血浆游离血红蛋白检说明书

1.目的
建立血红蛋白测定的操作步骤，以保证试验的顺利进行和结果的真实可靠。

2.适用范围
适用于血清制品血红蛋白的测定（分光光度计法）
3.职责
检验人员。

4.定义
无
5.引用标准
《中国药典》2015版四部通则3604
6.材料及设备
6.1 751分光光度计
6.2 1-cm光路的比色杯
6.3 蒸馏水
7.流程图
无
8.内容
8.1.以蒸馏水为空白对照。

8.2 使用1-cm光路的比色杯，直接测定牛血清样品在576nm、623nm及700nm
波长下的吸光值。

8.3 每个样品至少测定2次。

8.4 计算平均测定值
8.5 按照下式计算样品中血红蛋白含量：
血红蛋白含量（mg/dl）=[(A576×115)−(A623×102)−(A700×39.1)] ×10。

8.6 其中；A576、A623、A700是样品在576nm、623nm及700nm波长下的平均
吸光值。

9.注意事项
9.1. 严格按照仪器说明书进行操作。

9.2. 比色杯要保持清洁，定期在盐酸液中进行浸泡。

9.3. 试验完毕将所有物品放归原处。

10.附录及派生记录
10.1. 血红蛋白检测记录F-SOP-ZL004-01
11.相关文件
无
12.修订记录。

分离胶真空采血管冷冻前后游离血红蛋白测定发表时间：2016-03-14T14:38:27.120Z 来源：《中国综合临床》2015年12月供稿作者：杨忠思马维娟冯秋霞[导读] 山东省青岛市中心血站山东青岛２６６０７１分离胶为具有触变性的粘性液体,呈惰性,气密性好,透明度高,主要由硅橡胶,碳氢大分子化合物,疏水胶等组成,杨忠思马维娟冯秋霞山东省青岛市中心血站山东青岛２６６０７１【摘要】目的探讨采用分离胶真空采血管直接进行冷冻对血样是否有影响.方法运用TRINDER法对分离胶真空采血管保存的血样进行冷冻前后游离血红蛋白的测定,并对检测结果进行比较和评价.结果冷冻２周后的分离胶保持完整,血浆游离血红蛋白的测定结果无统计学差异.结论分离胶真空采血管直接对血样进行冷冻保存,能减少工作量降低成本,冷冻两年后性状如何以及是否对核酸检测有影响,尚需验证.分离胶真空采血管使用前应作对比试验, 以保证检验结果的可靠性和准确性. 【关键词】分离胶真空采血管;游离血红蛋白;冷冻【Abstract】Objective Toobservetheinfluenceonfreehemoglobin(Hb)detectionviaVacuumgeltubebeforeandafterfrozen．Methods Thirty －eightblooddonorssamplewereenrolledinthestudy．ThelevelsofplasmafreeHbweremeasuredbeforeandaftersamplefrozenrespectively．Results separategelcontainsintactafterfrozenThelevelsofplasmafreeHbshownosignificancebeforandafterfrozen．Conclusion separatevacuumgeltubecanbeappliedforbloodsamplepreservationdirectly,andcandecreasethecostworkload．Butwedonotknowtheeffectaftertwoyearsfrozen．Paralleledtestmustbedonebeforeusingseparatevacuu【mKegyelwtourdbse】toensureresultsaccuracyandlibability． separatevacuumgeltube;freehemoglobin;frozen【中图分类号】R４４６??９【文献标识码】A 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－１４９２－０２分离胶为具有触变性的粘性液体,呈惰性,气密性好,透明度高,主要由硅橡胶,碳氢大分子化合物,疏水胶等组成,比重在１．０４５－１．０５０之间,而血浆比重为１．０２５－１．０３０,红细胞比重１．０６０－１．０８０,分离胶比重正好处在血浆与红细胞之间,在离心力的作用下,将血浆与红细胞分开.分离胶真空采血试管的使用,可保证血浆与红细胞分离,也可直接冷冻保存,但冷冻前后分离胶性能如何,对检测结果是否有影响,尚不能表明.本实验将冷冻前后结果报道如下:１材料与方法１．１标本来源青岛市中心血站随机留取献血者标本３８份. １．２试剂北京瑞尔达生物科技有限公司生产的血浆游离血红蛋白测定试剂盒,批号C１００５０１５. １．３主要仪器设备及耗材奥地利含分离胶的真空采血管,生产批号A０９０７０８２,全波长酶标仪型号SN１５００－４１９. １．５实验方法用分离胶真空采血管采集血样３８份,以３０００转离心２０分钟,并直接游离血红蛋白(TRINDER 法)检测.然后直接放入－２０的冰箱中保存２周,２周后取出样品复融后进行相同项目检测,并且要求在同一仪器上操作及使用相同生产批号的试剂.操作步骤见表１.表１血浆游离血红蛋白测定３讨论分析前质量控制室实验室质控的一个重要组成部分,而实验室样本的正确采集、处理和保存又和分析前质量控制息息相关.随着采血管技术的不断发展,临床检测已逐渐采用真空采血管或者分离胶真空采血管.分离胶为具有触变性的粘性液体,呈惰性,密性好,透明度高,主要由硅橡胶、碳氢大分子化合物、疏水胶等组成,比重在１．０４５－１．０５０之间,而血浆比重约为１．０２５－１．０３０,红细胞比重１．０６０－１．０８０,分离胶比重正好处在血浆与红细胞之间,在离心力的作用下,将血浆与红细胞分开[１].可保证原管检测、原管留样,减少再次转管发生错误的可能,能保证溯源,并能减少工作量,降低成本. 本次试验冷冻温度选择零下２０℃以下保存,将分离胶真空采血管冷冻两周后复融,外观检查分离胶界面平整,血清层与血细胞层分隔较好,冻存标本复融后,分离胶界面仍然保持良好.离心转速借鉴卫生部临检中心核酸检测要求[２],以３０００转/min,离心２０分钟.血浆游离血红白主要用于判断体内各种溶血程度,体外循环后,红细胞被破坏情况.过去只停留在对测定血浆游离血红蛋白的方法上研究,至今少见测定游离血红蛋白对标本采集和处理进行探讨.胡望平等用血浆血红蛋白评价各种采血管及添加剂,认为枸橼酸钠(１:９)抗凝剂管红细胞保存最好,促凝剂可致轻度溶血,各采血管３小时后游离血红蛋白浓度上升,２４小时后升高显著[３],但未进行冷冻实验研究.本次结果表明,冷冻前后,血浆游离血红蛋白浓度差异无统计学意义.证明分离胶没有因冷冻而破坏,血红蛋白没有穿过分离胶渗透到血浆中来.但卫生部?血站管理办法?修订后[４],血液标本的保存期为全血或者成分血使用后二年,冷冻二年后分离胶性状如何,血浆游离血红蛋白浓度是否有变化,尚鲜见报道. 有关分离胶真空采血管用于核酸检测,相应评价正在进行中.探讨不同厂家、不同类型的试管,在不同时间离心,直接冷冻保存,或者分离血清/血浆后冷冻保存,复融后对核酸检测结果的影响. 建议实验室向厂家索取所采用分离胶采血管的详细的技术资料和技术评价,实验室也有必要对所用的分离胶采血管进行各种检测指标的对比实验,只有通过对测定结果的比较分析才能判断它是否符合检验质量要求,确保检验结果的准确性和可靠性.参考文献[１] 杨永红,安仕刚,王树辉,等．分离胶储血管保存及其制备血清标本生化指标稳定性的观察．贵州医药,２００６,３０(１)６７－６９ [２] ?血站核酸检测试点实验室技术指导意见?．卫生部临床检验中心[３] 胡望平,胡盈莹,王海林,等．用血浆血红蛋白评价各种采血管和抗凝剂．北京生物医学工程,２００７,２６(４):４２８－４３０ [４] ?血站管理办法?．卫医政发(２００９)２８号文。

血浆游离血红蛋白测定的临床意义哎呀，你们可知道血红蛋白是个啥玩意儿？它就是一种红色的蛋白质，咱们的身体里有大量的血红蛋白，它们可是负责把氧气从肺部输送到全身各个部位的小能手呢！不过，有时候这些小家伙会突然跑出来捣乱，那可就麻烦了。

所以，今天我们就要来聊聊血浆游离血红蛋白测定的临床意义，看看这个小小的指标是如何帮助医生们及时发现问题的。

咱们来了解一下什么是血浆游离血红蛋白测定。

简单来说，就是检测血液中游离在血浆里的血红蛋白含量。

这个指标可以帮助医生们了解患者的氧气供应情况，从而判断是否存在缺氧、贫血等问题。

那么，这个指标到底有多重要呢？咱们接下来就来看看吧！1.1 了解患者的氧气供应情况咱们知道，心脏是负责将氧气从肺部输送到全身各个部位的重要器官。

而血红蛋白就是负责将氧气从肺部输送到全身各个部位的小能手。

如果血红蛋白含量过高，说明患者可能存在心脏负担过重的问题；反之，如果血红蛋白含量过低，说明患者可能存在缺氧、贫血等问题。

通过血浆游离血红蛋白测定，医生们可以及时了解患者的氧气供应情况，从而为患者提供更加精准的治疗方案。

1.2 预防心血管疾病的发生咱们知道，心血管疾病是威胁人类健康的重要疾病之一。

而血红蛋白含量过高或过低都可能与心血管疾病的发生有关。

例如，血红蛋白含量过高可能导致心脏负担过重，从而增加心血管疾病的风险；反之，血红蛋白含量过低可能导致身体各部位缺氧，从而增加心血管疾病的风险。

因此，通过血浆游离血红蛋白测定，医生们可以在早期发现潜在的心血管疾病风险，从而采取相应的预防措施，降低心血管疾病的发生率。

2.1 诊断贫血贫血是指血液中红细胞数量或质量不足的一种疾病。

而血红蛋白是红细胞内的重要组成部分，因此血浆游离血红蛋白测定对于诊断贫血具有重要的临床意义。

当血红蛋白含量降低时，医生们可以通过这个指标及时发现贫血问题，从而为患者提供更加精准的治疗方案。

2.2 观察病情变化对于一些慢性疾病患者来说，定期进行血浆游离血红蛋白测定可以帮助医生们观察病情的变化。

血浆游离血红蛋白测定[原理]血红蛋白中亚铁血红素具有类似过氧化物酶的作用，使联苯胺(或邻甲苯胺)氧化，在醋酸溶液中变成绿色、黄色，紫红色。

当血管内溶血时，血浆游离血红蛋白可明显增高。

[试剂](1)联苯胺(或邻甲苯胺)0．1g，加冰醋酸2ml，加蒸馏水3ml，溶解后加95％乙醇至10ml置于4℃冰箱内保存可用1-2周。

(2)取30％H2O2 0．5ml，加蒸馏水14．5ml(新鲜配制)。

(3)10％(v／v)醋酸溶液。

(4)Hb标准液，即用HiCN法精确测得Hb含量，然后配成100mg/L的Hb水溶液.[操作]取大试管(容量为30—50m1)3、支，依次加入下列各液见表(1—3—5)。

表1-3-5 血浆游离血红蛋白测定用波长515nm比色，以空白调零，读取各管吸光度。

[计算]游离血红蛋白(mg／L)＝测定管吸光度／标准管吸光度×100。

[参考值]正常人血浆游离血红蛋白＜100mg/L(10mg／dl)。

换算系数：mg／L=mg／d1×10编写：孙利制定日期：2011.12.1[临床意义]血管内溶血性贫血、PNH及输不合型的血液后均明显增高，尤其后者可高达5000mg／L以上。

[附注](1)本法系测定细胞溶解，抽血后分离过程应特别注意红细胞破坏而导致结果升高。

(2)显色受温度干扰，要严格遵守测定条件，注意标准管与测定管的比色时间。

(3)由于灵敏度较高，当肉眼见到溶血现象时，标本就应稀释，必要时同时应作1管稀释5倍标本。

(4)因联苯胺具有毒性；测定时可用邻甲苯胶或四甲基联苯胺替代。

(5)纯品联苯胺为无色结晶，纯度不好但可提纯。

联苯胺10g溶于 lmol儿HCl 200ml中，加活性炭1—2g，用力振摇(可稍加热)后过滤，滤液一般无色，否则继续再振摇1—2分钟后，向滤液中加入浓HCl 30ml，混匀置于冰箱过夜即可见大量白色结晶析出，用滤纸过滤后，再用乙醇—乙醚等量混合液洗涤结晶数次，最后用乙醚洗2次即可。

人游离血红蛋白(F-Hb)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人全血样本中游离血红蛋白(F-Hb)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人游离血红蛋白(F-Hb)水平。

用纯化的人游离血红蛋白(F-Hb)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入游离血红蛋白(F-Hb)，再与HRP标记的游离血红蛋白(F-Hb)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的游离血红蛋白(F-Hb)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人游离血红蛋白(F-Hb)浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：540μg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）产品技术要求ruierda血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）适用范围：该试剂用于定量测定人血浆中游离血红蛋白的含量。

1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×12. 性能指标1、试剂空白试剂空白吸光度值≤0.18。

2、线性区间测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3、准确度回收率90%～110%4、分析灵敏度血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

5、精密度a）重复性变异系数≤10%。

b）批间差连续三批血浆游离血红蛋白试剂盒测定同份血浆样本，其测定值的批间差≤10%。

【包装规格】试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml×1【主要组成成分】R1：TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/LR2：4-氨基安替比林 5mmol/LR3：过氧化氢3.0%【产品性能指标】1. 试剂空白吸光度值≤0.18。

2. 线性区间测量范围[0.025，0.400 ]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3. 重复性：变异系数≤10%。

4. 准确度：4.1 型式检验：回收率90%～110%4.2 出厂检验：检测控质控品，结果在靶值±2SD范围内。

5. 灵敏度：血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

”变更为“产品技术要求1. 产品型号/ 规格及其划分说明1.1 试剂 1（R1）：100ml×1，试剂 2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×1校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂 1（R1） TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L试剂 2（R2） 4-氨基安替比林 5mmol/L试剂 3（R3）过氧化氢 3.0%校准品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白 0.100g/L（目标浓度）质控品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白0.146 g -0.236g/L 。

游离血红蛋白检测方法游离血红蛋白（free hemoglobin）指的是血浆中存在的不与红细胞结合的血红蛋白。

正常情况下，游离血红蛋白的浓度很低，但在一些疾病状态下，如贫血、溶血等，会导致血浆中游离血红蛋白的浓度增加。

因此，对游离血红蛋白进行检测对于评估一些疾病的严重程度和治疗方案的制定具有重要意义。

以下是一些常用的游离血红蛋白检测方法：1.光学法检测：光学法是一种简单但有效的游离血红蛋白检测方法。

该方法根据游离血红蛋白具有的特殊吸收光谱特性来测定其浓度。

通过测量在550至600纳米范围内的吸光度，可以推断游离血红蛋白的浓度。

2.分光光度法：分光光度法是一种利用分光光度计来测量游离血红蛋白浓度的方法。

它利用游离血红蛋白在450至700纳米波长范围内的吸收特性，通过测量吸光度来确定其浓度。

3.糖基化血红蛋白方法：糖基化血红蛋白是由于高血糖状态导致血红蛋白分子上发生糖化反应而形成的一种血红蛋白变异物。

检测糖基化血红蛋白可以间接评估血浆中游离血红蛋白的浓度。

目前，一些商业化的糖基化血红蛋白检测试剂盒已经上市，可以通过测量糖基化血红蛋白的浓度来推测游离血红蛋白的水平。

4.凝胶电泳法：凝胶电泳法可以通过将血浆样品电泳分离来检测游离血红蛋白。

在凝胶电泳过程中，血浆样品中的游离血红蛋白会沿电泳槽向阳极迁移，然后通过染色剂染色后可观察到游离血红蛋白的带状图案。

5.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种高灵敏度的游离血红蛋白检测方法。

该方法利用高效液相色谱仪的柱分离功能，根据游离血红蛋白与固定相之间的亲和作用，将游离血红蛋白从血浆样品中分离出来，并通过检测峰面积或峰高来测定其浓度。

除了上述方法，还有一些新兴的游离血红蛋白检测技术正在研究中。

例如，传感器技术结合了生物传感器和游离血红蛋白的特异性反应，可用于快速和准确地检测游离血红蛋白。

此外，质谱分析技术也被用于游离血红蛋白的检测，通过比较样品与标准的质谱图谱来确定游离血红蛋白的浓度。

一、实验目的1. 掌握血红蛋白测定的原理和方法。

2. 了解血红蛋白在临床医学中的应用。

3. 培养实验操作技能，提高实验数据分析能力。

二、实验原理血红蛋白（Hemoglobin，Hb）是红细胞内的一种含铁蛋白质，具有携带氧气和二氧化碳的功能。

血红蛋白的测定方法主要包括比色法、直接测定法和血浆游离血红蛋白测定法等。

本实验采用比色法测定血红蛋白含量。

三、实验材料与仪器1. 试剂：血红蛋白标准液、邻甲联苯胺溶液、双氧水、醋酸溶液、蒸馏水、生理盐水等。

2. 仪器：分光光度计、微量移液器、试管、离心机、移液管等。

四、实验方法与步骤1. 标准曲线绘制（1）取一系列试管，分别加入不同浓度的血红蛋白标准液，加入蒸馏水至一定体积。

（2）向各试管中加入适量的邻甲联苯胺溶液和双氧水，混匀。

（3）室温放置10分钟后，用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。

（4）以血红蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血红蛋白含量测定（1）取一定量的待测血液，加入适量的生理盐水，混匀。

（2）离心分离血浆，取上层血浆至试管中。

（3）按照标准曲线绘制方法，测定血浆的吸光度。

（4）根据标准曲线，计算待测血液中的血红蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据，绘制标准曲线如下：```血红蛋白浓度（g/L）| 吸光度-------------------|--------0.0 | 0.0000.2 | 0.1500.4 | 0.3000.6 | 0.4500.8 | 0.6001.0 | 0.750```2. 血红蛋白含量测定根据标准曲线，计算待测血液中的血红蛋白含量为X g/L。

六、实验讨论1. 本实验采用比色法测定血红蛋白含量，该方法操作简便、快速，准确度较高。

2. 实验过程中，应注意防止血红蛋白污染，确保实验结果的准确性。

3. 血红蛋白含量测定在临床医学中具有重要意义，可用于诊断贫血、溶血性贫血等疾病。

邻-甲联苯胺法测定血浆游离血红蛋白的基质效应及消除方法屠湧涛;刘清琳;徐敏敏;王莺【摘要】目的：研究邻-甲联苯胺法（经典方法）测定血浆游离血红蛋白（Hb）的基质效应及消除方法。

方法以用生理盐水1000倍稀释的 Hb 储存液（浓度为103.1 g/L）作为标准液，将此 Hb 标准液再用无 Hb 血浆分别稀释500、1000、2000、4000倍（游离 Hb 理论浓度分别为206.20、103.10、51.55、25.78 mg/L），然后用经典方法测定游离 Hb 浓度，比较与理论值的差异。

将 Hb 储存液分别用生理盐水（经典方法）、无 Hb 血浆（消除方法1）、混合血浆（消除方法2）1000倍稀释作为标准液。

经典方法和消除方法1的计算公式为血浆游离Hb（mg/L）=测定管吸光度（A）值×标准液浓度÷标准管 A 值；消除方法2的计算公式为血浆游离 Hb（mg/L）=测定管 A 值×标准液浓度÷（标准管 A 值×混合血浆 A 值）；消除方法3操作同经典方法，计算公式为血浆游离 Hb（mg/L）=测定管 A 值×标准液浓度×2.35÷标准管 A 值。

测定40份标本，比较各消除方法的结果。

在血浆中分别加入206.20、103.10、51.55 mg/L Hb，测定各消除方法的回收率。

分别取6.25、12.50、25.00、50.00μg/L 维生素 C 溶液4.5 mL，各加1.031 g/L Hb 标准液0.5 mL，用经典方法测定回收率。

结果采用无 Hb 血浆500、1000、2000、4000倍稀释的 Hb 标准液的游离 Hb 测定结果分别为87.85、43.16、21.90、10.99 mg/L。

40份标本采用经典方法、消除方法1、消除方法2、消除方法3测定的游离 Hb 浓度分别为（7.99±4.90）、（18.61±11.42）、（19.18±11.77）、（18.77±11.52）mg/L；消除方法1、消除方法2、消除方法3的结果均高于经典方法（P 均<0.01），但3种消除方法之间差异均无统计学意义（P 均>0.05）。

96孔U型微板比色法用于测定游离血红蛋白含量的研究刘向华【摘要】目的探讨一次性96孔U型微板比色法在测量血浆游离血红蛋白含量的可靠性.方法用游离血红蛋白(FHb)含量为200 mg/L的标准品制备成FHb含量不同的标本,再用722G可见光分光光度计和一次性96孔U型微板比色法测出不同OD值制成2条标准曲线,进行回归和相关分析,同时用这两种比色法测量50个上清液样本得到相应OD值,再从对应的标准曲线中算出测量标本的FHb含量,同时对两种方法所得的FHb含量进行统计分析.结果两种方法所制备的2条标准曲线R2值分别为0.945和0.926,两种方法对50份标本测量的FHb值的差异无统计学意义(t=0.78,P＞0.05).结论一次性96孔 U型微板法比色在测量血浆游离血红蛋白含量是可行且可靠的.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2015(017)005【总页数】2页(P455-456)【关键词】游离血红蛋白;U型微板比色法;去白细胞悬浮红细胞【作者】刘向华【作者单位】351100 福建省莆田市中心血站【正文语种】中文【中图分类】R331.1根据文献［1］的要求，全血及红细胞成分血在储存期末溶血率小于红细胞总量的0.8%，因此必须测量血浆或红细胞保存的上清液中游离血红蛋白(FHb)含量，由于FHb 含量一般是用生化仪或分光光度计进行比色测量，为方便基层血站工作人员操作，用一次性96 孔U 型微板和酶标仪对FHb含量进行比色测量，并与分光光度计结果进行比较，旨在评价一次性96 孔U 型微板法比色在测量血浆游离血红蛋白含量的可靠性。

材料与方法1 标本来源去白细胞悬浮红细胞上清液标本50 个。

2 试剂和仪器血浆游离血红蛋白测定试剂及FHb 含量为200 mg/L 标准品(比色法，北京瑞而达生物科技有限公司，批号141215)。

722G 可见光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，Phomo 酶标仪(郑州安图实验仪器有限公司)，一次性96 孔U型微板(浙江拱东医疗科技有限公司)。

血浆游离血红蛋白测定的临床意义1. 什么是血浆游离血红蛋白？说到血浆游离血红蛋白，首先得知道这是什么玩意儿。

简单来说，血红蛋白就是我们血液里负责运输氧气的那个小家伙。

它通常藏在红血球里，但在某些情况下，它会“出逃”，溜到血浆里。

你可以把它想象成一个不太守规矩的孩子，突然决定不再呆在教室里，而是跑到操场上去玩耍。

游离的血红蛋白可是有故事可讲的，尤其是在咱们身体出现问题的时候。

1.1. 游离血红蛋白是怎么来的？游离血红蛋白的来源可多了！当红血球破裂，血红蛋白就会被释放到血浆中。

这种情况可能因为各种原因发生，比如外伤、贫血、或是某些病症。

这时候，医生就会提高警惕，准备对症下药。

想象一下，就像你家狗狗突然跑出去了，肯定得赶紧去找它回来，不然可就麻烦了。

1.2. 测定的过程如何？测定血浆游离血红蛋白其实并不复杂，医生会抽取你手上的血，然后送到实验室分析。

这就像做一道简单的菜，材料准备好了，接下来的步骤就靠机器和技术了。

结果出来后，医生会根据这些数据来判断你身体的状况，看看是不是有什么潜在的问题。

总之，这个过程不但科学，还让你对自己的身体状况有个大概念。

2. 临床意义接下来，咱们聊聊测定游离血红蛋白在临床上的重要性。

你可能会想，哎，这跟我有什么关系呢？其实，关系可大了！这可不是小打小闹的事儿，而是关系到你健康的大问题。

2.1. 判断疾病首先，通过游离血红蛋白的检测，医生可以判断一些严重的疾病，比如溶血性贫血、心血管疾病等。

当身体出现异常时，游离血红蛋白的水平会飙升，就像股票市场突然大涨一样。

医生通过这些指标，可以及时做出反应，采取措施，确保你能早日康复。

这可比你在马路上过红绿灯要安全多了，提前预警，免得碰到大麻烦。

2.2. 监测治疗效果其次，这项检测还可以用来监测治疗效果。

比如说，你正在接受某种治疗，医生会定期检查游离血红蛋白的水平，以确认治疗是否奏效。

这就像在学校里，老师会定期给你考试，看看你的学习进度如何。

血浆游离血红蛋白检测操作规程1. 目的确保血浆游离血红蛋白检测实验过程准确、规范。

2．适用范围适用于全血及红细胞类血液制品储存末期溶血率的抽样检测过程控制。

3．职责全血及成分血抽样检测岗负责血液制品血浆游离血红蛋白的抽样检测工作。

4. 原理检测原理详见《紫外可见分光光度计操作规程》.5.设备、材料与试剂5.1仪器：紫外可见分光光度计、微量移液器、37℃恒温水浴箱、台式离心机。

5.2材料: 洁净试管、试管架、一次性吸头、一次性手套。

5.3试剂：血浆游离血红蛋白检测试剂盒（R1、R2、R3、标准液）。

6．检测环境条件实验室温度18～27℃、湿度30～70%7．步骤与方法7.1 检测前准备７.１.1 仪器设备准备：执行《紫外可见分光光度计操作规程》。

７.１.2 试剂准备：检查试剂盒内试剂瓶是否完好、有无渗漏，瓶内试剂有无浑浊、沉淀、变色及异物，容量是否满足工作需要。

查看批号和有效期，确保在有效期内使用。

７.１.３其他物品准备：检查EP管、一次性吸管、硬塑试管无破损、变形及污染，整齐摆放于实验台上；用记号笔在3支硬塑试管壁上分别标识“测试管”和“标准管”、“空白管”。

7.2 标本处理打开离心机，将容量相近标本试管对称放入离心机转子内，3000r/min，离心5分钟，吸取上层血浆，将获得的血浆再次离心，吸取不含红细胞的血浆待用。

7.3 检测7.3.1加样7.3.1.1用微量移液器按照表21-1所示步骤，将试剂和标本分别加入对应的硬塑试管内。

表21-1 血浆游离血红蛋白检测加样步骤测试管标准管空白管1．血浆（μl）100 －－2．Hb标准液（μl）－100 －3．生理盐水（μl）－－1004．R1（μl）1000 1000 10005．R2（μl）1000 1000 10006．R3（μl）100 100 1007.3.1.2加样完毕，取三支试管帽，将3支试管盖上，手持试管两端，来回颠倒3～5次，混匀，放于试管架上；打开37℃恒温水浴箱，将试管连同试管架一起放入水浴箱中，孵育20分钟。

临床检验正常值临床检验参考值一。

血液检验（一）血液一般检验血红蛋白（Hbg）男性120-160g/L女性110—150g/L新生儿170—200g/l红细胞（RBC）男性(4。

0-5.5）×1012/L女性(3.5-5。

0）×1012/L新生儿（6.0—7。

0）×1012/L白细胞(WBC）成人(4.0—10.0）×109/L新生儿（15。

0-20.0) ×109/L6个月至2岁(11。

0—12。

0) ×109/L白细胞分类计数百分率中性杆状核粒细胞0.01-0.05（1%-5%)中性分叶核粒细胞0。

50—0。

70（50%-70%)嗜酸性粒细胞0。

005-0。

05(0。

5％—5%)嗜碱性粒细胞0—0。

01（0％—1％)淋巴细胞0.20-0。

40(20％-40%）单核细胞0.03-0。

08(3％-8％)绝对值中性杆状核粒细胞(0。

04-0.5）×109/L中性分叶核粒细胞(2。

0-7。

0) ×109/L嗜酸性粒细胞(0。

02-0.5）×109/L嗜碱性粒细胞（0-0。

1) ×109/L淋巴细胞（0.8-4。

0）×109/L单核细胞(0.12-0。

8）×109/L点彩红细胞百分率<0.0001(0。

01％）绝对值<300/106红细胞嗜多色性红细胞<0.01(1%）（二)红细胞的其他检验网织红细胞（Rtc）成人百分数0。

005—0。

015(0.5％—1.5%) 绝对值（24-84) ×109/L新生儿百分数0.02-0.06(2%—6%）网织红细胞生成指数（RPI）2红细胞沉降率(ESR) Westergren法男性0-15mm/l小时末女性0-20mm/l 小时末红细胞平均直径6—9µm（平均7。

2µm)红细胞厚度边缘部2µm，中央部1µm血细胞比容(Hct）微量法男性0。

血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）适用范围：该试剂用于定量测定人血浆中游离血红蛋白的含量。

1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×12. 性能指标1、试剂空白试剂空白吸光度值≤0.18。

2、线性区间测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3、准确度回收率90%～110%4、分析灵敏度血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

5、精密度a）重复性变异系数≤10%。

b）批间差连续三批血浆游离血红蛋白试剂盒测定同份血浆样本，其测定值的批间差≤10%。

【包装规格】试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml×1【主要组成成分】R1：TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/LR2：4-氨基安替比林 5mmol/LR3：过氧化氢3.0%【产品性能指标】1. 试剂空白吸光度值≤0.18。

2. 线性区间测量范围[0.025，0.400 ]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3. 重复性：变异系数≤10%。

4. 准确度：4.1 型式检验：回收率90%～110%4.2 出厂检验：检测控质控品，结果在靶值±2SD范围内。

5. 灵敏度：血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

”变更为“产品技术要求1. 产品型号/ 规格及其划分说明1.1 试剂 1（R1）：100ml×1，试剂 2（R2）：100ml×1，试剂 3（R3）：10ml ×1校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂 1（R1） TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L试剂 2（R2） 4-氨基安替比林 5mmol/L试剂 3（R3）过氧化氢 3.0%校准品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白 0.100g/L（目标浓度）质控品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白0.146 g -0.236g/L 。

尿血红蛋白的检测及临床意义一、概述1、尿中血红蛋白(Hb)的检测通常指尿隐血试验。

2、健康人血浆中大约有 50mg/L游离血红蛋白，但尿液中无游离血红蛋白。

当发生血管内溶血时，大量血红蛋白释放入血液形成血红蛋白血症。

若血红蛋白量超过结合珠蛋白结合能力时，血浆游离血红蛋白可经肾小球滤出，当超过1.00~1.35g/L 时血红蛋白可随尿液排出，即为血红蛋白尿。

因此，溶血时是否出现血红蛋白尿取决于3个因素：血浆内游离的血红蛋白、结合珠蛋白和肾小管重吸收能力。

二、检测方法尿血红蛋白测定方法众多，目前应用广泛和简易方法是试带法，还有单抗胶体金法、湿化学法等。

各种方法既能与完整红细胞反应，也能与游离血红蛋白反应，一般认为血红蛋白0.3mg/L 相当于红细胞数为5~10个/μl。

1、试带法试带法的原理：试带法为血红蛋白亚铁血红素过氧化物酶法。

常用的色素原有邻联甲苯胺、氨基比林和四甲基联苯胺(TMB)等。

血红蛋白含有血红素基团，具有过氧化物酶样活性，能催化H2O2作为电子受体使色素原氧化呈色，借以识别微量血红蛋白的存在，其呈色深浅与血红蛋白含量成正比。

试带法目前广泛使用的尿液血红蛋白测定方法，操作简单、快速，可作为尿液血红蛋白的筛检试验。

不同试带灵敏度有所差异，一般为 0.15~0.30mg/L，除与游离血红蛋白反应外，也与完整的红细胞反应。

但在高蛋白、高比重尿液中，红细胞不溶解，此时结果只反映血红蛋白的量。

试带法的假阳性：尿液中含有易热性触酶、尿液被氧化剂污染或尿路感染时某些细菌产生过氧化物酶。

试带法的假阴性：尿液中含大量维生素C或其他还原物质、过量甲醛、大量亚硝酸盐(反应延迟)。

2、免疫法采用胶体金标记抗人血红蛋白单抗，用双抗夹心酶联免疫法测定标本血红蛋白，测定的灵敏度为 0.1~0.2μg/ml，特异性强，只与人血红蛋白反应，不受动物血和辣根过氧化物酶影响。

操作简便快速，以阴阳性表达结果，费用较高，适用于排除干扰的验证，可作为确证试验。

溶血性贫血一般检查【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0260-021 血浆游离血红蛋白测定（邻一甲联苯胺法）1.1实验原理邻-甲联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯胺，产生绿色→蓝色→紫色，其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。

1.2试剂①2g/L邻-甲联苯胺溶液称取邻-甲联苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸馏水至100ml，置于棕色瓶内冰箱保存，色变暗应重配。

②1%过氧化氢溶液用30%过氧化氢原液新鲜配制。

③10%冰醋酸溶液取10ml冰醋酸，加蒸馏水至100ml。

④血红蛋白应用标准液将血红蛋白贮存液用生理盐水稀释成10mg/100ml备用。

⑤抗凝试管用0.2ml100U/ml肝素于试管内，在80℃以下烘干，每管可抗凝2ml全血。

1.3操作方法①将抗凝全血分离血浆。

②取试管3支，标明测定、标准和空白，分别加入血浆、应用标准液和蒸馏水各0.02ml，再向管中加入邻-甲联苯胺溶液及1%过氧化氢溶液各1.0ml，充分混匀，放置10min。

③于上述3支试管内分别加入10%冰醋酸溶液10ml混匀，用435mm波长比色，以空白调“0”，读各管吸光度。

④计算：游离血红蛋白（mg/L）=测定管吸光度/标准管吸光度×100%1.4质量控制①一切容器均应避免血红蛋白污染，标本勿溶血，否则可引起假阳性。

②过氧化氢溶液浓度要准，新鲜配制。

③联苯胺醋酸的含水量不能低于15%和超过30%，否则均可引起吸光度降低。

④标准液的加入量一定要准。

1.5参考区间 <40mg/L。

1.6临床意义血浆游离血红蛋白含量增加是血管内溶血的特征。

血浆中血红蛋白含量超过与血清中结合珠蛋白的结合能力时，其含量即可升高。

微血管内溶血时，血浆游离血红蛋白含量均明显升高。

阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）可为200～2500mg/L，输不合血型后可为150～5000mg/L。