桦褐孔菌三萜类物质的提取与含量测定解读

维普资讯 ３期林庚申等：桦褐孔菌三萜类物质的提取与含量测定表４不同溶剂对桦褐孔菌菌丝体三萜类化合物提取量的影响＝３）ＴｂｅｎｅｔｏｔｔｐｎｉｓｘｒｃｅｏｍｙｅａｆｈｅｐｏｕｂＵｔｉｅｅｔｘｒｃｏｏｖｎｓ＝３ａｌ４ＣｏｔｎｓｆｒｅｅｏｄｔｔｄｆｍｃｌＰａｏｒｓｏ幻ＵＳｈｄｆｒｎｅｔｔｎｓｌｅｔｉｒｅａｒｉｏｗｉｆａｉ）注：同一行数值上的不同字母表示差异达到５的显著水平％Ｎｏｅ。

ｌｅｎｔｅｓｍｅｌｎｔｆｅｅｔｅｔｒｎｉａｅｓｇｉｃｎｔｉｆｒｎｅａｐ＜００ｅｅ．ｔ：Ｖａｕｓｉａｉｅｗｉｄｉｆｒｎｔｓｉｄｃｔｉｎｆａｆｅｅｃｔｈｈｌｅｉｄ５ｌｖ１．表５异丙醇提取时间对桦褐孔菌菌丝体三萜类化合物提取量的影响＝３）Ｔｂｅ５ｏｔｔｏｔｔｒｅｏｄｘａｔｏｃｌｆｈｅｐｒｓｂｉｕｓｉｏｒｐｎｌｉｅｅｔｘｒｃｏｍｅ＝３ａｌｎｅｓｆｒｅｐｎｉｓｔｃｅｆｍｍｙｅｉｏＰａｏｏｕｌｕｔｉｐｏａｏｉｄｆｒｎｅｔｔｎｉＣｎｉｅｒｄｒａｏｑｗｈｓｎａｉｔ）注：同一行数值上的不同字母表示差异达到５的显著水平．Ｎｔ：Ｉｅｅａｅｉｅｔｉｅｎｌｔｓｎｉａｇｉｃｎｉｅｎｅｔｏ～ａｓｎｔｌｎｈｄｆｒｔｅｅｄｃｔｓｎｆａｔｆｒｃｐ＜００ｖ１ｅｕｉｈｓｎｌｗｉｅｔｒｉｅｉｉｄｅａ．５ｅｅ．ｌ一、ｔ、ｔ３诃论目前报道三萜类化合物的提取方法主要有反复萃取法（书铭等，２０）、超声提取黄０４法（徐榕和许津，２０）和溶剂回流法（０５马林等，２０；孙宏和张泽，２０）。

采用的溶０３０５剂主要为氯仿、甲醇、二氯甲烷、正己烷，其中尤以有毒性的氯仿和甲醇为常用。

这些方法所需的提取样品量较大，即每个样品需要１１ｇ～０，而且每个样品超声和回流的时间较长（．～１ｈ，但是在真菌的发酵工艺研究中，每个待提取样品量一般只有不到１Ｏ５．）５ｇ干重菌体，且每次需测定几十至上百个样品，因此，上述提取方法存在要求每个样品的用量大、提取操作繁琐费、提取设备数量多、溶剂用量和毒性大等现实问题。

为了适应真菌发酵优化过程中，对不同发酵条件实时取样的快速测定，本文通过对溶剂的筛选和提取时间的摸索，建立了简便的静置提取方法，该方法可以同时对大批样品，而且每个样品仅需约１０ｇ０ｍ进行提取，不受仪器数量限制，在保证提取率的前提下，节省了提取时间，溶剂用量和操作步骤。

常用溶剂的极性大ｄＪ序：水＞乙醇、甲醇、丙酮＞丁醇＞乙酸乙酯＞氯仿＞乙醚＞，￣Ｉｌ苯＞环己烷＞石油醚。

异丙醇极性与丁醇相近，在本实验中为最佳提取溶剂，极性较大的如甲醇、乙醇和丙醇的提取效果低于异丙醇，极性较小的溶剂如乙酸乙酯、氯仿和正己烷维普资讯 菌物学报２卷６的提取效果则更差，这可能与主要提取物属于弱极性的三萜有关，因此，本试验测定结果符合相似相溶的基本原则。

三萜类化合物的分光光度测定法又可分为直接在紫外（２Ｏｍ）下比色和经过香草约ｌａ醛．冰醋酸．高氯酸反应后在可见光（５１约５ａｍ）下比色两种。

由于白桦脂醇的结构属于缺乏共轭双键的氧化型五环三萜，在２０ｎ下吸收较弱，直接比色的测试精度低于香草醛一１ｒａ冰醋酸．高氯酸分光光度法，而且样品需要量大，受部分氨基酸的干扰，不适合用于发酵过程研究中的小剂量样品（ｌＯ）的测定，因此本文以白桦脂醇为对照品，选用香草醛约Ｏｍｇ．冰醋酸．高氯酸分光光度法（孙宏和张泽，２０），测定桦褐孔菌中三萜类化合物含量，０５研究结果证实该方法线性关系良好、灵敏度高、重复性好、所用仪器简单、试剂安全、适合众多小样品量发酵菌丝体内三萜类化合物含量的快速测定。

一般情况下大家认为真菌的液态发酵菌丝体中所含有的活性物质含量要比野生和人工栽培的子实体（或菌核）的低，如三萜类化合物在灵芝子实体内含量为１．／，而在发酵菌丝体中仅为０１ｍｇｇ（４８ｇｍｇ．￣２／马林等，２０；黄书铭等，２０），但是本研究结果显示，三萜类化合物在桦褐孔菌发酵菌０３０４丝体中的含量明显高于野生菌核，项小燕等（０６２０）也报道桦褐孔菌发酵菌丝体中的麦角甾醇含量高于野生菌核。

研究还表明，桦褐孔菌菌核和发酵菌丝体的三萜类化合物（菌核为５．ｍ／，菌丝９６ｇｇ８体为９．ｍ／）含量明显高于其他药用真菌，如牛樟芝发酵菌丝体为３ｍｇｇ（ｈｈｅａ．４９ｇｇ２０／Ｓｉ１ｔ，２０）、茯苓菌核为９７／（０６．ｍｇｇ徐榕和许津，２０）、灵芝子实体１．ｍｇｇ（６０５４８／黄书铭等，２０）、灵芝发酵菌丝体为０Ｉｍｇｇ（０４．￣２／马林等，２０）。

因此，桦褐孔菌具有重要药用０３开发价值，特别是利用桦褐孔菌的深层菌体发酵代替有限的野生菌核资源，生产白桦脂醇等三萜类活性物质，为桦褐孔菌产品的进一步开发提供了新的可行途径。

［ＦＲＮＣＥＪＲＥＥＥＳＡｉｅＣｈｎＣＨ，０５ＢｅｕｉｉｃｄｄｒａｖｓａＶｎｉｉａｓＲＥＮＤＳｉｏｅｕａｅｃｎ，１３１６ｋｎＣ，ｅ２０．ｔｌｃａｉｅｖｔｅｓＨＩｌａｔｖｒｌＴｎｉｉＭｌｃｌｒＭｄｉｉｅ１：－３ｎＣｅｈｎＹＱ，ＬｉＹ，ＺｏＪ２０．ｔｄｎｔｅｃｎｉｏｓｆｉｕｄｃｌｒｆｎｎｔｂｉｕｓＪｕｎｌｆｉｎＡｒｃｌｒｌｈｕＬ，０６Ｓｕｙｏｏｄｔｎｌｉｕｔｅｏｌｏｏｕｏｌｕ．ｏｒａＪｌｇｉｔａｈｉｏｑｕｓｑｏｉｕｕＵｉｅｓｔ，８３８３０３８ｉｉｅｅｎｖｒｉ２：５￣６，６（Ｃｈｓ）ｙｎｎＨａｇＬ２０．ｓｒｕ１ｍｅｉｎｌｎｉｎｕｓ—ｎｎｔｂｑｕ．ＦｎｉＣｉ，１７８ｎｈｎｓ）ｕｎ，０２Ｍｙｔｏｓ０【ｄｉｇｉＲｓａｌｏｏｕｏｌｕｓＥ６ｕｇｈｎ２：～ｉｅＮｅｉｆｌｃａｆｉｕｓｉｏｆａＯＣｅＨｕｎＭ，Ｙａｇ）Ｌ，Ｈｕｎ，Ｘｕ几，ｕＨＳ，０ＭｅｈｄｆｒｔｅｒｐｄｑａｔｆｃｔｎｏｉｒｅｏｄｎｄｅｍａａｇＳｎ（ａｇＪＺｈ２０４．ｔｏｏｈａｉｕｎｉａｉｆｔｔｐｎｉｓｉＧａｏｒｉｏｒｅｎｌｃｄｍｂｌａｉｌｔｐｃｏｔ．ｒｎａｔｎｅ＇ｇＩｓｉｔｏＴｃｎｌｇ，４５５５８ＣｉｅｅｕｉｕｙｔｖｏｅｅｔｍｅｒＴａｓｃｉｓｏｏｎｔｕｅｅｈｏｏｙ２：５￣５ｈｎｓ）ｕｒｓｒｙｏｆＢｉｎｔｆＩｈｍｕａＴ，Ｗａ￣ｅＯ，Ｍａａ，１９．ＩｈｂｔｎｏｆＨＩｌｐｏｅｓｙｗａｅ－ｏｕｌｉｎｎ—ｉｅｓｂｔｎｅｆｏａｃｉｒｍｎｍｙｍａＳ９８ｎｉｉｉＶ—ｒｔａｅｂｔｒｓｌｂｅｌｇｉｌｕｓａｃｒｍｏｋｎｅｉｅｍｕｈｏｍ，ｓｏｏｉｂｉｕ．ｏｃｅｃｏｔｃｎｌｇｎＢｉｃｅｓｒ６：７￣７ｄｂｌｓｒｏＦｕｃｐｒａｏｌａＢｉｓｉｎｅＢｉｅｈｏｏｙａｄｏｈｍｉｔｑｙ，２５５５７ＫａｈｗａａＳｋｙＩｅｈｒＦｊｋｌｏｅｓｉｄｅｉａＭ，ｋｓｉｏｕｉａＫｉｒＷｉＴＡｌｗａＰＬｅＫ２０．－ＧｌｔｒｌｉｙｒｂｔｌｏＬｑＮＲ，ｌＣ，ｌｙＧ，ｅＨ，０４３Ｏ—ｕａｙ—ｈｄｏｅｉｄａｄｕｎｎｅａｅｌ１ｃ］ｄｒｖｔｓａｏｅｉＶｇｎｓＢｉｏａｄｒｌｔｄｎｏｌａｙｅｉａｉｅｓｐｔｎｔｔＨＩａｅｔ．ｏ喀ｄｉｏｖｎａ－ｎｃ＆Ｍｅｉｉａｅｓｒｅｔｒ，４：８８３ｄｃｎｌＣｈｍｉｔＬｔｅｓ１５５￣５５ｙ１ＫｉＹＯ，ＨａｍｎＳＢ，ＬｅｅＨＡｈｎＨＪ，ＹｏｎＹＤ，ＪｎｇＪ，ＫｉＨＭ，ＳｌｎＣＳ，２０．ＩｏｕＫｍａｉ０５ｍｍｕ—ｔｍｕａｉｇｅｅｔｏｅｎｏｓｉｌｔｆｃｆｔｎｈｅｄ－ｏｙａｃａｉｅｒｄｃｄｂｂｒｅｕｔｒｆｎｎｔｓｂｉｕｓＬｆｃｅｃｓ７：４８２５ｎｏｐｌｓｃｈｒｏｕｅｙｓｍｅｇｄｃｌｅｏｌｏｏｕｌｕ．ｉＳｉｅ，７２３－４６ｄｐｕｕｏｑｅｎＬｕＷＫ，ＣＣｅｎＷ，ｉＰＹ，ＣｅＣ２０．ｐｐｏｃａｆｉｏｅｌｉａｉｅｖｔｅｎｍｕｉｅｉＨｏＪ，ｈｕｇＦＬｕＢ，ｅＷＣｈＺ０４Ａｏｔｆｃｖ妒ｆｂｔｉｃｃｄｄｒａｖｓＯｒｉｉｕｎｉｉｎｍｅｏ６ｃｌｌｅＥｒｐａｏｒａＰａｍａｏｏｙ４８７－８ｌｍａＢＩｅ．ｕｏｅｎＪｕｎｌｈｒｃｌｇ，９：１７ｎａｌｉｎｆｏ维普资讯 ３期林庚申等：桦褐孔菌三萜类物质的提取与含量测定４３０ＭａＬ，ＷｕＦ，ＣｈｎＲＹ，２０．ａｙｉｆｔｉｅｐｎｅｃｎｔｔｅｓｆｏＧａｏｅｍａｌｃｄｍ．ｔｅ０３ＡｎｌｓｓｏｔｒｅｏｓｉｎｔｒｍｎｄｒｕｉｕＡｅａＰｈａｒａｅｔｃｉｉａ３８ｒｕｒｎｃｕｉａＳｎｃ，：５－２（ｈｎｓ）０５ｉＣｉｅｅｎＰｓＣｈｉＨ，ｅＩ，ＣｈｇｄｒｉｈａＥ，ａＬｅＳａｗｅｅａＴＥ，ｒｓｒｈＮＣｏｄｅｌＧＡ，ｅｈｒＣＷＦｎＦａｎｗｏｔｒｌＢｅｃｅｏｇＨＨ，ｎｈｒＫｉｇｏｎＡＤ，ｏＢｒｗｎＤＭ，ＷａｉＭＣ，ａｌＭＥ，ｅｅ，ｐｔＫ，ｚｕｏＪ，１９．ｓｏｅｙｆｅｕｉｉｃｄａｅｅｔｅｉｈｂｔｒｏｕｎｎＷｌＨｉｋｎＴＪＧｕａＴＰｅｚｔＭ９５Ｄｉｃｖｒｏｂｔｌｎｃａｉｓａｓｌｃｉｎｉｉｆｈｍａｖｏｍｅａｏａｎｃｉｎｕｔｎｏｐｐｏｉ．ｌｎｍａｔｔｕｔｏｓｈｆｂｙｉｃｉｆａｏｔｓｓＮａｔｅＭｅｉｉｅ１０￣１５ｌｎｄｏｕｒｄｃｎ．：１４６０ＲａｈｖａｐｌｇｕｒＧｏａＤＶ，ｒａＮａｋｒＡＡ，ｄｉａｈＹ，ｉｈａＫＰ，ｏｈＢａｒｎｔＭｓｒＪｓｉＤＳ，０５Ｂｅｌｉｃｄｉｄｃｓａｏｔｓｓｉｕｎｃｒｎｃ２０．ｔｉｃａｉｎｕｅｐｐｏｉｎｈｍａｈｏｉｕｎｍｙｌｇｎｕｕｅａＣＬｃｌｌｅＫ一６ｔｏｔｌｒｇｔｅｌｖｌｏＢｃ—１Ｔｘｃｌｇｅｔｒ，５：４－５ｅｅｏｓｅｋｍｉ（Ｍ）ｅｌｉ５２ｗｉｕｔｉｅｆｒｏｌｎｈａｅｎｈｅｓＡｂ．ｏｉｏｏｙＬｔｓ１５３３３１ｅＲａｉＮ，０２．ｆｅｔｏｒｏｕｂｔｎｅＣｈｇｎｄｐｓｔｏｒｉｏａｉｎｏ０ＳｎｎｔｅｅｅｔｏｒｌｎｅｘｅｎｌｓｎａＬ２０Ｅｆｃｆｃｙｓｓａｃａｉｏｅｏｉｎｏｓｌｔｆ９ｒａｄｏｈｆｃｆｐｏｏｇｄｅｔｒａｉｏｅｐｓｒａｍａｒｄａｉｎＲｄａｓｎａａｏｏｉａｉｅｏｏｉ，２３９４３（ｕｓａ）ｘｏｕｅｏｇｍ—ｉｔ．ａｉｔｉｎｉｌｇｉＲｄｏｃｌｇｉ４：９－０ｉＲｓｉｎｔａｏｏＢｉａａｎＲｚｍｏｋ，１９．ＴｅｅｅｔｏｑｅｓｅｔａｔｏＩｏｏｔｓｏｌｑｕｈｉｔｃｉｄｘａｄｅｚｍｅａｔｖｔｓｙｗｓａＪ９８ｈｆｃｆａｕｏｕｘｒｃｓｆｍｎｎｕｂｉｕｓｏｎｔｅｍｔｉｎｅｎｎｙｃｉｉｅ．ｒｏｉＢｏｌｔｉｏＣｈｍｉｏＦａｍａｅｔｏ１７３５ｌｅｔｎｉｃｒｃｕｉ，３：１￣１ｃＳｈＩＰｎＫ，ｉｈＣ，２６ＩｆｕｎｅｏｕｒｔｎｌｃｍｐｎｎｓａｄｏｙｅｕｐｌｎｔｅｍｙｅｉｌｇｏｈａｄｂｏｃｉｈｉＬ，ａＨｓｅ００．ｎｅｃｆｎｔｉｏａｏｏｅｔｘｇｎｓｐｙｏｈｃｌａｒｗｔｉａｔｌｉｎｎｖｅｍｅａｌｅｒｕｃｉｎｉｕｍｅｇｄｃｔｒｆｔｏｉｉｎｍｏａＰｒｃｓｏｈｍ＆ｔ４：ｌ２－１３ｔｂｏｉｓｐｏｄｔｏｎｓｂｒｅｕｌｅｏＡｎｒｄａｃｎａｍｅ．ｏｅｓＢｉｃｅｔｕｒｙ，１９５１１ＳｎＨ，ｈｎ，０５ＳｅｔｐｏｏｔｃｍｅｈｄｏｄｔｒｎｈａｄｔｔｌｆｔｅｔｔｐｎｉｓｉｅａＪｕｎｌｆｕＺａｇｚ２０．ｐｃｏｈｔｍｅｉｒｒｔｏｓｔｅｍｉｅｔｅｇｎｏａｉｒｅｏｄｎＢｍｌ．ｏｒａｅｒｏｈｒｅｏＮｍｉａｎｇＦｏｅｔｎｖｒｉＮｔｒｌｃｅｃｓｉｏ２：ｌｌ２（ｈｎｓ）ｒｓｒＵｉｅｓｔａｕａＳｉｅＥｄｔ，９ｌｌｉＣｉｅｅｙｙ（ｎｉｎＷａｇＺＨ，ＨｕｎｏＹＦ，ＷａｇＢ，ＳｅＷ，０．ｕｍｅｇｄｆｒｅｔｔｎｏｎｈｎＪ２０６ＳｂｒｅｅｍｎａｉｆＰｈｅｐｏｕｂｉＵＵ．ｃｓｓｅ，２４６－７ｏａｏｒｓｏｌｑＳＭｙｏｙｔｍａ５：１４６（ｈｎｓ）ｉＣｉｅｅｎＷａｓｒＳｓｅＰ，ＷｅｓＡＬ，１９ｉ９９．ＴｈｒｐｅｔｃｅｅｔｏｕｓｎｅｃｕｒｇｉｉｈｒＢａｉｉｍｙｅｅｓｒｏ：ａｍｏｅｅａｕｉｆｃｆｓｂｔｃｓｏｃｒｉｎｈｇｅｓｄｏａｎｃｔｓｍｕｈｏｍｓｄｒｎｐｅｓｅｔ．ｉｃｌｖｅｉｍｍｕｌｇ，９：５９ｒｐｃｉＣｒｔａｉｗＩｖｅｉＲｅｎｎｏｏｙ１６～６ＸｉｇＸＹ，ＺｅｇＷＦＺａｇＸＰＷｅＪ，０６Ｎｏ—ｏａｏｓｔｅｔｏ［ｏｏｕｂｉｕｓｉｌｎｕｍｅｇｎａＧｕＱ，ｈｎ，ｈｎ，ｉＣ２０．ｎｐｌｒｎｔｕｎｓｆｎｎｔｓｏｌｕｎｗｉａｄｓｂｒｅｃｉｑｄｃｌｒ．ｈｎｓｒｄｔｎｌｎｕｔｅＣｉｅｅＴａｉｏａｄＨｅｂｌｕ，７６０６２（ｈｎｓ）ｕｉａｒａｇ３：７－７ｉＣｉｅｅＤｒｎＸｕＲｕＪ２０．ＶｐｃｏｈｔｍｅｉｄｔｒｉａｉｎｏｉｒｅｅｉｏｉＯＯＳｈ）Ｗｏ￣ＣｉｅｅＪｕｎｌ，Ｘ，０５ＵＳｅｔｐｏｏｔｃｅｍｎｔｆｔｔｐｎｎＰｒＣＣＳ（ｃｗ．ｒｒｅｏｒｅａｌｈｎｓｏｒａｆｏＰａｍａｅｔａｎｌｓ，５４９５（ｈｎｓ）ｈｒｃｕｉｌａｙｉ２：４－ｉＣｉｅｅｃＡｓ４ｌｎＺａｇＸＱ，ｉ，０５ＦｏａＦｎｏｍｉｉｏｕＶｏ．９ｍｅｏｈｅａｅｅＢｉｎ：ｃｅｃｒｓ．２９ｉｈｎｓ）ｈｎＤａ２０．ｌｒｕｇｒＳｎｃｒｍ１２ＹＣｎＨｙｎｃａｔｃａ．ｅｉｇＳｉｅｅｓ９～３（ＣｉｅｅｊｎＰｎＺａｇｚ，ＳｈｎｎｕＨ，２４．ＤｅｅｍｉａｉｎｏｔｌｏｅｏｂｋｏｔｌａｐｌａＳｕ．ｂ００ｔｒｎｔｆｂｅｉｃｎｔｎｔｆｍａｆＢｅｕａｐｌｔｌｋｙＨＰＬＣ．ＣｈｅｓｒｎｏｕｎｒｒｙｍｉｔａｄｙＩｄｓｒｏＦｒｓＰｏｕｔ２：１－３（ｈｎｓ）ｎｕｔｆｏｅｔｒｄｃｓ４６－ｉＣｉｅｅｙ，－ｎ６［附中文参考文献］陈艳秋，李玉，周丽洁，２０．桦褐孔菌菌丝液体培养条件的研究．吉林农业大学学报，２：５－６，３８０６８３８３０６黄年来，２０．罗斯神秘的民用药用真菌——桦褐孔菌．中国食用菌，２：～０２俄１７８黄书铭，杨新林，黄健，徐建兰，朱鹤荪，２０．紫外分光光度法快速测定灵芝样品中三萜类化合物的含量．北京理工大学学０４报，２：５～５４５５５８马林，吴丰，陈若芸，２０．芝三萜成分分析．药学学报，３：０５０３灵８５￣２孙宏，张泽，２０．０５分光光度法测定白桦三萜类物质总量．南京林业大学学报（自然科学版）９１０１２，２：１￣１王振河，霍云凤，王斌，申进文，２０．桦褐孔菌液体深层培养研究．物学报，２：６－６０６菌５４１４７项小燕，顾琪，郑维发，张小平，魏江春，２０野生桦褐孔菌及其深层发酵产物的弱极性成分研究．中草药，３：７－７０６７６０６２徐榕，许津，２０．外分光光度法测定茯苓中三萜成分．药物分析杂志，２：４－１０５紫５４９４５张小青，戴玉成，２０中国真菌志（革孔菌科）．第一版．北京：科学出版社．２９０５锈９－３张泽，孙宏，２０．效液相色谱法测定白桦树皮中白桦酯醇的含量．产化学与工业，２：１，０４高林４６－３－６。