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病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
一、实训目的1. 掌握病原性球菌的基本概念和分类。
2. 熟悉病原性球菌的形态学观察方法。
3. 理解病原性球菌的培养特性及生化反应。
4. 提高实验室操作技能，为临床诊断提供依据。
二、实训时间2023年10月15日三、实训地点微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：显微镜、接种环、玻片、酒精灯、无菌生理盐水、肉浸液琼脂平板、血琼脂平板、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、明胶、石炭酸复红染液、结晶紫、碘液、95%乙醇等。
2. 试剂：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等。
五、实训内容1. 病原性球菌的形态学观察（1）革兰染色：取适量金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等，分别进行革兰染色，观察其染色特性。
（2）镜检：将染色后的玻片置于显微镜下观察，记录细菌的形态、排列方式、细胞壁结构等特征。
2. 病原性球菌的培养特性观察（1）肉浸液琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于肉浸液琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征。
（2）血琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于血琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征及溶血现象。
3. 病原性球菌的生化反应观察（1）糖发酵试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等培养基，37℃培养24小时，观察是否产生气泡。
（2）明胶液化试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于明胶培养基，37℃培养24小时，观察明胶是否液化。
4. 病原性球菌的免疫学检验（1）SPA协同凝集试验：将金黄色葡萄球菌与SPA抗体混合，观察是否出现凝集现象。
（2）血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌接种于血浆培养基，37℃培养24小时，观察血浆是否凝固。
六、实训结果与分析1. 革兰染色观察：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌均为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串样排列；溶血性链球菌为革兰氏阴性球菌，呈链状排列。
一、实训目的本次实训旨在通过实验室操作，了解和掌握球菌和杆菌的基本特征、培养方法以及鉴别技术，提高对微生物学基本操作技能的掌握程度，为今后从事相关领域的工作打下基础。
二、实训时间2023年X月X日至2023年X月X日三、实训地点微生物实验室四、实训材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、血琼脂平板、营养肉汤等。
3. 试剂：革兰氏染色液、无菌生理盐水、无菌水、酚红指示剂等。
4. 仪器：显微镜、培养箱、无菌操作台、移液器、接种环等。
五、实训内容1. 球菌和杆菌的形态观察通过显微镜观察金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等菌种的形态，了解其大小、形状、排列方式等特征。
2. 菌种的培养与分离（1）制备培养基：按照实验要求配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和血琼脂平板。
（2）接种：用无菌操作技术将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等菌种接种于培养基上。
（3）培养：将接种好的培养基放入培养箱中，根据菌种生长条件调节温度和时间。
（4）分离纯化：观察菌落生长情况，挑取单菌落进行纯化。
3. 革兰氏染色（1）制片：将分离纯化的菌落制成薄片。
（2）染色：依次进行初染、媒染、脱色和复染。
（3）观察：在显微镜下观察菌体的染色结果，判断其为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
4. 酸碱指示剂试验（1）制备培养基：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中加入酚红指示剂。
（2）接种：将大肠杆菌接种于培养基上。
（3）培养：将接种好的培养基放入培养箱中。
（4）观察：观察菌落周围的颜色变化，判断其代谢产物对酸碱的影响。
六、实训结果与分析1. 球菌和杆菌的形态观察金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈球形，成对或短链排列；肺炎链球菌为革兰氏阳性球菌，呈球形，成双排列；大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，呈杆状，排列呈链状；枯草杆菌为革兰氏阳性杆菌，呈杆状，排列呈链状。
2. 菌种的培养与分离金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等菌种均能在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基和血琼脂平板上生长，且分离纯化效果良好。
