QL.Oroxylin A reverses multi-drug resistance of human hepatoma BEL7402/5-FU cells viadownregulation of P-glycoprotein expression by inhibiting NF-κB signaling pathway.Mol Carcinog. 2012 Feb;51(2):185-95.32.Yunhe F, Bo L, Xiaosheng F, Fengyang L, Dejie L, Zhicheng L, Depeng L, Yongguo C, Xichen Z, Naisheng Z, Zhengtao Y.The effect of magnolol on the toll-like receptor 4/nuclear factor kappa B signaling pathway inlipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice.Eur J Pharmacol. 2012 Aug 15;689(1-3):255-61.33.Wei P, Ma P, Xu QS, Bai QH, Gu JG, Xi H, Du YG, Yu C.Chitosan oligosaccharides suppress production of nitric oxide in lipopolysaccharide-induced N9murine microglial cells in vitro.Glycoconj J. 2012 May 24.34.Yang Z, Gu P, Shao X, Li Z, Zhou Y, Lu L, Chou KY.Mutated major histocompatibility complex class II transactivator up-regulates interleukin-33-dependent differentiation of Th2 subset through Nod2 binding for NLR (NOD-like receptor) signaling initiation.J Biol Chem. 2012 Mar 23;287(13):9972-81.35.Wei M, Chu X, Jiang L, Yang X, Cai Q, Zheng C, Ci X, Guan M, Liu J, Deng X.Protocatechuic acid attenuates lipolysaccharide-induced acute lung injury.Inflammation. 2012 Jun;35(3):1169-7836.Zhang L, Jiang G, Yao F, He Y, Liang G, Zhang Y, Hu B, Wu Y, Li Y, Liu H.Growth inhibition and apoptosis induced by osthole, a natural coumarin, in hepatocellularcarcinoma.PLoS One. 2012;7(5):e37865.\37.Zhu G, Wang X, Wu S, Li QInvolvement of activation of PI3K/Akt pathway in the protective effects of puerarin against MPP+-induced human neuroblastoma SH-SY5Y cell death. Neurochem Int. 2012 Mar;60(4):400-8.38.Li P, Huang JJ, Ni JJ, Sun FYVEGF evokes reactive astroglia to convert into neuronal cells by affecting the biological functionof MeCP2 in adult rat brain after cerebral ischemia. Neurochem Int. 2012 Jul 20.39.Li J, Shen L, Lu FR, Qin Y, Chen R, Li J, Li Y, Zhan HZ, He YQ.Plumbagin inhibits cell growth and potentiates apoptosis in human gastric cancer cells in vitrothrough the NF-κB signaling pathway.Acta Pharmacol Sin. 2012 Feb;33(2):242-9.40.Shi F, Yang L, Kouadir M, Yang Y, Wang J, Zhou X, Yin X, Zhao D.The NALP3 inflammasome is involved in neurotoxic prion peptide-induced microglial activation.J Neuroinflammation. 2012 Jul 11;9:73.41.Shi JX, Su X, Xu J, Zhang WY, Shi YHuR post-transcriptionally regulates TNF-α-induced IL-6 expression in human pulmonarymicrovascular endothelial cells mainly via tristetraprolin.Respir Physiol Neurobiol. 2012 Apr 30;181(2):154-61.42.Li J, Wang K, Chen X, Meng H, Song M, Wang Y, Xu X, Bai Y.Transcriptional activation of microRNA-34a by NF-kappa B in human esophageal cancer cells.BMC Mol Biol. 2012 Jan 31;13:4.43.Zhang H, Zhang X, Wu X, Li W, Su P, Cheng H, Xiang L, Gao P, Zhou G.Interference of Frizzled 1 (FZD1) reverses multidrug resistance in breast cancer cells through theWnt/β-catenin pathway.Cancer Lett. 2012 Oct 1;323(1):106-1344.Tang J, Guo YS, Zhang Y, Yu XL, Li L, Huang W, Li Y, Chen B, Jiang JL, Chen ZNCD147 induces UPR to inhibit apoptosis and chemosensitivity by increasing the transcription ofBip in hepatocellular carcinomaCell Death Differ. 2012 May 18. doi: 10.1038/cdd.2012.60.45.Zhang Y, Lai Y, Chen HQ, Liu YF.AP-1 and NF-κB transcriptionally regulate interleukin-8 in EA.Hy926 cells under shear stress.Cell Biol Int. 2012 Mar 1;36(3):251-4.46.Cao X, Zhou M, Wang C, Hou L, Li Y, Chen LMusca domestica pupae lectin improves the immunomodulatory activity of macrophages by activating nuclear factor-κB.J Med Food. 2012 Feb;15(2):145-51.47.Liang ZJ, Zhuang H, Wang GX, Li Z, Zhang HT, Yu TQ, Zhang BD.MiRNA-140 is a negative feedback regulator of MMP-13 in IL-1β-stimulated human articularchondrocyte C28/I2 cells.Inflamm Res. 2012 May;61(5):503-9.48.Qin Y, Sun CY, Lu FR, Shu XR, Yang D, Chen L, She XM, Gregg NM, Guo T, Hu Y.Cardamonin exerts potent activity against multiple myeloma through blockade of NF-κB pathwayin vitro.Leuk Res. 2012 Apr;36(4):514-20.49.Gao Q, Qi L, Wu T, Wang J.An important role of interleukin-10 in counteracting excessive immune response in HT-29 cellsexposed to Clostridium butyricum.BMC Microbiol. 2012 Jun 8;12:100.50.Jin H, Zhu ZG, Yu PJ, Wang GF, Zhang JY, Li JR, Ai RT, Li ZH, Tian YX, Zhang WX, Wu SG.Myrislignan Attenuates Lipopolysaccharide-induced Inflammation Reaction in Murine MacrophageCells Through Inhibition of NF-κB Signalling Pathway Activation.Phytother Res. 2012 Feb 1..。
