HPV基因诊断试剂盒
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HPV分型试剂盒及市场各产品比较
HPV分型试剂盒1、HPV目前市场上主要产品：杂交法（达安19、凯普21、亚能23、透景26）；实时荧光PCR（之江13种高危分型、港龙凯普亚能13种高危不分型、达安8个型定量）；第二代杂交捕获法（HC2）等2、操作方法：：①HPV②HPV实验：A、杂交法：首先加样上PCR仪做扩增，上机时间大约一个半小时左右。
PCR 完成后做杂交，目前市场上有手工杂交和使用杂交仪杂交。
操作时间2-4个小时。
B、第二代杂交捕获法（HC2）:原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测,C、荧光定量PCR：直接上机通过荧光信号累积实时监测整个PCR进程，之江生物是用多重PCR对标本进行准确的13个高危型的具体分型，其他不具体分型。
举例之江产品：之江八管双通道仪器(双色荧光PCR仪器都可以用)：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4E Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5F Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6G Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7H Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8一排八管做一个标本即可具体分型！HPV核酸荧光PCR检测混合液若FAM通道Ct值≤35，结果判断为若VIC通道Ct值≤35，结果判断为Mix1 16+56 HPV16 HPV56Mix2 18+45 HPV18 HPV45Mix3 35+59 HPV35 HPV59Mix4 39+51 HPV39 HPV51Mix5 58+52 HPV58 HPV52Mix6 31 HPV31Mix7 33 HPV33Mix8 68 HPV68②四管四通道仪器（ABI7500、罗氏480、伯乐CFX96、SLAN96孔等四色荧光PCR仪器）：A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4结果判断：3、产品分析比较：4、上海之江HPV优劣势:•优点：①闭管PCR操作，避免扩增污染②能够对13个高危型精确分型③灵敏度高，操作简单，减少了杂交的操作程序，一个实验大约2个小时内完成④针对开放荧光PCR检测系统，无需额外增加设备，有人员培训基础。
04-HPV 人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒-产品介绍13-12-17
14
形态学筛查存在的问题
１、假阴性结果(10-30%)面临医疗纠纷；
２、重复性不好；
３、经验性:需要富有经验的专家； ４、增加筛查成本:复诊率过高； ５、在等待复查中承受焦虑和精神压力；
2014年11月2日星期日
15
宫颈癌临床主要检测方法（二）
HPV DNA分型检测方法
---荧光PCR法(默乐生物） ---杂交信号放大法 (HC2)
1、竞争性内标技术：
监测整个核酸抽提和检测过程是 否有误，有利于消除反应出现的 假阴性，结果更可靠。
2014年11月2日星期日
20
产品特点——独特探针引物设计
高保守
无交叉 阴阳性
无漏检
基于HPV分型原理： 根据HPV L1区基因保守序列设计一系列扩增引物富集24种型别的HPV
PCR产物，再针对不同亚型设计不同探针，进行荧光PCR反应，通过荧光信
2014年11月2日星期日
10
宫颈癌前病变各期及宫颈癌的病理模式图
正常宫颈
轻度不典型增生 中度不典型增生 CIN I CIN II
重度不典型增生 CIN III/CIS
浸润癌 Invasive CA
2014年11月2日星期日
11
宫颈癌筛查方案
• 权威组织一致推荐：采用细胞学检 查和HPV DNA联检进行宫颈癌筛查。
2014年11月2日星期日 31
产品市场容量分析
HPV检测试剂 盒未来的市场 规模达222亿元
我们默乐 HPV产品市 场占有率
？
2014年11月2日星期日 32
2014年11月2日星期日
33
CIN1、CIN2、CIN3：子宫颈上皮内瘤变
ASC-US:意义不明确的非典型鳞状细胞
凯普21种基因型HPV分型与其它比较
交叉污染
多次开关管盖,完 全手工操作，需要 向外倾倒液体，易 污染；有同一容器 内洗涤过程，容易 交叉污染
无效复性
高
杂交效率
低
导流杂交法 10分钟
目的DNA可与杂交膜 表面及孔径中的探针 进行杂交反应，立体 式杂交
低(浅)
实验全过程在隔离的 反应室内完成，通过 外部负压吸引，分子 不易向外扩散，不易 交叉污染。
• 在HC-II的说明书中有提及高危型探针可能会与细 菌的PBR322质粒发生交叉反应(24)。
来源：内部研究资料198例HC-2阳性样本的研究 &. limitations of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid capture-II,P24
来源：limitations of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid captureII,P24 &. Mario Poljak, Irena J. Marin, Katja Seme, Hybrid Capture II HPV Test detects at least 15 human papillomavirus genotypes not included in its current high-risk probe cocktail. Adriana Vince Journal of Clinical Virology 25 (2002) 89--97
98.48%
特异性
95.74%
87.61%
来源:临床考核报告
HC-II的交叉 反应
• 在HC-II检测为阳性的198例样本，有18例样本不 能用其他方法（PCR-测序）证实存在其检测的13 种高危型HPV。 其中有8例样本检出13种高危型之外的其他 HPV基因型，分别为3例HPV66，1例HPV53，1 例HPV53/66，1例CP8304 ，1例HPV82 ，1例 55型。
三家国产试剂盒HPV分型检测结果一致性比较分析
三家国产试剂盒HPV分型检测结果一致性比较分析余红;陆其兵【摘要】目的比较分析三家国产试剂盒HPV分型检测结果的一致性.方法收集近2个月来由之江检测的阳性标本82份,阴性标本10份,分别用3家国产试剂进行HPV基因分型检测2次,并进行比较.结果三家试剂结果重复性分别是之江95.6％,凯普96.7％,安普利95.6％.三家试剂检测结果完全一致率为51.1％(47/92),部分一致率为24.9％(22/92),不一致率为25.0％(23/92).单一型感染的一致率86.4％(32/37),多重感染完全一致率为22.2％(10/45),部分一致率为48.9％(22/45).结论三家国产试剂检测结果一致性不理想.建议患者进行前后治疗的效果对比,最好选在同一家医院进行检测,这样才具有可比性.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2019(021)003【总页数】3页(P320-322)【关键词】人乳头瘤病毒;国产试剂盒;结果一致性【作者】余红;陆其兵【作者单位】224400 江苏省阜宁县人民医院检验科;224400 江苏省阜宁县人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R373.9;R446.11人乳头瘤病毒（HPV）是常见的一种性传播疾病的病原体，分为高危型和低危型，其中高危型HPV感染已被证实与宫颈癌的发生密切相关，HPV检测在宫颈癌筛查中越来越受到重视[1]。
目前HPV检测主要采用分子生物学方法，我国注册的HPV检测试剂盒大部分检测L1基因序列，也有检测全基因组或HPV E6/7序列，但分子生物学方法检测技术也并不完美，这些设计无法顾全到HPV型别全覆盖和型别特异等问题。
本文选用了三家国产试剂进行HPV分型检测并进行比较，发现三家国产试剂检测结果的一致性很不理想。
材料与方法1 仪器与试剂仪器为上海复星SLAN-96S实时荧光扩增仪，三家国产试剂分别是上海之江生产的HPV分型试剂：6+11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82，其中两个低危不分型。
检测试剂盒反向斑点杂交法
人乳头瘤病毒基因分型（32型）检测试剂盒使用说明书（PCR-反向斑点杂交法）【产品名称】通用名称：人乳头瘤病毒基因分型（32型）检测试剂盒（PCR-反向斑点杂交法）英文名称：Human Papillomavirus Genotyping Kit For 32 Types（PCR-RDB）【包装规格】25人份/盒【预期用途】本试剂盒用于检测宫颈脱落细胞是否感染人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）并加以分型，对宫颈癌的早期诊断有重要意义。
【检测原理】反向斑点杂交法本试剂根据HPV基因组的特点设计生物素标记的引物，PCR扩增各基因型HPV的目的片段。
将32型HPV特异性寡核苷酸探针固定在尼龙膜上。
根据生物素-亲和素系统（Biotin-avidin system,BAS）原理，将PCR扩增产物与固化在膜条上的探针杂交，洗膜后加入辣根过氧化合物酶标记的亲和素（POD），与PCR产物上的生物素结合。
加入显色液（TMB，H2O2），辣根过氧化物酶催化其底物H2O2分解，TMB作为供氢体参与反应后产生蓝色的斑点。
根据杂交信号斑点的有无来判断样本中是否存在HPV的基因型。
本试剂盒能有效检测WHO确认的32种HPV的基因型，其中包括19种高危亚型：HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83型；13种低危亚型:HPV6、11、40、42、43、44、55、61、67、69、70、72、81型。
【主要组成成分】【自备试剂】1、20×SSC:称取175.3gNaCl和88.2g枸橼酸钠二水，用800mL双蒸水溶解，浓HCl调节pH值至7.0，定容至1000mL，高压灭菌，室温保存。
2、10%SDS:将20gSDS溶解在180mL双蒸水中，浓HCl调节pH值至7.0，定容至200mL，高压灭菌，室温保存。
3、1M柠檬酸钠：294.1g柠檬酸钠加纯水800mL溶解，用浓HCl调pH值至5.0，定容至1000mL，室温保存。
HPV SOP - 不带提取
人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（荧光PCR 法）标准操作流程一、目的：规范实验室操作，正确使用PCR扩增仪进行HPV-DNA扩增分析，以保证实验结果的准确性。
二、适用范围：人乳头状瘤病毒(HPV)基因分型检测试剂盒在扩增仪上进行扩增以及分析。
三、职责：由临床分子生物实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。
四、程序：【检验方法】1. 试剂准备（试剂准备区）a) 从-20℃取出试剂盒，将各试剂融化混匀并短暂离心后备用。
计算需要进行的反应份数n （n=待测样本数+空白对照1份+阳性对照1份）。
b) 取出8个离心管分别标记1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#和8#，分别加入n×10μl 核酸扩增反应液，然后对应每个编号离心管分别加入n×8μl A反应液（1#）、n×8μl B反应液（2#）、n×8μl C反应液（3#）、n×8μl D反应液（4#）、n×8μl E反应液（5#）、n×8μl F反应液（6#）、n×8μl G反应液（7#）、n×8μl H反应液（8#）。
c) 混匀并短暂离心后，依次分装至对应编号PCR八联管中，每管18μl，总共分装n排PCR 反应八联管，1排PCR八联管为1人份。
2. 加样（1）小心打开PCR八联管盖，每份待测样本核酸溶液、空白对照按照2μl/管依次加入对应编号含有A-H反应体系的PCR八联管中，1排PCR八联管为1人份，阳性对照（A-H组）同样按照2μl/管分别加入对应的A-H反应体系的PCR八联管中，总体积为20μl/管。
（2）盖紧PCR八联管盖，低速短暂离心。
3. PCR扩增检测（核酸扩增区）3.1 将反应管放入荧光PCR 扩增仪进行扩增检测。
4. 结果分析4.1 杭州博日Linegene 9600荧光定量PCR仪：反应结束保存结果，根据分析后图像调节基线的起始循环、终止循环（可以根据实际情况自行调整，起始循环可以在3~15、终止循环可设在5~20，调整空白对照的扩增曲线平直或低于阈值线；也可由仪器进行自动判读，起始循环为3、终止循环为15），点击确定自动获得分析结果，在同一界面的显示区察看结果。
HPV分型试剂盒及市场各产品比较
HPV分型试剂盒1、HPV目前市场上主要产品：杂交法（达安19、凯普21、亚能23、透景26）；实时荧光PCR（之江13种高危分型、港龙凯普亚能13种高危不分型、达安8个型定量）；第二代杂交捕获法（HC2）等2、操作方法：：①HPV②HPV实验：A、杂交法：首先加样上PCR仪做扩增，上机时间大约一个半小时左右。
PCR 完成后做杂交，目前市场上有手工杂交和使用杂交仪杂交。
操作时间2-4个小时。
B、第二代杂交捕获法（HC2）:原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测,C、荧光定量PCR：直接上机通过荧光信号累积实时监测整个PCR进程，之江生物是用多重PCR对标本进行准确的13个高危型的具体分型，其他不具体分型。
举例之江产品：之江八管双通道仪器(双色荧光PCR仪器都可以用)：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4E Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5 Mix5F Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6 Mix6G Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7 Mix7H Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8 Mix8一排八管做一个标本即可具体分型！HPV核酸荧光PCR检测混合液若FAM通道Ct值≤35，结果判断为若VIC通道Ct值≤35，结果判断为Mix1 16+56 HPV16 HPV56Mix2 18+45 HPV18 HPV45Mix3 35+59 HPV35 HPV59Mix4 39+51 HPV39 HPV51Mix5 58+52 HPV58 HPV52Mix6 31 HPV31Mix7 33 HPV33Mix8 68 HPV68②四管四通道仪器（ABI7500、罗氏480、伯乐CFX96、SLAN96孔等四色荧光PCR仪器）：A Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1 Mix1B Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2 Mix2C Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3 Mix3D Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4 Mix4结果判断：3、产品分析比较：4、上海之江HPV优劣势:•优点：①闭管PCR操作，避免扩增污染②能够对13个高危型精确分型③灵敏度高，操作简单，减少了杂交的操作程序，一个实验大约2个小时内完成④针对开放荧光PCR检测系统，无需额外增加设备，有人员培训基础。
HPV基因分型检测试剂盒常见问题
方便工作
基因扩增检验实验室工作流程
进入各个工作区必须遵循严格 的单一方向顺序!
最佳的HPV基因分型实验室布局
工作流 向
PCR后区域
PCR前区域
临床 样本 收集 与 储存
出口
入口
最佳的HPV基因分型实验室布局
每间房间必须有其专用的工作服及一次性手套； 每个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材； 不同区域的仪器设备及耗材不能混用;
临床试验结果分析及常见问题
九、封阻液抽不动 可能原因： ①仔细观察封阻液是否有絮状微 生物或澄淀，如果有则证明封阻 液有发霉迹象，是由于操作中没 有使用灭菌枪头而造成的。 重新购买封阻液，同时确保试验中使用已灭菌 的移液枪头
临床试验结果分析及常见问题
HPV基因分型检测项目 临床试验实际问题
目 录
试验开展实验室要求 HPV临床样本的采集方法及注意事项 临床试验操作注意事项 临床试验结果分析及常见问题
HPV基因分型检测试验项目
——试验开展实验室要求
临床基因扩增实验室设置的一般原则
各区独立 注意风向 因地制宜
“十六字方针”
临床试验结果分析及常见问题
402721 403022 403040 403078
稀释 1:10 DNA模板重复PCR
HPV 58
HPV 18
IC (+) HPV 51
弱 IC, HPV 52
临床试验结果分析及常见问题
三、杂交结果中IC点没有，同时阳性点淡或不清楚； 可能原因：① 样本中含有抑制PCR反应的物质； ② 样本中HPV DNA浓度较低，同样本中 含有抑制PCR反应的物质； ③ 病人样本不符合凯普分型试验要求，样本本身 为阴性结果，但因为样本中有抑制PCR反应的物 质，同时操作人员对杂交温度又控制不当，出 现非特异性杂交点； 建议增加用于扩增DNA浓度，重新PCR扩增及杂交反应。
HPV DNA检测标准操作程序
入空白对照、阳性质控、阳性DNA对照，建议加样编号顺序如下：首先依次是不同的样本编号，最后为阳性质控、阳性DNA对照、与空白对照管（蒸馏水）。
6.2.3 从冰箱中取出PCR试剂盒，将PCR Premix融化后，与Taq酶管一起放入离心机中点动离心。
6.2.4 将试剂放入生物安全柜内，将已点动离心了的PCR premix管、Taq酶管插在冰块上保持在低温条件下。
6.1.6 按照反应数计算所需的PCR各个组份的数量来准备PCR Mastermix（可参照PCR MIX与酶混合比例如下表）。
6.2.7 在生物安全柜内，按已计算好的PCR premix用量，从冰中取出相应的PCR premix管吸取准确量后加入对应的1.5ml离心管中，将PCR premix管放回冰块中。
6.2.8 垂直将枪头小心打入废液缸中，确保移液枪前臂没有碰到废液缸口。
6.2.9 从冰中取出Taq酶管，按计算好的用量（可参照PCR MIX与酶混合比例附表），吸取准确量后分别加入对应的1.5ml离心管中。
6.2.10 盖紧1.5ml离心管盖，同时将PCR premix管及Taq酶管从超净台中取出放回-20℃冰箱的原包装中，标注已使用数量。
6.2.11 将已加入PCR premix和Taq酶的1.5ml离心管在涡旋器上振荡5sec，放入离心机点动离心。
6.2.12 在生物安全柜中，将6种PCR混合液分装入对应的0.2ml PCR扩增管中，每管加入混合液18ul，加完后将所有PCR管盖盖上。
6.3 DNA提取6.3.1将临床样本及阴性对照品置室温下解冻，把标本编号，取出相应数量的样本管，对应编号。
6.3.2 将临床样本振荡混匀，伸入采集管底部吸取临床样本0.8ml 至管底，。
2024年人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒市场环境分析
2024年人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒市场环境分析一、市场概述人乳头瘤病毒（HPV）是一种常见的性传播疾病，其感染与宫颈癌、其他妇科癌症以及口腔颌面部等恶性肿瘤的发生密切相关。
HPV核酸检测试剂盒作为一种常用的检测工具，可以快速、准确地检测出患者体内是否存在HPV病毒感染。
随着人们对性健康的重视程度提高，HPV核酸检测试剂盒市场迅速发展。
本文将对该市场的环境进行分析。
二、市场规模与增长趋势根据市场调研数据显示，全球HPV核酸检测试剂盒市场在近年来呈现稳步增长的态势。
2019年，全球HPV核酸检测市场规模达到XX亿美元，预计到2025年，市场规模将达到XX亿美元，年均复合增长率约为XX%。
市场增长的主要驱动因素包括：1.HPV感染率的上升：随着性行为自由化和人们性健康意识的提高，HPV感染的发生率逐年上升，促进了检测需求的增加。
2.宫颈癌筛查政策的推动：许多国家和地区推行了宫颈癌筛查政策，将HPV核酸检测作为常规筛查项目，对市场的增长起到了推动作用。
3.技术进步的推动：HPV核酸检测技术不断改进，检测精度和敏感性得到提高，对市场需求的增加起到了积极作用。
三、市场竞争格局目前，全球HPV核酸检测试剂盒市场竞争激烈，主要竞争对手包括以下几家公司：1.公司A：是全球领先的生物技术公司，拥有先进的核酸检测技术和完善的售后服务体系，市场份额居于领先地位。
2.公司B：专注于HPV核酸检测领域多年，产品质量可靠，市场声誉良好，在某些地区占据较大市场份额。
3.公司C：新兴的生物技术公司，推出了具有创新性的HPV核酸检测试剂盒产品，正在逐步扩大市场份额。
四、市场驱动因素分析1.政策支持：一些国家和地区紧密结合公共卫生政策，推动HPV核酸检测的普及。
2.人口结构变化：全球人口老龄化趋势明显，特别是发达国家，需求增加。
3.市场渗透率低：尽管市场规模不断增长，但HPV核酸检测的普及率仍然相对较低，有较大的市场空间和潜力。
五、市场挑战因素分析1.技术标准与监管：HPV核酸检测技术标准尚不完善，各国监管要求不一，在产品研发和市场准入方面存在一定的挑战。
国家体外诊断试剂标准物质使用说明书 HPV 全基因组分型参考品
中国食品药品检定研究院人乳头瘤病毒全基因组分型参考品National reference materials for thecomplete genome of Human PapillomavirusGenotyping【批号】360003-201602【性状】无色液体【用途】用于以以非L1区域如E6、E7区域和全基因组为靶序列的人乳头瘤病毒核酸（基因分型）检测试剂盒质量控制和评价。
【包装】1.5mL 冻存管【规格】27支/套，HPV 全基因组分型不同型别重组质粒参考品27支，阴性参考品5支，分别为正常人基因组DNA、CMV、UU、CT、HSV2。
基质液为2ng/ul 正常人基因组，在通风橱中分装到1.5mL 冻存管中，每管100ul，每种不同HPV 基因型的重组质粒浓度约为106-107拷贝/ml。
注：●代表高危型，共有13种。
▲代表中等危险型，其余为低危型；82和ISO39、MM4等同，84和MM8等同。
中国食品药品检定研究院【使用方法和要求】1.本品核酸提取前常温溶解、混匀。
2.使用时要求按照106-107拷贝/ml 浓度进行稀释，稀释液应为2ng/ul 正常人基因组TE 溶液。
本参考品使用时，应满足：1、准确性（阳性符合率）：要求检测试剂盒检测范围内人乳头瘤病毒不同型别国家分型参考品结果应均为阳性。
2、特异性：a)采用实时荧光PCR、PCR-杂交等原理检测试剂盒检测5份阴性参考品，检测结果应为阴性。
检测本参考品22种不同型别阳性参考品，检测结果应为不在其检测范围内的高危型别，应不得出现交叉；不在其检测范围内的低危型别，交叉反应率应分别不大于10.0%。
b)采用杂交捕获-化学发光法原理的检测试剂盒检测5份阴性参考品，检测结果应为阴性。
检测本参考品22种不同型别阳性参考品，检测结果应符合制造商的要求并注明可能产生交叉反应的型别。
3、重复性（精密度）：a)采用实时荧光PCR 原理的检测试剂盒，要求批内精密度应符合Ct 值的变异系数（CV,%）不大于5.0％。
HPV基因分型检测试剂盒常见问题教学课件(一)
HPV基因分型检测试剂盒常见问题教学课件(一)HPV基因分型检测是一项重要的生化检验，对于病毒性疾病的预防和治疗具有重要意义。
而HPV基因分型检测试剂盒是目前市场上最常用的检测工具之一。
下面就来了解一下HPV基因分型检测试剂盒中常见的问题及教学课件。
常见问题：1.检测原理：HPV分型检测是基于荧光定量PCR技术，通过检测病毒DNA来识别和鉴定不同类型的HPV病毒。
2.样本类型：HPV基因分型检测的样本可以从阴道、宫颈、包皮等部位采集，其中以宫颈抹片为主要样本。
3.样本采集技巧：在采集样本前，需要女性病人禁止洗澡，性生活，以及使用药物等干扰因素。
采集时要求专业医护人员采用无菌操作的方式，以避免样本受到污染。
4.检测结果的解读：HPV基因分型检测试剂盒可将检测结果分为阳性和阴性两个结果。
如果检测结果为阳性，则需要根据检测结果中列举的不同亚型，结合病人的病情，对病情进行进一步的判断和治疗。
教学课件：1.样本采集技巧：课件中应该包括女性病人采集阴道、宫颈、包皮样本的步骤，以及采集时的禁忌和注意事项。
同时还应该介绍如何保障采集过程中的无菌操作。
2.检测原理：HPV基因分型检测的原理是基于PCR技术的，课件需着重说明PCR技术的基本原理，以及如何通过PCR扩增目标DNA的方法。
3.检测结果的解读：课件中应该列举常见的HPV病毒亚型以及其对应的感染和病症。
这样，医生在解读检测结果时，可以更加准确判断HPV 病毒的类型和严重程度。
4.资料分析与比较：HPV基因分型检测试剂盒有多种型号，不同型号之间的检测原理和检测结果解读可能会有所差别。
因此，课件应该将不同型号的测试盒进行分类，并对各个型号的检测原理、样本要求、结果解读等进行详细的说明。
这有助于医生根据不同型号进行测试时，避免操作失误和不必要的风险。
总之，HPV基因分型检测试剂盒教学课件的设计需要充分考虑实际使用中遇到的问题，并且应注重方法的简单明了，语言的易懂易学，让受众能够快速学习和掌握相关的知识和技能。
人乳头瘤病毒全基因组分型参考品说明书
本参考品未经批准，说明书仅供参考版本号： V1.0中国食品药品检定研究院人乳头瘤病毒全基因组分型参考品National reference materials for the complete genome of HumanPapillomavirus genotyping【类别】体外诊断试剂参考品 【批号】370060-201901【性状】无色液体【用途】本参考品由病毒培养物和HPV全基因组质粒组成，适用于以非L1区域如E6、E7区域和全基因组为靶序列的人乳头瘤病毒核酸（基因分型）检测试剂盒的质量控制和评价，包括但不限于PCR-荧光探针法、PCR反向杂交法、基因芯片法、恒温扩增法、杂交捕获法、酶切信号放大、测序法等方法学原理。
【组成和规格】此参考盘组成为28支/套，包括23个不同型别的HPV参考品和5个HPV阴性参考品（分别为CMV、HSV-1、CT、GBS和UU），详细信息见下表。
参考品类型型别浓度(IU/ml) 规格 高危型HPV 参考品HPV16 1.49×107100μl/支 HPV18 6.52×106 100μl/支 HPV31 7.49×106 100μl/支 HPV33 6.55×106 100μl/支 HPV35 9.31×106 100μl/支 HPV39 6.63×106 100μl/支 HPV45 3.87×106 100μl/支 HPV51 5.18×106 100μl/支 HPV52 7.30×106 100μl/支 HPV56 1.02×107 100μl/支 HPV58 4.10×106 100μl/支 HPV59 5.57×106 100μl/支 HPV66 8.51×106 100μl/支 HPV68 8.72×106 100μl/支 潜在高危型HPV 参考品HPV26 1.45×107 100μl/支 HPV53 9.00×106 100μl/支 HPV735.72×106100μl/支本参考品未经批准，说明书仅供参考版本号： V1.0中国食品药品检定研究院HPV82 8.79×106100μl/支 低危型HPV 参考品HPV6 1.10×107100μl/支 HPV11 1.49×107 100μl/支 HPV42 9.78×106 100μl/支 HPV43 7.56×106 100μl/支 HPV81 1.30×107100μl/支 HPV 阴性参考品NC1 / 500μl/支 NC2 / 500μl/支 NC3 / 500μl/支 NC4 / 500μl/支 NC5/500μl/支注： 82和ISO39、MM4等同。
一种检测HPV病毒感染致宫颈癌的试剂盒[发明专利]
![一种检测HPV病毒感染致宫颈癌的试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/58204e06aeaad1f347933fde.png)
专利名称：一种检测HPV病毒感染致宫颈癌的试剂盒专利类型：发明专利
发明人：胡争,田瑞,崔资凤,金庄
申请号：CN202010992308.4
申请日：20200921
公开号：CN112114145A
公开日：
20201222
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种检测HPV病毒感染致宫颈癌的试剂盒，包含试剂亚组1、2，所述试剂亚组1、2分别以含检测Spondin 1和p16INK4a水平的试剂作为筛选和诊断HPV病毒感染致宫颈癌的标志物，主要分为捕获抗体、检测抗体、化学发光底物AMPPD、稀释液和洗涤浓缩液，所述检测抗体是将碱性磷酸酯酶加入到PBS，再加入戊二醛，然后分别与检测鼠抗人Spondin 1的单克隆抗体或检测鼠抗人p16INK4a的单克隆抗体混合制成，可检测的样品是来自所述对象的血液、血清、血浆、淋巴、脑脊液、腹水、尿和组织活检物。
本发明所提供的试剂盒的宫颈癌诊断方法和试剂盒的灵敏度和特异性均得到显著提高，极大地降低了假阳性率，能够有效用于宫颈癌的早期筛查。
申请人：中山大学附属第一医院
地址：510080 广东省广州市越秀区中山二路58号
国籍：CN
代理机构：广州粤弘专利代理事务所(普通合伙)
代理人：马腾飞
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16
国内对不同亚型感染致病性研 究近况
北京大学第一临床医院赵健等对1715例患者研 究表明：在高危型中，致癌性最强的是16型， 其次是33和31型。（十五攻关资助项目）。
在北京中日友好医院进行的591例研究中，发 现多重感染患者发生宫颈癌的危险性明显高于 单一感染者，对放疗敏感性差，无进展生存期 和带瘤生存期比单一感染者明显缩短。
型）。其中超过35种可以感染人类的生殖器官，约30种及肿瘤有关。
1）低危型：宫颈上皮内低度病变，引起外生殖器湿疣等良性性病（HPV 6、11、42） ； 2）高危型： 宫颈上皮内高度病变，与宫颈癌的发生有关（HPV 16、 18、 31、 33、35、 39 、45、 51、 52、 53、56、 58、59、 66及 68）；
--- 99.7％的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染。
7
二、HPV的生物学研究
8
人乳头瘤病毒（Human Papillomaviruses, HPV）
双链DNA无包膜病毒 环状DNA，约8Kb； 病毒颗粒直径为50～55nm； 依靠宿主细胞进行复制、转录和
翻译。
HPV病毒电镜图
9
型别及分布
型别：已发现100多种不同的亚型（如果DNA序列同源性小于90％，则定为新的亚
14
HPV基因结构
按功能可分为早期区(E区)、晚期区 (L区)和非编码区 （ LCR）三个区域。
E区分为E1～E7开放阅读框架，主要编码 及病毒复制、转录、调控和细胞转化有关的 蛋白（ HPV无E3）。
L区分L1和L2，分别编码主要衣壳蛋白和 次要衣壳蛋白。
LCR是E区与L区间-6.4～1.0Kb的DNA片 段，可负责转录和复制的调控
15
HPV的致癌机理
HPV以游离态感染上皮细胞后，可以持续存在于染色体外，不引起 任何病变，或引起良性病变和低度病变，如尖锐湿疣或轻度不典型 增生等。而癌变则及病毒DNA整合入宿主染色体密切相关。 高危型HPV DNA链通常在E1或E2的开放读码框内断裂，使HPV DNA 整合入染色体脆弱区。E6和E7具有促进和维持整合状态的功能。 HPV E6蛋白间接抑制 p53活性，阻碍细胞对DNA损伤的反应。（负 向调节细胞的生长和分化） HPV E7蛋白与pRb结合后使其功能失活，改变细胞周期的正常调控。
％， 所有亚型检出次数为226。
2. 本表统计数据由WHO深圳项目提供，HPV分型基因检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。
13
浙江12000例HPV检测初步结果
分型情况：16型占26%左右，其他依次 为58、33、52、45、18。及其他地区的 统计有明显差异。 高危人群阳性率在30%左右，普通人群 在11%左右。 温州地区丽水地区阳性率明显高于省内 其他地区。 进一步的研究正在进行中。
最常见的高危型
53%
HPV16
（HPV16、18、31、
33、45、58 ）
宫颈癌患者中高危型HPV感染率(欧州2000年资料)
12
深 圳 不 同 HPV 亚 型 的 检 出 频 率 统 计 （WHO项目）
注：1.本表统计样本数为1153例，其中阳性样本数为119例； 由于检测样本中存在复合感染，故亚型的检出频率＝（该亚型的检出次数 / 所有亚型的检出次数）×100
HPV基因诊断试剂盒
一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展 二、HPV的生物学研究 三、宫颈癌的早期筛查 四、宫颈病变的治疗
2
一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展
3
宫颈癌－－最常见的妇科恶性肿瘤
据世界范围内统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发 病例的5%，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例约13.15 万，占世界宫颈癌新发病例总数的28.8% ，发病率仅次于乳腺癌位居第二。
宫颈病变 湿疣，CIN I CIN, CIN CIN CIN CIN I CIN I 正常宫颈上皮 尖锐湿疣 鲍温样丘疹病 VIN VaIN 鳞癌 外阴乳头状瘤
11
HPV在欧洲的常见分型和感染率
H3P%V33 6%
HPV31
1 4 % Other
9%
HPV45
15%
HPV18
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
最常见的低危型
（HPV6、11）
17
HPV感染途径及危险因素
随着筛查制度的建立，世界宫颈癌的发病率和死亡率已经大幅下降。我国由 70年代的10.28/10万下降到90年代的3.25/10万，但在高发病区，死亡率仍高居不 下。
地区 世界 中国 北京 上海 山西阳城
死亡率 (/10万） 8.00 3.25 2.54 3.8 36.00
4
患病年龄更趋于年轻化（发病年龄提前到45岁），发病史缩短。如吉林省在80年代统计宫颈癌 患者中小于35岁的妇女占4.8％，而2000年已经占到34.1％
分布：有些亚型和地区、宫颈癌的病理类型有关。
HPV45在非洲西部很常见，HPV39和59在美洲中部和南部常见，HPV52，58在中国常见。 在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鳞癌中HPV18分别占56％和39％。
10
表 HPV型别及宫颈病变
常见HPV型别 6，11 16 18 30，40，58，69 31，33，35，39 45，51，52，56 42，43，44 53 54 55 59 61，62，64，67 66 70
5
子宫颈癌的危险因素：
❖ 行为危险因素：如性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、 营养不良及性混乱等； ❖ 生物学因素：如细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染。 ❖ 目前仅有少量研究表明宫颈癌可能存在着家族聚集现象。
6
宫颈癌的生物学病因研究进展 ： *早在十九世纪四十年代，一位意大利医生Regoni Stern最早提出结婚及
否与宫颈癌的发生可能有关； *60－70年代，人们的主要研究对象是HSV,HCMV等病原体； *1974年zur Hausen首次提出HPV感染与宫颈肿瘤有密切关系； *1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒 （Human papillomavirus，HPV）颗粒； *1995年IARC专题讨论会：高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要病因。
国内对不同亚型感染致病性研 究近况
北京大学第一临床医院赵健等对1715例患者研 究表明：在高危型中，致癌性最强的是16型， 其次是33和31型。（十五攻关资助项目）。
在北京中日友好医院进行的591例研究中，发 现多重感染患者发生宫颈癌的危险性明显高于 单一感染者，对放疗敏感性差，无进展生存期 和带瘤生存期比单一感染者明显缩短。
型）。其中超过35种可以感染人类的生殖器官，约30种及肿瘤有关。
1）低危型：宫颈上皮内低度病变，引起外生殖器湿疣等良性性病（HPV 6、11、42） ； 2）高危型： 宫颈上皮内高度病变，与宫颈癌的发生有关（HPV 16、 18、 31、 33、35、 39 、45、 51、 52、 53、56、 58、59、 66及 68）；
--- 99.7％的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染。
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二、HPV的生物学研究
8
人乳头瘤病毒（Human Papillomaviruses, HPV）
双链DNA无包膜病毒 环状DNA，约8Kb； 病毒颗粒直径为50～55nm； 依靠宿主细胞进行复制、转录和
翻译。
HPV病毒电镜图
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型别及分布
型别：已发现100多种不同的亚型（如果DNA序列同源性小于90％，则定为新的亚
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HPV基因结构
按功能可分为早期区(E区)、晚期区 (L区)和非编码区 （ LCR）三个区域。
E区分为E1～E7开放阅读框架，主要编码 及病毒复制、转录、调控和细胞转化有关的 蛋白（ HPV无E3）。
L区分L1和L2，分别编码主要衣壳蛋白和 次要衣壳蛋白。
LCR是E区与L区间-6.4～1.0Kb的DNA片 段，可负责转录和复制的调控
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HPV的致癌机理
HPV以游离态感染上皮细胞后，可以持续存在于染色体外，不引起 任何病变，或引起良性病变和低度病变，如尖锐湿疣或轻度不典型 增生等。而癌变则及病毒DNA整合入宿主染色体密切相关。 高危型HPV DNA链通常在E1或E2的开放读码框内断裂，使HPV DNA 整合入染色体脆弱区。E6和E7具有促进和维持整合状态的功能。 HPV E6蛋白间接抑制 p53活性，阻碍细胞对DNA损伤的反应。（负 向调节细胞的生长和分化） HPV E7蛋白与pRb结合后使其功能失活，改变细胞周期的正常调控。
％， 所有亚型检出次数为226。
2. 本表统计数据由WHO深圳项目提供，HPV分型基因检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。
13
浙江12000例HPV检测初步结果
分型情况：16型占26%左右，其他依次 为58、33、52、45、18。及其他地区的 统计有明显差异。 高危人群阳性率在30%左右，普通人群 在11%左右。 温州地区丽水地区阳性率明显高于省内 其他地区。 进一步的研究正在进行中。
最常见的高危型
53%
HPV16
（HPV16、18、31、
33、45、58 ）
宫颈癌患者中高危型HPV感染率(欧州2000年资料)
12
深 圳 不 同 HPV 亚 型 的 检 出 频 率 统 计 （WHO项目）
注：1.本表统计样本数为1153例，其中阳性样本数为119例； 由于检测样本中存在复合感染，故亚型的检出频率＝（该亚型的检出次数 / 所有亚型的检出次数）×100
HPV基因诊断试剂盒
一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展 二、HPV的生物学研究 三、宫颈癌的早期筛查 四、宫颈病变的治疗
2
一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展
3
宫颈癌－－最常见的妇科恶性肿瘤
据世界范围内统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发 病例的5%，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例约13.15 万，占世界宫颈癌新发病例总数的28.8% ，发病率仅次于乳腺癌位居第二。
宫颈病变 湿疣，CIN I CIN, CIN CIN CIN CIN I CIN I 正常宫颈上皮 尖锐湿疣 鲍温样丘疹病 VIN VaIN 鳞癌 外阴乳头状瘤
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HPV在欧洲的常见分型和感染率
H3P%V33 6%
HPV31
1 4 % Other
9%
HPV45
15%
HPV18
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
最常见的低危型
（HPV6、11）
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HPV感染途径及危险因素
随着筛查制度的建立，世界宫颈癌的发病率和死亡率已经大幅下降。我国由 70年代的10.28/10万下降到90年代的3.25/10万，但在高发病区，死亡率仍高居不 下。
地区 世界 中国 北京 上海 山西阳城
死亡率 (/10万） 8.00 3.25 2.54 3.8 36.00
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患病年龄更趋于年轻化（发病年龄提前到45岁），发病史缩短。如吉林省在80年代统计宫颈癌 患者中小于35岁的妇女占4.8％，而2000年已经占到34.1％
分布：有些亚型和地区、宫颈癌的病理类型有关。
HPV45在非洲西部很常见，HPV39和59在美洲中部和南部常见，HPV52，58在中国常见。 在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鳞癌中HPV18分别占56％和39％。
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表 HPV型别及宫颈病变
常见HPV型别 6，11 16 18 30，40，58，69 31，33，35，39 45，51，52，56 42，43，44 53 54 55 59 61，62，64，67 66 70
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子宫颈癌的危险因素：
❖ 行为危险因素：如性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、 营养不良及性混乱等； ❖ 生物学因素：如细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染。 ❖ 目前仅有少量研究表明宫颈癌可能存在着家族聚集现象。
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宫颈癌的生物学病因研究进展 ： *早在十九世纪四十年代，一位意大利医生Regoni Stern最早提出结婚及
否与宫颈癌的发生可能有关； *60－70年代，人们的主要研究对象是HSV,HCMV等病原体； *1974年zur Hausen首次提出HPV感染与宫颈肿瘤有密切关系； *1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒 （Human papillomavirus，HPV）颗粒； *1995年IARC专题讨论会：高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要病因。