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简述电镜超薄切片制作技术及其在植物细胞生物学中的应用举例。
（原创版3篇）目录（篇1）一、电镜超薄切片制作技术简介1.超薄切片的定义与要求2.电镜超薄切片制作技术的基本原理3.电镜超薄切片制作技术的发展历程二、电镜超薄切片在植物细胞生物学中的应用1.植物细胞结构与功能的研究2.植物细胞发育过程的研究3.植物细胞遗传学研究4.植物细胞生物学研究中的其他应用三、举例说明电镜超薄切片在植物细胞生物学中的应用1.观察植物细胞质膜的结构与功能2.研究植物细胞分裂过程3.解析植物细胞基因表达正文（篇1）一、电镜超薄切片制作技术简介超薄切片是指厚度在几十纳米到几百纳米之间的薄片，这种薄片可以充分显示微细结构，因此在电子显微镜（简称电镜）下观察具有很高的分辨率。
电镜超薄切片制作技术是一种将生物组织或材料制成超薄切片，然后通过电镜观察其微细结构的方法。
电镜超薄切片制作技术的基本原理是通过切片机将组织或材料切成薄片，然后使用染色方法将组织或材料的结构显示得更清晰。
在电镜下观察时，超薄切片可以提供比光镜下观察更高的分辨率，从而可以更清晰地观察细胞和组织的微细结构。
电镜超薄切片制作技术经历了从手工切片到机械切片，再到电子显微镜切片的发展过程。
随着技术的进步，现在的电镜超薄切片制作技术已经越来越成熟，可以满足生物学、医学和其他领域的研究需求。
二、电镜超薄切片在植物细胞生物学中的应用电镜超薄切片技术在植物细胞生物学中具有广泛的应用，包括植物细胞结构与功能的研究、植物细胞发育过程的研究、植物细胞遗传学研究等方面。
在植物细胞结构与功能的研究中，电镜超薄切片技术可以用于观察细胞质膜的结构与功能。
通过电镜观察，可以清晰地看到质膜的形态和结构，以及质膜上的各种蛋白质和分子。
这对于研究植物细胞质膜的功能和植物细胞对外界环境的响应具有重要意义。
在植物细胞发育过程的研究中，电镜超薄切片技术可以用于研究细胞分裂过程。
通过电镜观察，可以实时动态地观察到细胞分裂的各个阶段，以及细胞器在分裂过程中的变化。
单独超薄切片超薄切片一、超薄切片机的基本构造和工作原理目前有许多种型号的超薄切片机，但主要包括两类：（1）热胀式--工作原理：利用金属杆热胀或冷缩时产生的微小长度变化来提供前进LKB公司的LKB-Ⅴ热胀式切片机以该机型为例：其只要构造：电源控制箱和主机部分。
（1）电源控制箱：样品臂加热及冷却样品臂的升降控制样品臂的手动、自动模式切削速度控制（2）主机部分：样品臂--带加热线圈和样品定向头刀台--可调整前后左右方位及角度动圈式马达--可使样品臂上下往返运动光源（荧光灯、聚光灯）--照明、观察刀刃立体显微镜--观察切片超薄切片机的基本构造：主要由主机调控、对刀调节和观察照明三大部分组成a.主机调控--包括动力开关（ON/OFF）、手动切片控制钮、自动切片控制钮、加热开关钮、切速调控扭、切片厚度控制钮和电吹风开关等。
b.对刀调节--包括样品臂（它又包括样品夹和调节样品方向的一组镍钮等）、刀台、刀角刻度指示（包括倾斜角和弧度角）、刀在水平方向左右移动和前后移动钮，调节刀与样品距离的组合钮（包括粗调钮、细调钮、和微调钮）等。
c.观察照明--包括滑动式显微镜底座、双筒立体显微镜、日光灯白炽灯、显微镜倾斜度标尺等。
（2）机械式--工作原理：用微动螺旋和微动杠杆来提供微小前进。
常用的有LKBⅢ、LKBⅤ型和NOVA等，我国多用瑞典LKB公司产品，目前市场上新产品都是机械式超薄切片机。
二、切片前的准备1、切片用品包括解剖镜、制刀机、玻璃条、载网、镊子（细尖嘴）、培养皿、滤纸、睫毛笔、注射器（2或5ml）、重蒸水、95%乙醇、样品盒、酒精灯、石蜡（块或片）、绸布、小玻璃缸（直径10cm，高10cm以上）、载玻片、新刀片（单面或双面），以及制备支持膜的溶液（如：0.3%-0.5%孚尔瓦/氯仿溶液）等。
2、修块聚合好的样品块是不能直接拿到切片机上切片的，必须将其整修一番，去除外周的包埋介质，暴露出表面积小于0.1mm，和低于0.2mm 的小方台。
冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。
它是把样品进行冷冻固定后，进行超薄切片，省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。
样励在切片前后，不经过强烈的化学处理，约胞结构能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小会被抽提，使得电镜图像更接近于生物的生活状态。
可用于细胞免疫化学、可溶性成分自显影、尤其在X射线微区成分分析等研究中。
冷冻超薄切片机操作：在超薄切片机上加上高压冷冻仪冷冻附件就可进行。
冷冻超薄切片的制备程序可为两类：1.无溶液制备法：包括取材、快速冷踪、冷冻替代、切片、干燥、染色或不染色、镜检等几个步骤。
主要用于可溶性物质的放射白显影和X射线微区分析。
2.固定样品制备法：包括取材、醛类阑定、样品包埋或不包埋、冷冻保护处IR、快速冷冻切片、染包及镜检等步骤。
适用于进行形态学、细胞化学和免疫细胞化学研究。
用户经培训后取得资格可自行使用超薄切片机，使用步骤如下：1）开机2）检查是否处于切片模式，检查顶光底光是否亮度正常；3）将包埋块放入适当夹头并用六角扳手旋紧，以固定包埋块；（然后将夹头安装在修快台进行修快）；4）将夹头放入机械臂，并用手旋好螺丝上紧夹头（不可用六角扳手）；5）将玻璃刀/钻石刀安装在刀台上，用手旋好螺丝以固定刀，并注意检查刀台是否固定于底座上；6）检查刀间隙角，调整刀台角，选择适当的夹头角度等；7）设定切片窗口（上下范围）；8）对刀；9）选择所用切片速度和厚度；10）在刀槽内注水，注意水面平整；11）切片、捞片；12）关机、清理切片机，拿走个人物品，保持切片台面整洁；13）登记使用记录。
超薄切片一、超薄切片机的基本构造和工作原理目前有许多种型号的超薄切片机，但主要包括两类：（1）热胀式--工作原理：利用金属杆热胀或冷缩时产生的微小长度变化来提供前进LKB公司的LKB-Ⅴ热胀式切片机以该机型为例：其只要构造：电源控制箱和主机部分。
（1）电源控制箱：样品臂加热及冷却样品臂的升降控制样品臂的手动、自动模式切削速度控制（2）主机部分：样品臂--带加热线圈和样品定向头刀台--可调整前后左右方位及角度动圈式马达--可使样品臂上下往返运动光源（荧光灯、聚光灯）--照明、观察刀刃立体显微镜--观察切片超薄切片机的基本构造：主要由主机调控、对刀调节和观察照明三大部分组成a.主机调控--包括动力开关（ON/OFF）、手动切片控制钮、自动切片控制钮、加热开关钮、切速调控扭、切片厚度控制钮和电吹风开关等。
b.对刀调节--包括样品臂（它又包括样品夹和调节样品方向的一组镍钮等）、刀台、刀角刻度指示（包括倾斜角和弧度角）、刀在水平方向左右移动和前后移动钮，调节刀与样品距离的组合钮（包括粗调钮、细调钮、和微调钮）等。
c.观察照明--包括滑动式显微镜底座、双筒立体显微镜、日光灯白炽灯、显微镜倾斜度标尺等。
（2）机械式--工作原理：用微动螺旋和微动杠杆来提供微小前进。
常用的有LKBⅢ、LKBⅤ型和NOVA等，我国多用瑞典LKB公司产品，目前市场上新产品都是机械式超薄切片机。
二、切片前的准备1、切片用品包括解剖镜、制刀机、玻璃条、载网、镊子（细尖嘴）、培养皿、滤纸、睫毛笔、注射器（2或5ml）、重蒸水、95%乙醇、样品盒、酒精灯、石蜡（块或片）、绸布、小玻璃缸（直径10cm，高10cm以上）、载玻片、新刀片（单面或双面），以及制备支持膜的溶液（如：0.3%-0.5%孚尔瓦/氯仿溶液）等。
2、修块聚合好的样品块是不能直接拿到切片机上切片的，必须将其整修一番，去除外周的包埋介质，暴露出表面积小于0.1mm，和低于0.2mm 的小方台。
超薄切片技术·为透射电子显微镜观察提供超薄样品的专门技术·生物学中研究细胞、组织超微结构最常用技术·生物学中其他电子显微技术（电镜放射自显影、电镜细胞化学、免疫电镜技术等）的关键性技术。
目前有关生物体的各种细胞、组织的超微结构知识几乎都是这种技术提供。
超薄切片：一般厚度在10～100nm的切片。
这种切片的技术――超薄切片技术制作一般过程（与光学显微镜的石蜡切片过程原则上基本相似）：取材、固定、（浸洗）脱水、渗透、（胶囊）包埋、聚合、（样品修块）、切片、（捞片－切片沾在载网上）、染色等几个环节利用超薄切片技术制备样品的实验过程较长，从样品取材到电镜观察大约需要一周时间。
由于步骤多，时间长，操作时必须十分认真，做好每一步实验。
无论哪个环节出现问题，都不能得到理想的实验结果。
衡量超薄切片的质量：1．样品结构保存良好；2．切片厚度为60nm左右；3．切片均匀，表面无褶皱，无刀痕、无震颤及染色沉淀等现象；4．切片反差适中；5．样品支持膜耐受电子束轰击，观察时无膜的漂移和破裂现象。
I．取材II．固定1．固定的目的及良好固定的标准2．几种常用的固定剂3．几种常用的缓冲液4．几种常用的固定液及配方5．固定方法6．固定时注意事项III．脱水1．脱水的目的及其过程2．脱水过程中的注意事项IV．渗透与包埋1．常用的包埋剂及配方2．渗透与包埋的步骤3．渗透与包埋过程中的注意事项V．超薄切片1．超薄切片的准备工作2．切片VI．切片染色1．染色的作用2．染色的方式I．取材关键环节，取材正确与否与制备出来的样品能否符合观察要求直接有关。
肌体内酶作用下的代谢非常迅速，生物组织离体后，细胞将会立即释放出各种水解酶引起细胞自溶，使细胞内部微细结构发生变化。
这种微细结构的改变在光镜下无法看到，但电镜下呈现明显的人工假象。
尽可能避免人工假象，正确取材的几点要求：1．切取组织块时必须快速，以尽量保持材料的新鲜，一般要求在一分钟内把组织块浸入固定液；组织块要小，一般切成0.5～1.0mm3大小，太大则在短时间内固定液不能渗透到组织块内部；2．所用的固定液及容器都必须预冷，以降低离体细胞内水解酶的活性，尽可能减少细胞自溶；3．由于电镜观察视野小，具有很大的局限性，所以，选择部位要准确可靠。
