Alb-cre／DTR 小鼠可诱导性肝损伤模型的建立

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小鼠肝癌模型的建立及PTP1B表达的研究

小鼠肝癌模型的建立及PTP1B表达的研究肝癌是目前世界上最常见的癌症之一，而小鼠肝癌模型是研究肝癌病理生理学、分子遗传学等方面的重要工具。

本文将介绍小鼠肝癌模型的建立过程及PTP1B表达的研究。

1. 小鼠肝癌模型的建立小鼠肝癌模型可以通过许多方法进行建立，其中最常用的是化学诱导法、基因改造法和放射性物质诱导法。

本文将着重介绍化学诱导法建立小鼠肝癌模型的过程。

首先，选择适合的小鼠品系进行实验，一般选择C57BL/6J品系的雄性小鼠。

然后，通过口服或注射的方式给小鼠灌服化学致癌物质二甲基亚硝胺（DMN）、二乙二酸氮氫鈉（DEN）或对二氯苯胺（2-AAF）等化学物质，导致肝脏发生损伤和炎症反应，进而促进肝癌的发生。

此后，可根据肝癌的形态特征、肿瘤大小和数量、肿瘤组织学特征等指标对小鼠进行肝癌诊断。

2. PTP1B表达的研究PTP1B是一种酪氨酸磷酸酶，在正常情况下具有负调控胰岛素和胰高血糖素信号通路的作用。

PTP1B在多种人类肿瘤中发挥着重要的作用，如乳腺癌、前列腺癌和肝癌等。

因此，对PTP1B在肝癌发生发展中的作用进行深入研究具有重要意义。

通过小鼠肝癌模型可以获得不同发展阶段的肝癌组织标本，可用于研究PTP1B的表达情况。

目前主要采用免疫组织化学、Western blot、实时荧光定量PCR等技术手段进行测定。

研究结果显示，肝癌组织中PTP1B的表达显著升高，与肝癌细胞增殖和转移相关。

另外，PTP1B抑制剂等新型治疗手段的出现为治疗肝癌带来了新的机遇。

通过对PTP1B的研究，不仅可以深入了解肝癌的发生发展过程，还可以为肝癌的治疗提供新思路和策略。

总之，小鼠肝癌模型的建立和PTP1B表达的研究对于肝癌相关研究具有重要的意义。

未来还需要进一步加强肝癌发生机制和新型治疗手段的研究，为肝癌的预防和治疗提供更有效的手段。

肝功能损伤小鼠模型制备方法

可以参考以下步骤来制备肝功能损伤小鼠模型：
实验动物选择：选择SPF级Balb/c小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g-22g。

实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

建模方法：建立小鼠慢性肝损伤模型。

具体方法为腹腔注射20%CCL4油溶液（5ml/kg），一周2次，连续注射12周。

在12周末次给药3d后，腹腔注射D-Gal（1g/kg）、LPS（10ug/kg）。

干预给药：分别给药TSA（Trichostatin A），正丁酸钠，NF-κB抑制剂（PDTC）等。

模型评价：待小鼠清醒后放回饲养室饲养，密切关注小鼠的状态及生存状况并做好记录。

在建模完成后，处死各组小鼠，取血并分离血清用于生化检测；取肝组织、肠组织进行病理检测。

生化指标包括ALT、AST；取肝组织时，经固定、脱水、包埋后，制石蜡切片；取肠组织进行HE染色。

对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化

对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化郭乐乐;张晓慧;张向颖;胡中杰;任锋;张晶【摘要】目的探讨对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠肝组织糖基转移酶Colgalt2表达的变化.方法取C57BL/6小鼠100只,采用腹腔注射APAP溶液法建立小鼠急性肝损伤模型.首先建立不同浓度干预组,每组10只,分别给予[0 mg·kg-1 APAP(对照组)、100 mg·kg-1 APAP处理组、250 mg.kg-1 APAP处理组、500 mg·kg-1 APAP处理组和1000 mg·kg-1 APAP处理组],再建立不同时间干预组,每组10只,均给予500 mg·kg-1 APAP腹腔注射,分别观察[0 h APAP(对照组)、2 h APAP处理组、4 h APAP处理组、8 h APAP处理组和12 h APAP处理组].采用Real-time quantitative PCR和Western blot法检测肝组织对糖基转移酶Colgalt2基因及其蛋白表达情况.结果在250 mg·kg-1、500 mg·kg-1和1000 mg·kg-1 APAP处理组,血清ALT分别为(1360.5±189.8)IU/L、(3191.2±118.6)IU/L和(5022.7±234.6)IU/L,AST分别为(2147.1±133.4)IU/L、(3628.8±107.9)IU/L和(5854.5±295.1)IU/L,较对照组显著升高(P<0.05);在4 h、8 h和12 h APAP处理组,血清ALT水平有类似的变化;在100 mg·kg-1、250 mg·kg-1、500 mg·kg-1、1000 mg·kg-1 APAP处理组,肝组织Colgalt2基因水平较对照组显著升高;在2 h、4 h、8 h和12 h APAP处理组,肝组织Colgalt2基因水平较对照组逐渐显著升高,肝组织Colgalt2蛋白表达水平也随APAP干预剂量的增加和干预时间的延长也呈逐渐增强趋势.结论肝组织糖基转移酶Colgalt2在对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤小鼠发病过程中发挥着重要的作用.【期刊名称】《实用肝脏病杂志》【年(卷),期】2019(022)001【总页数】4页(P29-32)【关键词】急性肝损伤;对乙酰氨基酚;糖基转移酶;Colgalt2;小鼠【作者】郭乐乐;张晓慧;张向颖;胡中杰;任锋;张晶【作者单位】100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;北京市肝病研究所;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科;北京市肝病研究所;100069 北京市首都医科大学附属北京佑安医院丙型肝炎与中毒性肝病科【正文语种】中文对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）和含有APAP的药物是最常用的解热镇痛药，临床上主要用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，以缓解轻至中度疼痛[1]。

四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察

基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
期间自由饮水(摄食#第'天开始联苯双酯组以&*+!& "6+96灌胃#空白对照组及模型组灌胃等剂量蒸馏水#每天%次#连续灌胃$'%第%&天腹腔注射"*%? 浓度 44=) 橄榄油溶液制备急性肝损伤模型#分别于造模后((+(%!和!)E后处理各组动物#以%"?水合氯醛按"*"( "=+%"6麻醉动物#摘眼球取血#) \# )""";+"$,离心 %& "$,#取血清#采用全自动生化分析仪测各组生化指标 2=K 及 2IK'
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

小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立

巨噬细胞炎性蛋白2小鼠肝脏部分缺血60min组再灌注后细胞因子含量的变化趋势小鼠肝脏部分缺血60min组再灌注后组织学评分的变化趋势小鼠肝脏部分缺血60min组再灌注后凋亡指数的变化趋势肝脏缺血再灌注损伤是外科实践中常见的组织器官损伤之一多见于失血性休克肝脏严重创伤手术肝脏肿瘤切除肝移植等情况缺血再灌注损伤导致肝代谢解毒功能降低微循环阻力升高严重者还可出现肝衰竭直接影响到疾病的预后手术成功率和患者生存率如何保护缺血的肝细胞减少缺血再灌注损伤的发生以及更好地保护供肝都是亟待解决的临床课题因此近年来肝脏缺血再灌注损伤的研究越来越受到重视作为其基础实验研究重要保障的动物模型研究也愈显重要
中华消化外科杂志２０１３年９月第１２卷第９期ＣｈｉｎＮｏ．９
·７０３·
·论著·
小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立
麻勇汪大伟刘连新王建奇王继洲潘华洋潘尚哈姜洪池
【摘要】目的建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型并分析损伤评估指标的变化趋势。方法采用９６只７～８周龄的纯系Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠作为研究对象，建立７０％肝脏缺血再灌注损伤模型。按照缺血时间将小鼠分为假手术组和缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组，每组２４只。各组小鼠分别于再灌注后６、１２、２４和４８ｈ处死。通过检测血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６和巨噬细胞炎性蛋白２（ＭＩＰ２）水平以及病理组织学评分、细胞凋亡指数等方法评估各组小鼠肝组织的损伤情况。两独立样本比较采用ｔ检验。结果术后８８只小鼠存活，８只死亡，造模成功率为９１．７％（８８／９６）。假手术组、缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＡＬＴ水平分别为（３５±２４）Ｕ／Ｌ、（１７０３±４４２）Ｕ／Ｌ、（５１３３±６８１）Ｕ／Ｌ和（８２３３±８０８）Ｕ／Ｌ，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＡＬＴ水平显著高于假手术组（ｔ＝６．５４，１２．９７，１７．５６，Ｐ＜０．０５）；ＡＳＴ水平分别为（８７±２８）Ｕ／Ｌ、（２６６７±４５１）Ｕ／Ｌ、（６３３３±７７８）Ｕ／Ｌ和（９９６７±１１６８）Ｕ／Ｌ，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＡＳＴ水平显著高于假手术组（ｔ＝９．８９，１３．８９，１４．６５，Ｐ＜０．０５）；ＴＮＦα水平分别为（１４±５）μｇ／Ｌ、（８３±１４）μｇ／Ｌ、（１３３±１７）μｇ／Ｌ和（２０２±２１）μｇ／Ｌ，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＴＮＦα水平显著高于假手术组（ｔ＝７．７８，１１．８２，１５．３４，Ｐ＜０．０５）；ＩＬ６水平分别为（３２±９）μｇ／Ｌ、（４９３±１６８）μｇ／Ｌ、（８４４±１６６）μｇ／Ｌ和（１３４５±１９８）μｇ／Ｌ，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＩＬ６水平显著高于假手术组（ｔ＝４．７４，８．４６，１１．４８，Ｐ＜０．０５）；ＭＩＰ２水平分别为（３７±１１）μｇ／Ｌ、（１０２±３５）μｇ／Ｌ、（１７７±３２）μｇ／Ｌ和（２７９±５０）μｇ／Ｌ，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组ＭＩＰ２水平显著高于假手术组（ｔ＝３．０５，７．２８，８．１９，Ｐ＜０．０５）；细胞凋亡指数分别为１．７％±２．１％、２２．７％±８．６％、５４．３％±１１．２％和７６．３％±１４．８％，缺血３０、６０、９０ｍｉｎ组细胞凋亡指数显著高于假手术组（ｔ＝４．１０，８．０４，８．６３，Ｐ＜０．０５）。在缺血时间相同的情况下，随着再灌注时间的延长，各监测指标呈“抛物线”样变化趋势。结论小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型能较好地反映小鼠肝组织的损伤情况。随着缺血时间的延长，小鼠肝脏的缺血再灌注损伤程度逐渐加重；随着再灌注时间的延长，ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦα、ＩＬ６、ＭＩＰ２以及病理组织学评分和细胞凋亡指数均呈现“抛物线”样变化趋势。【关键词】肝脏；缺血再灌注损伤；小鼠；模型

血管内皮间质样转分化遗传示踪小鼠模型的构建及其在肝纤维化研究中的应用

Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｃｉｎｇａｎｄｉｔｓｒｏｌｅ
ｉｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｓｔｕｄｉｅｓ
，，，，，（，ＸＵＨａｏ１ＲＵＡＮＢａｉ１，２ＬＩＺｈｉｗｅｎ１ＦＡＮＧＺｈｉｑｉａｎｇ１ＷＡＮＧＬｉｎ１ＤＯＵＫｅｆｅｎｇ１．１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔｉｃａｎｄ，，， ’ ，；，ＳｐｌｅｎｉｃＳｕｒｇｅｒｙＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌＡｉｒＦｏｒｃｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＸｉａｎ７１００３２Ｃｈｉｎａ２．ＣｅｎｔｅｒｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＡｅｒｏｓｐａｃｅＭｅｄｉｃｉｎｅＳｃｈｏｏｌｏｆ，， ’ ，）ＡｅｒｏｓｐａｃｅＭｅｄｉｃｉｎｅＡｉｒＦｏｒｃｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＸｉａｎ７１００３２Ｃｈｉｎａ：，（：）ＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒＤＯＵＫｅｆｅｎｇｄｏｕｋｅｆ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎＯＲＣＩＤ００００－０００２－８８５７－５６６３
ｌｅｃｔｅｄｆｏｒｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｔｄＴｏｍａｔｏａｎｄｅＧＦＰ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｆｔｅｒｂｅｉｎｇｉｎｄｕｃｅｄ
，ｂｙｔａｍｏｘｉｆｅｎＬＳＥＣｓａｎｄｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｏｆＣｄｈ５－ＣｒｅＥＲＴ／Ａｃｔａ２－ＫＩｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｃｉｎｇｍｉｃｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｅＧＦＰｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－，ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｗｈｉｌｅｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄｔｄＴｏｍａｔｏａｌｏｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕ

异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究_禄保平

·论著·异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型的研究禄保平，杨晓娜，许家艳【摘要】目的探索应用异烟肼灌胃建立小鼠急性肝损伤模型，并初步阐明其机制。

方法昆明种小鼠 50 只，随机分为异烟肼正常剂量造模组（常量组）、2 倍剂量造模组（2 倍量组）、5 倍剂量造模组（5 倍量组）、8 倍剂量造模组（8 倍量组）和空白对照组，每组各 10 只。

各造模组分别以 90、180、450、720 mg/kg 剂量的异烟肼灌胃，18 h 后检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平并取肝组织进行光镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量。

另取昆明种小鼠 90 只，随机分为单纯造模组（40 只）、干预造模组（40 只）和空白对照组（10 只），各造模组以相对合适剂量异烟肼灌胃，其中干预造模组于造模前以甘利欣75 mg/kg 体重连续灌胃 5 d，18、36、54、72 h 后分别检测血清 ALT、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）水平，并进行肝组织光镜和电镜观察，探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制。

结果在探索相对合适剂量实验中，2 倍量组小鼠血清ALT、AST 分别为（101.6 ± 6.3）和（108.1 ± 14.9）U/L，明显高于空白对照组的（30.1 ± 3.6）、（35.3 ± 6.5）U/L 和常量组的（52.8 ± 5.3）、（53.9 ± 8.9）U/L，差异均有统计学意义（均P < 0.05），肝细胞出现广泛的脂肪变性和水肿，肝窦几乎消失；5 倍量组小鼠死亡 7 只，8 倍量组小鼠则全部死亡。

在探索相对合适时间及发生机制实验中，应用2 倍剂量异烟肼灌胃后 18 h，单纯造模组小鼠血清 ALT、MDA 水平明显高于空白对照组，SOD、GSH-Px 水平明显低于空白对照组，肝细胞广泛损伤，细胞超微结构显著变化。

10种细胞损伤模型建立方法

10种细胞损伤模型建立方法转载请注明来自丁香园发布日期：2012-10-09 14:36 文章来源：丁香园分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网关键词：细胞细胞培养技术专题义翘神州丁香园丁香通点击次数：997现在很多实验都涉及到细胞损伤模型的建立和运用，如CCl4诱导肝细胞损伤模型（体内、体外）、PC12细胞的NO和淀粉样蛋白(Aβ)损伤模型、神经元缺血再灌注损伤模型，以及脉络宁对骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用等。

一、体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。

将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。

然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素）制成1×109个·L-1肝细胞悬液。

分离的肝细胞经0.6％台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90％，高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99％为肝实质细胞。

将上述肝细胞悬液分别加入24孔（每孔1 ml）和96孔（每孔0.1 ml）培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。

12～16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。

2CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立肝细胞培养12 h后，吸弃上清，更换培养液并加入不同浓度的CCl4〔（1～16mmol·L-1），以少量的二甲亚砜助溶，二甲亚砜终浓度为0.1％（体积分数）〕，作用不同时间（1～12 h）后，收集24孔板中培养上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSHpx 活性；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。

肝损伤模型的建立

肝损伤模型的建立：1. 四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h（贴壁良好）后，置培养皿于一密闭的塑料盒，内置四氯化碳0.4M容积，37度90min，造成肝细胞损伤的模型，后转入正常培养，进行下一步实验。

(即熏蒸法)肝细胞培养12h后，吸弃上清，更换培养液并加入CCL4 8mM（事先用DMSO溶解，DMSO终浓度1％），作用6h后收集24孔板中培养上清检测AST以及肝细胞MDA含量盒GSHpx活性，评价损伤程度。

（常用方法）2.醋氨酚体外损伤肝细胞模型肝细胞培养24h后，用清洗液洗2次，培养液洗1次，然后换以20mM醋氨酚的培养液，继续培养12h，取培养液，进行下一步实验。

3.过氧化氢体外损伤肝细胞模型肝细胞培养24h后，吸弃上清液，更换培养液并加入H2O2 0.6mM，作用1h后，收集24孔板中的培养上清液检测AST活性和MDA含量。

4.氰化钾缺氧肝细胞损伤模型肝细胞培养24h后，贴壁生长良好的肝细胞中加入氰化钾2.5mM，继续培养2h，定量检测培养液上清中LDH活性，以及酶的活性反应肝细胞损伤程度。

本模型可以更好的模拟缺氧损伤。

5.硫代乙酰胺（TTA）体外肝细胞损伤模型肝细胞预培养24h后，贴壁生长良好的肝细胞中加入TTA0.18mM，继续培养48h，肝细胞大量损伤和坏死，上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性升高，造成体外损伤肝细胞模型。

6.内毒素体外损伤肝细胞模型贴壁生长良好的肝细胞中加入内毒素70uL/mL，置37度，5％CO2培养此时上清LDH 活性升高造成肝细胞损伤模型，造成体外肝细胞损伤模型。

7.半乳糖胺（GalN）体外损伤模型分离肝细胞，预培养12-24h后，待细胞贴壁生长均匀后，加入5mMGalN的肝细胞培养液，继续培养1.5h，测定培养上清液中ALT，ALT显著升高时，肝细胞造模成功。

2.体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。

药食两用中药及活性成分抗肝损伤研究进展-王晓慧

WANG Xiaohui1，YANG Bo1，ZHOU Zhongguang1，GONG Minghai1， LI Donghui1，ZHENG Xiangqun2，LIU Ning2
（1.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，Heilongjiang，China；2.Tianwenshan
质量下降，胆汁淤积会出现身体皮肤及眼睛黄染，皮下瘀血、瘀斑等症状。肝损伤如不及时合理控制，会导致肝纤维化、肝硬化甚至肝功能衰竭等严重疾病的发生。现代研究发现，大部分药食两用中药具有抗氧化、抗炎、抗衰老以及抑制酯化等药理作用。此外，由于药食两用中药具有天然的安全性，在防病保健方面的作用逐渐凸显。目前，已有多种药食两用中药单味、中药制剂或复方制剂应用于临床（如栀子清气颗粒、黄精口服液、黄精乳膏等）。本文将近 5 年国内外文献对目前药食两用中药及其有效成分抗肝损伤作用及机制加以综述，希望为后续深入研究
基金项目：黑龙江省应用技术研究与开发计划重大项目（GA16C102）作者简介：王晓慧（1980-），女，黑龙江绥棱人，副教授，硕士，研究方向：中医药抗肝硬化研究。通讯作者：周忠光（1957-），男，黑龙江哈尔滨人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中医药抗衰老、抗肿瘤研究。
138
2 3 卷
质酸（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ- 谷氨酸转肽酶（γ-GT）的含量及组织匀浆中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）水平。研究表明：甘草硒多糖对肝损伤有保护作用，其机制是通过清除自由基而达到防治肝细胞损害作用。 2.3 决明子
Agricultural Comprehensive Development Co.，Ltd.，Harbin 150323，Heilongjiang，China）

小鼠急性酒精性肝损伤模型的制备及观察

ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｌｉｖｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＥｉｇｈｔｙＩＣＲｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐｓ，ｆｏｕｒｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓａｎｄ
北方药学２０１４年第１１卷第６期
６７
小鼠急性酒精性肝损伤模型的制备及观察
林晓晖黄玲王一铮刘如玉（福建中医药大学中西医结合学院福卅ＩＩ３５０１２２）
摘要：目的：建立小鼠酒精性肝损伤模型，并动态研究小鼠血清和肝脏的生化指标的变化。方法：将８０只清洁级ＩＣＲ小鼠随机分为８个组：４个模型组和４个空白组。模型组小鼠按１２ｍｌ・ｋｇｄ胃灌注５２度白酒，空白组小鼠给予胃灌注等量蒸馏水，分别在灌胃后２ｄ，４ｄ，６ｄ，８ｄ各取一组模型组和空白组小鼠，测定血清ＡＬＴ、ＴＧ，肝脏指数，肝组织ＳＯＤ和ＭＤＡ。结果：与同时段空白组比较，造模６ｄ后，小鼠血清中ＡＬＴ和ＴＧ均显著升高（Ｐ＜０．０１），肝脏指数、肝组织中ＴＧ和ＭＤＡ显著升高（Ｐ＜０．０１），而ＳＯＤ活性显著下降（Ｐ＜０．０１）。结论：本实验在短时间内成功建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，稳定性好，可应用于护肝药物保护机制的研究。关键词：酒精性肝损伤动物模型

肝损伤动物模型的造模方法

肝损伤动物模型的造模方法
1. 化学物质诱导，这是最常用的方法之一，可以使用一些化学
物质如四氯化碳（CCl4）、醋酸乙酯（TAA）、二甲基硫醚（DME）
等来诱导肝损伤。

这些化学物质可以通过不同的途径进入动物体内，导致肝细胞损伤和肝功能异常。

2. 手术诱导，通过手术方法，可以直接对动物的肝脏进行切割、缺血再灌注等操作，从而引起肝损伤。

这种方法可以控制损伤的程
度和范围，适用于研究特定类型的肝损伤模型。

3. 遗传工程模型，利用转基因技术或基因编辑技术，可以构建
特定基因缺陷的动物模型，如肝细胞特异性基因敲除或过表达，从
而模拟特定的肝损伤情况。

4. 营养学诱导，通过控制动物的饮食，可以诱导脂肪肝、酒精
性肝病等肝损伤模型。

例如，高脂饮食可以导致脂肪肝，酒精饮食
可以导致酒精性肝病。

5. 辐射诱导，辐射也可以用来诱导肝损伤，如通过X射线或其
他辐射源对动物的肝脏进行照射，引起肝细胞的损伤和炎症反应。

总的来说，选择合适的肝损伤模型方法需要考虑研究的具体目的、动物种类、研究经费和实验条件等因素，并且在进行实验时需要严格控制实验条件，确保模型的可靠性和稳定性。

同时，也要遵守动物实验伦理规范，保障动物的福利和权益。

2023年关于1小鼠cre原理

小鼠cre原理小鼠cre原理是一种重要的基因编辑技术，可以用于特定类型细胞中的基因靶向突变，从而为研究人员提供了一种有力的工具来研究基因在生物体中的功能以及与疾病相关的变化。

本文将从小鼠cre原理的背景、实施方法以及应用前景等方面进行阐述。

一、背景小鼠cre原理来源于细菌λ噬菌体的遗传遗传系统，通过融合细菌λ噬菌体cre基因与特定的转基因小鼠中的目标基因，可以在特定类型细胞中实现基因靶向突变。

cre酶是一类重组酶，可以通过结合特定的DNA序列（loxP位点）来切割DNA链，从而引发DNA重组并导致基因突变。

二、实施方法小鼠cre原理的实施需要进行两个主要步骤：建立转基因小鼠和使用小鼠cre酶进行基因突变。

1. 建立转基因小鼠首先，通过克隆技术将cre基因与目标基因进行融合，形成一个新的重组DNA序列。

然后，将这个重组DNA序列导入胚胎干细胞中，通过胚胎解剖学的方法将这个重组DNA序列导入小鼠胚胎中。

最后，将转基因胚胎植入母鼠子宫中进行孕育，从而获得转基因小鼠。

2. 使用小鼠cre酶进行基因突变在获得转基因小鼠后，研究人员可以通过激活cre酶来实现基因突变。

首先，在特定类型细胞中表达cre酶，使其与目标基因的loxP位点结合。

当loxP位点两端的DNA链被切割后，就可以进行DNA重组。

研究人员可以通过不同的重组方式来实现目标基因的突变，如基因敲除、基因拼接、基因位点交换等。

三、应用前景小鼠cre原理的应用前景十分广阔。

通过这种技术，研究人员可以实现特定类型细胞中目标基因的突变，从而深入研究基因在生物体中的功能和相互作用。

此外，小鼠cre原理还可以用于模拟人类疾病的基因突变，从而研究疾病的发生机制、治疗方法以及相关药物的筛选等方面。

小鼠cre原理不仅在基础科学研究中有重要意义，还在医学研究和药物研发领域发挥着重要作用。

通过对特定基因的靶向突变，可以深入研究基因的功能和相互作用，为疾病的预防和治疗提供有力的依据。

cre重组酶转基因小鼠原理

cre重组酶转基因小鼠原理
CRE recombinase (CRE) 重组酶是一种生物学工具，用于在基因组中定向地编辑和改变基因序列。

它通过识别并损伤两个特定的DNA 目标序列（称为LoxP 序列）来实现这一目的。

CRE 重组酶转基因小鼠是通过将CRE 重组酶基因插入到小鼠基因组中来实现的。

这些小鼠称为CRE 转基因小鼠。

这些小鼠可以用来研究基因编辑和基因疾病，以及药物研发。

在CRE 重组酶转基因小鼠中，CRE 重组酶基因可以被插入到特定基因的启动子区域中，这样CRE 重组酶就能在特定组织或细胞中表达。

这种基因敲除或基因编辑的方法称为条件型基因敲除。

例如，在一种常见的CRE 重组酶转基因小鼠中，CRE 重组酶基因被插入到肝脏中的基因启动子区域中，这样只有在肝脏细胞中才能表达CRE 重组酶。

这种小鼠可以用来研究肝脏疾病的基因编辑疗法。

CRE 重组酶转基因小鼠还可以用来研究其他器官和组织的基因编辑疗法，如心脏、肺、肠、脑等。

这些小鼠也可以用来研究各种疾病的基因编辑疗法，如癌症、遗传性疾病等。

总之, CRE重组酶转基因小鼠是一种重要的生物学工具, 可以用来研究基因编辑和基因疾病，以及药物研发。

它能够在特定组织或细胞中实现基因敲除或基因编辑，进而探究基因对疾病的影响。

CRE重组酶转基因小鼠原理是通过将CRE重组酶基因插入到小鼠基因组中,这样就能在特定组织或细胞中表达CRE重组酶。

CRE重组酶能识别并损伤两个特定的DNA目标序列（称为LoxP序列），实现在基因组中定向地编辑和改变基因序列。

这样就能在特定组织或细胞中实现基因敲除或基因编辑，进而探究基因对疾病的影响。

Cre-LoxP技术构建肝脏特异性HIF-2α基因敲除小鼠模型

【摘要】目的探讨采用 Cre-LoxP 技术构建肝脏特异性 HIF-2α 基因敲除小鼠模型的可行性。方法由美国 Jackson 实验室引进 loxP 标记的 HIF-2α 基因小鼠，采用 Cre/loxP 重组酶系统和 Alb-Cre 转基因小鼠，通过多次繁殖杂交，建立肝脏特异性 HIF-2α 基因敲除小鼠模型。利用 PCR 技术鉴别小鼠基因型，并用 RT-qPCR 检测小鼠肝脏、脂肪及肌肉组织 HIF-2α mRNA 水平，同时检测野生型小鼠和 Alb-Cre+/HIF-2αfl/fl 的纯合子小鼠血糖、血脂以及肝功能水平。3 组 HIF-2α mRNA 数据比较采用单因素方差分析和 Turkey 检验。结果 PCR 法成功检测出子代小鼠基因型，包括 Alb-Cre+/HIF-2αfl/fl 和 AlbCre-/HIF-2αfl/fl 纯合子小鼠。肝脏 HIF-2α 基因敲除鼠肝脏组织 HIF-2α mRNA 表达量为 0.10±0.02，明显低于野生型小鼠的 1.00±0.10（HSD=-1.87，P<0.05）。结论采用 Cre-LoxP 技术可成功构建肝脏特异性 HIF-2α 基因敲除小鼠。
【Abstract】 Objective To investigate the feasibility of establishing a mouse model with liverspecific HIF-2α gene knockout using Cre-LoxP technique. Methods The loxP-labeled mice with HIF-2α gene were introduced from the Jackson Laboratory of the United States. A liver-specific HIF-2α gene knockout mouse model was established by using Cre/loxP recombinase system and Alb-Cre transgenic mice through multiple generations of hybridization. The genotypes of mouse were identified by PCR. The expression levels of HIF-2α mRNA in the liver, fat and muscular tissues were detected by RT-qPCR. The blood glucose, blood lipid and liver function levels in the wild-type mice and Alb-Cre+/HIF-2αfl/fl homozygous mice were detected. The levels of HIF-2α mRNA among three groups were statistically compared by one-way ANOVA and Turkey test. Results The genotypes of the 2nd generation mouse were successfully identified, including Alb-Cre+/HIF-2αfl/fl and Alb-Cre-/HIF-2αfl/fl homozygous mice. The expression level of HIF-2α mRNA in the liver tissues of HIF-2α gene knockout mice was 0.10±0.02, significantly lower than 1.00±0.10 of the wild-type mice (HSD=-1.87, P<0.05). Conclusion The mouse models with liver-specific HIF-2α gene knockout can be successfully established using Cre-LoxP technique.

中国蛤蜊水提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用

中国蛤蜊水提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用王晓洁;史倩;张晨晨;王守海;刘晓晨;刘新生;曲彦清【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)019【摘要】目的：研究中国蛤蜊水提取物（WEMC）对四氯化碳（CCl4）所致小鼠肝损伤的保护作用。

方法：对小鼠经口灌胃0.15、0.45、0.90g/（kg.d）的中国蛤蜊水提取物,8d后,以1mL/kg的剂量一次性腹腔注射6%的CCl4,24h后测定小鼠的肝指数、血清谷丙转氨酶（ALT）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、球蛋白（Glb）、白球比（A/G）等指标,光镜下观察肝组织学变化。

结果：中国蛤蜊水提取物各剂量组均能显著降低CCl4所致急性肝损伤小鼠的血清ALT的水平（P 〈0.01）,各剂量组的A/G较模型组明显上升（P〈0.01）,且明显促进肝功能的恢复,但对肝指数无明显影响,光镜下可见中国蛤蜊水提取物可明显改善肝组织损伤程度。

结论：中国蛤蜊水提取物对CCl4所致小鼠肝损伤有保护作用。

【总页数】4页(P205-208)【作者】王晓洁;史倩;张晨晨;王守海;刘晓晨;刘新生;曲彦清【作者单位】鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025;鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025;鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025;鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025;鲁东大学生命科学学院,山东烟台264025;鲁东大学校医院,山东烟台264025;鲁东大学校医院,山东烟台264025【正文语种】中文【中图分类】TS254.1【相关文献】1.六月雪水提取物对小鼠实验性肝损伤的保护作用 [J], 刘春棋;卑占宇;李洪亮;江丽霞;范小娜2.镰叶西番莲地上部分水提取物对乙醇诱导小鼠急性肝损伤的保护作用研究 [J], 卢传礼3.柿叶水提取物对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用及机制 [J], 成芳梅;王翠荣;黄斌;林桂宇;梁丹妮;黄仁彬4.老鹳草水提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用 [J], 郑铁;周微;徐铁;宫雪;朴光春;李镐5.网状五层龙热水提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用 [J], 宫德正;耿成燕;姜丽萍;李秋娟;仲来福因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

URG?小鼠是什么？

URGⓇ小鼠是什么？该模型是国内最早的人源化肝脏小鼠模型。

URG小鼠由4种基因修饰动物模型交配获得，包含2个转基因和2个基因敲除。

其核心模型源于2009年Song等[49]构建了TRE-uPA转基因小鼠和Alb-rtTA转基因小鼠，然后交配获得了Alb-rtTA/TRE-uPA双阳性小鼠；通过Dox诱导，在该小鼠中检测到uPA表达和肝损伤。

北京维通达生物技术有限公司的研发人员将Alb-rtTA/TRE-uPA双阳性小鼠连续8代回交到NRG(NOD背景Rag2null/ Il2rgnull小鼠)背景，2012年获得Alb-rtTA/ TRE-uPA/Rag2null/Il2rgnull小鼠。

作为新一代的可调控肝损伤人源化肝脏小鼠模型，人源肝脏细胞可以实现高达95%整肝重建，满足HBV药物的药效、药代和药动等相关实验需要。

使用该模型，也发表了一系列高水平研究论文[50-53]。

宿主免疫应答在HBV感染中起着至关重要的作用，然而上面5种人鼠嵌合肝脏小鼠，均为高度免疫缺陷背景，无法直接用于HBV特定的免疫和炎性反应研究。

Washburn等[48]开发了一种人源化小鼠模型(AFC8-hu-HSC/Hep小鼠)，共移植人CD34+造血干细胞(HSC)与肝细胞祖细胞进入新生(出生后第1周内)的转基因小鼠，同时具有人类免疫系统和人的肝细胞。

但是这个模型人肝细胞重建水平低，也未检测到抗原特异性B淋巴细胞和T淋巴细胞反应。

2014年，这个小组建立了A2/NSG/Fas hu-HSC/Hep双人源化小鼠模型(人HLA-A2转基因的NSG小鼠)，人HLA-A2转基因促进人MHC限制性T淋巴细胞的发育；小鼠特异性抗Fas激动剂治疗抗体(JO2)支持人体免疫细胞和肝细胞的再增殖[54]。

A2/NSG/Fas hu-HSC/Hep小鼠可支持持续性HBV 感染(＞4个月)与HBV特异性人类免疫有关的肝纤维化；而且在HBV 感染的嵌合肝脏中，观察到活化的人M2样巨噬细胞聚集，这与HBV 引起的急性和慢性感染相似。

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Alb-cre／DTR 小鼠可诱导性肝损伤模型的建立任晓楠;任蓉蓉;刘雪;杨华;秦波音;周晓辉【摘要】目的：建立Alb-cre／DTR双转基因小鼠模型并进行相关表型分析，在此基础上建立可诱导性肝损模型，用于肝脏疾病的相关研究。

方法将引进的Alb-cre和DTR小鼠扩繁后，通过杂交的方式获得双转基因小鼠。

提取小鼠尾部组织DNA，利用PCR方法进行基因型鉴定。

在双转基因小鼠上腹腔注射白喉毒素，之后在不同时间点进行称重、采血，检测血清ALT、AST水平。

结果将Alb-cre和DTR小鼠杂交、筛选后获得了Alb-cre／DTR双转基因小鼠，对该小鼠使用0.625 ng／g剂量的白喉毒素，可使小鼠血清中ALT与AST水平显著升高，解剖小鼠后观察到肝整体变白，HE染色结果显示肝细胞明显坏死。

结论成功建立可诱导特异性肝损伤小鼠模型。

%Objective To analyze the Alb-cre/DTR mouse phenotype, and establish a model of induced liver damage to serve basic researches of liver diseases.Methods The introduced Alb-cre and DTR mice were crossed to obtain Alb-cre/DTR mice and the genomic DNAs were extracted from the tail tissue of the mice for genotying by PCR.Diphtheria toxin was intraperitoneally(i.p.)injected into the Alb-cre/DTR mice, then the body weights were monitored and the sera were collected for the detection of serum ALT and AST levels.Results By crossing Alb-cre and DTR mice we obtained the Alb-cre and DTR double transgenic mouse.The intraperitoneal injection of diphtheria toxin in a dose of 0.625 ng/g body weight significantly induced liver injury in these mice, as showed by the elevated levels of ALT and AST, the gross appearance of liver damage and the pathological changes such as necrosis in the liver tissue.ConclusionsWe have ob-tained a novel mouse strain of Alb-cre/DTR by crossing Alb-cre and DTR mice.Liver damages in those Alb-cre/DTR mice can be induced by injection of diphtheria toxin.This established mouse model of inducible liver damage is a useful platform for the studies of liver damage and recovery, as well as liver transplantation.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2016(024)002【总页数】5页(P134-138)【关键词】Alb-cre;DTR;转基因;特异性肝损伤;小鼠【作者】任晓楠;任蓉蓉;刘雪;杨华;秦波音;周晓辉【作者单位】上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海201508;上海市公共卫生临床中心，上海 201508【正文语种】中文【中图分类】Q95-33肝疾病是对人类威胁最大的疾病之一［1-2］，除病毒性肝炎外［3-4］，肝脏疾病中肝硬化、肝癌等危害也相当严重；肝脏移植手术对于解决肝系统疾病和肝代谢紊乱等来说是一种非常重要的手段［5］，但是肝移植手术仍然面临很多尚未解决的问题，需要更多的相关研究来提高移植后肝细胞的再生和增殖问题。

与肝脏的移植相比，肝细胞的移植更具可行性［6］，所需费用也较小。

建立肝损伤动物模型是研究肝细胞移植和再生的关键性技术［7］。

基于上述研究背景，研究者利用Cre-loxp条件性敲除系统控制转基因表达的技术，将白喉毒素受体基因特定表达于小鼠肝细胞，构建了Alb-cre/DTR小鼠。

目前基于Cre-loxp 条件性敲除系统的应用非常多，但是通过该技术使用白喉毒素诱导肝损伤的动物模型还未见相关报道。

研究者构建的模型即可通过注射白喉毒素实现可控性、诱导性肝损的发生，是一种新型的肝损模型。

1.1 实验动物B6.Cg-Tg（Alb-cre）21Mgn/J小鼠（以下简称Alb-cre小鼠）引自美国Jackson实验室，pCAGSTOP-DTR-2A-EGFP小鼠（以下简称DTR小鼠）引自北京百奥赛图基因生物技术有限公司。

遗传背景均系C57BL/6小鼠。

1.2 小鼠的饲养和繁殖按照SPF级动物饲养标准在上海市公共卫生临床中心实验动物中心［SYXK（沪）2015-0008］进行饲养。

室内温度20～25℃，相对湿度50% ～60%，每日光照12 h，小鼠饲料、饮水、垫料均经高温高压灭菌处理。

将引进的Alb-cre和DTR 小鼠分别繁殖扩群后，采用公∶母=1∶1的同居方式进行繁殖，母鼠妊娠后单笼饲养。

产生F1代杂交小鼠后在幼仔21日龄左右离乳，剪脚趾标记，剪鼠尾待检测基因型。

1.3 主要试剂动物组织基因组小量提取试剂盒（DK611-02）和2×Taq PCR Master mix （PT102-02）购自上海莱枫生物科技有限公司，琼脂糖和DNA marker购自北京全式金生物生物技术有限公司，白喉毒素购自Sigma公司。

1.4 小鼠的基因型鉴定1.4.1 小鼠尾部基因组DNA提取剪小鼠尾0.5～1 cm置入EP管中，按照上海莱枫生物公司的动物组织DNA提取试剂盒的说明书进行DNA抽提。

1.4.2 小鼠基因组DNA的PCR扩增反应（Alb-cre 和DTR定型用引物如表1）（1）Alb-cre/DTR小鼠Alb-cre基因的PCR反应体系下列反应物构成25 μL的反应体系：2×PCR Master Mix 12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物（10 μmol/L）1 μL，模板DNA 2 μL，加ddH2O 8.5 μL，共25 μL。

PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃30 s；延伸72℃30 s；共30个循环，最后再延伸72℃10 min，之后10℃保存。

（2）Alb-cre/DTR小鼠DTR基因的PCR反应体系下列反应物构成25 μL的反应体系：2×PCR master Mix 12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物（10 μmol/L）1 μL，模板DNA 2 μL，加ddH2O 8.5 μL，共25 μL。

WT rosa-GT PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃ 35 s；延伸72℃ 35 s；共35个循环，最后再延伸72℃ 10 min，之后10℃保存。

Mutant EGFP PCR反应条件：预变性95℃ 5 min；变性95℃30 s；退火62℃ 20 s；延伸72℃ 20 s；共35个循环，最后再延伸72℃ 10 min，之后10℃保存。

1.4.3 琼脂糖凝胶电泳及结果分析PCR之后通过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。

制备1%琼脂糖凝胶，取PCR反应终产物10 μL进行电泳，120 V，20 min。

电泳后使用凝胶成像系统进行电泳图片分析。

鼠尾琼脂糖凝胶电泳基因型片段为：鉴定Alb-cre基因，含有该基因的片段大小为275 bp，野生型则没有相应片段；鉴定DTR，野生型为Rosa-GT引物对扩增片段，大小为469 bp，纯合子为DTR/EGFP引物对扩增片段，大小为234 bp，杂合子为469 bp和234 bp，根据条带大小鉴别含有双基因的小鼠。

1.5 特异性肝损伤小鼠模型的建立取SPF级Alb-cre/DTR小鼠（含有cre、DTR杂合）和C57BL/6小鼠（购自上海斯莱克实验动物中心）各3只，9～10周龄，雄性，于实验前采血，分离血清，检测造模前小鼠本底ALT、AST值，之后称取体重，将0.625 ng/g小鼠体重剂量的白喉毒素溶于200 μL的PBS溶液中，通过腹腔注射的方式造模；分别于造模后第1、2、3、4、7、8、9天监测小鼠体重并采血，全血标本于室温静置1 h后600 r/min离心15 min分离血清，用于ALT与AST指标的检测，实验第四天时自然死亡小鼠解剖取肝进行大体观察，留取肝4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，观察肝病理组织学改变。

1.6 统计学方法数据均以均值±标准差表示，两组间均值的统计比较实用非配对t检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2.1 Alb-cre/DTR小鼠Alb-cre基因型鉴定结果通过PCR检测Alb-cre/DTR小鼠的Alb-cre基因型，含有Alb-cre基因的小鼠在279 bp有条带，野生型在相应位置则没有条带（图1）。

2.2 Alb-cre/DTR小鼠DTR基因型鉴定结果通过PCR检测Alb-cre/DTR小鼠的DTR基因型，野生型为469 bp，纯合子只有234 bp一条带，杂合子有469 bp和234 bp两条带（图2A和2B）。

2.3 肝损伤表型的建立2.3.1 小鼠体重变化的比较造模后，Alb-cre/DTR小鼠的体重开始下降，第4天降至最低，只有原有体重的（87.89% ± 0.8822），C57BL/6小鼠为（100.3% ±0.4490），两者差异有显著性（P＜0.001）。