dna粗提取的实验步骤
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《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、引言DNA 作为生命的遗传物质,承载着生物体的遗传信息。
对 DNA 的研究有助于我们深入了解生命的奥秘、疾病的发生机制以及进行法医学鉴定等。
DNA 的粗提取及鉴定是分子生物学中的基础实验技术,下面我们就来详细了解一下。
二、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习 DNA 的鉴定方法。
三、实验原理1、 DNA 在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同在014mol/L 的氯化钠溶液中,DNA 的溶解度最低。
利用这一特点,可以使 DNA 从细胞中析出。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,从而可以将 DNA 与蛋白质进一步分离。
3、 DNA 遇二苯胺会呈现蓝色这一特性可用于鉴定 DNA。
四、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液(也可以使用菜花、洋葱等材料)2、用具研钵、烧杯、玻璃棒、漏斗、纱布、试管、量筒、体积分数为 95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、0015mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂等。
五、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂,离心或静置沉淀,除去上清液,得到鸡血细胞液。
2、破碎细胞,释放 DNA取 20mL 鸡血细胞液倒入烧杯中,加蒸馏水到 100mL,搅拌均匀。
然后向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞破裂,释放出 DNA。
3、去除杂质(1)过滤用纱布过滤含 DNA 的溶液,取滤液。
(2)去除核蛋白向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液 40mL,搅拌 1min,使核蛋白充分溶解。
然后缓慢加入蒸馏水,同时轻轻搅拌,直至溶液中氯化钠浓度达到 014mol/L,此时 DNA 会析出,用多层纱布过滤,取纱布上的黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将上述黏稠物放入 20mL 体积分数为 95%的酒精溶液中,搅拌,使DNA 沉淀。
然后用玻璃棒卷起沉淀,放入试管中。
5、 DNA 的鉴定(1)向两支试管中分别加入 2mol/L 的氯化钠溶液 5mL。
【实验九】DNA的粗提取与鉴定陈小珺(江西省赣州市第三中学341000)1 教学建议在本实验的教学中,教师应注意以下几点。
1.1 实验材料必须准备充足。
本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。
每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。
宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。
也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
(每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠)1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。
因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。
1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。
1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液:将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精:体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。
1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。
教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。
进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。
2 实验原理的补充介绍2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富,材料易得;二是鸡血细胞极易吸水胀破。
DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。
为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。
蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。
DNA的粗提取与鉴定(一)实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核,细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低,而蛋白质此时的溶解度高的特点,可以使DNA与蛋白质分离,形成沉淀析出,通过过滤,得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精,但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点,进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺(沸水浴)成蓝色的特性,可以鉴定提取的DNA。
(二)实验材料(以鸡血为例)鸡血细胞液:先配备10%的柠檬酸钠溶液,按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例,立即将血液与柠檬酸钠充分混合,同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后,用离心机以2000转/min的速度离心4min后,用吸管除去离心管上清液,就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机,可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀后,也可获得所需的鸡血细胞悬液。
(三)试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl,加蒸馏水至1000mL,使之完全溶解,即可获得2mol/L 的NaCl,须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前,将0.1mL的B液加入到10mL的A液中,现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL,使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上,用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
(四)实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中,加蒸馏水20mL,同时,用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌,使血细胞过度吸水破裂,细胞核内物质释放出来,然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,核中DNA游离并充分溶解,染色质中的DNA和蛋白质分离。
DNA粗提取步骤一、目的要求本实验旨在使学生掌握DNA粗提取的基本原理和操作步骤,了解DNA的物理、化学性质以及其在生物科学研究中的应用。
通过实验,要求学生能够独立完成DNA的粗提取,并对实验结果进行分析和解释。
二、实验原理DNA粗提取的原理基于DNA在不同物理和化学环境中的稳定性。
在一定浓度的盐溶液和适当的温度条件下,DNA的溶解度会发生变化,从而实现DNA 的分离和提取。
本实验采用盐析法进行DNA粗提取,具体操作步骤如下:1.细胞破碎:通过物理或化学方法破碎细胞,释放出细胞内的DNA。
常用的破碎方法包括机械破碎(如研磨、匀浆等)、化学破碎(如用酸、碱或酶处理)和冷冻破碎等。
2.去除杂质:通过离心、过滤等方法去除细胞碎片、蛋白质和其他杂质,使DNA充分溶解在溶液中。
3.调节盐浓度:通过调节盐浓度,使DNA在盐溶液中的溶解度发生变化,从而实现DNA的分离和提取。
常用的盐溶液包括氯化钠、氯化钾、氯化钙等。
4.沉淀DNA:通过降低pH值、加入乙醇或异丙醇等方法,使DNA从溶液中沉淀析出。
5.洗涤与干燥:用70%乙醇或无水乙醇洗涤DNA沉淀,去除残留的盐分和杂质,然后干燥得到粗提取的DNA。
三、实验步骤1.准备实验材料与试剂(1)实验材料:鸡血细胞;(2)试剂:氯化钠、柠檬酸钠、蒸馏水、95%乙醇、70%乙醇;(3)仪器与器皿:离心管、离心机、滴管、玻璃棒、烧杯。
2.操作步骤(1)制备鸡血细胞溶液:取适量鸡血细胞,加入等体积的柠檬酸钠溶液,混合均匀后离心,去除上清液,得到鸡血细胞沉淀。
(2)破碎细胞:将鸡血细胞沉淀重新悬浮于适量蒸馏水中,加入适量的玻璃珠或石英砂,搅拌破碎细胞。
也可以采用匀浆、超声破碎等方法破碎细胞。
(3)去除杂质:将破碎后的溶液离心,去除上清液,得到的沉淀物为富含DNA的细胞碎片。
可以进一步用蒸馏水冲洗沉淀物,去除残留的蛋白质和其他杂质。
(4)调节盐浓度:向沉淀物中加入适量的氯化钠溶液,搅拌均匀,使DNA充分溶解在盐溶液中。
DNA的粗提取与鉴定1.基本原理2.操作过程(1)操作流程选取材料→破碎细胞,获取含DNA的滤液→去除滤液中的杂质→DNA的析出与鉴定。
(2)材料的选取:选用DNA含量相对较高的生物组织。
(3)破碎细胞①动物细胞:易破碎,可通过吸水破裂。
②植物细胞:加入洗涤剂、食盐后研磨。
(4)除去杂质的方法方法一:利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同,通过调节NaCl溶液的浓度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。
方法二:利用DNA对酶的耐受性,直接在滤液中加入嫩肉粉,反应10~15 min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质,而不会破坏DNA。
方法三:利用DNA对高温的耐受性,将滤液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性。
(5)DNA的析出:向处理后的滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中会出现白色丝状物,用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分。
(6)DNA的鉴定:在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
易错警示(1)本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料,原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。
可选用鸡血细胞作材料。
(2)实验中两次使用蒸馏水,第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA,第二次的目的是稀释NaCl溶液,使DNA从溶液中析出。
1.下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序,请分析回答下列问题:(1)步骤一中,向鸡血细胞液中加入____________并搅拌,可使鸡血细胞破裂。
(2)步骤二中,过滤后收集含有DNA的____________。
(3)步骤三、四的操作原理是________________________________________________________________________________________________________________________;步骤四中,通过向溶液中加入____________调节NaCl溶液的物质的量浓度至____________mol/L时,DNA将会析出,过滤去除溶液中的杂质。
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1.提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
如:(1)DNA在酒精溶液中的溶解性:DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性:DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2.鉴定DNA的原理在一定温度下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1.称取约30 g洋葱,切碎,然后放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨。
2.去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布,将洋葱研磨液过滤到烧杯中,在4 ℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中,在1 500 r/min的转速下离心5 min,再取上清液3.DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA;用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中,在10 000 r/min的转速下离心5 min,弃上清液,将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管,各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中,再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后,将试管置于沸水中加热5 min,待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1.以血液为实验材料时,每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠,防止血液凝固。
2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1.利用动物细胞提取DNA时,破碎细胞的方法:动物细胞无细胞壁,可直接使其吸水涨破。
2.不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料,原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
dna的粗提取与鉴定dna的粗提取与鉴定实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法2、观察提取出来的DNA物质实验原理1、DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1、步骤3析出含DNA的黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液(5~10mL);体积分数为XX%的冷酒精,蒸馏水,质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液,二苯胺试剂;烧杯(100mL,1个,50mL, 500mL,各2个),漏斗,试管(20mL,2个),玻璃棒,滴管,量筒(100mL,1个),纱布,镊子,滤纸,铁架台,铁环,三角架,酒精灯,石棉网,载玻片,试管夹。
课时安排一课时课前准备制备鸡血细胞液,方法是:将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL,置于500mL烧怀中,注入新鲜的鸡血(约180mL),用玻璃棒搅拌,使其充分混合,以免凝血。
静置于冰箱内一天,使血细胞自行沉淀。
也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。
用吸管吸去上清液。
板书实验十一 DNA的粗提取与鉴定实验原理1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤:1、提取鸡血细胞的细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。
5 min2、溶解细胞核内的DNA3、析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢4、过滤:取黏稠物5、再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。
dna粗提取方法DNA粗提取方法DNA(脱氧核糖核酸)是构成生物体的基因遗传物质,对于研究基因组学、进化学以及疾病诊断等方面具有重要意义。
DNA粗提取是从生物样本中提取出DNA的一种常用方法,本文将介绍DNA粗提取的步骤和相关注意事项。
一、实验前的准备工作在进行DNA粗提取前,需要准备以下实验材料:1. 细胞样本:可以是人体组织、细菌、植物组织等;2. 细胞裂解液:包括裂解液缓冲液和蛋白酶K等;3. 蛋白沉淀剂:如氯化钠、聚乙二醇等;4. 离心管、离心机、超声波仪等实验设备。
二、DNA粗提取步骤1. 细胞裂解:将细胞样本加入细胞裂解液中,通过机械或化学方法使细胞壁破裂,释放出细胞内的DNA。
2. 蛋白沉淀:加入蛋白沉淀剂,与DNA结合的蛋白质会沉淀到底部,形成蛋白质沉淀物。
3. DNA沉淀:将上述混合液离心,离心后,DNA会沉淀到离心管的底部形成DNA沉淀物。
4. 洗涤:将DNA沉淀物用乙醇洗涤,去除杂质。
5. 干燥:将洗涤后的DNA沉淀物在通风处晾干,使其变为干燥的DNA固体。
三、注意事项1. 实验操作过程中应注意无菌操作,避免外源性DNA的污染。
2. 细胞裂解液的选择应根据具体实验目的进行优化,以获得高质量的DNA。
3. 实验过程中应控制温度,避免DNA的降解。
4. 保存提取得到的DNA时,应避免阳光直射,存放在低温干燥的环境中,以防止其降解。
5. 实验操作中应注意个人安全,避免接触有毒物质和腐蚀性液体。
DNA粗提取方法是提取DNA的常用方法之一,它能够快速、高效地从生物样本中提取出DNA,为后续的分子生物学研究提供了重要的基础。
然而,需要注意的是,DNA粗提取方法提取得到的DNA质量较低,适用于一些对DNA纯度要求不高的实验,如PCR反应等。
对于一些对DNA质量要求较高的实验,如测序、限制性酶切等,需要使用更为精细的DNA提取方法。
DNA粗提取是一种常用的DNA提取方法,通过简单的步骤可以从生物样本中提取出DNA。
dna粗提取与鉴定实验步骤一、一周知识概述。
1、实验:DNA的粗提取与鉴定的实验目的、实验原理;2、实验:DNA的粗提取与鉴定的实验方法与步骤;3、实验过程中的注意事项。
二、学习重难点。
1、该实验的实验原理。
2、该实验的实验方法和步骤。
三、重难点精析。
(一)实验目的:1、了解生物组织中DNA的存在部位和形式。
2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
3、观察提取出来的DNA物质。
(二)实验原理:鸟类血液中红细胞有细胞核,细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低,而蛋白质此时的溶解度高的特点,可以使DNA与蛋白质分离,形成沉淀析出,通过过滤,得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精,但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点,进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺(沸水浴)成蓝色的特性,可以鉴定提取的DNA。
(三)实验材料:鸡血细胞液:先配备10%的柠檬酸钠溶液,按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例,立即将血液与柠檬酸钠充分混合,同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后,用离心机以2000转/min的速度离心4min后,用吸管除去离心管上清液,就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机,可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀后,也可获得所需的鸡血细胞悬液。
(四)试剂与仪器:1、2mol/L的NaCl溶液。
称取117g的NaCl,加蒸馏水至1000mL,使之完全溶解,即可获得2mol/L 的NaCl,须按此配方配备大量的2mol/L的NaCl。
2、二苯胺试剂。
A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前,将0.1mL的B液加入到10mL的A液中,现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液。
dna的粗提取方法DNA的粗提取方法DNA是生物体内最基本的遗传物质,对于研究生物学、医学等领域具有重要意义。
因此,DNA的提取方法也成为了科学研究中的一项重要技术。
下面将介绍一种简单易行的DNA粗提取方法。
材料准备1. 10% SDS溶液:称取10克SDS加入100毫升去离子水中,混合均匀后加热至70℃左右,搅拌至SDS完全溶解即可。
2. 0.5M EDTA溶液:称取186.1克EDTA加入500毫升去离子水中,调节pH至8.0。
3. 1M Tris-HCl缓冲液:称取121.14克Tris-HCl加入1000毫升去离子水中,调节pH至8.0。
4. NaCl溶液:称取58.44克NaCl加入1000毫升去离子水中,搅拌均匀后过滤灭菌。
5. 蛋白酶K:用去离子水将蛋白酶K稀释至10mg/ml浓度。
6. 高锰酸钾:用去离子水将高锰酸钾稀释至0.1%浓度。
7. 95%乙醇:用去离子水将95%乙醇稀释至70%浓度。
8. 细胞样品:可以是动物组织、细菌、真菌等样品。
步骤步骤一:制备细胞裂解液1. 取适量的细胞样品,用PBS缓冲液洗涤3次,去除细胞外的杂质。
2. 向含有10% SDS的裂解液中加入适量的蛋白酶K,搅拌均匀后在60℃水浴中孵育2小时。
3. 将孵育后的裂解液加入相同体积的高锰酸钾溶液中,搅拌均匀后再加入相同体积的4M NaCl溶液中,轻轻摇晃混合即可。
步骤二:沉淀DNA1. 将上述混合溶液离心10分钟,收集上清液至新离心管中。
2. 向上清液中滴加等体积的冷乙醇(70%),轻轻摇晃后放置于-20℃冷冻库中保存至少30分钟以上。
3. 将离心管取出,离心10分钟,倒掉上清液,将沉淀用无菌去离子水洗涤3次。
步骤三:纯化DNA1. 将沉淀加入含有0.5M EDTA的去离子水中,搅拌均匀后放置于60℃水浴中孵育30分钟。
2. 在孵育过程中,制备1M Tris-HCl缓冲液,并调节pH至8.0。
3. 孵育结束后,向上述溶液中加入相同体积的1M Tris-HCl缓冲液,轻轻摇晃混合均匀。
dna粗提取的原理DNA粗提取是一项重要的实验技术,它可以帮助科学家们获取DNA 样本中的大量DNA分子。
这项技术的原理是通过一系列化学和物理方法将DNA样本中的细胞壁、蛋白质和其他杂质去除,从而纯化出大量的DNA分子。
DNA粗提取的过程可以分为以下几个步骤。
首先,需要将DNA样本进行破碎,使DNA分子变得更加容易提取。
这可以通过机械方法(如超声波或搅拌)或化学方法(如酶处理)来实现。
接下来,通过加入缓冲液和试剂,可以使DNA分子与其他组分分离开来。
这些试剂可以破坏细胞壁、溶解蛋白质和其他有机物质,从而使DNA分子完全暴露出来。
在DNA分子纯化的过程中,可以通过离心的方式将DNA分子从其他组分中分离出来。
离心是一种利用离心力将混合物中的成分分离的技术,通过调整离心力和离心时间,可以将DNA分子从其他组分中沉淀下来。
然后,通过去除上清液中的其他杂质,可以得到纯净的DNA分子。
DNA粗提取的关键在于选择合适的试剂和缓冲液。
试剂和缓冲液的选择应根据不同的样本类型和实验目的来确定。
一般来说,缓冲液应具有适当的pH值和离子浓度,以维持DNA分子的稳定性。
试剂可以包括蛋白酶、盐酸、EDTA等,用于去除细胞壁、蛋白质和其他有机物质。
DNA粗提取的过程中还需要注意一些技术细节。
例如,操作过程中应保持无菌条件,以避免细菌或其他污染物的污染。
此外,应注意使用适当的离心力和时间,以确保DNA分子能够完全沉淀下来。
在提取过程中,还应避免过度破坏DNA分子,以免影响后续实验的进行。
DNA粗提取是获取DNA样本中大量DNA分子的重要步骤。
它为后续的DNA分析提供了可靠的基础。
通过合理选择试剂和缓冲液,并注意操作细节,可以获得高质量的DNA样本。
这项技术的广泛应用为生物医学研究、犯罪侦查和基因工程等领域提供了强大的支持。
实验步骤——以洋葱为实验材料:
1、称取30克已切碎的洋葱,放入研钵中,加入少量石英砂助研,倒入10mL 2mol/L 的氯化钠溶液,充分研磨。
洋葱含有挥发性刺激物,有效减少刺激,才能使实验顺利进行。
上课前,教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿,使其凉透但又不能结冰;或将洋葱切成几大块,放入清水泡一会儿,让其挥发性刺激物溶于水,可以减轻刺激。
然后将洋葱切碎备用。
研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂,使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液,没必要将洋葱研成粥糊状,后者既浪费时间又影响实验效果。
研磨时,切忌使用搅拌器(榨汁机)。
使用搅拌器虽可以提高研磨效率,但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒,无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。
只能将酒精直接倒入滤液中,许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来,DNA藏在其中,无法分辨。
学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。
2、研磨后,用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中,得到滤液。
3、向滤液中加入95%的酒精溶液20mL,沿烧杯壁缓缓倒入,不要震动或搅拌。
此时,烧杯中的液体分为上、下两层,下层较浑浊,上层澄清,很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出,用玻璃棒可将其轻轻卷起。
实例: 用鸡血细胞液粗提取DNA 并鉴定步骤
1、提取鸡血细将制备好的鸡血细胞液(已在课前配好) 5~10mL,注入到50ml 烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20mL,同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min,然后,用放有纱布的漏斗将血细胞过滤至1000mL 的烧杯中,取其滤液。
图示胞的细胞核物质
2、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2mol/ L 的NaCl 溶液40 mL 加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA 在溶液中呈溶解状态。
3、析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现。
继续加入蒸馏水,溶液中出现的黏稠物会越来越多。
当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。
4、滤取含DNA的粘稠物用放多层纱布的漏斗,过滤溶液至1000 mL 的烧杯中。
取纱布上的黏稠物。
5、将DNA 的粘稠物再溶解取一个50 mL 烧杯,向烧杯内注入物质的量浓度为2mol/ L 的NaCl 溶液20 mL。
用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至NaCl 溶液中,用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min,使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6、过滤含DNA的氯化钠溶液取一个100 mL 烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液。
取其滤液(DNA 溶于滤液中)。
7、提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中,加入冷却的、体积分数为95% 的酒精溶液50 mL(加入时动作要慢),并用玻璃棒沿一个方向搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物。
当玻璃棒上出现丝状物缠绕时,继续慢慢搅拌,至不再增加时,用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。
取两支20 mL 的试管,各加入物质的量浓度为0.015mol/ L 的NaCl 溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。
然后,向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,等试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。
那是心与心的交汇,是相视的莞尔一笑,是一杯饮了半盏的酒,沉香在喉,甜润在心。
红尘中,我们会相遇一些人,一些事,跌跌撞撞里,逐渐懂得了这世界,懂得如何经营自己的内心,使它柔韧,更适应这风雨征途,而不会在过往的错失里纠结懊悔一生。
时光若水,趟过岁月的河,那些旧日情怀,或温暖或痛楚,总会在心中烙下深深浅浅的痕。
生命是一座时光驿站,人们在那里来来去去。
一些人若长亭古道边的萋萋芳草,沦为泛泛之交;一些人却像深山断崖边的幽兰,只一株,便会馨香满谷。
人生,唯有品格心性相似的人,才可以在锦瑟华年里相遇相知,互为欣赏,互为懂得,并沉淀下来,做一生的朋友。
试问,你的生命里,有无来过这样一个人呢?
张爱玲说“因为懂得,所以慈悲”.
于千万人群中,遇见你要遇见的人,没有早一步,也没有晚一步,四目相对,只淡淡的问候一句:哦!原来你也在这里,这便足够。
世间最近与最遥远的距离,来自于心灵与心灵。
相遇了,可以彼此陌生,人在咫尺心在天涯,也可初见如旧,眼光交汇的那一刻,抵得人间万般暖。