下载文档原格式
液基细胞学超薄片技术液基细胞学超薄片技术是一种新兴的细胞学检测技术，它是最近几年来在临床上被广泛应用的标本制备方法之一。
相比于传统细胞学检测方法，液基细胞学超薄片技术具有样本制备简便、高质量、高灵敏度等优点，成为了常见的细胞学检测方法之一。
本文将对液基细胞学超薄片技术的原理、操作流程、优缺点以及应用前景等进行全面的介绍。
液基细胞学超薄片技术是通过将患者的细胞样本置于细胞培养基中，使细胞自然沉淀在液面上，然后将液面上的细胞簇均匀地涂布于载玻片上，制成超薄的细胞片。
这种方法可以消除细胞离解的影响，从而获得细胞的更为真实和可靠的信息。
1、提取细胞样本：液基细胞学超薄片技术适用于多种细胞样本，包括子宫颈和直肠样本等。
需要用细胞采集刷子或取样器从病变部位采集样本。
2、制备液基样本：将采集到的细胞样本浸入到液基培养液中，用旋转离心器离心沉积。
然后倒掉上清液，留下沉淀物，加入液基培养液对其进行混合，形成适宜的液基样本。
3、制备载玻片：用专用液基载物架将样本移至载玻片上，使其均匀涂布于玻片上。
然后将载玻片放置在室温下干燥，形成固定的细胞片。
4、染色：超薄片样本可以进行各种染色技术，如Papanicolaou染色法和HE染色法等。
5、显微镜观察：向染色后的细胞片添加透明液体，缓慢旋转载玻片使液体均匀涂布于载玻片上，并在显微镜下观察细胞形态结构和病变特点。
优点：1、操作简便：液基细胞学超薄片技术相较于传统细胞学制备方法，操作更为简单，易于掌握，且制备过程稳定、重复性好。
2、样本质量优良：液基细胞学超薄片技术通过将细胞沉淀于液面上，消除了细胞离解对细胞形态识别和准确性的影响，从而获得更加可靠的样本。
3、提高检测准确性：该技术可以有效地预防细胞溢出和血液污染等因素对样本的污染和扰动，从而提高检测准确性。
1、设备和药剂成本高昂：液基细胞学超薄片技术所需的设备和药剂成本较高，限制了该技术的普及。
2、诊断难度较大：液基细胞学超薄片技术所获得的样本比传统细胞学制备方法更为干净，从而难度也更大，需要更多的专业技能和实践经验。
超薄切片技术第一节引言超薄切片制备技术是医学研究、超微病理诊断中最基本、最常用的技术。
它可作为进一步学习电镜细胞化学、免疫电镜及超微结构图像立体学定量技术的基础。
透射电镜的加速电压为20－100KV（千伏），其电子束穿透能力弱，对绝大多数样品而言，不能在TEM下直接观察，必须制备成厚度为50－70nm的超薄切片。
要获得高质量的电镜照片，关键在于制作合格的超薄切片。
对于超薄切片制备的主要要求有：①组织、细胞的精细结构保存良好，没有明显的物质凝集、抽取、添加等人工假象。
②超薄切片应具有一定的硬度和韧性，能够耐受电子束的轰击，在观察过程中，切片不发生变形；切片包埋介质不会升华。
③超薄切片应均匀，没有皱褶、刀痕、震颤及染色剂沉淀等缺陷。
切片还应具有良好的反差。
因此只有经过一系列的固定、脱水、包埋、切片、染色等步骤，使组织标本既保存了细微结构，又具有适当的硬度和韧性以及良好的反差，才能达到上述要求。
超薄切片在电镜中被观察时，由于电镜的分辨本领很高，细胞内部的微细结构变化会在图像上反映出来，所以在整个样品制备过程中，操作者必须十分认真地对待每一个操作步骤。
在样品制备过程中稍有疏忽都可能影响制片质量，或切不成超薄切片，或在图像中加入人工假象，以至于直接影响研究结果的准确性和重复性。
所以整个操作过程必须细致、谨慎，严格按照操作步骤进行。
所用的器皿和器械必须非常清洁，玻璃器皿都要经过清洁液泡洗，所用的药品及试剂都是分析纯级，配试剂用的蒸馏水必须是用玻璃蒸馏器蒸出的双蒸水。
超薄切片样品制备的过程比较复杂，具体的说来，大致可分为取材、固定、漂洗、脱水、浸透、包埋、修整定位、切片及染色等几个步骤。
常规超薄切片样品制作的具体步骤和时间如下：⑴样品取材后在醛类固定液（3％戊二醛）预固定几个小时或更长的时间；⑵缓冲液漂洗（0.1mol/L磷酸缓冲液）几小时或过夜，中间更换5次缓冲液；⑶1％四氧化锇固定液后固定2h左右；⑷0.1mol/L磷酸缓冲液漂洗3次，每次10min;⑸梯度乙醇或丙酮脱水，其顺序为、50％、70％、80%、90％、100%乙醇各一次，每次10分钟100％丙酮2次，每次10－15min。
