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第8讲半薄/超薄切片技术取材→固定→脱水→渗透→包埋→聚合→修块→切片→染色现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法；另一类是生物制品特殊技术，包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、电镜细胞化学术、免疫电镜术、电镜放射自显影技术、X线微区分析技术等。
基本概念一、生物样品制备技术的重要性1、决定电镜图像分辨率的两个因素1）电镜本身的分辨本领2）样品的结构和反差，而样品的结构与反差在很大程度取决于样品制备技术2、电镜样品应具备的基本条件1）样品必须彻底干燥；2）样品要进行提高反差处理2）样品要进行提高反差处理4）样品耐受电子束的轰击5）充分保存好生物样品的超微结构二、TEM样品制备技术分类1、超薄切片技术（普通）2、冷冻超薄切片技术3、冷冻置换和低温包埋技术4、金属投影技术5、表面复型技术6、冷冻(断裂)蚀刻及复型技术7、免疫电镜技术8、电镜细胞化学技术7、8、9是TEM，SEM共有9、电镜放射自显影技术三、超薄切片技术概述1、超薄切片★样品厚度在10～100nm之间的切片，超薄切片TEM专用石蜡切片h=10μm(5~50μm)2、制作超薄切片的必要性1) 增加电子透射能力2) 电镜的场深大，切片太厚，上下结构重叠,使得图像不清楚3) 减少色差4) 减少样品对电子的吸收3、对超薄切片的要求⑴细胞的细微结构保存良好，没有明显的物质凝聚、丢失、添加等人工效应⑵切片厚度500～700Å为宜,小于1000 Å太薄：δ高，反差低太厚：δ低，反差好，结构重叠，电子甚至不能穿透⑶切片应耐电子束的强烈照射，不变形，升华⑷切片能够适当被染色，保证一定的反差⑸切片均匀，无皱褶、刀痕，无染色剂或其他化学物质的沉淀普通超薄切片技术：一、取材二、固定三、脱水四、渗透与包埋五、超薄切片六、电子染色一、取材1、含义：指从生物体上取下要观察的组织块。
注意：由于水解酶的作用可引起细胞自溶2、取材操作规则:快,小, 冷,准,稳,轻(防损伤)⑴快：动作迅速,快取,投入固定液⑵小：样品体积小,动1mm3,植宽1，长3～4mm⑶冷：0～4℃⑷准：取的部位准，有代表性、目的性⑸轻：操作轻巧，避免拉、锯、压A、按样品类别分为：⑴动物材料麻醉→解剖→戊二醛预固定（0～4℃，2％～5％）在预冷的玻板上细切（1mm3）→戊二醛前固定(1～3h) →漂洗（10～30min）→1％锇酸后固定(1～2h)⑵植物材料叶片宽1，长3～4，有时需脱蜡根茎果实1mm3⑶单细胞：洗去有机成分→固定→预包埋→切块B、按取材地点分为：⑴野外取材：冰壶⑵实验室室内取材1.2 取材方法3 材料放在洁净的韧性较大的纸上→滴上预冷的固定液→用刀片将组织切下并修小→用牙签或镊子将组织块移至盛有预冷的固定液的小瓶中。
