酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明

酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）储存条件：Carrier DNA-20℃保存，其它组分可室温保存，有效期1年。

产品内容：Components SK2400-200PEG Solution50mlLiAc Solution50mlCarrier DNA2×1ml说明书1份酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。

-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5mm的短线，在30℃培养2-4天。

待酵母单菌落长至2mm长时，接种。

3.首先把酵母细胞接种到3ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。

收集细胞，1000g，离心5min,去上清。

5.沉淀用30-50ml的无菌的去离子水悬浮。

1000g，离心5min，去上清。

6.沉淀用合适体积的1/10浓度的LiAc悬浮（30ml的酵母菌最多用不超过1mL的1/10浓度的LiAc悬浮，通常100μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。

1/10浓度的LiAc稀释方法：100μl LiAc Solution+900μl无菌水。

7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5ml的离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。

1000g，离心5min，去上清。

制备好的感受态细胞备用。

酵母转化：1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μl的预混液。

PEG Solution240μlLiAc Solution36μlCarrier DNA10μl质粒（大约200ng/μl）5μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）总体积360μl（不足体积用ddH2O补充）2.吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。

一、实验目的1. 学习酵母蛋白的提取方法。

2. 掌握蛋白质的检测方法。

3. 了解酵母蛋白的生理活性。

二、实验原理酵母蛋白是一种重要的微生物蛋白，具有丰富的氨基酸组成和生理活性。

本实验采用酸法提取酵母蛋白，通过检测蛋白质含量和生理活性，验证提取方法的可行性。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜酵母菌（酿酒酵母）。

2. 试剂：盐酸、硫酸铵、NaOH、BCA蛋白定量试剂盒、生理盐水、生理盐酸盐缓冲液等。

四、实验步骤1. 酵母蛋白提取（1）将新鲜酵母菌接种于YPD培养基中，30℃培养24h。

（2）收集培养液，用无菌生理盐水洗涤酵母细胞3次。

（3）将洗涤后的酵母细胞用无菌生理盐水悬浮，加入适量盐酸（pH 4.5）。

（4）在冰浴条件下，用高速匀浆机将酵母细胞匀浆。

（5）将匀浆液离心（8000r/min，10min），取上清液即为酵母蛋白提取液。

2. 蛋白质含量检测（1）取适量酵母蛋白提取液，按照BCA蛋白定量试剂盒说明书进行操作。

（2）根据标准曲线计算蛋白质含量。

3. 生理活性检测（1）取适量酵母蛋白提取液，按照生理活性检测方法进行操作。

（2）根据检测结果，分析酵母蛋白的生理活性。

五、实验结果与分析1. 蛋白质含量检测结果通过BCA蛋白定量试剂盒检测，酵母蛋白提取液中的蛋白质含量为2.0mg/mL。

2. 生理活性检测结果通过生理活性检测，酵母蛋白提取液具有一定的生理活性。

六、实验结论本实验采用酸法提取酵母蛋白，通过检测蛋白质含量和生理活性，验证了提取方法的可行性。

酵母蛋白提取液具有较高的蛋白质含量和一定的生理活性，为后续研究提供了实验基础。

酵母阳性克隆快速鉴定试剂盒使用说明书产品编号：SK2420保存条件：-20℃储存，有效期1年。

包装内容：产品内容SK2420-200T 酵母质粒快速提取缓冲液（SK2420-1）5×1mL2×PCR MasterMix（FSL2610）5×1mL说明书1份产品简介：使用本试剂盒能够快速提取的酵母质粒，大幅减少酵母阳性克隆的鉴定时间。

仅适用于通过PCR扩增的方法鉴定酵母阳性克隆或获得的PCR产物用于测序分析。

如想获得纯度高酵母质粒请选用酵母质粒提取试剂盒（SK2410）。

使用方法:一、酵母质粒提取1.吸取20μL的酵母质粒快速提取缓冲液放入1.5mL的离心管中。

2.用无菌枪头挑取长度1~2mm的酵母菌悬浮在装有缓冲液的离心管中。

3.在95°C的水浴锅或者金属浴中煮5min-10min。

4.冰上放置2min，常温条件下12,000rpm，离心5min，吸取上清移至新的离心管。

得到的质粒可用于PCR分析。

二、PCR扩增目的条带。

建议每10μL PCR反应体系加入1μL提取的酵母质粒，40个PCR循环数。

PCR反应体系:试剂20μl反应体系终浓度2×PCR MasterMix10μl1×Primer F,10µM0.5μl0.25μMPrimer R,10µM0.5μl0.25μMTemplate DNA2μl<1μg/reaction dd H2O up to20μl-PCR反应条件：2×Taq MasterMix反应温度反应条件循环94℃6min194℃30secTM℃30sec40 72℃1kb/min72℃7min14℃+∞1注意事项：1.建议提取酵母质粒前先把酵母克隆在平板上划1cm左右的短线，生长2-3天后，挑取1~2mm的酵母菌用做质粒提取。

2.可根据酵母菌的多少适当增加或减少酵母质粒提取缓冲液的使用量。

试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次酵母裂解液室温15 ml 30 ml 60 ml蛋白沉淀液室温 5 ml 10 ml 20 mlDNA溶解液室温 5 ml 5 ml 10 ml本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时酵母裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。

在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下，酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。

2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。

3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml离心管；12,000rpm离心2分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。

2.高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。

3.加入300μl酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1毫升的枪头反复吹打混匀。

酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。

4.将裂解物放置在70℃水浴15-30分钟。

如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。

5.冰上至少5分钟使回复到室温。

酵母蛋白提取试剂酵母蛋白提取试剂是一个可以从酵母细胞中提取蛋白质的试剂。

酵母蛋白提取试剂包括几个组分，包括缓冲液、还原剂、表面活性剂和蛋白酶抑制剂。

这些组分协同作用，可有效地提取酵母细胞中的蛋白质，用于鉴定、分析和研究酵母蛋白。

1. 缓冲液：缓冲液提供恰当的 pH 值，帮助蛋白质稳定，并防止蛋白质的降解和失活。

缓冲液也有助于酵母膜的溶解。

2. 还原剂：还原剂帮助去除酵母细胞中的还原剂，使蛋白质结构更加开放，更容易与其他分子相互作用。

3. 表面活性剂：表面活性剂增加膜上张力，有助于溶解酵母细胞膜，并使蛋白质更容易进入溶液。

4. 蛋白质酶抑制剂：当酵母细胞破裂时，内源性蛋白酶会降解蛋白质。

蛋白酶抑制剂可以防止蛋白酶的活性，保护蛋白质。

1. 称取酵母菌落（大约10-20毫克）。

2. 加入酵母蛋白提取试剂，混匀，并放入70℃水浴中加热10分钟。

3. 冷却至室温，随后进行机械打碎，如用超声波进行打碎，取10秒打碎，之后静置15秒，重复上述操作6-9次。

4. 超声波打碎后，应将细胞碎片离心，以去除细胞碎片和细胞壁碎片。

5. 快速转移清亮的上清液到一个新的离心管中。

6. 风干或用沸水浴进行浓缩（加热的时间应小于5分钟），以浓缩蛋白质。

1. 操作简便，可快速提取酵母蛋白质。

2. 组成的各种成分，有助于保护蛋白质的稳定性。

3. 可用于纯化多种酵母蛋白，并可使蛋白质进入溶液。

4. 成分与其他酵母蛋白质提取方案相比，价格便宜。

总之，酵母蛋白提取试剂是酵母生物学研究中必不可少的试剂，提取酵母细胞中的蛋白质是酵母生物学研究和其他生物学研究的基础。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60072.2 v.A GENMED酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在使用化学去垢和物理方法相结合，快速且充分裂解酵母细胞壁，通过生物酶的萃取，获得完整而纯化的可溶性细胞壁蛋白成分的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

可直接用于后续二维电泳、蛋白分离、结构分析、质谱分析、蛋白组学图谱分析等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取完整。

技术背景酵母细胞壁在细胞生长和分裂时，决定着细胞的形态和完整性。

酵母细胞壁是一种动力结构，由多糖和蛋白，例如葡聚糖（glucan）、甘露聚糖（mannan）、甲壳素（chitin）等构成的超分子网络，适应酵母生理和形态变化，包括单倍体细胞接合（conjugation）、孢子形成（sporulation）或假菌丝形态（pseudohyphal growth）等。

酵母细胞壁蛋白约占5％的细胞壁成分，含有400多种蛋白分子。

采用化学法和生物酶解法，可以获得100％完整的胞壁蛋白成分。

产品内容GENMED平衡液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED活性液（Reagent C）微升GENMED酸珠液（Reagent D）毫升GENMED清理液（Reagent E）毫升GENEMD净化液（Reagent F）毫升GENMED萃取液（Reagent G）毫升GENMED酸性液（Reagent H）毫升GENMED水解液（Reagent I）毫升GENMED中和液（Reagent J）毫升GENMED酶解液（Reagent K）微升产品说明书1份保存方式保存GENMED裂解液（Reagent B）、GENMED活性液（Reagent C）、GENMED萃取液（Reagent G）和GENMED酶解液（Reagent K）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；GENMED水解液（Reagent I）避免光照，有效保证6月用户自备50毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器2毫升离心管：用于样品操作的容器烧杯：用于样品煮沸台式离心机：用于细胞收集和去除杂质微型台式离心机：用于胞壁蛋白收集和去除杂质分光光度仪：用于测定酵母细胞浓度涡旋震荡仪：用于裂解酵母细胞壁实验步骤1．准备好50毫升新鲜酵母样品（注意：通过选择性培养液培养获得酵母细胞）2．在分光光度仪上测定OD600（注意：建议达到1 OD，即1 X 107细胞/毫升；总量为5 X 108细胞） 3．转移到预冷的50毫升锥形离心管4．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g5．小心抽去上清液6．加入 毫升GENMED平衡液（Reagent A），混匀7．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g8．小心抽去上清液9．重复实验步骤6至8二次10．加入 微升GENMED裂解液（Reagent B）11．加入 微升GENMED活性液（Reagent C）12．加入 微升GENMED酸珠液（Reagent D）13．在4℃环境下，持续强力涡旋震荡2分钟，间歇1分钟14．重复实验步骤12三次15．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g16．小心移取上清液（500微升）到新的15毫升锥形离心管（收集管）17．加入 微升GENMED裂解液（Reagent B）到上述含有GENMED酸珠液（Reagent D）的锥形离心管18．涡旋震荡15秒19．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g20．小心移取上清液（500微升）合并到上述收集管21．重复实验步骤16至19二次22．将收集管（总量为2毫升上清液）放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g23．小心抽掉上清液，保留沉淀颗粒――此为细胞壁成分24．加入 微升4℃预冷的GENMED清理液（Reagent E），混匀25．转移到新的2毫升离心管26．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g27．小心抽掉上清液28．加入 微升4℃预冷的GENMED净化液（Reagent F），混匀29．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g30．小心抽掉上清液31．加入 微升4℃预冷的GENMED清理液（Reagent E），混匀32．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g33．小心抽掉上清液34．加入 微升GENMED萃取液（Reagent G），混匀35．置于沸水中，煮沸孵育10分钟36．置于冰槽里5分钟37．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM；例如eppendorf 5415） 38．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管39．放进－70℃的冰箱里备用或冻干――此为90％可溶性胞壁蛋白40．加入 微升4℃预冷的GENMED清理液（Reagent E），混匀上述沉淀颗粒41．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g42．小心抽掉上清液43．重复实验步骤39至41一次44．加入 微升4℃预冷的GENMED酸性液（Reagent H），混匀45．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g46．小心抽掉上清液47．重复实验步骤43至45一次48．加入 微升GENMED水解液（Reagent I），混匀49．室温下孵育48小时，避免光照50．加入 微升GENMED中和液（Reagent J），混匀51．加入 微升GENMED酶解液（Reagent K），混匀52．室温下孵育24小时53．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g54．移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为10％难溶性胞壁蛋白（例如葡聚糖、甘露聚糖、甲壳素类糖蛋白）55．放进－70℃的冰箱里备用或冻干56．（选择步骤）合并上述可溶性胞壁蛋白和难溶性胞壁蛋白到1管――此为完全胞壁蛋白注意事项1．本产品为20次操作2．所有操作均须在无菌和4℃状态下进行，除步骤中规定的之外3．操作时须戴手套4．GENMED水解液（Reagent I）含有毒物质，注意操作安全5．细胞生长切莫过度，否则影响蛋白表达和细胞裂解6．50毫升（0D600＝1）菌液湿重约1克7．50毫升（0D600＝1）菌液可获得约250毫克湿重的胞壁成分，其中94％为多糖，5％为蛋白8．本产品可萃取约400多种胞壁蛋白，其中10％为难以萃取的β－葡聚糖和甲壳素链接的甘露糖蛋白成分9．制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融10．用户可以根据需求，浓缩或冻干蛋白溶液：建议使用GENMED三氯醋酸小量蛋白浓缩沉淀试剂盒（GMS30001）11．本公司提供系列酵母试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定无蛋白酶污染使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

酵母基因组DNA 快速提取试剂盒目录号：DN20适用范围：适用于快速提取各种酵母基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存50次 平衡液 室温 5 ml 缓冲液YB 室温20 ml 结合液CB 室温11 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml Lytic Enzyme -20℃2.5 ml 蛋白酶K 粉（可选）20mg/ml -20℃20mg 吸附柱AC 室温50个 收集管（2ml ） 室温 50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:目录编号包装单位 DN200150次 DN2031 50次（带蛋白酶K ，带Lytic Enzyme ）1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状（20mg），收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解配制成20mg/ml溶液，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。

3.Lytic Enzyme为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，－20℃保存。

蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。

适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。

约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。

纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

酵母细胞经lytic Enzyme处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

一般实验室使用，仅用于体外一步法酵母质粒快速提取试剂盒一步法快速提取酵母质粒目录号：DP5001（50次）DP5002（100次）使用手册2007年4月，第1版Bioteke Corporation一、试剂盒组成、储存、稳定性本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

注意事项1．裂解液YE低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2．避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

3．操作过程请带手套，一旦有试剂接触到皮肤请立即用水冲洗。

二、原理简介本试剂盒提供了一种简单快捷的提取酵母质粒的方法，不需要任何破壁酶和玻璃珠，能大大的缩短操作时间，在30分钟左右的时间提取高纯度的酵母质粒DNA。

三、试剂盒特点1．不需要破壁酶。

2．不需要借助玻璃珠破壁。

3．时间短，方便快捷。

四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！）1．所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到14，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2．开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3．为了最佳效果，最好使用新鲜标本，否则会严重降低产量。

五、操作步骤1.用1.5ml的离心管收集菌体，14000rpm离心20秒沉淀菌体(菌液1.5ml培养24小时左右至OD260达到1-1.5)，倒掉上层液体。

2.加入100ul的裂解液YE重悬菌体，加入等体积的酚/氯仿（1：1），激烈旋涡震荡10分钟。

3.65℃水浴5分钟，期间保持静置，不要摇动。

4.14000rpm离心5分钟收集上清液。

5.转移上清（注意不要触动界面物质），并加入2倍体积的95%乙醇，室温放置5 min后，以12,000 rpm离心5 min，弃尽上清，沉淀用70％无水乙醇洗涤2次，放置真空浓缩仪抽干5 min（或者常温晾干）。

6.100μl洗脱缓冲液EB溶解沉淀物，于-20℃保存。

酵母质粒提取试剂盒操作步骤及注意事项货号：D1160规格：50T/100T保存：室温（15℃-25℃）干燥保存，复检期为12个月。

2℃-8℃保存时间更长。

试剂盒组成D1160-50T D1160-100TRNase A300ul500ul酵母破壁酶 1.25ml 1.25ml×2山梨醇Buffer25ml50mlβ-巯基乙醇300ul600ul溶液YP115ml30ml溶液YP215ml30ml溶液YP320ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

YP1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

产品简介：酵母质粒提取试剂盒采用酶法破碎酵母细胞壁和碱裂解法裂解酵母细胞来提取酵母质粒DNA。

所采用的酵母破壁酶能有效地破坏酵母细胞壁，提高酵母质粒DNA的产量。

吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。

使用酵母质粒提取试剂盒提取的酵母质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学实验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。

操作步骤：1、取1-5ml酵母培养物（不超过5×107cells），12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、酵母细胞壁的破除：A、酶法：向酵母菌体中加入470ul山梨醇Buffer，充分悬浮菌体，加入25ul酵母破壁酶和5ulβ-巯基乙醇，充分混匀，30℃处理1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。

12000rpm 离心1min，弃上清，收集沉淀。

向沉淀中加入250ulYP1（请先检查是否已加入RNaseA），充分悬浮沉淀。

酵母菌鉴定试剂盒检测标准操作规范1. 目的规范酵母菌鉴定试剂盒检测标准操作规程。

2. 检验程序的原理ID 32 C 鉴定试条是由32个含干燥碳水化合物的试验杯所组成。

将待测酵母菌的菌悬液接种到半固体微量培养基中。

经24-48小时孵育后，可用ATBTMExpressionTM 仪或mini API ®仪自动检测或目测检测每个试验杯的生长情况。

鉴定结果借助于相应的鉴定软件得到。

3. 性能特征无4. 样本要求ID 32 C 鉴定试条不能直接用于临床或其它标本（例如泌尿生殖道标本、呼吸道标本、血等等）。

被鉴定的微生物必须首先根据标准的微生物技术在适当的培养基上进行分离。

5. 患者准备参见《标本采集程序》。

6. 容器和添加剂类型参见《标本采集程序》。

7. 所需的仪器和试剂7.1 API 悬浮培养基，2mL（产品号：70 700）7.2 比浊计（产品号：99 234）或A TB 比浊仪或麦氏标准比浊管（70 900），使用2McF 浓度。

7.3 ATB Expression 仪或miniAPI 仪或apiwebTM（鉴定软件（Ref 40 011）.7.4 ATB 电子加样枪或A TB 自动接种器和Tip 头（产品号：15 710）8. 环境和安全控制参见《质量管理》。

9. 校准程序无10. 程序性步骤10.1 试条的准备10.1.1 从包装袋中取出鉴定试条。

10.1.2 弃去干燥剂。

10.1.3 盖上试条盖子。

10.1.4 在鉴定试条的长端记录菌株的编号（不要记录在盖子上，因为操作过程中很容易将盖子错放到其它试条上）。

10.2 接种物的制备10.2.1 按本说明书中“警告和注意事项”一节中的要求打开一支API 悬浮培养基安瓿(2ml) 或含2ml 无任何添加剂的无菌蒸馏水试管。

10.2.2 从培养皿上取一个或几个待测菌落，建议用（24-48 小时菌龄）新鲜菌落。

10.2.3 用ATB比浊仪或其它比浊仪制备浊度相当于2个麦氏单位的菌悬液，或与麦氏标准比浊管比较。

产品编号
CAT：RY8001
保存条件
-20 ℃保存，有效期1年
产品组分
产品概述
本试剂盒含有绿色染料，可在反应结束后直接进行电泳，能够快速扩增酵母中重组质粒目的基因片段，省时省力。

Yeast lysis buffer用于破坏酵母的细胞壁；2×Yeast PCR mix含PCR buffer，dNTPs，MgCl2，热启动快速Taq酶，客户只需加入引物和模板/酵母菌落即可进行扩增，减少移液操作，提高了稳定性，且2×Yeast PCR mix中含有保护剂，反复冻融后仍可保持稳定性。

PCR产物的3’端带有A，可直接用于TA克隆。

实验流程
1、吸取3-3.5 μl Yeast lysis buffer到PCR管中，用无菌枪头或牙签蘸取适量酵母菌至PCR管中。

2、吸打（搅拌）混匀后，置于98 ℃反应10-20 min。

3、再准备一支无菌PCR管，按下表配制反应体系。

PCR反应体系：
* 步骤2的反应液短暂离心,混匀后吸取1 μl作为模板，为佳
PCR反应条件：
* 该退火温度根据引物的Tm值进行调整，一般设置Tm -5 ℃
案例：
图注：从SD/-Leu-Trp-His-Ade培养基中挑取酵母菌落直接进行酵母菌落PCR
南京瑞源生物技术有限公司坐落于南京市栖霞区生命科技园，专注于基因组高通量研究领域，致力于生物高科技研发，目前产品的技术水平已达到省级实验水平，瑞源生物立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学技术服务，自2019年创立以来，全体员工致力于利用酵母系统研发新药物靶点，专注于生物学研究，长期与全国各大农林/医药院校在大型科研技术研发上紧密合作。