HPV基因诊断试剂盒

硕世hpv21分型说明书
摘要：
硕世HPV21分型检测试剂盒说明书
正文：
硕世HPV21分型检测试剂盒是一种用于检测女性宫颈脱落细胞样本中的HPV病毒（人乳头瘤病毒）的检测产品。

该产品适用于临床实验室、卫生防疫部门等场所进行HPV病毒的检测。

产品由试剂盒和仪器设备两部分组成，操作步骤包括样本采集、试剂准备、样本处理和酶标检测。

首先，使用样本收集器获取女性宫颈脱落细胞样本，然后将样本放入病毒保存液中，震荡混匀后静置5分钟。

接着，吸取上层液体并放入离心机离心5分钟，吸取上清液后弃去样本。

然后将酶标抗体、阴性对照和阳性对照分别加入相应的孔中，再将样本处理液加入样本孔中，轻轻摇匀后放入37℃恒温箱中静置1小时。

最后，用洗板机将孔内液体洗去，放入酶标仪中进行检测，并记录检测结果。

结果判读分为阴性和阳性。

阴性表示未感染HPV病毒，阳性表示感染了HPV病毒，需进一步进行分型检测。

在操作过程中，应严格遵循操作规程，避免样本污染或试剂失效。

试剂盒应存放在2-8℃冰箱中，酶标抗体有效期为12个月。

人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（荧光PCR 法）标准操作流程一、目的：规范实验室操作，正确使用PCR扩增仪进行HPV-DNA扩增分析，以保证实验结果的准确性。

二、适用范围：人乳头状瘤病毒(HPV)基因分型检测试剂盒在扩增仪上进行扩增以及分析。

三、职责：由临床分子生物实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、程序：【检验方法】1. 试剂准备（试剂准备区）a) 从-20℃取出试剂盒，将各试剂融化混匀并短暂离心后备用。

计算需要进行的反应份数n （n=待测样本数+空白对照1份+阳性对照1份）。

b) 取出8个离心管分别标记1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#和8#，分别加入n×10μl 核酸扩增反应液，然后对应每个编号离心管分别加入n×8μl A反应液（1#）、n×8μl B反应液（2#）、n×8μl C反应液（3#）、n×8μl D反应液（4#）、n×8μl E反应液（5#）、n×8μl F反应液（6#）、n×8μl G反应液（7#）、n×8μl H反应液（8#）。

c) 混匀并短暂离心后，依次分装至对应编号PCR八联管中，每管18μl，总共分装n排PCR 反应八联管，1排PCR八联管为1人份。

2. 加样（1）小心打开PCR八联管盖，每份待测样本核酸溶液、空白对照按照2μl/管依次加入对应编号含有A-H反应体系的PCR八联管中，1排PCR八联管为1人份，阳性对照（A-H组）同样按照2μl/管分别加入对应的A-H反应体系的PCR八联管中，总体积为20μl/管。

（2）盖紧PCR八联管盖，低速短暂离心。

3. PCR扩增检测（核酸扩增区）3.1 将反应管放入荧光PCR 扩增仪进行扩增检测。

4. 结果分析4.1 杭州博日Linegene 9600荧光定量PCR仪：反应结束保存结果，根据分析后图像调节基线的起始循环、终止循环（可以根据实际情况自行调整，起始循环可以在3~15、终止循环可设在5~20，调整空白对照的扩增曲线平直或低于阈值线；也可由仪器进行自动判读，起始循环为3、终止循环为15），点击确定自动获得分析结果，在同一界面的显示区察看结果。

HPV分型试剂盒1、HPV目前市场上主要产品：杂交法（达安19、凯普21、亚能23、透景26）；实时荧光PCR（之江13种高危分型、港龙凯普亚能13种高危不分型、达安8个型定量）；第二代杂交捕获法（HC2）等2、操作方法：：①HPV②HPV实验：A、杂交法：首先加样上PCR仪做扩增，上机时间大约一个半小时左右。

PCR 完成后做杂交，目前市场上有手工杂交和使用杂交仪杂交。

操作时间2-4个小时。

B、第二代杂交捕获法（HC2）:原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测,C、荧光定量PCR：直接上机通过荧光信号累积实时监测整个PCR进程，之江生物是用多重PCR对标本进行准确的13个高危型的具体分型，其他不具体分型。

举例之江产品：之江八管双通道仪器(双色荧光PCR仪器都可以用)：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4E Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5F Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6G Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7H Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8一排八管做一个标本即可具体分型！HPV核酸荧光PCR检测混合液若FAM通道Ct值≤35，结果判断为若VIC通道Ct值≤35，结果判断为Mix1 16+56 HPV16 HPV56Mix2 18+45 HPV18 HPV45Mix3 35+59 HPV35 HPV59Mix4 39+51 HPV39 HPV51Mix5 58+52 HPV58 HPV52Mix6 31 HPV31Mix7 33 HPV33Mix8 68 HPV68②四管四通道仪器（ABI7500、罗氏480、伯乐CFX96、SLAN96孔等四色荧光PCR仪器）：A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4结果判断：3、产品分析比较：4、上海之江HPV优劣势:•优点：①闭管PCR操作，避免扩增污染②能够对13个高危型精确分型③灵敏度高，操作简单，减少了杂交的操作程序，一个实验大约2个小时内完成④针对开放荧光PCR检测系统，无需额外增加设备，有人员培训基础。

入空白对照、阳性质控、阳性DNA对照，建议加样编号顺序如下：首先依次是不同的样本编号，最后为阳性质控、阳性DNA对照、与空白对照管（蒸馏水）。

6.2.3 从冰箱中取出PCR试剂盒，将PCR Premix融化后，与Taq酶管一起放入离心机中点动离心。

6.2.4 将试剂放入生物安全柜内，将已点动离心了的PCR premix管、Taq酶管插在冰块上保持在低温条件下。

6.1.6 按照反应数计算所需的PCR各个组份的数量来准备PCR Mastermix（可参照PCR MIX与酶混合比例如下表）。

6.2.7 在生物安全柜内，按已计算好的PCR premix用量，从冰中取出相应的PCR premix管吸取准确量后加入对应的1.5ml离心管中，将PCR premix管放回冰块中。

6.2.8 垂直将枪头小心打入废液缸中，确保移液枪前臂没有碰到废液缸口。

6.2.9 从冰中取出Taq酶管，按计算好的用量（可参照PCR MIX与酶混合比例附表），吸取准确量后分别加入对应的1.5ml离心管中。

6.2.10 盖紧1.5ml离心管盖，同时将PCR premix管及Taq酶管从超净台中取出放回-20℃冰箱的原包装中，标注已使用数量。

6.2.11 将已加入PCR premix和Taq酶的1.5ml离心管在涡旋器上振荡5sec，放入离心机点动离心。

6.2.12 在生物安全柜中，将6种PCR混合液分装入对应的0.2ml PCR扩增管中，每管加入混合液18ul，加完后将所有PCR管盖盖上。

6.3 DNA提取6.3.1将临床样本及阴性对照品置室温下解冻，把标本编号，取出相应数量的样本管，对应编号。

6.3.2 将临床样本振荡混匀，伸入采集管底部吸取临床样本0.8ml 至管底，。

中国食品药品检定研究院人乳头瘤病毒全基因组分型参考品National reference materials for thecomplete genome of Human PapillomavirusGenotyping【批号】360003-201602【性状】无色液体【用途】用于以以非L1区域如E6、E7区域和全基因组为靶序列的人乳头瘤病毒核酸（基因分型）检测试剂盒质量控制和评价。

【包装】1.5mL 冻存管【规格】27支/套，HPV 全基因组分型不同型别重组质粒参考品27支，阴性参考品5支，分别为正常人基因组DNA、CMV、UU、CT、HSV2。

基质液为2ng/ul 正常人基因组，在通风橱中分装到1.5mL 冻存管中，每管100ul，每种不同HPV 基因型的重组质粒浓度约为106-107拷贝/ml。

注：●代表高危型，共有13种。

▲代表中等危险型，其余为低危型；82和ISO39、MM4等同，84和MM8等同。

中国食品药品检定研究院【使用方法和要求】1.本品核酸提取前常温溶解、混匀。

2.使用时要求按照106-107拷贝/ml 浓度进行稀释，稀释液应为2ng/ul 正常人基因组TE 溶液。

本参考品使用时，应满足：1、准确性（阳性符合率）：要求检测试剂盒检测范围内人乳头瘤病毒不同型别国家分型参考品结果应均为阳性。

2、特异性：a)采用实时荧光PCR、PCR-杂交等原理检测试剂盒检测5份阴性参考品，检测结果应为阴性。

检测本参考品22种不同型别阳性参考品，检测结果应为不在其检测范围内的高危型别，应不得出现交叉；不在其检测范围内的低危型别，交叉反应率应分别不大于10.0%。

b)采用杂交捕获-化学发光法原理的检测试剂盒检测5份阴性参考品，检测结果应为阴性。

检测本参考品22种不同型别阳性参考品，检测结果应符合制造商的要求并注明可能产生交叉反应的型别。

3、重复性（精密度）：a)采用实时荧光PCR 原理的检测试剂盒，要求批内精密度应符合Ct 值的变异系数（CV,%）不大于5.0％。

HPV基因分型检测试剂盒常见问题教学课件(一)HPV基因分型检测是一项重要的生化检验，对于病毒性疾病的预防和治疗具有重要意义。

而HPV基因分型检测试剂盒是目前市场上最常用的检测工具之一。

下面就来了解一下HPV基因分型检测试剂盒中常见的问题及教学课件。

常见问题：1.检测原理：HPV分型检测是基于荧光定量PCR技术，通过检测病毒DNA来识别和鉴定不同类型的HPV病毒。

2.样本类型：HPV基因分型检测的样本可以从阴道、宫颈、包皮等部位采集，其中以宫颈抹片为主要样本。

3.样本采集技巧：在采集样本前，需要女性病人禁止洗澡，性生活，以及使用药物等干扰因素。

采集时要求专业医护人员采用无菌操作的方式，以避免样本受到污染。

4.检测结果的解读：HPV基因分型检测试剂盒可将检测结果分为阳性和阴性两个结果。

如果检测结果为阳性，则需要根据检测结果中列举的不同亚型，结合病人的病情，对病情进行进一步的判断和治疗。

教学课件：1.样本采集技巧：课件中应该包括女性病人采集阴道、宫颈、包皮样本的步骤，以及采集时的禁忌和注意事项。

同时还应该介绍如何保障采集过程中的无菌操作。

2.检测原理：HPV基因分型检测的原理是基于PCR技术的，课件需着重说明PCR技术的基本原理，以及如何通过PCR扩增目标DNA的方法。

3.检测结果的解读：课件中应该列举常见的HPV病毒亚型以及其对应的感染和病症。

这样，医生在解读检测结果时，可以更加准确判断HPV 病毒的类型和严重程度。

4.资料分析与比较：HPV基因分型检测试剂盒有多种型号，不同型号之间的检测原理和检测结果解读可能会有所差别。

因此，课件应该将不同型号的测试盒进行分类，并对各个型号的检测原理、样本要求、结果解读等进行详细的说明。

这有助于医生根据不同型号进行测试时，避免操作失误和不必要的风险。

总之，HPV基因分型检测试剂盒教学课件的设计需要充分考虑实际使用中遇到的问题，并且应注重方法的简单明了，语言的易懂易学，让受众能够快速学习和掌握相关的知识和技能。

本参考品未经批准，说明书仅供参考版本号： V1.0中国食品药品检定研究院人乳头瘤病毒全基因组分型参考品National reference materials for the complete genome of HumanPapillomavirus genotyping【类别】体外诊断试剂参考品 【批号】370060-201901【性状】无色液体【用途】本参考品由病毒培养物和HPV全基因组质粒组成，适用于以非L1区域如E6、E7区域和全基因组为靶序列的人乳头瘤病毒核酸（基因分型）检测试剂盒的质量控制和评价，包括但不限于PCR-荧光探针法、PCR反向杂交法、基因芯片法、恒温扩增法、杂交捕获法、酶切信号放大、测序法等方法学原理。

【组成和规格】此参考盘组成为28支/套，包括23个不同型别的HPV参考品和5个HPV阴性参考品（分别为CMV、HSV-1、CT、GBS和UU），详细信息见下表。

参考品类型型别浓度(IU/ml) 规格 高危型HPV 参考品HPV16 1.49×107100μl/支 HPV18 6.52×106 100μl/支 HPV31 7.49×106 100μl/支 HPV33 6.55×106 100μl/支 HPV35 9.31×106 100μl/支 HPV39 6.63×106 100μl/支 HPV45 3.87×106 100μl/支 HPV51 5.18×106 100μl/支 HPV52 7.30×106 100μl/支 HPV56 1.02×107 100μl/支 HPV58 4.10×106 100μl/支 HPV59 5.57×106 100μl/支 HPV66 8.51×106 100μl/支 HPV68 8.72×106 100μl/支 潜在高危型HPV 参考品HPV26 1.45×107 100μl/支 HPV53 9.00×106 100μl/支 HPV735.72×106100μl/支本参考品未经批准，说明书仅供参考版本号： V1.0中国食品药品检定研究院HPV82 8.79×106100μl/支 低危型HPV 参考品HPV6 1.10×107100μl/支 HPV11 1.49×107 100μl/支 HPV42 9.78×106 100μl/支 HPV43 7.56×106 100μl/支 HPV81 1.30×107100μl/支 HPV 阴性参考品NC1 / 500μl/支 NC2 / 500μl/支 NC3 / 500μl/支 NC4 / 500μl/支 NC5/500μl/支注： 82和ISO39、MM4等同。