土壤酶活性测定方法

土壤酶活性测定几种水解酶：芳基硫酸酯酶（Arylsulphatase(EC 3.1.6.1)）, 葡萄糖苷酶（β-glucosidase(EC 3.2.1.21) ）和磷酸单酯酶（phosphmonoesterase(EC 3.1.3)）测定：这三种酶的测定都是依据人工合成底物（p-nitrophenyl sulphate, p-nitrophenyl glucoside and p-nitrophenyl phosphate,respectively）裂解后释放的p-nitrophenol 的量来测定。

Arylsulphatase(EC 3.1.6.1)：称取1g土（湿重），与4ml 500mM乙酸缓冲液（acetate buffer）（pH5.8）和1ml底物（25mM）混匀。

对照为4ml乙酸缓冲液加1ml灭菌蒸馏水。

土壤稍作涡旋振荡，置于旋转摇床20℃，200rpm培养2h。

然后，往样品中加1ml 无菌蒸馏水，往对照中加1ml底物。

再加入1ml 500mM 氯化钙和4ml 500mM 氢氧化钠以终止反应。

悬浮液在旋转摇床上20℃，200rpm振荡30min。

9464×g离心5min，然后在400nm波长下测定上清夜中所提取的p-nitrophenol 的颜色深度。

如果是在中性条件下测定，则用蒸馏水取代乙酸缓冲液。

标准曲线制作：用蒸馏水配制p-nitrophenol溶液，浓度范围0-50ug/ml。

β-glucosidase(EC 3.2.1.21)：缓冲液换为改进的通用缓冲液（modified universal buffer）(pH6.0);底物浓度25mM，提取液用Tris缓冲液（pH12.0）.phosphmonoesterase(EC 3.1.3): 缓冲液换为改进的通用缓冲液（modified universal buffer）(pH4.0和9.0)（分别测定酸性和碱性磷酸酯酶），底物浓度为15mM。

一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养24ｈ。

然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。

脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。

标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。

1h内在分光光度计上于578nm处比色。

土壤酶活性测定的实验步骤土壤酶的测定1.将三角瓶在稀释的硝酸（3-5%）或洗衣粉中浸泡24小时，然后刷洗，然后用蒸馏水湿润并在空气中干燥。

2.土样应细磨并袋装。

土壤量：2G+2.5G+5G+5G=14.5G，重复一次，14.5×2=29g一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫p323）1.试剂制备：(1)0.3%过氧化氢溶液：① （1:10030%过氧化氢和水）② （0.5mol H2O2+49.5ml蒸馏水）③ （1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）（2）3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）（3）0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gkmno4+100ml蒸馏水）2．操作步骤：将2G风干土壤放入100个三角形烧瓶中→ 40毫升蒸馏水和5毫升0.5毫升蒸馏水注入3%过氧化氢（现配备）→ 在往复式振动筛上振荡20分钟→ 添加5ml 3N硫酸（以稳定未溶解的H2O2）→ 用慢滤纸过滤→ 吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉色3．结果计算过氧化氢酶活性（m），20分钟后在1g土壤中以毫升0.1nkmno4表示：m=（a-b）×T，其中：a：空白消耗的0.1nkmno4毫升数b：滤液消耗的0.1nkmno4 ml T：高锰酸钾滴定的校正值备注：H2O2的酶活性是用容量法测定的：kappen（1913）首先介绍了在硫酸存在下用高锰酸钾滴定残余过氧化氢的方法。

根据H2O2与土壤相互作用过程中未分割H2O2的含量，采用容量法（常用高锰酸钾滴定未分割H2O2）2kmno4+5h2o2+3h2so4测定H2O2的酶活性→2mnso4+K2SO4+8H2O+5o2土壤h2o2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用二、蔗糖酶（p278）滴定法1.试剂配制：（1） 20%蔗糖：（20克蔗糖+80毫升水或12.5克蔗糖+50毫升水）（2）甲苯（分析纯）(3)ph5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液0.5ml磷酸氢二钠12H2O（1/15m）+9.5ml磷酸二氢钾（1/15m）磷酸氢二钠12h2o(1/15m)：23.88gna2hpo4,，加h2o溶解，定容至100ml。

土壤酶活性的测定方法及部分样品配制详细请参考《土壤微生物分析方法手册》，《土壤酶及其研究法》土壤样品采集与制备土壤样品取样后混匀，用于土壤酶活性测定的土壤磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测。

1.土壤酶活性的测定方法1.1.脲酶采用靛酚蓝比色法方法原理：本法基于以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，用于尿酶活性的测定。

操作步骤：取10g风干土，置于100ml三角瓶中，加2ml甲苯，15min后加10ml 10%尿素液和20ml pH6.7柠檬酸盐缓冲液。

摇匀后在37℃恒温箱中培养3h。

按此操作，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定，过滤后取0.5ml滤液于50ml比色管中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。

氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。

pH6.7柠檬酸盐缓冲液：用368g柠檬酸溶于600ml水，另取295g氢氧化钾溶于水，再将二种溶液混合，然后用1M的氢氧化钠调节pH到6.7，定容到2L。

苯酚溶液：称取苯酚（C6H5OH）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O, 化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·12H2O, 化学纯）31.8g 和52.5g·L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液)10mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

标线绘制：取稀释的标准液0、l、2、4、6、8、10ml，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。

再加4mL苯酸钠溶液和4mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml 水（B液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。

三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。

再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。

然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。

三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。

培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。

③8%蔗糖溶液。

④甲苯。

⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。

然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。

再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。

标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。

2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。

摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

到时取出，迅速过滤。

从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。

溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。

为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。

无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。

无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。

3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。

土壤蔗糖酶活性测定方法方法一：邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)法1.实验原理：邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)可通过蔗糖酶催化水解产生对甲酚背氧钠（PMS），PMS与p-苯醌反应生成紫色物质，紫色物质的光学密度与蔗糖酶活性呈正相关关系。

2.实验步骤：1) 准备土壤样品：将土壤样品通过2mm筛分获得<2mm的土壤颗粒，取适量土壤加入含有0.01mol/L可溶性蔗糖溶液的无磷酸钠缓冲液中制备土壤悬浮液。

2) 补充试剂：将0.5%邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)和0.1mol/L乙酰胆碱溶液准备好。

3) 催化反应：取50ml土壤悬浮液加入50ml离心管中，加入0.5ml 邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)溶液和0.5ml乙酰胆碱溶液，摇匀后放置于恒温水浴中，在37℃下培养2小时。

4) 停止反应：加入0.5ml冷却剂（10%w/v次氯酸钠和10%w/v硼酸混合物）停止反应。

5) 比色：每个试管取1ml反应液加入4ml氢氧化钠溶液，并通过pH 试纸调整pH值为7-8，然后以1ml/分钟的速度加入1mol/L硫酸，同时记录反应液的吸光度。

6)计算结果：根据吸光度计算出土壤中蔗糖酶的活性。

方法二：葡萄糖法1.实验原理：葡萄糖测定法使用试剂酚氨试剂和葡萄糖酸嵌合物的形成来测定土壤中蔗糖酶的活性。

葡萄糖酸嵌合物的形成量与蔗糖酶活性呈正相关关系。

2.实验步骤：1) 准备土壤样品：将土壤样品通过2mm筛分获得<2mm的土壤颗粒，取适量土壤加入含有0.3mol/L蔗糖溶液的无磷酸钠缓冲液中制备土壤悬浮液。

2) 补充试剂：准备好酚氨试剂和0.3mol/L葡萄糖溶液。

3) 催化反应：取2ml土壤悬浮液，加入2ml酚氨试剂和1ml葡萄糖溶液，放置于37℃恒温水浴中，培养2小时。

4) 停止反应：加入5ml冷却剂（20%醋酸和20%硼酸混合液）停止反应。

5) 比色：每个试管取4ml反应液加入10ml硫酸进行酸化，然后以每分钟加入2ml五氯酚酸溶液的速度加入到试管中，同时记录反应液的吸光度。

2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。

它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。

土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。

2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。

2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。

2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。

根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。

表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。

表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。

土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

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土壤纤维素酶活性的测定方法
土壤纤维素酶活性的测定方法包含以下步骤：
1. 准备醋酸缓冲液、CMC溶液、水合葡萄糖溶液等试剂，恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器，三角瓶等设备。

3. 取10.00 g（耕地）或5.00 g（林地）的新鲜土壤，加入15 ml醋酸缓冲液和15 ml CMC溶液，在50℃下培养24小时。

4. 过滤，同时做空白对照。

5. 取2.00 ml样品于50 ml容量瓶中定容，吸取2.00 ml稀溶液于20 ml去离子水中，加入10.00 ml无水葡萄糖溶液，在100℃下水浴加热15分钟。

6. 冷却后加入10.00 ml无水葡萄糖溶液，在690nm波长下进行比色定。

注意：此方法适用于林地土壤，耕地土壤的测试效果可能较差。

土壤生物化学指标测定一、土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定（比色法）（一）分析意义脱氢酶能酶促脱氢反映，它起着氢的中间传递题的作用。

在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。

脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。

（二）方法选择与原理Lenhard(1956)最先提出用TTC作为氢的受体生成红色的TF，进行闭塞测定，以溶液的光密度值表示酶活性。

后来对上述的方法做了不同的改进和完善。

用土壤有机质作为氢的供体或用葡萄糖做氢的供体，用生成的TF数量或换算成氢的体积来表示脱氢酶的活性。

（三）试剂配制1、0.5%TTC溶液2、甲苯3、Tris-HCl缓冲液Ph7.6：0.1M三羟甲基氨基甲烷（12.114g/L）50ml 与0.1MHCl38.5ml混合后，用水稀释至100ml。

4、硫化钠5、0.1mol/L葡萄糖溶液。

（四）实验步骤1、标准曲线的绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的TTC于50 ml比色管中，定容，制成1 mg/L的母液。

分别向6支50ml比色管中依次注入1、2、3、4、5、6mL mg/ml 标准TTC溶液，用蒸馏水定容，是为工作液：取7只带塞比色管（50ml）依次加入2 mL Tris-HCl演算缓冲液，1 mL不同浓度的TTC工作液，1 mL10%硫化钠新配溶液，摇匀，放置20分钟；反应完全后，准确加入10ml甲苯，振摇。

完全提取TF，稳定数分钟，取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞（在比色皿中也需稳定2分钟）绘制标准曲线。

2、操作过程：取0.5g新鲜土壤，置于50ml 比色管中，依次加入2mlTris-HCl盐酸缓冲液、1ml 0.1mol/L葡萄糖溶液、1ml 0.5% TTC溶液,震荡均匀，离心（4000转/分）5分钟后，将甲苯提取液在分光光度计492 nm处闭塞测定。

同时设无土壤和无TTC的对照（以蒸馏水替代）。

3、结果计算：脱氢酶活性=TF含量/0.5g —土壤含水量脱氢酶活性，以24h后1g干土中TF的生成量表示。

土壤的淀粉酶测定方法
土壤的淀粉酶测定方法有多种，其中常用的方法包括碘液滴定法、酶活性测定法和分子生物学方法等。

1. 碘液滴定法是最常用的方法之一，通过将土壤样品与碘液反应，然后使用滴定管滴定还原的碘的量来测定淀粉酶的活性。

2. 酶活性测定法则是利用特定的底物和指示剂来测定淀粉酶的活性。

3. 分子生物学方法则是通过检测淀粉酶基因的存在和表达来间接评估淀粉酶的活性。

此外，还有实验试剂的选择和操作步骤等注意事项，例如所有试剂除注明者外，均为分析纯;实验用水为蒸馏水或去离子水或相当浓度的水。

在具体操作过程中，需要将适量土壤样品加入10倍体积的蒸馏水，搅拌均匀。

然后，将样品过滤，收集滤液。

在滤液中加入适量的淀粉溶液，搅拌均匀。

将混合液置于恒温器中，保持适宜的温度(如30℃)，一定时间后(如30分钟)，加入适量的碘试剂，观察颜色的变化。

根据颜色变化和标准比色卡比较，计算出淀粉酶活的单位。