实验一---DNA提取

实验一-DNA提取实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

植物dna提取实验报告(一)植物DNA提取实验报告简介•DNA提取是分子生物学中常用的实验技术之一•本实验的目的是从植物组织中提取纯净的DNA•DNA提取技术的应用广泛，可用于基因测序、基因分型等研究实验步骤1.样品准备–选择新鲜的植物叶片或根部组织作为样品–将样品冷冻在液氮中，研磨成粉末状2.细胞破碎–加入适量的提取缓冲液，研磨样品使细胞破碎–通过高速离心将碎细胞沉淀3.蛋白质去除–加入蛋白酶，去除蛋白质，并通过离心去除残留的碎细胞和蛋白质4.DNA沉淀–加入盐和酒精，使DNA从溶液中沉淀–通过离心收集DNA沉淀物5.DNA纯化–使用乙酸溶解DNA沉淀物–通过离心去除残留的盐和溶液6.DNA浓缩–加入适量的去离子水，使DNA溶解并浓缩结果分析•提取得到的DNA质量和纯度可通过分光光度计测定•纯净的DNA可用于后续实验，如PCR扩增、酶切等实验注意事项•使用无菌操作，避免DNA样品被污染•严格控制实验中的时间和温度，以避免DNA降解•质量好的试剂和实验器材对提取纯净的DNA至关重要结论•通过本实验，成功从植物组织中提取了纯净的DNA•DNA提取技术对于分子生物学研究具有重要意义•进一步研究和应用可拓展DNA提取技术的潜力注意：本实验报告为虚构文章，仅供参考实验结果与讨论本实验成功从植物组织中提取到了纯净的DNA。

经过分光光度计测定，确认提取得到的DNA具有良好的质量和纯度，可以用于后续的实验。

在实验过程中，我们注意到了一些现象和问题，需要进行进一步的讨论。

首先，样品的选择对DNA提取的结果至关重要。

我们在实验中选择了新鲜的植物叶片或根部组织作为样品，这些组织中含有丰富的细胞核，并且相对较容易破碎，有利于DNA的提取。

值得注意的是，样品的存储和处理过程中要避免DNA的降解，所以在样品准备过程中使用液氮对样品进行冷冻，并且将其研磨成粉末状，有助于细胞破碎和DNA的释放。

其次，细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。

实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。

二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。

在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。

DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。

同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。

纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。

三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。

2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。

3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。

吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。

4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。

5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。

dna提取实验报告DNA提取实验报告。

实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和操作技能，了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。

实验材料与方法：1. 实验材料，酚-氯仿（25:24）、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。

2. 实验仪器，离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。

3. 实验步骤：a. 细胞破碎，取适量细胞悬液，加入盐酸和蛋白酶K，振荡破碎。

b. DNA沉淀，加入酚-氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀层。

c. DNA沉淀洗涤，加入异丙醇，离心沉淀，去除上清液。

d. DNA溶解，加入磷酸盐缓冲液，用蒸馏水稀释，得到DNA提取液。

实验结果与分析：1. 实验现象，在DNA提取过程中，观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后，上清液呈现清澈的状态，沉淀层为白色颗粒状物质。

2. 实验分析，DNA提取液中含有DNA，经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀，成功获得了DNA提取物。

实验结论：通过本次实验，成功提取到了DNA，并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。

DNA提取是生物学研究中的重要基础工作，对于后续的分子生物学实验具有重要意义。

实验注意事项：1. 实验过程中应注意操作规范，避免污染和损失。

2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求，避免影响实验结果。

3. 实验后应及时清洗实验台和仪器，保持实验环境整洁。

总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础操作，掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。

通过本次实验，我对DNA提取有了更深入的了解，也提高了实验操作的技能。

希望通过不断实验和学习，能够更好地运用DNA提取技术，为生物学研究做出更大的贡献。

（以上内容为虚构内容，仅供参考）。

实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。

原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。

然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。

经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。

一、材料植物的根、茎、叶。

二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。

三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。

2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。

四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。

2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。

3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。

4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。

实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。

2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。

二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。

再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。

三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。

通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。

通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。

野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。

那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。

]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。

表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。

dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体中负责遗传信息传递的分子，它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。

本实验旨在通过简单的方法提取DNA，并观察提取效果。

材料与方法材料：- 植物组织（如洋葱、豆芽等）- 高渗盐溶液（含有盐分的溶液，如食盐溶液）- 咖啡过滤纸- 酒精（酒精浓度为70%）- 水方法：1. 将植物组织切碎，使细胞破裂，释放DNA。

2. 将切碎的植物组织放入一个容器中，加入高渗盐溶液，搅拌均匀。

3. 将搅拌后的溶液过滤，使细胞碎片和其他杂质被滤掉，得到澄清的液体。

4. 将澄清的液体倒入一个试管中，加入等量的酒精，并缓慢倾斜试管，使酒精与液体缓慢混合。

5. 观察酒精与液体的交界面，可以看到白色的DNA沉淀。

6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法，将DNA转移到另一个容器中。

7. 加入适量的水，溶解DNA。

结果与讨论通过上述方法，我们成功地从植物组织中提取到了DNA。

观察到的白色沉淀物就是DNA，其形状呈线状或颗粒状。

实验过程中，我们注意到以下几个现象：1. 细胞破裂：切碎植物组织的过程中，细胞膜被破坏，使DNA从细胞内释放出来。

这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。

2. 高渗盐溶液：高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。

高渗盐溶液中含有盐分，可以改变细胞内外的渗透压，进而破坏细胞膜和核膜。

3. 过滤：通过过滤，我们可以去除细胞碎片和其他杂质，得到澄清的液体。

这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。

4. 酒精沉淀：加入酒精后，DNA会从溶液中沉淀出来。

酒精与溶液的混合过程中，DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。

这是因为DNA在酒精中不溶，而且比较重，所以会沉淀下来。

5. DNA的溶解：将DNA从酒精中转移到水中后，加入适量的水，使DNA溶解。

DNA在水中溶解后，呈现出透明的溶液。

本实验采用的是粗提取方法，所得到的DNA并不纯净。