突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建

增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达段斯亮;于声;苏晓庆【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2008(30)10【摘要】目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达栽体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况.方法据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克隆EGFP编码序列;将其亚克隆入表达载体pTWIN1,得到以EGFP为标记的原核表达载体pTWIN-EGFP.转化大肠杆菌ER2566菌株,IPTG诱导EGFP基因表达.结果经过IPTG诱导后,细菌培养物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光.结论成功构建了原核表达载体pTWIN-EGFP,为应用EGFP作为报告基因和筛选标记奠定了实验基础.【总页数】4页(P1475-1477,封2)【作者】段斯亮;于声;苏晓庆【作者单位】柳州医学高等专科学校,柳州市,545006;贵阳医学院,贵阳市,550004;柳州医学高等专科学校,柳州市,545006【正文语种】中文【中图分类】R394.64【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 [J], 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎3.小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达 [J], 廖丽姿;肖金刚;杨苗苗;孔子任;孙钦策;田卫东4.增强型绿色荧光蛋白与肝细胞生长因子共表达载体的构建及表达 [J], 李兴升;王志刚;苏琳;任建丽;杨春江;郑元义;冉海涛;李攀5.颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达 [J], 何永林;朱道银;伊正君;杨春;徐蕾;王瑜伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

增强型绿色荧光蛋白RNAi表达载体的构建和鉴定干惠珠;张桂珍;卜丽莎;杨绍娟;高申;郑德明【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2011(015)004【摘要】目的构建靶向增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的RNA干扰质粒载体.方法设计并合成针对EGFP编码区的模板寡核苷酸单链,克隆入pSilencerTM 3.1-H1 neo载体中,对重组质粒进行酶切鉴定和DNA序列测定.结果重组质粒经限制性内切酶酶切得到66 bp和4.3 kb条带;重组阳性克隆测序结果与实验设计的模板寡核苷酸序列相符.结论成功构建靶向EGFP的RNA干扰表达载体,为RNA干扰技术在实验室的进一步开展奠定基础.【总页数】3页(P619-621)【作者】干惠珠;张桂珍;卜丽莎;杨绍娟;高申;郑德明【作者单位】吉林大学中日联谊医院,肿瘤血液科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,中心研究室,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,中心研究室,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,中心研究室,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,中心研究室,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,中心研究室,吉林,长春130033【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定 [J], 白志勋;陆静;杨亦彬2.针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定 [J], 马龙洋;刘家云;许彦鸣;贾林涛;王成济;杨安钢3.增强型绿色荧光蛋白基因与hTIMP 1基因融合表达载体的构建及鉴定 [J], 徐昭;周丽娟;李广平4.构建携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的重组反转录病毒表达载体pLXSN-Kozak-EGFP及鉴定 [J], 杨天燕;王乃平;王劲;刘冠达;韦锦斌5.同源重组快速构建百合LCHS2基因RNAi表达载体及其鉴定 [J], 化占勇;刘雅莉;徐伟荣;王跃进;张雄飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

增强型绿色荧光蛋白与MAGE-n共表达载体的构建及表达黄亚渝;童卫;马加海;董海龙;叶菁;陈广生;张秀敏;隋延仿【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2006(14)7【摘要】目的:构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与人黑色素瘤抗原-n(melanoma antigen n,MAGE-n)真核共表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达.方法:采用酶切法从pLXSN-MAGE-n 中得到MAGE-n基因片段,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n.用脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中EGFP的表达,RT-PCR、Western blot和免疫组化分别检测阳性克隆中MAGE-n mRNA和蛋白的表达水平.结果:从pLXSN-MAGE-n重组质粒中酶切获得一条约950bp的片段,成功构建了真核共表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-n,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见到EGFP的表达,产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-n mRNA的表达,Western blot和免疫组化检测到MAGE-n蛋白的表达.结论:成功构建了共表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-n,获得了稳定共表达EGFP和MAGE-n的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为进一步研究MAGE-n在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础.【总页数】4页(P783-786)【作者】黄亚渝;童卫;马加海;董海龙;叶菁;陈广生;张秀敏;隋延仿【作者单位】第四军医大学西京医院血液科,陕西,西安,710032;第四军医大学西京医院医教部教务科,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R730.3【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 [J], 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎3.猪传染性胃肠炎病毒S与M基因融合表达载体及IRES连接双基因共表达载体的构建 [J], 贺小英;彭树英;杨瑞锋;张涌4.α2B-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建 [J], 王震;李玉蕾;周培岚;苏瑞斌;傅风华5.增强型绿色荧光蛋白与肝细胞生长因子共表达载体的构建及表达 [J], 李兴升;王志刚;苏琳;任建丽;杨春江;郑元义;冉海涛;李攀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

nm23-H1-绿色荧光蛋白融合基因真核表达载体的构建和表达车国卫;周清华;刘伦旭;覃杨;孙芝琳【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2005(18)1【摘要】目的:构建包含人野生型nm23-H1cDNA和绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pLXSN-nm23-H1- EGFP,用以研究nm23-H1逆转肺癌转移表型的分子机制. 方法:应用基因工程和分子克隆技术,将nm23-H1-EGFP基因克隆到真核表达载体pLXSN中,得到真核重组载体pLXSN-nm23-H1-EGFP;脂质体法转染包装细胞系PA317,得到包含nm23-H1-EGFP的逆转录病毒,并感染人肺癌细胞株L9981. 结果:构建了pLXSN-nm23-H1-EGFP逆转录病毒真核表达载体,L9981细胞能够表达nm23-H1-EGFP融合蛋白. 结论:成功构建真核表达载体pLXSN-nm23- H1-EGFP,并能在L9981细胞中持续、稳定和高效表达nm23-H1-EGFP 融合蛋白.【总页数】4页(P1-3,7)【作者】车国卫;周清华;刘伦旭;覃杨;孙芝琳【作者单位】四川大学华西医院,四川省肺癌分子重点实验室,胸心外科,四川成都,610041;四川大学华西医院,四川省肺癌分子重点实验室,胸心外科,四川成都,610041;四川大学华西医院,四川省肺癌分子重点实验室,胸心外科,四川成都,610041;四川大学华西医院,四川省肺癌分子重点实验室,胸心外科,四川成都,610041;四川大学华西医院,四川省肺癌分子重点实验室,胸心外科,四川成都,610041【正文语种】中文【中图分类】Q782【相关文献】1.人雌激素受体β绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达 [J], 李慧;安莲效;郭静;顾月清2.携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体的构建及其在转染乳腺癌MCF-7细胞的表达 [J], 郝苗;齐凤杰;马玲3.绿色荧光蛋白-EGFRvⅢ真核表达载体的构建及在Tca8113细胞中的表达 [J], 李冠颖;胡温庭;吴正华4.真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK-1的构建及其在结直肠癌SW480细胞内的表达 [J], 武金宝;党彤;陈学清;张振书;张宏权;宋于刚5.颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达 [J], 何永林;朱道银;伊正君;杨春;徐蕾;王瑜伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建
徐洁杰;张伟娟;王浩明;胡火珍
【期刊名称】《四川大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2005(042)002
【摘要】构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的真核表达载体pCDNA3.1(+)-EGFP,转染至培养的Hela细胞中成功表达,并发出绿色荧光,证明EGFP一种良好的报告基因和筛选标记.
【总页数】3页(P386-388)
【作者】徐洁杰;张伟娟;王浩明;胡火珍
【作者单位】四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室,成都,610041;湖北省浠水县人民医院,湖北浠水,438200;四川大学生命科学学院细胞生物学教研室,成都,610041
【正文语种】中文
【中图分类】Q78
【相关文献】
1.携带增强绿色荧光蛋白基因的人PRKCB1真核表达载体构建、转染及活性鉴定[J], 段炼;周波;李启富
2.携带增强型绿色荧光蛋白基因的shRNA真核表达载体的构建 [J], 姜晓兵;赵洪洋;周凤
3.携带增强绿色荧光蛋白基因的TSLC1真核表达载体构建及鉴定 [J], 肖钟迪;张玉成;房学东
4.携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体的构建及其在转染乳腺癌MCF-7细胞的表达 [J], 郝苗;齐凤杰;马玲
5.携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建 [J], 张黎声;邱小忠;余磊;秦建强;陆云涛;杨俊;欧阳钧
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利用In-Fusion技术构建存活素-增强型绿色荧光蛋白融合基因重组慢病毒表达载体【摘要】目的：本研究以构建存活素增强型绿色荧光蛋白(survivin ＆efp)融合基因慢病毒表达载体（pcfusurvivin）为例来探讨infusion克隆技术在常规载体构建中的应用价值。

方法：根据infusion技术原理，克隆引物设计时，在survivin 同源序列的两侧分别引入经ae i线性化的载体pcfu两端各15个碱基，将以此引物扩增的聚合酶链式反应（pcr）产物与线性化pcfu用infusion交换酶在室温下作用30min，使survivin特异性扩增产物两端的序列与线性化载体两端的序列发生同源交换，取2μl交换液进行转化，挑取阳性克隆，进行酶切和测序鉴定。

将鉴定正确的阳性克隆瞬时转染293t 细胞，观察survivin ＆efp融合蛋白在293t细胞中的表达。

结果：每2μl克隆交换液获得大约103个克隆数，阳性率达90%以上，瞬时转染pcfusurvivin可获得survivin ＆efp融合蛋白在293t细胞中的表达。

结论：该技术是一种非连接酶依赖性克隆技术，使基因克隆步骤简化并大大节省了实验时间和经费。

关键词】基因；克隆细胞；基因，病毒value of infusion clonin techhique on routine vector construction lin chao ui fan lin chen lian londepartment of cardioloy，union hospital，fujianmedical university，fuzhou，fujian，350001，abstract：objective:to introduce a simple method for the clonin of pcr products.methods:the infusion clonin technique was described by constructin a rebinant lentivirus vector (pcfu) with survivin ＆efp fusion ene as a sample.the survivin cdna was amplified with survivin ene specific primers with 15 bp extensions homoloous to the pcfu ends.by the action of the infusion enzyme at room temperature for 30 minutes，the sinlestranded pcr frament and vector ends were fused due to the 15 bp homoloy.finally，clones derived from transformation were chosen randomly and identified.results:about 103 positive clones for inserts were obtained after transformation with 2 μl of exchanin products，and the ratio of the positive colonies was more than 90%.after 24 h the pcfusurvivin was transfected into 293t eukaryotic cells，the expression of the survivin ＆efp fusion ene can be confirmed with fluorescence microscope.conclusion:the liation independent property makes the infusion pcr clonin technique rapid，reliable and hiher costeffective，avoidin the need for multiple sub clonin steps.key words：enes;clone cells;enes,viral传统的聚合酶链式反应（pcr）产物克隆技术包括补平末端克隆、ta克隆以及连接酶依赖性克隆等。

二实验方法“。

”４”１技术路线１．１质粒构建藉弼丈学矮士学柱论定椽穗杰结果１质粒ｐＣＤＮＡ３．１“）和ｐＥＧＦＰ一１的双酶切鉴定ｐＣＤＮＡ３．１（＋）质粒经过ＢａｍＩｔＩ、ＮｏｔＩ双酶切后，电泳结聚（见阉ｌ一８）显示有一条５。

４Ｋｂ麓絷带，穰据ｐＣＤＮＡ３。

ｉ（＋）瘊粒酶窃图谱分析，该质救含有ＢａｍＨｌ和ＮｏｔＩ酶切位点各一个，经过双酶切后得到线性化载体ｐＣＤＮＡ３．１（＋）和另外一个很短的片段，电泳时这令缀籁静冀蔽燕出了璩瓣糖凝黢，最蘑凝胶上褥剿的条带聿誊合线往化载体ｐＣＤＮＡ３．１（＋）的长度，故可以验证所获质粒确为ｐＣＤＮＡ３．１（十）质粒。

ｐＥＧＦＰ－１蒺载经过８ａ硎ｉ、Ｎｏｔ｛瑟酶切鑫，电濠结莱（冕圈ｌ—Ｃ）鼹示有瓶条分别为３．５Ｋｂ卸０。

７Ｋｂ的祭带，根据ｐＥＧＦＰ—ｌ质粮酶切图谱分析，该质粒同样含商ＢａｍＨＩ和ＮｏｔＩ酶切位点各一个，经过载酶切籁得嚣露静蘩茜ＥＧＦＰ片段帮勇终一个鞍长豹的片段，电泳时凝胶上的条带符合鼹个片段的长度，数可以验证雕获质粒确为ｐＥＧＦＰ一１质粮。

豳ｌｐＣＤＮＡ３．１（＋）羊¨ｐＥＧＦＰ—ｌ质粒的酶切分毫斥Ａ：ＤＮＡ分子量标记：Ｂ：ｐＣＤＮＡ３．１（＋）质粒ＢａｍＨＩ、ＮｏｔＩ舣酶切Ｃ：ｐＥＧＦＰ－ｔ矮粒ＢａｍＨ｛、Ｎｏｔ｛鼹酶鞠鞫ｊｌ｜大学疆士学盈论文撩谗杰２垂缣质粒ｐＣＤＮＡ３．１（＋）－ＥＧＦＰ的酶稍釜定重组厦粒ｐＣＤＮＡ３。

ｌ（＋）一ＥＧＦＰ经过ＢａｍＨＩ单酶切基，电溶结果（见图２一Ｂ）显示有一条单一的６．１Ｋｂ条带，根据ｐＣＤＮＡ３．１－ＥＧＦＰ强谱分析，该质粒含有单一的ＢａｍＨＩ酶切位点，全长为６．１Ｋｂ左右。

耋组质粒ｐＣＤＮＡ３．１（＋）～ＥＧＦＰ经过ＢａｍＨｌ、ＮｏＬＩ双酶切蜃，电泳结果（见网２一Ｃ）显示有两条分别为５．４Ｋｂ和０．７Ｋｂ的条带，符台线赣ｐＣＤＮＡ３。

ｌ（十）载体和ＥＧＦＰ片段的长发，故可以验证所较质粒确为耋缀质粒ｐＣＤＮＡ３，ｌ《＋）－ＥＧＦＰ。

增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞【摘要】In this study, EGFP was cloned into pGEX-4T-l vector to construct prokaryotic expression vector pGEX-4T-EGFP, the recombinant plasmids were transformed into E.coli BL21 (DE3) and induced with IPTG for protein expression, then the EGFP protein was detected by UV irradiation and SDS-PAGE. It can be used to provide a new report gene and selective marker for prokaryotic expression system.%以EGFP为标记基因,原核表达质粒pGEX-4T-1为载体,成功构建重组质粒pGEX-4T-EGFP,并将其转入大肠杆菌BL21 (DE3).用IPTG进行诱导表达,通过紫外照射和SDS-PAGE检测其在大肠杆菌中的表达情况,为原核表达系统提供新的报告基因和筛选标记.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】4页(P103-106)【关键词】EGFP;克隆;重组质粒;原核表达【作者】刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞【作者单位】西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】Q786绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是源于多管水母属等海洋无脊椎动物的发光蛋白，其在蓝光或紫外光下可发出明亮的绿色荧光，可以作为报告基因检测蛋白的特异性表达或进行细胞定位研究。

绿色荧光蛋白原核表达载体的构建赵轶君;董浩;潘红艳;徐芳;赵佳;步怀宇;李红民【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】为开发以绿色荧光蛋白（GFP）为基因的原核表达载体，根据 NCBI 基因序列设计引物，通过 PCR 扩增获得GFP 编码基因，经限制性核酸内切酶消化后将 GFP 定向克隆至原核表达载体 pMAL－c2X 中 malE 基因下游的EcoRⅠ与Hind Ⅲ位点之间，与 malE 基因融合为一个表达框。

重组产物转化 E．coli TB1感受态细胞，在添加有50 mg/mL AMP、10μmol/L IPTG 的 LB 平板上于37℃培养12～16 h 后放置于25～30℃的培养箱中继续培养4～6 h，365 nm UV 照射下挑取转化克隆，经扩大培养后用 IPTG 诱导 GFP 的表达并用 SDS－PAGE 检测表达效率。

结果表明，融合在麦芽糖结合蛋白下游的 GFP 编码基因可以在宿主细胞中有效表达，在365 nm UV 照射下，可以直接从加有50 mg/mL AMP、10μmol/L IPTG 的 LB 平板上挑取发绿色荧光的重组克隆，SDS－PAGE 分析结果显示其扩大培养物经 IPTG 诱导后可高效表达 GFP。

该结果为进一步构建以 GFP 为标记基因取代抗生素筛选标记的原核表达载体提供了切实的试验依据。

【总页数】4页(P73-76)【作者】赵轶君;董浩;潘红艳;徐芳;赵佳;步怀宇;李红民【作者单位】西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达 [J], 段斯亮;于声;苏晓庆3.乳酸乳球菌NZ9000中增强型绿色荧光蛋白报告系统的构建 [J], 刘璐; 艾连中; 夏永军; 熊智强; 管彤; 宋馨4.基于绿色荧光蛋白的冷鲜猪肉中大肠杆菌预测模型的构建 [J], 刘变芳;胡辉帆;张义奎;蔡锦;杜双奎;李俊丽;曹梦茜;吕欣5.表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用 [J], 张晓战;边传周;王增;杨磊;邓同炜;赵攀登;彭志锋;陈露露;郭懿文;夏艳勋;乔宏兴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。