第九章 血清学反应
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血清学试验简介血清学反应是指:相应的抗原与抗体在体外肯定条件下作用,可消失肉眼可见的沉淀、凝集现象。
在食品微生物检验中,常用血清学反应来鉴定分别到的细菌,以最终确认检测结果。
血清学反应的一般特点:1)抗原体的结合具有特异性,当有共同抗原体存在时,会消失交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面的结合,这种结合虽相当稳定,但是可逆的。
3)抗原体的结合是按肯定比例进行的,只有比例适当时,才能消失可见反应。
4)血清学反应大体分为两个阶段进行,但其间无严格界限。
第一阶段为抗原体特异性结合阶段,反应速度很快,只需几秒至几分钟反应即可完毕,但不消失肉眼可见现象。
其次阶段为抗原体反应的可见阶段,表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。
反应速度慢,需几分、几非常以至更长时间。
而且,在其次阶段反应中,电解质、PH、温度等环境因素的变化,都直接影响血清学反应的结果。
习惯上将经典的血清学反应分三种类别:凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。
1、凝集反应颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合,在电解质参加下所形成的肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应(Agglutination reaction)。
其中的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。
在该反应中,由于单位体积抗体量大,做定量试验时,应稀释抗体。
1)直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所消失的反应,称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。
a.玻片凝集法。
是一种常规的定性试验方法。
原理是用已知抗体来检测未知抗原。
常用于鉴定菌种、血型。
如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴,在玻片上混匀,数分种后若消失肉眼可见的凝集块,即阳性反应,证明该菌是痢疾杆菌。
此法快速、简便,但不能进行定量测定。
b.试管凝集法。
是一种定量试验方法。
多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。
常用于帮助诊断某些传染病及进行流行病学调查。
如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。
血清学- 血清学反应的一般特点1)抗原体的结合具有特异性,当有共同抗原体存在时,会出现交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面的结合,这种结合虽相当稳定,但是可逆的。
3)抗原体的结合是按一定比例进行的,只有比例适当时,才能出现可见反应。
4)血清学反应大体分为两个阶段进行,但其间无严格界限。
第一阶段为抗原体特异性结合阶段,反应速度很快,只需几秒至几分钟反应即可完毕,但不出现肉眼可见现象。
第二阶段为抗原体反应的可见阶段,表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。
反应速度慢,需几分、几十分以至更长时间。
而且,在第二阶段反应中,电解质、PH、温度等环境因素的变化,都直接影响血清学反应的结果。
习惯上将经典的血清学反应分三种类别:凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。
1、凝集反应颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合,在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应(Agglutinationreaction)。
其中的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。
在该反应中,因为单位体积抗体量大,做定量实验时,应稀释抗体。
1)直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应,称为直接凝集反应(Directagglutionreactio n)。
a.玻片凝集法。
是一种常规的定性试验方法。
原理是用已知抗体来检测未知抗原。
常用于鉴定菌种、血型。
如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴,在玻片上混匀,数分种后若出现肉眼可见的凝集块,即阳性反应,证明该菌是痢疾杆菌。
此法快速、简便,但不能进行定量测定。
b.试管凝集法。
是一种定量试验方法。
多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。
常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。
如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。
因为要测定抗体的含量,故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度,然后加入等量抗原,37℃或56℃,2~4小时观察,血清最高稀释度仍有明显凝集现象的,为该抗血清的凝集效价。
第九章血清学试验§9-1血清学试验概述一、血清学试验的概念概念:抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。
因抗体主要存在于血清中,所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。
在体内发生的抗原抗体反应是体液免疫应答的效应作用。
二、血清学试验的特点(一)特异性和交叉性(二)敏感性(三)可逆性(四)反应的二阶段性(五)最适比例与带现象(六)用已知测未知三、影响血清学试验的因素(一)电解质常用0.85%~0.9%(人、畜)或8%~10%(禽)的氯化钠或各种缓冲液(免疫标记技术)作为抗原和抗体的稀释液或反应液。
(二)温度在一定温度范围内,温度越高,加速抗原抗体结合和反应现象的出现。
(三)酸碱度血清学试验要求在一定的pH下进行,常用的pH值为6~8,(四)振荡适当的机械振荡能加速抗原抗体的结合反应(五)杂质和异物每批血清学试验都应设阳性对照和阴性对照试验。
四、血清学试验的应用及发展趋向(一)血清学试验的应用传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、变态反应性疾病的确诊。
在动物疫病的群体检疫、疫苗免疫效果监测和流行病学调查。
生物活性物质的超微定量、物种及微生物鉴定和分型等方面。
基因分离,克隆筛选,表达产物的定性、定量分析和纯化等,已经成为现代分子生物学研究的重要手段。
(二)血清学试验的发展趋向反应的微量化和自动化方法的标准化和试剂的商品化技术的敏感特异和精密化检测技术的系列化方法简便快速。
§9-2凝集试验一、凝集试验的概念凝集试验:细菌、红细胞等颗粒性抗原,或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原,与相应抗体结合后,在有适量电解质存在下,经过一定时间,复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块,称为凝集试验(Agglutination test)。
参与凝集试验的抗原称凝集原,抗体称凝集素。
二、凝集试验的类型(一)直接凝集试验(Direct agglutination test)颗粒性抗原与相应抗体直接结合并出现凝集现象的试验称直接凝集试验。
第九章血清学反应
一、名词解释
1.血清学反应
2.凝集反应
3.补体结合反应
4.沉淀试验
5.凝集试验
6.中和试验
二、问答题
1.体外抗原抗体反应的一般规律。
2.抗原抗体反应结果受哪些因素影响?
3.什么是ELISA?试述其操作过程。
4.何谓血清学反应?其应用原则及注意事项是什么?
5.何谓凝集反应和沉淀反应?它们有什么异同点?在兽医学上有何用途?
6.琼脂扩散试验有几种类型?各有什么特点?
7.试述补体结合反应的原理及用途。
8.免疫标记技术常用的有哪些?各有什么特点?
9.葡萄球菌A蛋白(SPA)有哪些生物学特性?。
一、实验目的1. 了解血清反应的基本原理和操作方法。
2. 掌握血清反应在临床诊断中的应用。
3. 学会观察和分析实验结果,提高实验技能。
二、实验原理血清反应是一种基于抗原与抗体特异性结合的免疫学反应。
在血清学检测中,将待测血清与已知抗原(如细菌、病毒、肿瘤抗原等)进行混合,若血清中含有相应的抗体,则会与抗原发生特异性结合,形成可见的凝集现象。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:待测血清、已知抗原、生理盐水、试管、移液器、滴管、显微镜等。
2. 仪器:恒温箱、振荡器、离心机、洗板机等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制(1)取若干支试管,分别加入不同浓度的已知抗体,作为标准品。
(2)在标准品中加入适量的待测血清,混匀。
(3)将混合液在室温下放置一段时间,使抗原与抗体充分结合。
(4)将混合液离心,取上清液,用酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法检测抗体浓度。
(5)以抗体浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
2. 待测血清的检测(1)取若干支试管,分别加入不同浓度的待测血清,作为实验组。
(2)按照标准曲线的绘制方法,进行抗原与抗体的结合实验。
(3)将混合液在室温下放置一段时间,使抗原与抗体充分结合。
(4)将混合液离心,取上清液,用ELISA等方法检测抗体浓度。
(5)根据标准曲线,计算出待测血清中抗体的浓度。
3. 结果分析(1)将实验组与标准曲线进行比较,确定待测血清中抗体的浓度。
(2)分析实验结果,判断待测血清中是否存在特定抗原的抗体。
五、实验结果1. 标准曲线绘制成功,相关系数R²>0.9。
2. 待测血清中抗体的浓度为XX ng/mL。
3. 结果分析:根据实验结果,待测血清中存在特定抗原的抗体。
六、实验讨论1. 实验过程中,注意避免交叉污染,确保实验结果的准确性。
2. 在实验操作过程中,严格控制反应时间,确保抗原与抗体充分结合。
3. 实验结果分析时,结合临床实际情况,综合判断待测血清中是否存在特定抗原的抗体。
血清学反应特点今天咱们来聊一聊特别有趣的血清学反应的特点哦。
血清学反应就像是一场小小的生物之间的“识别游戏”。
血清就像是一个装满了各种小卫士的神奇药水。
这些小卫士呢,能够发现外来的东西是不是自己身体的朋友。
比如说啊,当我们身体里进了一些病菌,就像一群不速之客闯进了我们的家。
这时候血清里的小卫士就开始行动啦。
血清学反应的一个特点就是特异性。
这就好比一把钥匙只能开一把锁一样。
小卫士们能准确地找到那些病菌,不会认错。
就像小狗能在好多气味里一下子就闻到主人的味道,血清里的这些东西也能一下子就找到那些病菌的特别之处。
比如说我们得了流感,血清里专门针对流感病菌的小卫士就会跑出来,不会跑去对付那些不是流感病菌的东西。
还有哦,血清学反应有可见性。
怎么理解呢?就像我们画画的时候,用不同颜色的笔,画出来的东西我们能看到。
血清里的小卫士和病菌碰到一起的时候,就会发生一些变化,这些变化我们能够看得到。
就像在一杯透明的水里,滴了一滴有颜色的颜料,水就变色了,一下子就被我们发现了。
比如说在做一些检测的时候,原本透明的液体,在血清学反应发生之后,可能会变得浑浊,或者出现一些小颗粒,就像水里突然有了小小的沙子一样。
另外呢,血清学反应还有可逆性。
这就像我们玩的拼图游戏,有时候我们把拼好的一块拿下来,还可以再放回去。
血清里的小卫士和病菌结合之后,在一定的条件下,还能再分开呢。
这就好像是两个小朋友手拉手,但是如果有什么特殊的情况,他们又可以松开手。
我再给你们讲个小故事吧。
有个小朋友生病了,医生怀疑是某种病菌在捣乱。
于是医生就取了这个小朋友的血清,然后把可能的病菌放进去。
就像把小侦探放到可能有坏人的地方一样。
如果血清里的小卫士和病菌发生了血清学反应,那医生就能知道是这种病菌让小朋友生病的啦。
因为血清学反应的特异性,就像小侦探不会认错坏人一样。
然后医生就可以根据这个结果,给小朋友用对药,把那些病菌赶跑。
血清学反应的这些特点啊,就像身体里的小秘密一样,科学家们发现了这些秘密,就可以用它们来帮助我们预防和治疗疾病啦。