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磷酸酶磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。
试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用；某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。
土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况）。
基本原理：土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。
应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、ɑ-或ß-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。
当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。
因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。
这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。
该法可用于测定各种磷酸酶的活性：碱性磷酸酶（用PH10的硼酸盐缓冲液），中性磷酸酶（用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液），酸性磷酸酶（用PH5.0的乙酸盐缓冲液）试剂配制：1）甲苯2）0.5% 磷酸苯二钠3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0）：称取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml 去离子水，用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml4) 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。
保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
5）标准溶液：（a）母液：1g酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中；（b）工作液：10ml溶液（a）稀释至1000ml（1ml含10ug酚）6）0.3%硫酸铝溶液标准曲线绘制：取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。
以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。
操作步骤：1）取5g风干土置于200ml三角瓶中，用2.5ml甲苯处理2）处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠3）将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。
土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。
通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。
对-硝基苯磷酸盐在碱性溶液中为无色，在ALP的催化下，对-硝基苯磷酸盐分列出磷酸基团，生成游离的的对硝基酚，对硝基酚在碱性溶液中转变为醌式结构，呈现出较深的黄色，在405 nm 处连续监测吸光度的上升反应速率，反应速率与样本中碱性磷酸酶的含量成正比。
即可计算出样本中碱性磷酸酶的活力。
2．标本要求最适样本为新鲜不溶血血清或血浆。
血浆采用肝素扛凝；请勿使用EDTA、草酸盐或氟化物。
储存血清ALP的活性会缓慢增高，建议采血当天测定ALP的活性。
【3．试剂3.1 试剂：本试剂盒为液体双试剂，各组分如下：R1：AMP缓冲液410mmol/L、醋酸镁2.5mmol/LR2：AMP缓冲液410mmol/L、醋酸镁2.5mmol/L、对硝基苯磷酸二钠16.2mmol/L3.2：校准血清本试剂盒为连续监测法，可采用理论因子进行结果的计算：每次测定前只需要进行空白定标。
3.3 试剂的稳定性：2 ～ 8℃避光保存，防污染，有效期一年。
试剂首次开启后尽快用完。
当试剂空白吸光度高于0.8时，试剂按照失效处理。
4．仪器BT815A型号半自动生化仪。
5．操作5.1、参数设置6．计算ALP (U/L) =ΔAT/min×K 405 nm时，K=2713 7、性能指标的计算方法7.1、空白吸光度计算1-3号试管的吸光度的平均值，即为空白吸光度值，应符合：A405nm ≤0.80。
7.2、准确度计算4-6号试管的含量的平均值，即为准确度。
应符合：测定定值质控血清，三次测定的平均值应在规定的靶值范围内。
7.3 线性范围计算出7-11号试管的浓度值，在EXCEL中，利用相关系数公式（CORREL），自动求出理论浓度值与测定浓度值的相关系数。
应符合：在5～1000U/L范围内, 相关系数r应≥0.9907.4 分析灵敏度计算出12-21号试管的浓度值，在EXCEL中，利用平均值公式（AVERAGE），自动计算出平均值（X）；利用标准差公式（STDEV），自动计算出标准差（SD），求出X+2SD。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。
产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
碱性磷酸酶测定一、试剂配制1、甲苯2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液：称取20g纯氯化铵，溶于少量水（我配200ml，用一百多毫升水溶40g氯化铵），然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml，用pH试纸测pH，pH为10即可，不用刻意调pH。
（氨水很臭，需要带口罩在通风橱配）3、8%铁氰化钾溶液（只能用一周，放冰箱保存）：取8g铁氰化钾，用水定容至100ml。
4、2%4-氨基安替比林（只能用一周，放冰箱保存）：取2g4-氨基安替比林，用水定容至100ml。
5、0.5%磷酸苯二钠溶液（用pH9.4硼酸缓冲液配）（1）先配制pH9.4硼酸盐缓冲液：称取4.768g硼砂（十水合四硼酸钠）和0.44g纯氢氧化钠，用蒸馏水定容至1000ml。
（硼砂需要用电炉加热配制，硼砂用称量纸称量，氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH，pH试纸测为9）（2）称取5.05g磷酸苯二钠，用pH9.4硼酸缓冲液定容至1000ml。
6、酚标准溶液：酚溶液：称取1g苯酚用水溶至1L，保存于暗色瓶中。
（苯酚还是需要水浴加热，详细配法看脲酶测定，但由于1g很难准确称量，并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚，但测量后不影响标线的准确程度，R值为三个9）酚工作液：取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL)二、测定过程1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶（每个样需要3个重复，前两个重复和第三个重复分开放，第三个重复为无基质重复，每天做两个无土样重复，此重复加甲苯、磷酸苯二钠溶液），加5滴甲苯（用滴管加5滴），盖盖盖子后用震荡机低速震荡15min（我选择160的速度），然后给第三个重复加入20ml蒸馏水，给前两个重复加入20ml磷酸苯二钠，盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒温箱培养2小时。
2、培养结束后过滤，过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶（用5ml枪加，由于过滤液体没那么多，每加一个样用两遍蒸馏水润洗枪），加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢氧化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾溶液（用1ml枪加），每加一种都要充分摇匀。
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
1.1包装规格液体双剂型试剂1（R1）：80mL×3，试剂2（R2）：60mL×1；试剂1（R1）：80mL×2，试剂2（R2）：20mL×2；试剂1（R1）：60mL×3，试剂2（R2）：45mL×1；试剂1（R1）：40mL×3，试剂2（R2）：30mL×1；试剂1（R1）：40mL×3，试剂2（R2）：10mL×3。
1.2主要组成成分试剂1（R1）液体：AMP缓冲液350mmol/L（pH 10.5）2.5mmol/LMgCl2试剂2（R2）液体：对硝基苯磷酸盐 16mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1试剂1（R1）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；2.1.2 试剂2（R2）应为淡黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长410nm（400nm～420nm）（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤1.000；试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.005。
2.4准确度测定GBW(E)090593，相对偏差应不超过±10％。
2.5分析灵敏度对应于活性为120U/L的ALP所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.010～0.050范围内。
2.6重复性重复测试同一样本，变异系数（CV）应≤5%。
2.7批间差测试同一样本，批间差（R）应≤6%。
2.8线性范围在[1，1200]U/L（37℃）范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在(20，1200] U/L（37℃）范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在[1，20]U/L（37℃）范围内，线性绝对偏差应不超过±2U/L。
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit产品货号：E-BC-K091-M产品规格：48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器：酶标仪（500-530 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测动物血清(浆)、体液、组织及细胞中碱性磷酸酶的活力。
检测原理在pH=10的反应液中，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸。
酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物，根据红色的深浅计算酶活的高低。
本试剂盒检测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪（500-530 nm，最佳检测波长520 nm）、涡旋混匀仪、37℃恒温箱。
耗材：枪头（1000 µL，200 µL，10 μL）、EP管（10 mL，2 mL）。
试剂：双蒸水、PBS（0.01 M，pH 7.4）或生理盐水（0.9% NaCl）试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②工作液的配制：按试剂一：试剂二为1:1的体积比混匀，现用现配，未用完的试剂2-8℃避光可保存1天。
③不同浓度标准品的稀释：样本准备①样本处理血清血浆等液体样本：直接测定。
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液）
组成：
适用范围：用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
2.1外观
试剂盒外观应整洁，液体无渗漏，文字符号标识清晰；试剂1：无色澄清液体；试剂2：淡黄绿色澄清液体。
2.2装量
每瓶不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在A405nm处测定试剂空白吸光度A≤0.8，空白变化率△A/min≤0.005。
2.4分析灵敏度
试剂测定（120±12）U/L被测物，吸光度变化△A/min≥0.01。
2.5线性范围
2.5.1在[25，750]U/L内，相关系数R≥0.990。
2.5.2在 [25，100]U/L时绝对偏差不超过±10U/L，测定（100，750]U/L相对偏差不超过±10%。
2.6精密度
2.6.1 重复性
重复测试（120±12）U/L的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.6.2批间差
测定（120±12）U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.7准确度
比对试验相关系数r2≥0.95， [25，100]U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L，（100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。
2.8 效期稳定性
试剂有效期为12个月，取到效期后一个月内进行检测，测定结果应符合2.3-2.6.1、2.7项要求。
碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。
WAKO原装产品现货特价：碱性磷酸酶（ALP）的活性检测试剂盒/offer_sale/detail/2039842.html摘要碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。
常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。
特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。
本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，利用微孔板，可进行多种样品的检测。
【检测原理】样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应，在样品中的碱性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。
生成的p-硝基酚为碱性，呈黄色。
根据测量其405nm的吸光值，计算出样品中碱性磷酸酶的活性。
■LabAssay TM ALP [p-硝基苯磷酸基质法]【性能】检测范围：>0.06 mmol/L标准曲线范围：0～0.5 mmol/L再现性：C.V.<10%【试剂盒组成】・底物---------------------20片（溶解时：p-硝基苯磷酸二钠6.7mmol/L)・底物溶解液-------100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)・反应终止液-------100ml×1瓶（0.2mol/L氢氧化钠溶液）・标准液---------------10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）【试剂的配制】1）底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反应终止液：直接使用。
3）系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。
【标准操作法】向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。
添加80μl反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。
碱性磷酸酶染色试剂盒(ALP/AKP,改良Gomori钙钴法) 产品简介：碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。
此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。
现用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。
此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，立即被钙离子沉淀为磷酸钙，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。
产品组成：自备材料：1、蒸馏水2、温箱或水浴锅操作步骤（仅供参考）：(一)石蜡切片染色1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2、切片入ALP孵育液中，37℃孵育2~12h。
3、流水洗2min，入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37℃孵育5min。
5、流水洗5min后，入蒸馏水。
6、在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
切片入硫化工作液，孵育2min。
7、流水洗10min，入蒸馏水。
8、石蜡切片常规脱水、透明，树胶封片。
(二)冰冻切片染色1、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2~5min。
2、切片入ALP孵育液，37℃孵育5~15min。
3、流水洗2min，入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37℃孵育5min。
5、流水洗5min后，入蒸馏水。
6、在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
切片入硫化工作液，孵育2min。
8、流水洗10min，入蒸馏水。
9、冰冻切片用甘油明胶封片。
染色结果：酶所在阳性部位黑色硫化钴沉淀阴性对照(可选)：1、试剂(D)为不含底物的孵育液。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号碱性磷酸酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 P0321S 碱性磷酸酶检测试剂盒 100次 P0321M碱性磷酸酶检测试剂盒500次产品简介：碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)也称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA 或RNA 5´和3´末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5´末端去磷酸化以避免质粒自连等。
干细胞，如iPS 中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS 成功诱导的标志。
碱性磷酸酶值测定实验报告一、实验目的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简称 ALP）是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
本次实验的目的是测定样本中碱性磷酸酶的活性，以评估相关生理或病理状态。
二、实验原理碱性磷酸酶在碱性环境下能够催化磷酸酯的水解反应，生成无机磷和醇。
通过测定生成的无机磷的量，可以间接反映碱性磷酸酶的活性。
本实验采用磷酸苯二钠法，磷酸苯二钠在碱性条件下被碱性磷酸酶水解生成苯酚和磷酸氢二钠。
苯酚与 4-氨基安替比林反应生成红色醌亚胺衍生物，在 510nm 波长处有最大吸收峰。
通过测定吸光度值，并与标准曲线对照，即可计算出碱性磷酸酶的活性。
三、实验材料与设备1、材料血清样本磷酸苯二钠溶液碳酸盐缓冲液（pH 100）4-氨基安替比林溶液铁氰化钾溶液酚标准液2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干净试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
按表 1 向各试管中加入试剂，混匀。
置于 37℃水浴中保温 15 分钟。
加入铁氰化钾溶液 30ml，立即混匀。
用分光光度计在 510nm 波长处，以 0 号管调零，读取各管的吸光度值。
以酚含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
表 1 标准曲线绘制的试剂加入量｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜酚标准液（ml）｜0|005|010|020|030|040|｜蒸馏水（ml）｜10|095|090|080|070|060|｜碳酸盐缓冲液（ml）｜30|30|30|30|30|30|｜4-氨基安替比林溶液（ml）｜10|10|10|10|10|10|｜铁氰化钾溶液（ml）｜30|30|30|30|30|30|2、样本测定取 3 支干净试管，分别编号为测定管、对照管和空白管。
按表 2 向各试管中加入试剂，混匀。
置于 37℃水浴中保温 15 分钟。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)
简介：
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 96孔板
2、 水浴锅或恒温箱
3、 酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制标准品工作液：取出Phenol 标准(1mg/ml)恢复至室温后，取溶解于ddH 2O ，使
浓度达到，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
编号 名称
TE0005 50T TE0005 100T Storage
试剂(A): ALP Assay buffer 2.5ml 5ml 4℃ 避光 试剂(B): ALP 显色液 2.5ml 5ml -20℃ 避光 试剂(C): 显色基液
7.5ml 15ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml 1ml RT 试剂(E): ddH 2O 1ml
1ml
RT
使用说明书
1份
1
2
3
4
5
Phenol(0.05mg/ml)(μl) 0 10 20 30 40 50
ddH2O(μl) 55 45 35 25 15 5
相当于金氏单位(U/L) 0 10 20 30 40 50
2、准备样品：
①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离
心取上清，冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的
测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或
PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释后检测。
3、加样：按照下表设置对照孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免
产生气泡。
如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行孔。
加入物(μl) 对照孔标准孔测定孔
Phenol标准(1～5号管) —55 —
待测样品——55
ALP Assay buffer 50 50 50
37℃水浴中孵育5min。
ALP显色液(37℃提前温育) 50 50 50
立即混匀，37℃水浴中准确孵育15min。
显色基液150 150 150
待测样品55 ——
4、用分光光度计，以0号孔(ddH2O)调零，读取对照孔、标准孔、测定孔吸光度(即A对照、
A标准、A测定)，如无法检测，亦可检测范围内吸光度，一般应数小时内检测完毕。
计算结果：碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：在37℃条件下，待测样品与显色底物(即ALP显色液所含物质)作用，产生酚为一个金氏单位。
以系列Phenol标准(1～5号孔)对应的金氏单位为x轴，以相应的A标准(1～5号管)为y轴，绘制标准曲线。
以A测定-A对照的差值为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，求出酶活力单位。
参考区间(37℃)：
健康成年人3～13金氏单位
健康儿童5～28金氏单位
注意事项：
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4、空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
5、加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)。
