陕北木枣基因组DNA提取方法研究_王延峰 - 副本 - 副本

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玉米干种子DNA 快速提取技术研究

68.02
1.85
235.24
1.94
241.84
1.89
219.91
1.90
317.19
1.87
129.98
2.08
OD260nm/OD230nm 1.62 0.22 2.87 2.14 2.24 2.11 2.40
液，振荡混匀。⑤用磁分离架分离磁珠并弃上清。⑥加入 900 μL 漂洗液洗涤 3 次，分离磁珠弃上清，吹干磁珠后加入 100 μL 洗脱液，充分混匀，65 ℃水浴 10 min。⑦转移至磁力架上吸附 2 min，待磁珠完全吸
基金项目：吉林农业科技学院大学生科技创新科研项目（编号：吉农院合字 [2019] 第 037 号）。作者简介：王宇龙（2000—），男，本科在读；研究方向为分子生物学。通讯作者：楚海娇（1984—），女，硕士，实验师；研究方向为分子检测新方法研究。
验配制 7 种提取裂解液对玉米干种子进行 DNA 提取，经超微量紫外分光光度计测量浓度和纯度，结果见表 1。裂解液Ⅰ的浓度最低，裂解液Ⅱ而单独使用 2%CTAB
提取时浓度最高；加入不同摩尔浓度的盐酸胍后 DNA 浓度没有提高。采用 7 种裂解液提取的 DNA 纯度均较好，除使用 SDS 裂解液的 OD260/OD280 为 2.08，存在少量 RNA 污染外，其他比值均在 1.8 ～ 2.0。纯净 DNA 样本的 OD260/OD230 应该大于 2，采用盐酸胍和异硫氰酸胍作为裂解液的比值分别为 1.62 和 0.22，可能存在盐离子或胍盐残留。结合电泳图 1 可见 3 ～ 6 号泳道 DNA 条带明亮清晰，无拖尾弥散现象，完整性好。因此，认为 2%CTAB 为最佳裂解液。
裂解液
Ⅰ（盐酸胍） Ⅱ（异硫氰酸胍） Ⅲ（2%CTAB+1 mol·L-1 盐酸胍） Ⅳ（2%CTAB+3 mol·L-1 盐酸胍） Ⅴ（2%CTAB+6 mol·L-1 盐酸胍）

适用于新疆野核桃SSR_PCR的快速提取DNA的方法_王肇延

１００
北方园艺２（）：０１１１９１００１０３～
室温离心５ｍ取上清液，加入２倍体积４ｉｎ； ℃ 的无水，／、乙醇，混匀后至－２０ ℃ 沉淀３０ｍｉｎ１２０００ｒｍｉｎ２０ ℃ ；，离心５ｍ弃上清液用乙醇洗涤次ｉｎ４ ℃７０％２～３，自然风干，加入５４ ℃ 无水乙醇洗涤１次，０μ Ｌ的１× ，，。使完全溶解中保存备用ＴＥＤＮＡ－２０ ℃ １．２．３ＮＡ的鉴定用紫外法和琼脂糖电泳对全部Ｄ野核桃叶片基因组Ｄ操作如下：用ＮＡ进行质量检测，并取１μ １ ×ＴＥ做空白对照，ＬＤＮＡ用ｄｄＨ２Ｏ稀释至２用岛津Ｂ蛋白质核酸分析仪测定０μ Ｌ，ｉｏＳｅｃｉｎｉｐ－ｍ根据Ｏ／／ＤＮＡ原液的ＯＤＤ２６０２８０值和浓度，２６０２８０值确定提取ＤＮＡ的纯度。用１μ Ｌ混有荧光染料的溴酚蓝与以λ ５μ ＬＤＮＡ样品混合，ＤＮＡＨｉｎｄａｒｋｅｒ为参 Ⅲ Ｍ照，用０．８％～１％琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ的大小及降解情况，并用ＵＶＰ凝胶成像系统进行观察和拍［］照。采用鼎国生物合成的ＺＭＺ５引物９（５ ′ －、ＧＧＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＴＴＣＴＡＴ－３ ′５ ′ ＣＴＧＣＴＴＣＴＧＣ－Ｇ］１０）。利用刘晓丽等［建立并优化的核桃ＴＴＧＴＣＴＴ３ ′ －ＳＳＲ反应体系和ＰＣＲ扩增程序。根据引物合成提供的温度及实际凝胶电泳的结果，最终将扩增程序的退。火温度确定为５将６ ℃ ＳＳＲＰＣＲ扩增产物用８％非－变性聚丙烯酰胺凝胶检测其扩增产物并观察拍照。

刺槐高质量基因组DNA提取方法的研究

刺槐高质量基因组DNA提取方法的研究王少明【摘要】The DNA extraction with stable and efficient methods have been one of an pivotal technology in Molecular marker assisted breeding research. In this paper, DNA extraction methods with modified CTAB and grindingrod in liquid nitrogen as the main steps of the rapid extraction of genomic DNA for Robinia pseudoacacia leaves was established. SSR results proved that the extraction DNA was satisfied with molecular research. This work is a foundation for evaluation of genetic diversity and molecular marker assisted breeding for the Robinia pseudoacacia L.%高效、稳定的基因组DNA提取是进行分子标记辅助育种研究的关键技术环节之一。

以刺槐叶片为材料，将传统的CTAB法进行优化改良，结合组织研磨棒液氮研磨建立刺槐基因组DNA的提取方法。

将提取获得的基因组DNA进行SSR分子标记技术研究，获得的条带清晰、稳定．表明提取获得的基因组DNA能很好的满足SSR分子标记的需要。

为刺槐遗传多样性以及相关的分子标记辅助育种研究奠定了基础。

【期刊名称】《河南林业科技》【年(卷),期】2011(000)003【总页数】3页(P9-10,50)【关键词】刺槐;基因组DNA;CTAB法;SSR【作者】王少明【作者单位】国有洛宁县故县林场,河南洛阳471700【正文语种】中文【中图分类】S792.27前言刺槐（Robinia pseudoacacia L.）属豆科刺槐属（Robinia L.）落叶乔木，是重要的速生造林树种之一，不仅耐轻盐碱，是改造盐碱地的先锋树种，是一种良好的用材、水土保持、防风固沙、土壤改良和绿化树种。

陕北木枣中低聚糖的提取及其功效研究

陕北木枣中低聚糖的提取及其功效研究目前低聚糖生产虽已经得到产业化大规模发展,但是大多数低聚糖的生产都采用酶法合成或者化学合成的方法来得到,很少有企业直接从植物体内提取获得,归根结底最根本的原因就在于直接从植物中提取低聚糖的成本较高;另外目前已经得到广泛应用的植物天然低聚糖仅有大豆低聚糖,而对木枣低聚糖的研究尚在探索中,而且报道甚少。

陕北的优势产业----红枣产业近10年来出现了迅猛发展,而且已经跃居全国第五。

但是近年来因为生态环境的破坏,气候环境也受到了很大的影响,陕北雨水增多或者干旱,致使陕北红枣产业出现残次果增加,年产量下降等现象,致使红枣栽培户蒙受巨大的经济损失,因此寻找红枣产业利润的新增长点,弥补果农因产量降低,残次果增多而带来的经济损失,或是能够将残次果变废为宝,再次加工利用,增加果农收入,这将成为一项重要的研究课题。

本课题研究的意义和价值就在于通过对陕北木枣中木枣低聚糖的提取工艺优化及其功效研究:为陕北木枣中的低聚糖的制备奠定理论基础;为如何降低制备红枣天然低聚糖的成本提供理论依据;为陕北红枣产业寻找新的利润增长点提供开辟新的路径的理论依据。

本论文主要内容如下:1、用石油醚作为浸提溶液进行回流浸提,研究了去除红枣中脂类物质的最佳工艺。

通过对实验结果的综合分析最终得出去除红枣中的脂类物质的最佳条件是:在料液比为1:10(g/ml)时,在70℃下连续回流浸提2小时。

2、用蒸馏水作为浸提溶液进行回流提取,研究了从红枣中浸提可溶性糖的最佳工艺。

通过单因素和正交实验结果分析最终得出:在料液比为1:20(g/ml)时,在70℃下连续回流浸提2小时,可溶性糖的得率可以达到75%左右。

3、先用蒸馏水作为浸提溶液浸提红枣中的可溶性糖,然后再用Savage法去除蛋白质,95%乙醇沉淀法去除多糖,最后再通过聚丙烯酰胺凝胶柱和活性炭硅藻土柱两种不同的柱层析对木枣低聚糖进行分离比较,研究陕北木枣低聚糖提取与分离的最佳工艺。

高质量枣树基因组DNA提取方法的研究_李登科 - 副本 - 副本

ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＷａｙｓｏｆＨｉｇｈＱｕａｌｉｔｉｆｕｌＤＮＡｆｒｏｍ !" #$#$%& Ｍｉｌｌ．
ＬｉＤｅｎｇｋｅ１ＨｕａｎｇＣｏｎｇＬｉｎ２ＴｉａｎＪｉａｎｂａｏ１ＷａｎｇＹｏｎｇｋａｎｇ１＊ＷａｎｇＹｏｎｇｑｉｎ２
１ＰｏｍｏｌｏｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｈａｎｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｉｇｕ，０３０８１５；２ＢｅｉｊｉｎｇＡｇｒｏ－ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＢｅｉｊｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡ－ｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１０００８９＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｗａｎｇｒｋｍｅｒｒｙ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
１．２试验处理
各品种分别用常规ＣＴＡＢ法、ＴＥ３Ｄ法和改进ＣＴＡＢ法进行ＤＮＡ提取，每份称取２５０ｍｇ新鲜组织。样品编号及处理见表１。
１．３提取方法
１．３．１常规ＣＴＡＢ法称取一份材料放入液氮充分预冷（以加入液氮后不再剧烈冒泡为准）的研钵中，液氮充分研磨至粉末状。研磨过程中不断添加液氮，勿使其干。５０ｍｌ离心管中移入１．２５ｍｌＣＴＡＢ提取缓冲液（２％ＣＴＡＢ，１．４ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，０．５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ）预热至６５"。预热的提取液中加入２％体积 !－巯基乙醇，将研磨粉末的材料转入其中。６５# 水浴６０ｍｉｎ，其间轻轻摇匀数次。加入等体积氯仿：异戊醇（２４：１），混匀，１００００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清。再加入等体积氯仿：异戊醇（２４：１）抽提１次。加入２倍体积－２０$预冷的乙醇，混匀，－２０%静置１￣２ｈ。

一种适合枣和酸枣基因组DNA的提取方法

第23卷第4期河北农业大学学报Vol.23No.4 2000年10月Journal of Agricultural University of Hebei　Oct.2000　文章编号:1000-1573(2000)04-0046-03一种适合枣和酸枣基因组DNA的提取方法彭建营1,　束怀瑞2,　彭士琪1(11河北农业大学中国枣研究中心,河北保定071001;21山东农业大学园艺系,山东泰安271018)摘要:研究比较了CT AB法和S DS法在枣和酸枣基因组DNA提取中的效果,并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提DNA质和量及其RAPD扩增效果的影响。

结果表明:用改良后的CT AB法优于S DS法,可有效地去除多糖,所提DNA的质和量均能满足PCR扩增要求。

取样时间与部位对所提基因组DNA的质量无影响,但与产量有关,以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。

样品采后液氮处理-70℃低温保存,与新鲜材料所提DNA差异不大。

抗氧化剂可有效地阻止多酚类物质氧化变褐,1%的β2巯基乙醇即可满足要求。

用于RAPD分析的模板DNA中含有RNA和少量蛋白质对扩增结果无影响。

关键词:枣;酸枣;基因组;DNA制备中图分类号:S665.1 文献标识码:AA method for genomic DNA isolation of Chinese jujube and acid jujubePEN G Jian2ying1,SHU Huai2rui2,PEN G Shi2qi1(11Research Center of Chinese Jujube,Agricultural University of Hebei,Baoding071001,China;21Department of H orticulture,Shandong Agricultural University,T ai′an271018,China)Abstract:The effects for extracting genomic DNA by the methods of CT AB and S DS were studied on Chinese jujube and acid jujube,and the effects of different sam pling period,position,storage treatment,and oxidation inhibitor etc.,on the quality and quantity of DNA extracted and RAPD results were com pared.The results showed that the im proved CT AB method was better than that of the S DS method;it could rem ove polysaccha2 ride effectively.The sam pling period and position had no effect on the quality of DNA extracted,but they had relation to the quantity of DNA extracted.The y oung leaf or shoot was g ood for DNA is olation.The sam ple treated with liquid nitrogen and stored with-70℃refrigerator had no difference with fresh sam ple.Thebrowning of DNA could be prevented by1%β2mercaptoethanol.RNA and a little protein had no effect on RAPD results.K ey w ords:Ziziphus jujuba;Ziziphus acidojujuba;genomic;DNA extraction自60年代以来,分子标记技术迅速发展,极大地加深了人们对生物遗传规律的认识,在品种鉴定、分类研究、系谱分析、遗传图谱构建、基因标记等领域得到广泛应用[1]。

一种提取核桃基因组DNA的改进方法

一种提取核桃基因组DNA的改进方法
樊靖;刘庆忠;张俊林;王锦
【期刊名称】《山东农业科学》
【年(卷),期】2008(000)006
【摘要】以核桃幼嫩叶片为材料,针对核桃体内富含酚类、多糖等次生物质,采用改良的CTAB法,提取其基DNA,经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,蛋白、多糖、RNA等去除较干净,适用于分子标记及其分子生物学的研究.
【总页数】3页(P90-91,95)
【作者】樊靖;刘庆忠;张俊林;王锦
【作者单位】西南林学院园林学院,云南,昆明,650224;山东省果树研究所,山东,泰安,271000;山东省果树研究所,山东,泰安,271000;山东省果树研究所,山东,泰
安,271000;北京农学院植物科学技术系,北京,102206;西南林学院园林学院,云南,昆明,650224
【正文语种】中文
【中图分类】Q523.3
【相关文献】
1.改良CTAB法在核桃叶片基因组DNA提取中的应用研究 [J], 宋艳波;吴国良;牛洪斌
2.核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较 [J], 韩继成;徐平;李春敏;陈湖;张新忠
3.从陈旧血液提取基因组DNA的改进方法 [J], 古丽娜·艾山;木耶赛尔;马合木
提·哈力克
4.从固定液保存的刺参样品中提取基因组 DNA 的改进方法 [J], 王祖哲;王利;顾晨雷;马普;王秀利
5.黑核桃叶片基因组DNA提取方法比较研究 [J], 张丽;黄学琴;吴全忠;李苗;陈虞超;刘立武;宋玉霞
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一种蚜茧蜂基因组DNA提取方法

一种蚜茧蜂基因组DNA提取方法孔博;张宏瑞;和淑琪;谷星慧;杨硕媛;张立猛;李正跃【摘要】In order to eff ectively extract genomic DNA of Aphidiidae and reserve specimens for morphological identifi cation, extraction method of conventional kits (column centrifugation method) was improved. Genomic DNA of 7 species of Aphidiidae was extracted by puncturing,and genomic DNA of 4 species among them were extracted by grinding. Purity and yield of genomic DNA extracted by two methods were compared and verifi ed by amplifi cation of m itochondrial COI gene sequences. Results showed that puncturing extraction could be used to extract genomic DNA from individual adult of Ahidiidae, and to reserve specimens for morphological identifi cation. The yield of DNA extracted by this method ranged from 29 to 55 ng/μL,OD260 /OD280 of the extracts ranged from 1.51 to 1.91, which could stably amplify mitochondrial COI gene sequences, and PCR amplifi ed bands were clear and complete.%为有效获得蚜茧蜂基因组DNA,并保留其虫体做形态鉴定.本文对常规试剂盒提取方法(柱离心法)进行改进,采用穿刺法提取7种蚜茧蜂的基因组DNA,同时以研磨法提取4种常见蚜茧蜂成虫基因组DNA做对照,比较两种方法提取的基因组DNA的纯度和产量,并通过线粒体COI基因序列扩增进行验证.结果表明:穿刺法能从单头蚜茧蜂中提取DNA而不影响形态鉴定.该方法提取的DNA产物产量在29~55 ng/μL,提取物的OD260/OD280在1.51~1.91,可以稳定地进行线粒体COI基因序列扩增,PCR扩增条带清晰完整.【期刊名称】《中国烟草学报》【年(卷),期】2017(023)006【总页数】6页(P88-93)【关键词】蚜茧蜂;基因组DNA;DNA提取;PCR【作者】孔博;张宏瑞;和淑琪;谷星慧;杨硕媛;张立猛;李正跃【作者单位】云南农业大学植物保护学院,云南昆明 650201;云南农业大学植物保护学院,云南昆明 650201;云南农业大学植物保护学院,云南昆明 650201;云南省烟草公司玉溪市公司,云南玉溪 653100;云南省烟草公司玉溪市公司,云南玉溪653100;云南省烟草公司玉溪市公司,云南玉溪 653100;云南农业大学植物保护学院,云南昆明 650201【正文语种】中文蚜茧蜂科（Aphidiidae）隶属昆虫纲（Insecta）膜翅目（Hymenoptera）姬蜂总科（Ichneumonoidea），许多种类广泛分布于世界各地[1]。

核桃总DNA提取方法研究_常月梅 - 副本 - 副本

核桃总DNA 提取方法研究常月梅(山西省林业科学研究院,山西太原030012)[摘　要]研究了适于核桃基因组DNA 的提取方法,并对DNA 初步进行了质量检测,结果表明此方法可有效去除次生物质对DNA 的干扰,可用于随机引物RAPD 扩增和随后的各种遗传学分析。

[关键词]核桃;基因组DNA;提取;RAPD[中图分类号]S664.1;Q781 [文献标识码]A [文章编号]1003-8981(2005)03-0034-02Study on Genome DNA Extraction of WalnutCHANG Yue -Mei(Shanxi A cademy of F or est ry ,T a iyuan 030012,Shanx i,China)Abstract :T he efficient ex tr actio n metho d of g eno me DN A fr om w alnut wa s studied ,and quality analy sis of DN A ex tracted w as preliminar ily do ne.T he r esults show ed that the method could effectively elim inate inter fer er w it h ex tracting DN A by the secondary mater ials ,and it can be suitable for RA PD a nalysis and other genetic a nalysis .Key words :walnut;g enome DN A ;ex tr actio n;RA P D核桃PCR 扩增成败取决于DNA 的质量[1～5]。

DNA 的提取并不难,也不复杂,但实际工作中却发现要获得高质量的DNA 并不容易[6～7],关键在于核桃植物体内酚类、多糖等次生物质含量较高[8～10],严重影响DNA 提取的质量,从而造成PCR 扩增失败[11]。

陕北木枣基因组DNA提取方法研究

（．ｏｌｅｏＳｉｎｅＹｈ勰Ｕｉｒｔ，ｈｎｉ１ｏ０ＰＣ２ＳａｘＥｇｎｅｉ１ＣｌｇｅｆＬｃｅｃ，ａ，ｎｖｓｙＳａｘ７６ｏＲ；．ｈｎｉｎｉｅｒｇ＆Ｔｃｎｌｉｌｅｅｒｈｅｉ，ｎｅｈｏｏｃｓａｃｇａＲ
红枣营养丰富，多种维生素和矿物质，但含不可以食用，可入药，受人们喜爱。还深陕北木枣主要产于黄河沿岸的宜川、川、涧、堡、县、延清吴佳神木、谷等县，府由于土质独特，照、温、光气降雨量等
Ｎｏｔｅｈｎｉｗｉｉｅｅｔｗｙｏｐｅｅｖ．ＭｏｅｖｒｈｆｃｅｔｏｘｒｃｉｇｔｔｌＤＮＡｆｏｄｆｒｎａｔｆｒｒＳａｘｔｄｆｒｎａｓｔｒｓｒｅｈｎｈｒｏｅ，ｔｅｅｉｎｆｅｔｔｏａｉａｎｒｍｉｅｅｔｐｒｓｏｆ
ＥｘｒｃｉｎＭｅｈｏｏｔａｔｎｇＴｏａｔａｔｏｔｄｆｒＥｘｒｃｉｔｌＤＮＡｒｍｆｏ
ＭｕａｕｕｅｆｏＮｏｔｅｎＳａｘｚｏＪｊｂｍｒｈｒｈｎｉｒ
ＷＡＮＧＹａ－ｅｇ，ａ－ｏｇ，ＨＡＮＧｎｌ，ｎｆｎ ’ ＨＥＸｉｏｌｎ ’ ＺＹａ－ｉＺＨＡＮＧａｇｑａ ’ ＹＡＯｏ ’ Ｘｌｎ－ｉｎ，Ｙａ ’
Ｃｎｅｆｒｏｖｒｔｎ＆ＵｉａｉＲｇｏｄＢｏｏｉｌｅｏｒｅ，ａ＂１００ＰＪｅｔｏｎｅｓｉｒＣａｏｔｉｏｏｅｎｉｌｃｓｕｃｓＹｎｃ７６０，ＲｌｔｎｆｉｚｇｏＲｍＣ

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图 2 木枣不同取材部位基因组 DNA 的电泳检测（1：嫩茎；2：韧皮部；3：叶芽；4：花瓣； 5：花蕾；6：嫩叶；M：DNA Marker 2）
3讨论
为获得高质量的 DNA，需减少其内源 Dnase 的降解以及次生产物（色素、单宁、酚类）的干扰，应选取合适部位的材料，适宜的采后保存方式以及较优的提取方法。该研究表明，改良 CTAB 法对快速冷冻材料的提取效果较优，且木枣不同取材部位中以叶芽和嫩叶的提取效果最好。
湖南农业科学 2012，（17）：4~5，9
Hunan Agricultural Sciences
陕北木枣基因组ＤＮＡ提取方法研究
王延峰 1，贺晓龙 1，张艳丽 1，张向前 2，姚尧 1
（1.延安大学生命科学学院，陕西延安 716000； 2. 陕西省区域生物资源保育与利用工程技术研究中心，陕西7] Long Y H，Xie L，Liu N，et al. Comparison of gut-associated and nest-associated Rmicrobial communities of a fungus-growing ter－R mite （Odontotermes yunnanensis）[J]. Insect Science，2010，17 （3）：265-276.
（下转第 9 页）
第 17 期
龙海涛：CAP-trapper库，必须除去小片段双链 cDNA，但能基因这一主要目的，在保证插入片段长度的同时，需兼顾文库的库容量。
2，6：酒精处理；3，7：新鲜叶片；M：DNA Marker 2）
解，溶液极粘稠，移液枪吸取困难，取量不准。该法提取的快速冷冻、酒精处理、新鲜 3 种处理所得到的基因组 DNA 经乙醇沉淀后均有不同程度的色素残留，如酒精处理的为赭色，新鲜的为淡黄绿色，快速冷冻的为乳黄色。且各加样孔较亮，这说明 SDS 法提取的 DNA 样品中可能含有较多的未被去除的蛋白质、多糖及一些其他次生代谢产物[6]。
1%的 β-巯基乙醇可以有效地阻止褐变发生，完全可以制备高质量的 DNA，既经济又高效；3% CTAB 提取缓冲液可破碎细胞核，充分结合 DNA，完全与蛋白质解离，离心时可充分与多糖等物质分离，达到纯化分离 DNA 的目的[6]；2%SDS 提取液可得到质量较高的 DNA，且 DNA 产率更高、更稳定； EDTA 是一种能抑制 DNA 酶活性，保护 DNA 不被内源核酸酶降解的螯合剂，浓度过低或过高都会导致 DNA 降解或破损，EDTA 最佳使用浓度为 30～50 mmol/L[7]。因此，建议采用 SDS 提取缓冲液
关键词：木枣；SDS 法；改良 CTAB 法；基因组 DNA
中图分类号：S665.1
文献标识码：A
文章编号：1006-060X（2012）17-0004-02
Extraction Method for Extracting Total DNA from Muzao Jujube from Northern Shanxi
1.3 试验方法
1.3.1 改良ＣＴＡＢ法将研磨的干粉迅速转入 1.5 mL 离心管中，加入 500 μL 预热的 CTAB 提取缓冲液，充分混匀后于 65℃水浴中保温 30～60 min[1-3]。加等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），缓慢颠倒混匀，10 000 r/min 离心 10 min，重复抽提 1 次，取上清液加 2 倍体积的－80 ℃预冷的无水乙醇轻轻摇匀；－80 ℃静置 10 min，用无菌枪头挑出 DNA 转入另一离心管中；无水乙醇洗涤 DNA 沉淀 2 次，冷风吹干后溶于 50 μL TE 溶液中，加入 1 μL 10 mg/L RNaseA，于 37℃保温 60 min，4℃保存备用。 1.3.2 ＳＤＳ法［４－５］将研磨的干粉迅速转入 1.5 mL 离心管中，加入 500 μL 预热的 SDS 提取缓冲液，充分混匀后于 65℃水浴中保温 30～60 min；加等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），缓慢颠倒混匀，6 000 r/min 离心 10 min；上清液再用氯仿∶异戊醇（24∶1）抽提，8 000 r/min 离心 10 min，收集上清液再以氯仿∶异戊醇（24∶1）抽提，10 000 r/min 离心 5 min；收集上清液，加入 2 倍体积无水乙醇轻轻摇匀，无水乙醇重复洗涤 DNA 沉淀 2 次，冷风吹干后溶于 50 μL TE 溶液中，加入 1 μL 10 mg/L RNaseA，于 37℃保温 60 min，4℃保存备用。
1 材料与方法
收稿日期：2012-05-29 基金项目：陕西省教育厅自然科学基金（11JK0617）；延安市科技局计划项目资助（2009kn-26）作者简介：王延峰（1970-），男，陕西府谷县人，副教授，主要从事生物技术研究。
1.1 材料
1.1.1 供试材料试验材料为陕北木枣的叶片、叶芽、花蕾、花瓣、嫩茎、韧皮部，于 5 月采自延安大学植物园，置于冰盒中带回。叶片分别采用新鲜、-80℃快速冷冻、无水乙醇处理保存，其他材料置于-80℃快速冷冻保存。 1.1.2 仪器与试剂主要供试仪器：电泳仪 YJECP3000（北京君意东方），高速冷冻离心机（科大创新），恒温水浴锅，Bio-Rad Gel 凝胶成像仪。试剂：SDS 提取缓冲液（2% SDS，500 mmol/L NaCl， 100 mmol/L Tris-HCl，50 mmol/L EDTA，1%β- 巯基乙醇）；改良 CTAB 提取缓冲液（3%CTAB，1.4 mol/L NaCl，100 mmol/L Tris-HCl，30 mmol/L EDTA，1%β巯基乙醇）；TE 缓冲液（10 mmol/L Tris -HCl，1 mmol/L EDTA）；0.8%琼脂糖凝胶；DNA Marker。
2.2 木枣不同取材部位基因组 DNA 的提取
由图 2 可知，改良 CTAB 法对快速冷冻的枣树各组织器官总 DNA 的提取，从 DNA 的产量上观察，叶芽>嫩叶>韧皮部>花蕾>花瓣>嫩茎；在 DNA 条带的整齐度上，叶芽>韧皮部>嫩茎>嫩叶>花瓣> 花蕾；在总 DNA 降解程度上，花蕾、花瓣>韧皮部、嫩茎>叶芽>嫩叶；在次生产物去除干净程度上，花蕾、花瓣>嫩茎>叶芽、嫩叶、韧皮部。由此可见，不同取材部位中以叶芽和嫩叶的提取效果最优。
重组效率、库容量、平均插入片段长重组率为 98.7%，库平均插入片段约为 2.1 kb，插入片段全sing SDS method and improved CTAB method, total DNA was extracted from leaves of Muzao Jujube from
Northern Shanxi with different ways to preserve. Moreover, the efficient of extracting total DNA from different parts of Muzao jujube (leaf buds, flower buds, petal, ligneous phloem, tender stems and young leaves) were compared. The results showed that the total DNA extracted by improved CTAB method was the best when materials derived from leaf buds or young leaves stored at -80℃ , namely the performance for protein impurities interference less, DNA structure full and purity and productivity high.
1.2 试验设计
1.2.1 不同储存方式的木枣叶片基因组ＤＮＡ的提取分别取新鲜、快速冷冻、酒精处理的木枣叶片各 0.1 g 放入灭菌预冷研钵中，加入液氮迅速研
第 17 期
王延峰等：陕北木枣基因组 DNA 提取方法研究
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磨成粉状。采用 SDS 法和改良 CTAB 法提取木枣叶片的总 DNA。 1.2.2 木枣不同取材部位基因组ＤＮＡ的提取在采用 SDS 法和改良 CTAB 法提取木枣叶片不同储存方式总 DNA 的基础上，用改良 CTAB 法对木枣不同取材部位（嫩茎、韧皮部、叶芽、花蕾、花瓣、嫩叶）的总 DNA 进行提取。
Key words: Muzao jujube; SDS method; improved CTAB method; total DNA
红枣营养丰富，含多种维生素和矿物质，不但可以食用，还可入药，深受人们喜爱。陕北木枣主要产于黄河沿岸的宜川、延川、清涧、吴堡、佳县、神木、府谷等县，由于土质独特，光照、气温、降雨量等自然条件适宜，陕北木枣果大、肉厚、色红、味甜。在枣树 DNA 提取上前人仅针对提取方法进行了大量研究，但对于取材部位以及保存方式并无系统化的比较研究。针对上述问题，采用改良 CTAB 法和 SDS 法提取木枣基因组 DNA，对获得高质量枣树 DNA 应选取的部位、保存方式以及最优提取方法等进行了研究，以期为陕北枣种质资源的分子评价，包括品种鉴定、分类研究、系谱分析、遗传图谱鉴定、基因标记等提供参考。
[8] Warnecke F，Luginbühl P，Ivanova N，et al. Metagenomic and functional analysis of hindgut microbiota of a wood-feeding high－ er termite[J]. Nature，2007，45（22）：560-569.