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免疫学实验-血清学反应

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临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)

临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)

临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生（）。

A．自身免疫病B．超敏反应C．肿瘤D．免疫缺陷病E．移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。

2. 免疫自稳功能异常可发生（）。

A．病毒持续感染B．肿瘤C．超敏反应D．自身免疫病E．免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。

3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。

A．树突状细胞B．巨噬细胞C．中性粒细胞D． B细胞E． T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。

4. 免疫应答过程不包括（）。

A． T细胞在胸腺内分化成熟B． B细胞对抗原的特异性识别C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E．效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。

5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。

A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官C．是免疫应答发生的场所D．是免疫细胞发生和成熟的场所E．是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。

5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。

A． C1B． C3C． C4D． C5E． C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。

7. 细胞因子不包括（）。

A．单核因子B．淋巴因子C．生长因子D．抗体E．集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽，抗体不是。

8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为（）。

A． IgMB． IgAC． IgGD． IgEE． IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。

免疫学检测方法

免疫学检测方法
➢ 铁蛋白抗体法 ➢ 酶标记抗体法 ➢ 重金属标记抗体法
ห้องสมุดไป่ตู้
图 胶体金标记免疫电镜结果 A D bar = 200 nm; B C bar = 100 nm
胶体金免疫技术
胶体金是氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸 等作用下的水溶液,具有高电子密度,并能与 多种大分子发生物理吸附,因此,不但所有的 大分子物质都可被金标记,而且标记后大分 子物质活性不发生改变。
当抗原和金标抗体反应时,肉眼可见红色或 粉红色斑条 点 ,在显微镜下观察,抗原抗体 结合处为黑褐色的颗粒。
斑点免疫金渗滤法 DIGFA 的应用 与研究进展
是20世纪八十年代发展起来的一种免疫学检 测方法,具有简便、快速、准确等优点。目前在 医学检验中主要应用于检测 HBsAg、HCG 和 HIV等。
第八章 免疫学检测方法
免疫学技术是利用抗原抗体特异性反应 的原理建立的各种检测与分析技术,以 及建立这些技术的各种制备方法。
检测技术种类
一、免疫学检测
免疫凝集试验 免疫沉淀试验 酶联免疫试验 荧光免疫技术 免疫电镜技术 免疫印迹试验
细菌凝集反应被广泛应用于细菌学的诊断。在凝集反应 中,将参与反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。
免疫金标层析法的应用与研究进展
免疫金层析法快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶 体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术
医学：乙肝表面抗原、心肌肌钙蛋白T 、 HCG
兽医：猪瘟抗体 食品：克伦特罗 瘦肉精 、氯霉素 其他：饲料中的磺胺类药物残留物、转基因产品
直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体 抗原 ,与待测标本中相应的抗原 抗体 发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯 标记抗体复合物,这时只需加入氧化剂 H2O2 和NaOH使成 碱性环境,吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。

临床常用免疫学检查

临床常用免疫学检查

4.BF 方法：单向免疫扩散法 (0.1-0.4g/L) 意义：增高见于某些自身免疫病、肾病综合征、慢 性肾炎、恶性肿瘤； 2、减低见于肝病、急性肾 小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。 第二节 细胞免疫检测 主要包括有T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及其 亚群；临床常对淋巴细胞的数量，表面标志物及 功能进行检测，以了解机体的细胞免疫功能.
第六节 自身免疫检测 抗核抗体： •ANA阳性：血清滴度>1：40为阳性。最多见于未 治疗的SLE，活动期SLE几乎100%阳性。也可见 于其他自身免疫性疾病。抗核抗体共有4种荧光核 型：均质型，见于SLE、SS、PSS、MCTD；边 缘型，见于SLE、SS；颗粒型，见于SLE、RA； 核仁型，见于PSS、Crest征。 • 抗脱氧核糖核酸测定：分为抗双链 DNA抗体 （ds-DNA）、抗单链DNA抗体（ss-DNA）、抗 Z-DNA抗体。抗双链DNA抗体的检测有重要的临 床意义，它见于活动期的SLE，阳性率70%90%。
• B细胞免疫检测 1. B细胞表面标志物检测： B细胞表面有表面抗原 (CD19、CD20、CD21、CD22、CD40等)与表 面受体(BCR、CKR、CR、FC等) BCR又称B细胞表面免疫球蛋白（SmIg发育阶段 不同而变化。 (1).B细胞表面免疫球蛋白（SmIg）测定：主要用 于检测外周血B细胞的百分率。临床意义： ① SmIg减低见于免疫缺陷性疾病； ② SmIg升高 见于慢性淋巴细胞性白血病、多毛细胞白血病和 原发性巨球蛋白血症。原发性巨球蛋白血症患者 SmIgM阳性细胞可占78%。
(2).B细胞分化抗原测定：临床意义： ① 升高见于 急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病 和Burkitt淋巴瘤等； ② 降低见于无丙种球蛋白 血症、使用化疗或免疫抑制剂后。 • 淋巴细胞功能检测 (1).T细胞转化试验：反映T细胞的免疫功能。临床 意义同T细胞花结形成试验。但Down综合征时明 显增高。 (2).混合淋巴细胞反应：反映机体整体的细胞免疫 功能，还可用于HLA的细胞学分型

临床免疫学和免疫检验补体检测及应用练习题

临床免疫学和免疫检验补体检测及应用练习题

临床免疫学和免疫检验补体检测及应用练习题一、A11、总补体活性测定试验的原理属于A、溶血反应B、凝集反应C、沉淀反应D、补体结合反应E、中和反应2、不属于血清学反应的是A、凝集反应B、溶血反应C、溶菌反应D、补体结合反应E、Ⅳ型变态反应3、检测总补体活性，采用50%溶血试验是因为（）。

A、50%溶血试验比100%溶血试验简单B、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点更敏感C、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点可节约时间D、以50%溶血作为终点较100%溶血作为终点更为节省成本E、50%溶血作为终点好判断4、以免疫黏附作用清除免疫复合物的补体活性片段是（）。

A、C3aB、C2aC、C3bD、C5bE、Clq5、在总补体活性测定时，所测定的是（）。

A、红细胞与补体结合的能力B、补体溶解红细胞的活性C、补体溶解致敏红细胞的活性D、溶血素与补体结合的能力E、特异性抗体与红细胞结合的能力6、在经典激活途径中，补体识别的亚单位是（）。

A、C1B、C2C、C3D、CAE、C97、补体受体4（CR4）是哪一种受体（）。

A、C4bB、C4aC、iC3bD、C5aE、C1q8、关于补体旁路激活途径的叙述，错误的是（）。

A、激活物质是细胞壁成分B、从C3激活开始C、发挥效应比经典途径早D、亦有激活效应的扩大E、旁路途径在感染后期发挥作用9、补体结合试验的指示系统包括（）。

A、特异性抗体和补体B、特异性抗原和补体C、红细胞和溶血素D、加热灭活的病人血清E、特异性抗原和抗体10、补体结合试验的叙述，下列哪项是错误的（）。

A、新鲜豚鼠血清作为补体B、补体、SRBC和溶血素应预先定量C、出现溶血反应即为反应阴性D、不出现溶血反应即为反应阳性E、待测定系统中的抗原与抗体相对应，形成复合物激活补体，出现溶血11、以下哪项与补体结合试验无关（）。

A、抗原B、抗体C、补体D、溶血素E、酶12、补体结合试验结果阴性时出现（）。

第十六章 免疫学的实际应用

第十六章 免疫学的实际应用

（四）免疫标记技术 1.荧光标记抗体技术（免疫荧光技术）
免疫荧光技术是指用荧光素对抗体或抗原进行标记， 然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析示踪相应的抗 原或抗体的方法。
荧光素标记的 特异性抗体 荧光素标记 待测抗体 的抗抗体
Ag 组织切片
Ag 组织切片
直接法
间接法
2.酶标记抗体技术（酶免疫测定技术）
（2）琼脂扩散试验
根据其扩散的方向可分为单向单扩散、单向双 扩散、双向单扩散、双向双扩散，其中双向双扩应用 最广。
双向琼脂扩散（琼扩）系采用1%琼脂倒于平皿或 玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体 分别滴入孔内，放置湿盒中，在37˚C湿箱中24-72h后 观察。在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一种抗原成 分出现一条沉淀带。
1.对流免疫电泳
2. 火箭电泳
3. 免疫电泳
免疫电泳技术的用途
对流免疫电泳——快速、半定量测定
火箭电泳——快速、定量测定
免疫电泳——抗原分析
（二）补体有关的试验 （补体结合实验）
反应系统 已知抗原 （抗体） 指示系统 绵羊红 细胞 反应结果的判定 如溶血则 为阴性
补体
待检血清 （抗原）
溶血素
+
平板凝集试 验用抗原 阳性 血清 出现凝 集现象
B.试管凝集反应
⑵ 间接凝集反应
将可溶性抗原或抗体先吸附于一种与免疫无关的、 一定大小的载体颗粒的表面相吸附，然后与相应的 抗体或抗原作用，在有电解质存在的适宜条件下， 所出现的特异性凝集反应为间接凝集试验。
（正向）间接凝集反应原理示意图
（二）新型疫苗
1. 联苗与多价苗
联苗：是指不同种微生物或其代谢产物组成的疫苗。 多价苗：则是指同种微生物不同型或株所制成的疫苗。

11.免疫学技术概论

11.免疫学技术概论

第十一章免疫学技术概论免疫学技术是指利用免疫反应的特异性原理，建立各种检测与分析技术，以及建立这些技术的各种制备主意。

免疫学技术包括：①免疫血清学技术：用于检测抗原或抗体的体外免疫反应技术，或称免疫检测技术②细胞免疫技术：用于分析研究机体细胞免疫功能与状态的免疫学技术③免疫制备技术：用于建立免疫检测主意的技术第 1 节免疫血清学技术抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合反应，因抗体主要来自血清，因此在体外举行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。

一、免疫血清学反应的基本原理抗原与抗体的特异性结合，主要是基于抗原与抗体分子结构及立体构型的互补，以及由多种因素造成的两者在分子间引力参加下发生的可逆性免疫化学反应。

1.抗原抗体的结合力①库仑引力/静电引力：是抗原与抗体带有相反电荷的氨基与羧基之间互相吸引的力。

其大小与两个电荷间距离的平方呈反比。

②范德华引力：是原子与原子、分子与分子互相临近时分子极化作用产生的一种吸引力，引力大小与分子空间构象的互补性有关。

③氢键作用：是供氢体上的氢原子和受氢体原子间的引力。

④疏水作用：在水溶液中两个疏水基团互相接触，因为对水分子的排斥而趋向聚拢的力。

疏水作使劲在抗原抗体结合力中作用最强。

2.抗原抗体的亲和力与亲合力①亲和力(affinity)：指抗体的抗原结合位点与相应的抗原决定簇之间的结合强度，它是抗原抗体间固有的结合力。

亲和力可用平衡常数K表示：K＝K1/K2 （K1为结合常数，K2为解离常数）②亲合力(avidity)：指一个抗体分子与囫囵抗原表位之间结合的强度，与抗体结第 1 页/共7 页合价直接相关。

亲合力表现为多价优势。

3.抗原抗体的胶体特性及亲水性转化为疏水性①胶体特性：抗体和大多数抗原同属蛋白质，在通常的反应条件下均带有负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体。

②亲水性改变：抗原抗体结合使表面电荷减少，水化层变薄，失去亲水性能，抗原抗体复合物由亲水胶体转化为疏水胶体。

实验室血清学常用检测方法

常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用，大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。

1、酶联免疫吸附试验的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型：①.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。

在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。

②.双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。

用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。

与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。

乙肝HBs的检测常采用本法。

本法关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。

此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。

③.间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。

其原理为利用酶标记的抗体（抗免疫球蛋白抗体），检测与固相抗原结合的受检抗体（见图1）。

12 经典血清学试验

十二章经典血清学实验一、名词解释凝结性实验：按照是否产生凝结现象，用已知抗体或抗本来判定相应（未知）抗原或抗体的免疫反应。

凝集反应：细菌，红细胞等颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，经过一段时光形成肉眼可见的凝集现象。

反应中的抗原称为凝集原，反应中的抗体称为凝集素。

直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接发生特异性结合并浮上肉眼可见的凝集现象称为直接凝集反应。

间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）吸附在一种与免疫无关的惰性载体颗粒表面，使其成为致敏载体，然后与相应抗体（或抗原）结合，在电解质存在的条件下发生凝集的现象。

葡萄球菌A蛋白（SPA）：是金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与IgG分子的Fc片段结合，当SPA-Ab与相应抗原结合时，就可产生协同凝集反应。

HA：有些病毒具有能凝集某种哺乳动物和禽类红细胞的特性，依此特性建立的检测主意称为病毒血凝实验。

HI：按照病毒的特异性抗体可以抑制血凝现象建立的检测主意称为血凝抑制实验。

沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的白色沉淀。

参加沉淀反应的可溶性抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。

琼脂免疫蔓延：抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。

反应的沉淀物因颗粒较大，故在凝胶中不再蔓延，而形成沉淀带。

电泳：带电质点在电场中向着带异向电荷的电场移动。

免疫电泳：由琼脂双蔓延与琼脂电泳技术结合的实验。

凝集价/滴度/抗体效价：浮上50%以上凝集的血清最大稀释度为该血清的凝集价。

沉淀价：环状沉淀实验时，以浮上白色沉淀环的最高抗原稀释倍数作为沉淀素的效价，即沉淀价。

中和指数：在尽头法中和实验中，使病毒感染力减少至50%的血清中和效价称为中和指数。

中和效价：中和实验中，被检血清中抗体中和病毒的能力。

病毒的毒价：引起半数感染动物死亡的病毒最小量。

第1页/共5页二、简答题1.凝集反应和沉淀反应的基本类型有哪些？有何用途？2.凝集反应和沉淀反应的区别？（凝集反应和沉淀反应各有什么特点？）3.琼脂凝胶免疫蔓延实验有哪些不同的主意？举例说明它们的用途？抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。

临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应

precipitate forms in regions of Ab or Ag excess.
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术

临床免疫学：抗原抗体反应

• 带现象(zone phenomenon)：在等价带前后分别由于 抗体或抗原过剩，形成的沉淀物少，上清液中可 测出游离的抗体或抗原。
• 前带(prezone)：抗体过量
• 后带(postzone)：抗原过量
三、可逆性（reversibility）
• 是指抗原与抗体结合成复合物后，在一定 条件下可解离为游离抗原与抗体的特性
第二节抗原抗体反应的原理
一、空间互补关系: • 抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补
性与亲和性 • 抗原表位与抗体超变区密切接触 • 高度互补使抗原抗体之间有足够的结合力 • 亲水胶体转化为疏水胶体
二、抗原抗体结合力：抗原抗体是非共价键 结合，弱结合力
●静电引力(eletrostatic forces):是抗原抗体分子 中带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互的引力 ,两个电荷距离越近,静电引力越大.
• 抗原大都是多价，抗体多 为二价，等价带结合时， 抗体的两个Fab段可分别与 两个抗原分子表面的抗原 表位结合，相互交叉连接 成具有立体结构的巨大网 格状聚集体，形成肉眼可 见的反应物。
• 等价带（equivalence zone)：抗原抗体比例合适的 范围
• 最适比(optimal ratio):抗原抗体复合物形成最多 ，上清液中几乎无游离的抗原与抗体存在
●范德华引力(vander Waals forces):抗原和抗体相 互接近时,由于分子的极化作用而出现的引力 .
●氢键结合力(hydrogen bonding forces)：供氢体 上的氢原子与受氢体原子间的引力
●疏水作用力(hydrophobic forces)：两个疏水基团 在水溶液中相互接触时,由于对水分子排斥而趋向 聚集的力.
第四节 抗原抗体反应的影响因 素
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微生物学与免疫学教研室
【基本要求】
• 1. 上实验课时，把个人的书包和衣物放在衣 柜内，穿好白大衣。随身只带必要的实习指导 、笔记本和文具。实验室内禁止饮食。 • 2. 用过的实验材料，放于指定地点，不得随 意抛置。 • 3. 注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏 器材时，应立即报告指导教师，听候处理。 • 4. 实验结束后，将实验台整理清洁，方可离 开实验室。值日同学打扫好室内卫生并检查水 、电、等开关是否关好，防止意外事故发生。
29
（四）补体溶血：红细胞与相应抗体结合，
可激活补体使红细胞溶解，称为补体溶血反 应或免疫溶血反应。 原理：补体激活的经典途径（补体的动画） 补体特点： 补体可与任何抗原抗体复合物结合，但不能 单独与抗原或抗体结合。在有特异抗体存在 时可以溶解细胞（溶菌或溶血）。
30
溶血反应
RBC
+
RBC抗体 (溶血素) 新鲜血清（补体）
抗原抗体复合物
9
• 4、阶段性：抗原抗体反应分两个阶
段：
① 抗原抗体发生特异性结合的阶段，反应 快，几秒或几分钟，不可见 ② 可见阶段，短至数分、数小时，长至数 日，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现 象
10
交叉反应（cross reactions）
概念：两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结 构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应。
B
抗原抗体交叉反应示意图
亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高
11
三、血清学反应的影响因素
1、反应物自身因素
*抗原：理化特性、Ag决定簇数量和种类。
*抗体：1、来源
2、特异性与亲和力
3、浓度
比例要合适
12
2、环境因素：
（1）电解质
作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，
使Ag〃Ab聚集。
常用：0.85%NaCl溶液、缓冲液、Ca2+、Mg2+等。
抗体的两个Fab段 分别 结合两个Ag分子， 相互 交叉结合连接成巨 大的网格状立体聚 合物，（可见）。
Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和，大 多数游离存在，只形成小分子复 合物（不可见）。
四、传统的血清学反应
1、凝集反应
2、沉淀反应
3、补体参与的溶血反应 4、中和试验
17
（一）凝集反应
39
实验内容
直接凝集试验
双向扩散试验 补体溶血试验 观看细胞免疫的示教片
40
教材P299
• 一、直接凝集试验——试管法（1份/人）
• 试管法凝集试验是一种半定量的试验方法，是在 试管内将抗原或抗体稀释不同倍数后加入等量的 待检抗体或抗原，根据每管内的凝集程度，判定 待检样品中相应抗原或抗体的有无及其效价。 • 试验中可能由于电解质浓度或pH 值不适宜等原 因，而引起抗原非特异性凝集，出现假阳性反应 ，所以应设立阴性对照管。
AFP-Ag
定 位 标 记 孔
待测1
待测2
AFP-Ab
注意：加样量力求准确，勿使样品外溢或在孔缘上 残存小汽泡，以免影响扩散结果。 44 原则：满而不溢
免疫学实验 二
——————— 续血清学反应
微生物学与免疫学教研室
45
一、分析上次结果
（一）血球凝集（直接凝集试管法）：观察结果
并分析 1、从温箱中轻轻取出试管架， 不要摇动试管。先观察对照管 （第7管），此管血球不出现凝 集现象，红细胞在管底自然沉 降呈现点状结构，上层液基本 清澈透亮，管底可见红细胞沉 积物，呈圆形，边缘整齐，轻 轻振摇试管后，可见红细胞浮 起又分散仍呈悬液。
35
1、酶免疫测定（Enzyme immunoassay,EIA)
• 用酶标记的抗体或抗抗体来进行的抗原抗 体反应。 • 用酶作标记物 • 由于酶的催化作用可使原来无色的底物通 过水解、氧化或还原反应而显示颜色。
原理（以间接性ELISA为例）：
显色
37
2、放射免疫测定法（RIA）：
38
3、免疫荧光技术
27
④免疫电泳 ⑤对流免疫电泳
在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白泳向负极；而 一般抗原蛋白质泳向正极
抗原和抗体将在两孔之间相遇，
28
• （三）中和反应：特异性抗体抑制多
种抗原的生物学活性（细菌外毒素的毒 性、酶的活性、病毒的感染性等）的反 应。 • 主要用于毒素的鉴定、病毒感染性疾病 的诊断以及病毒的鉴定。例如在临床实 验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球 菌 O抗体的反应。
• 4. 各管加入绵羊红细胞悬液 0.5ml，于是各管血 清稀释倍数又增加了一倍。 • 5. 将各管震荡均匀，放入37℃温箱中过夜，次日 观察结果。
43
• 二、双向扩散试验——检测血清中的AFP（1份/2人）
• 【操作方法】 • 1. 双向琼脂扩散试验抗原抗体孔位置如下图所示 • 2. 用微量加样器孔中分别加抗甲胎蛋白诊断血清，周围孔 中分别加入待测血清和阳性对照血清，每孔加入25-30μl。 • 3. 将琼脂板放入密闭的盒内（内放浸有5%石炭酸的纱布以 保持湿度），置37℃温箱中，于24小时后观察结果。
溶血
31
由抗原抗体复合物结合C1q启动的途径
• 1. 激活剂 Ag-Ab复合物(IgG1,IgG2,IgG3,IgM) • 2. 参与成分 C1～C9 • 3. 激活过程（三个阶段） • 识别阶段 活化阶段 膜攻击阶段
五、现代免疫标记技术
免疫标记技术(Immuno-labelling technique) 是指将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同 位素和电子致密物质等加以标记，借以提高 其灵敏度的一类新技术。 • 优点：特异性强、灵敏度高、应用范围广 、反应速度快、容易观察、能定位、定量甚 至定位。
此时自第一管至第七管血清的稀释倍数分别是1:10， 1:20，1:40……1:320，具体稀释方法可参阅下图。 42
血清０.１ml
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
０ .５
生理盐水 血清稀释度
０.９
０.５
０.５
０.５
０ .５
０.５
０.５
1：10
1：20
1：40
1：80
1：160
1：320
弃 之
46
2、试验管从第一管看起，管底有凝集块，边缘不 整或卷起等现象，均为阳性反应，分别用（ ++++）、（+++）、（++）、（+）表示凝集程 度。 • （++++）表示血球100% 凝集，红细胞形成片层 凝集，均匀布满管底或边缘皱缩如花环状； • （+++）表示血球75% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积略多于（++）； • （++）表示血球50% 凝集，红细胞形成片层凝 集，面积较小，边缘较松散； • （+）表示血球25%凝集，红细胞沉于管底，周 围有散在的少量凝集。
原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。
（3）温度—影响反应速度
一般：15～40 ℃为宜，
最适温度：37℃
过高（>56）: Ag-Ab解离， Ag、Ab变性， 补体失活。 冷凝集实验：4 ℃凝集，>20解离。 （4）其他 适当的振荡、搅拌等可加速反应
只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合反应。
坐标(对数坐标)，绘制标准曲线， 求出待检样品内抗原浓度
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③双向扩散：
可溶性抗原与相应抗体在含适量电解质的琼脂糖凝 胶板的对应孔中各自向四周自由扩散,若两者分子比 例适当,则在扩散的一定时间后在两孔之间相遇并生 成白色沉淀线.
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(1) 沉淀线吻合：待检抗原与 标准抗原完全相同。 (2) 沉淀线相切：待检抗原中 含有与标准抗原相同的抗原， 还含有另外的抗原与抗血清 相对应。 (3) 沉淀线相交：待检抗原有 与抗血清对应的抗原，但和 标准抗原不同。 (4) 沉淀线部分吻合：待测抗 原和标准抗原性质相同，但 含量较低。 A1：待检抗原；A2：标准抗原
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不同病人抗原浓度测定
1.测定沉淀环直径
通过标准品绘制标准曲线
2.在标准曲线上查找相允许各种Ag或 Ab自由扩散，由近及远形成浓度梯度。
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②火箭免疫电泳
火箭免疫电泳是单向单 扩散和电泳技术相结合 的一种血清学试验，是 让抗原在电场的作用下， 在含有抗体的琼脂中定 向泳动，二者比例合适 时形成类似火箭样的沉 电泳完毕后，观察琼脂板上沉淀 淀峰。沉淀峰的高度与 峰，并测量从孔中心到峰尖的高 抗原的浓度成正比 。 度。以峰高为纵坐标，浓度为横
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血型鉴定
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（2）间接凝集反应（3）间接凝集抑制试验
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（二）沉淀反应
• 1、概念：可溶性抗原+抗体→沉淀现象。
• 可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、 菌体裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电 解质存在下，形成肉眼可见的细微的白色沉 淀。
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2、分类 （1）液相中的沉淀反应： 环状沉淀、絮状沉淀 （2）凝胶扩散： ①单向扩散：
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•材料：1% 新鲜绵羊红细胞悬液、羊红细胞凝集素（兔抗绵羊红
细胞免疫血清）等
•方法：（理解对倍稀释法） 1. 取小试管7支，置于试管架上，编号。 2. 用 1ml 刻度吸管吸生理盐水，第一管加0.9ml，其余 管各加0.5ml。 3. 用 1ml 刻度吸管吸取兔抗羊红细胞血清0.1ml 加入 第一管 中，反复吹吸三次，使之与盐水混匀，吸出 0.5ml注入第二管。同样混匀后吸取0.5ml 注入第三管， 依此类推。自第6管吸出0.5ml 弃掉。第八管不加血清作 为对照。
1、定义： • 颗粒性抗原（如细菌、红血球等） +抗体→凝集 现象。