血清学鉴定实验

公卫医师考试辅导：血清学诊断
血清学诊断是公卫医师考试大纲所包含的内容，我们搜集整理相关内容供大家学习参考。

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫试验（RIA）及免疫荧光试验（IF）
ELISA、RIA及IF均为用于检测感染者血清中特异性抗体或抗原的方法，均为应用标记的抗原检测血清中抗异性抗体，或应用标记的抗体检测血清中特异性抗原。

（2）蛋白印迹试验（Westernblot，WB）
蛋白印迹试验（WB）是在ELISA应用原理基础上发展的一项新技术，用于检测微生物的特异性蛋白抗原或患者相对应的蛋白抗体的实验室诊断方法。

若用此试验检测患者血清特异性抗体，可用已知微生物蛋白抗原捕捉患者血清中特异性抗体，再结合酶标记抗人抗体并观察结果。

我们搜集整理。

（3）中和试验（NT）
中和试验（NT）为在检测病原微生物（病毒、细菌等）的血清学试验过程中，先在被检血清或其他液体标本中加人已知的特异性抗体或抗原，使其发生中和反应后，再检测被检血清中其特异性抗原或抗体。

（4）试管凝集试验
肥达氏试验是辅助诊断伤寒或副伤寒病常用的一种血清学
试验，即用已知伤寒沙门氏菌的菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）及甲型或乙型副伤寒杆菌的鞭毛抗原（PA或PB抗原），
测定人血清中相应抗体效价。

ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１０．０９㊃临床实验研究㊃一例Ｂ（Ａ）血型的血清学及分子生物学鉴定㊀㊀㊀㊀作者简介：张钰，１９９２年生，女，技师，硕士，主要从事输血免疫学研究；李炜华，１９７６年生，女，副主任技师，大学本科，主要从事血站质量管理；二者对该文具有同等贡献，同为第一作者㊂㊀㊀㊀㊀通信作者：何成涛，硕士，副主任技师，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｅｃｈｅｎｇｔａｏ４１３＠１２６．ｃｏｍ㊂张钰１，李炜华２，蔡杰１，杜海林１，何晓露１，傅强１，戴宇东１，何成涛１（１．南京红十字血液中心研究室，南京２１００００；２．宿迁市中心血站质管科，宿迁２２３８００）摘要：目的㊀对１例血型血清学正反定型不符的标本进行ＡＢＯ血型鉴定㊂方法㊀运用血型血清学方法鉴定标本ＡＢＯ血型；用ＰＣＲ⁃序列特异性引物（ＳＳＰ）基因定型和ＡＢＯ基因直接测序的方法确定该标本的基因型㊂结果㊀血型血清学检测结果表现为Ｂ（Ａ）亚型的特点；ＰＣＲ⁃ＳＳＰ分型结果定为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ１型；测序发现标本ＡＢＯ基因的第６和第７外显子存在变异：第６外显子存在２６１ｄｅｌＧ㊁２９７Ａ＞Ｇ；第７外显子存在５２６Ｃ＞Ｇ㊁６４０Ａ＞Ｇ㊁６５７Ｃ＞Ｔ㊁７０３Ｇ＞Ａ㊁７９６Ｃ＞Ａ㊁８０３Ｇ＞Ｃ㊁９３０Ｇ＞Ａ，判断该样本血型为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ０１血型㊂结论㊀该血型血清学初步鉴定为Ｂ（Ａ）的标本用ＰＣＲ⁃ＳＳＰ法和ＡＢＯ基因直接测序法确认为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ０１型㊂关键词：Ｂ（Ａ）；血型血清学；ＰＣＲ⁃序列特异性引物；ＤＮＡ测序中图分类号：Ｒ４４６㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ㊀㊀ＡＢＯ血型系统是人类最主要的血型系统之一［１］，ＡＢＯ血型不合的输血会导致严重的输血反应及其他并发症㊂因此，ＡＢＯ血型的准确分型对于安全输血至关重要［２］㊂除了Ａ㊁Ｂ㊁ＡＢ㊁Ｏ等正常的ＡＢＯ表型外，还有一些罕见的亚型［３］㊂Ｂ（Ａ）是一种较为罕见的ＡＢＯ亚型，其可能是由于底物特异性的酶转变所导致［４］㊂其血清学的特点主要是正定型红细胞与抗Ｂ出现强凝集反应，与抗Ａ出现弱凝集反应，反定型血清能够凝集Ａ１和Ａ２细胞［５⁃６］㊂在血清学分型中，Ｂ（Ａ）常与ＣｉｓＡＢ㊁ＡｘＢ等发生混淆，分子生物学技术则可以帮助区分各种亚型㊂本研究使用血型血清学和分子生物学的方法检测了１例正反定型不符的标本，最后鉴定其为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ０１，报道如下㊂１㊀材料与方法１．１㊀样本来源㊀２０２０年１月１９日１例自愿无偿献血的２１岁男性血液标本㊂１．２㊀试剂与仪器㊀单克隆抗Ａ㊁抗Ｂ㊁抗Ｈ㊁抗Ａ１㊁Ａ１细胞㊁Ａ２细胞㊁Ｂ细胞㊁Ｏ细胞㊁抗筛细胞（Ｏ１㊁Ｏ２㊁Ｏ３）试剂（上海血液生物医药公司），抗ＡＢ（ＲａｐｉｄＬａｂｓ公司），凝聚胺试剂盒（合肥天一生物技术研究所公司），抗人球蛋白检测卡（长春博迅生物技术公司），血液基因组ＤＮＡ提取试剂盒（德国ＱＩＡＧＥＮ公司），人类红细胞ＡＢＯ血型基因分型试剂盒（天津秀鹏公司），实验所有试剂均检验合格，按要求保存并在有效期内使用㊂免疫微柱孵育器㊁血型血清学离心机（长春博研科学仪器公司），低速全自动离心机（日本Ｋｕｂｏｔａ公司），离心机（德国ＳＩＧＭＡ公司），核酸蛋白定量检测仪（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司），基因扩增仪（美国ＡＢＩ公司），凝胶成像仪（上海复日科技公司）㊂１．３㊀方法１．３．１㊀血型血清学试验㊀参照‘全国临床检验操作规程“第４版及各试剂说明书用试管法进行血型血清学试验㊂１．３．２㊀分子生物学试验１．３．２．１㊀基因组ＤＮＡ的提取㊀采用商品试剂盒并严格按照试剂盒说明书快速提取ＤＮＡ，ＤＮＡ浓度调为３０ １００ｎｇ／μＬ，ＤＮＡ纯度Ａ２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ值为１．６ ２．０，２５ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳显示无ＤＮＡ降解现象㊂１．３．２．２㊀ＰＣＲ⁃ＳＳＰ基因分型㊀严格按照人类红细胞ＡＢＯ血型基因分型试剂盒进行操作㊂按照以下循环参数进行ＰＣＲ扩增：９６ħ２ｍｉｎ，１个循环；９６ħ２０ｓ，６８ħ６０ｓ，５个循环；９６ħ２０ｓ，６５ħ４５ｓ，７２ħ３０ｓ，１０个循环；９６ħ２０ｓ，６２ħ４５ｓ，７２ħ３０ｓ，１５个循环；７２ħ３ｍｉｎ，１个循环㊂凝胶电泳：ＰＣＲ产物经２５ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶㊁１４０ １５０Ｖ电泳１０ １５ｍｉｎ，凝胶成像仪拍照并观察结果㊂１．３．２．３㊀标本ＡＢＯ基因测序㊀采用直接测序法对标本ＡＢＯ血型基因１ ７外显子进行测序，由天津秀鹏公司完成㊂ＰＣＲ产物纯化：在每个反应管每孔中加入３μＬＥｘｏＳＡＰ⁃ＩＴ（ＥｘｏｎｕｃｌｅａｓｅⅠ和ＳｈｒｉｍｐＡｌ⁃ｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ的混合溶液），以去除多余的ＰＣＲ㊃８５７㊃临床检验杂志２０２０年１０月第３８卷第１０期㊀ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＬａｂＳｃｉ，Ｏｃｔ．２０２０，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．１０引物和底物ｄＮＴＰｓ㊂低速离心混合溶液后，运行以下热循环程序：３７ħ３ｍｉｎ，８０ħ１５ｍｉｎ，１个循环㊂测序反应：纯化的ＰＣＲ产物用作测序反应ＤＮＡ模板㊂采用２０μＬ反应体系，内含：１６μＬＢｉｇＤｙｅｔｅｒ⁃ｍｉｎａｔｏｒｖ３．１ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔ提供的测序反应混合液和４μＬ经ＥｘｏＳＡＰ⁃ＩＴ处理的ＰＣＲ产物㊂测序反应扩增条件：９６ħ２０ｓ，５０ħ３０ｓ，６０ħ２ｍｉｎ，２５个循环㊂２㊀结果２．１㊀血型血清学结果㊀血型血清学反应格局见表１㊁２㊂正定型中红细胞与抗Ａ发生较弱凝集（ʃ），与抗Ｂ发生强凝集（４＋），反定型血清能够凝集Ａ１细胞（１＋）和Ａ２细胞（１＋ｗ）；血清中无不规则抗体的存在；红细胞与抗Ｈ的反应强度（３＋）接近正常的Ｏ型红细胞（３＋ｓ）而高于正常的Ｂ型红细胞（２＋）㊂表１㊀血型血清学检测反应条件ＡＢＯ正定型抗Ａ抗Ｂ抗Ａ１抗ＡＢＡＢＯ反定型Ａ１细胞Ａ２细胞Ｂ细胞Ｏ细胞自身细胞立即离心ʃ４＋０４＋１＋１＋ｗ０００多次离心ʃ４＋０４＋１＋１＋ｗ０００表２㊀抗Ｈ与Ｐ细胞㊁ＤＯ细胞㊁ＤＢ细胞反应结果反应条件抗ＨＰ细胞ＤＯ细胞ＤＢ细胞立即离心３＋３＋ｓ２＋㊀㊀注：Ｐ细胞为被检标本红细胞；ＤＯ细胞为相同采血时间５个Ｏ型献血者的混合红细胞；ＤＢ细胞为相同采血时间５个Ｂ型献血者的混合红细胞㊂２．２㊀ＰＣＲ⁃ＳＳＰ结果㊀见图１㊂第７㊁１０㊁１１㊁１２孔位呈阳性反应，其余孔位呈阴性反应㊂㊀㊀注：１ １４泳道分别为Ｃｉｓ⁃ＡＢ０１㊁Ｃｉｓ⁃ＡＢ０１／Ｂ（Ａ）０１㊁Ｂ（Ａ）０１／Ｂ（Ａ）０３㊁Ｃｉｓ⁃ＡＢ０２㊁Ｂ（Ａ）０２㊁Ｃｉｓ⁃ＡＢ０３㊁Ｂ（Ａ）０４㊁Ｂ（Ａ）０６㊁Ｃｉｓ⁃ＡＢ０４㊁Ｂ１㊁Ｂ２㊁Ｏ１㊁Ｏ２㊁阴性对照㊂图１㊀标本ＰＣＲ电泳结果２．３㊀ＡＢＯ基因测序结果㊀见图２㊁３㊂根据ＮＣＢＩ网站血型抗原基因突变数据库（以Ａ１０１为参考序列），结果发现第６外显子２６１处缺失Ｇ，２９７处出现Ａ／Ｇ突变㊂外显子７的突变有５２６Ｃ＞Ｇ㊁６４０Ａ＞Ｇ㊁６５７Ｃ＞Ｔ㊁７０３Ｇ＞Ａ㊁７９６Ｃ＞Ａ㊁８０３Ｇ＞Ｃ㊁９３０Ｇ＞Ａ㊂３㊀讨论㊀㊀Ｂ（Ａ）血型最早是１９５６年由Ｙａｍａｍｏｔｏ等［７］发现，是一种较为罕见的ＡＢＯ亚型㊂迄今为止，已发现６种Ｂ（Ａ）等位基因，分别为Ｂ（Ａ）０１㊁Ｂ（Ａ）０２㊁Ｂ（Ａ）０３㊁Ｂ（Ａ）０４㊁Ｂ（Ａ）０５㊁Ｂ（Ａ）０６，其中Ｂ（Ａ）０２和Ｂ（Ａ）０４在我国最为常见［８］㊂Ｂ（Ａ）血型的形成主要是由于Ｂ基因的特定突变，变异的Ｂ基因具有编码双功能活性酶的能力，使血清学中有正常Ｂ抗原和较弱Ａ抗原的特征，因为关键位点的突变及其引起的单个氨基酸的改变，从而改变了糖基转移酶的酶学特点和催化活性，使相同的底物被催化形成不同的产物［９］㊂本研究分析了１例正反定型不符的献血者标本，血型血清学结果发现其红细胞可以凝集抗Ａ和抗Ｂ（与抗Ｂ的凝集强度强于抗Ａ），与抗Ｈ反应的凝集强度接近Ｏ细胞而强于Ｂ细胞，反定型血清能凝集Ａ１细胞和Ａ２细胞㊂因此根据血清学的结果，我们初步判定其为Ｂ（Ａ）型㊂目前，血型血清学的检测是血型鉴定的主要方法，但是其只能对ＡＢＯ亚型进行初步定型，还需借助分子生物学的方法对ＡＢＯ亚型进行基因分型㊂因此我们使用了ＰＣＲ⁃ＳＳＰ方法进行检测，检测结果与分型表相比对，发现该样本为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ１杂合㊂为进一步证实ＰＣＲ⁃ＳＳＰ的结果，我们对标本ＤＮＡ进行测序，ＡＢＯ基因由７个外显子和６个内含子组成，其功能区域分别位于第６外显子和第７外显子中，而ＡＢＯ等位基因和所有的亚型基因也主要分布在这个区域［１０］㊂本研究测序结果显示，第６外显子中有１个单核苷酸缺失，即２６１ｄｅｌＧ，这与Ｏ０１等位基因相一致［１１］，第７外显子存在５２６Ｃ＞Ｇ㊁６４０Ａ＞Ｇ㊁６５７Ｃ＞Ｔ㊁７０３Ｇ＞Ａ㊁７９６Ｃ＞Ａ㊁８０３Ｇ＞Ｃ㊁９３０Ｇ＞Ａ的突变，第６㊁７外显子的突变导致了５个氨基酸发生变化（Ａｒｇ１７６Ｇｌｙ㊁Ｍｅｔ２１４Ｖａｌ㊁Ｇｌｙ２３５Ｓｅｒ㊁Ｌｅｕ２６６Ｍｅｔ㊁Ｇｌｙ２６８Ａｌａ），从而形成了Ｂ（Ａ）０４等位基因㊂图２㊀外显子６测序结果图３㊀外显子７测序结果㊀㊀综上所述，本研究结合血型血清学和分子生物学的结果，判定该献血者的血型为Ｂ（Ａ）０４／Ｏ０１㊂在临床实践中，当出现正反定型不符的情况时，除进行必要的血清学检测外，可结合分子生物学的方法进一步检测，正确分析血型，避免出现误检或漏检，以确保临床输血的安全性㊂４　参考文献［１］ＭｏｌｌｅｒＭ，ＪｏｕｄＭ，ＳｔｏｒｒｙＪＲ，ｅｔａｌ．Ｅｒｙｔｈｒｏｇｅｎｅ：ａｄａｔａｂａｓｅｆｏｒｉｎ⁃ｄｅｐｔｈａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｖｅｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎ３６ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｓｙｓｔｅｍｓｉｎｔｈｅ１０００ＧｅｎｏｍｅｓＰｒｏｊｅｃｔ［Ｊ］．ＢｌｏｏｄＡｄｖ，２０１６，１（３）：２４０⁃２４９．［２］ＪｉａｏＬＸ，ＹｕＪＨ，ＹｕＸＬ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｗｏｃａｓｅｓｗｉｔｈＣｉｓ⁃ＡＢ／Ｂｂｌｏｏｄｓｕｂｇｒｏｕｐ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＡｐｈｅｒＳｃｉ，２０１７，５６（２）：２２３⁃２２５．［３］ＮａｉｒＲ，ＧｏｇｒｉＨ，ＫｕｌｋａｒｎｉＳ，ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｒａｒｅｓｕｂｇｒｏｕｐｏｆａｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗｈｉｌｅｒｅｓｏｌｖｉｎｇＡＢＯｄｉｓｃｒｅｐａｎｃｙ［Ｊ］．ＡｓｉａｎＪＴｒａｎｓｆｕｓＳｃｉ，２０１９，１３（２）：１２９⁃１３１．［４］郭忠慧，向东，朱自严，等．中国汉族人群检出新的Ｂ（Ａ）６４１Ｔ＞Ｃ等位基因［Ｊ］．中国输血杂志，２００６，１９（１）：１７⁃２０．［５］ＪａｉｎＡ，ＧｕｐｔａＡ，ＭａｌｈｏｔｒａＳ，ｅｔａｌ．ＡｎＡＢＯｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｉｎｇｄｉｓ⁃ｃｒｅｐａｎｃｙ：ＰｒｏｂａｂｌｅＢ（Ａ）ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＡｐｈｅｒＳｃｉ，２０１７，５６（３）：４５９⁃４６０．［６］熊莉，周小英，吴红，等．罕见Ｂ（Ａ）血型的鉴定［Ｊ］．临床检验杂志，２０１８，３６（６）：４２６⁃４２８．［７］ＹａｍａｍｏｔｏＦ，ＭｃＮｅｉｌｌＰＤ，ＹａｍａｍｏｔｏＭ，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃａ⁃ｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＡＢＯｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＶｏｘＳａｎｇ，１９９３，６４（３）：１７５⁃１７８．［８］刘乐霞，梁俊杰，肖玮，等．罕见Ｂ（Ａ）０４血型家系遗传规律调查［Ｊ］．临床输血与检验，２０１４，１６（２）：１７３⁃１７５．［９］ＧｕｏＺＨ，ＸｉａｎｇＤ，ＺｈｕＺＹ，ｅｔａｌ．Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃ⁃ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＢ（Ａ）ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００７，２３（２）：６９⁃７４．［１０］宋艳艳，周雪莹，欧阳旭，等．Ｂ（Ａ）０２亚型分子生物学鉴定１例［Ｊ］．临床输血与检验，２０１６，１８（４）：３３８⁃３４０．［１１］ＤｅｎｇＺＨ，ＹｕＱ，ＬｉａｎｇＹＬ，ｅｔａｌ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌＢ（Ａ）ａｌｌｅｌｅｗｉｔｈＢＢＢＡｔｙｐｅａｔｔｈｅＡＢＯｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐ［Ｊ］．ＪＨｕｍＧｅｎｅｔ，２００６，５１（８）：７３２⁃７３６．（收稿日期：２０２０⁃０７⁃２９）（本文编辑：王海燕）。

沙门菌血清学鉴定流程及结果判读下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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鉴定血型的实验报告一、实验目的本实验旨在通过血清学方法鉴定一个人的血型，以便了解其红细胞的抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性。

二、实验原理血型鉴定是基于抗原和抗体的特异性反应。

红细胞表面所携带的抗原与血清中的抗体相互作用，通过观察是否发生凝集反应来判断血型。

本实验将采用经典的ABO血型系统进行鉴定。

三、实验步骤1、准备试剂和器材：抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体、生理盐水、微量移液器、离心机、试管、滴管等。

2、采集样本：使用微量移液器从受试者静脉中抽取50微升血液。

3、实验操作：a.将50微升血液分别加入抗A抗体和抗B抗体试管中；b.用生理盐水将试管中的血液稀释至100微升；c.用滴管缓慢加入5滴抗D抗体；d.摇匀后，观察凝集反应；e.用离心机分离血清和红细胞，观察结果。

4、结果记录：记录每个试管中的凝集反应情况，包括凝集颗粒的数量、颜色变化等。

5、结果分析：根据记录的凝集反应情况，判断受试者的血型。

四、实验结果与分析1、实验结果：在加入抗A抗体的试管中，受试者血液呈现凝集反应，形成明显的凝集颗粒；而在加入抗B抗体的试管中，血液未发生凝集反应。

2、结果分析：根据ABO血型系统的特点，受试者的红细胞表面可能携带A抗原，而未携带B抗原。

因此，可以初步判断受试者为A型血。

为了进一步确认血型，可以继续进行Rh血型等其他血型系统的鉴定。

五、结论本实验通过血清学方法成功鉴定了受试者的ABO血型为A型。

这一结果对于了解受试者的红细胞抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性具有重要意义。

在实际应用中，鉴定血型是确保医疗安全和有效治疗的关键环节之一。

红细胞血型系统课件一、引言红细胞血型系统是生物学和医学领域中的一个重要概念。

红细胞血型是指红细胞表面抗原的特异性，这些抗原在个体之间存在差异。

了解红细胞血型系统对于临床输血、器官移植、新生儿溶血病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。

本课件将介绍红细胞血型系统的基本概念、分类和应用。

十二章经典血清学实验一、名词解释凝结性实验：按照是否产生凝结现象，用已知抗体或抗本来判定相应（未知）抗原或抗体的免疫反应。

凝集反应：细菌，红细胞等颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，经过一段时光形成肉眼可见的凝集现象。

反应中的抗原称为凝集原，反应中的抗体称为凝集素。

直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接发生特异性结合并浮上肉眼可见的凝集现象称为直接凝集反应。

间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）吸附在一种与免疫无关的惰性载体颗粒表面，使其成为致敏载体，然后与相应抗体（或抗原）结合，在电解质存在的条件下发生凝集的现象。

葡萄球菌A蛋白（SPA）：是金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与IgG分子的Fc片段结合，当SPA-Ab与相应抗原结合时，就可产生协同凝集反应。

HA：有些病毒具有能凝集某种哺乳动物和禽类红细胞的特性，依此特性建立的检测主意称为病毒血凝实验。

HI：按照病毒的特异性抗体可以抑制血凝现象建立的检测主意称为血凝抑制实验。

沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的白色沉淀。

参加沉淀反应的可溶性抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。

琼脂免疫蔓延：抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。

反应的沉淀物因颗粒较大，故在凝胶中不再蔓延，而形成沉淀带。

电泳：带电质点在电场中向着带异向电荷的电场移动。

免疫电泳：由琼脂双蔓延与琼脂电泳技术结合的实验。

凝集价/滴度/抗体效价：浮上50%以上凝集的血清最大稀释度为该血清的凝集价。

沉淀价：环状沉淀实验时，以浮上白色沉淀环的最高抗原稀释倍数作为沉淀素的效价，即沉淀价。

中和指数：在尽头法中和实验中，使病毒感染力减少至50%的血清中和效价称为中和指数。

中和效价：中和实验中，被检血清中抗体中和病毒的能力。

病毒的毒价：引起半数感染动物死亡的病毒最小量。

第1页/共5页二、简答题1.凝集反应和沉淀反应的基本类型有哪些？有何用途？2.凝集反应和沉淀反应的区别？（凝集反应和沉淀反应各有什么特点？）3.琼脂凝胶免疫蔓延实验有哪些不同的主意？举例说明它们的用途？抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。

常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前,该项技术已在兽医学上得到广泛的应用，大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。

1、酶联免疫吸附试验的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度.2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型：①.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。

在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。

②.双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。

用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。

与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。

乙肝HBs的检测常采用本法。

本法关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。

此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。

③.间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。

其原理为利用酶标记的抗体（抗免疫球蛋白抗体)，检测与固相抗原结合的受检抗体（见图1）。

血清学实验报告引言血清学是研究血清中各种生物标志物的含量和性质的科学，对于疾病的诊断、治疗和预防具有重要意义。

本实验旨在使用血清学方法，对某种疾病相关的生物标志物进行测定，从而为疾病的诊断和监测提供依据。

材料与方法材料•血液样本•血清学试剂盒•高速离心机•显微镜•吸光度计方法1.采集血液样本，并将其离心分离得到血浆。

2.采用试剂盒中提供的方法，按照标准操作步骤进行相应的实验操作。

3.在吸光度计中测定标准曲线以及样本的吸光度值。

4.根据实验结果进行数据分析和解读。

结果与分析本实验使用血清学方法对某种疾病相关的生物标志物进行测定，并得到了以下结果。

标志物吸光度值A 0.2B 0.5C 0.8D 1.0根据吸光度值的测量结果，我们可以得到以下结论： 1. 标志物A在血清中的含量较低，表明该疾病的发展程度较轻。

2. 标志物B的吸光度值较高，可能表示该疾病的严重程度增加。

3. 标志物C的吸光度值进一步增加，可能表明该疾病已经进入了一定的恶化阶段。

4. 标志物D的吸光度值最高，可能意味着该疾病已达到了最严重的阶段。

根据以上分析，我们可以初步判断该疾病的严重程度，为疾病的诊断和监测提供了一定的依据。

结论通过血清学实验的测定，我们得到了某种疾病相关的生物标志物的吸光度值，并根据吸光度值进行了数据分析和解释。

根据吸光度值的高低，我们初步判断了疾病的严重程度，为疾病的诊断和监测提供了一定的依据。

此外，本实验还展示了血清学方法在疾病研究中的应用价值。

参考文献[1] Smith A, Johnson B. Serum markers in disease diagnosis. J Med Res. 2010;45(2):123-135.[2] Liu C, Wang D, Zhang E. Application of serum markers in disease monitoring. J Clin Pathol. 2015;75(3):234-246.。