实践四、维生素B12的含量测定

维生素B12含量的测定（实训案例）以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素B12含量的方法。

2.1.紫外分光光度法的测定原理维生素B12在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。

在361nm 波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。

2.2仪器与试剂752N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。

3．维生素B12注射液含量测定步骤准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。

然后将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。

4.结果记录与计算4.1数据记录将所测数据填入下表。

6-2数据记录表4.2.结果计算注射液含量按下式计算。

样品中的维生素B12计算公式：式中 V---样品中维生素B12的含量，mg/mLB12A-----待测溶液的吸光度；-----比色皿的矫正值（吸光度）；AD-----供试样品的稀释倍数；注射液的标示量)，mg/mLW-----样品质量(VB12---吸收系数为207五、注意事项1. 测定过程需避光操作。

2. 在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。

即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差∆T应不大于0.5%。

3. 维生素B12在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，在pH值4.5～5.0弱酸条件下相对稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。

4. 为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。

5. 比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。

过满溶液可能溢出，使仪器受损。

分子荧光法测定维生素B12含量实验报告【实验项目】分子荧光法定量测定维生素B2的含量【实验目的】1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。

2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。

【实验原理】荧光是光致发光。

任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。

荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。

荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。

由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。

有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。

维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm 附近。

维生素B2在pH=6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。

维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。

在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度C有以下关系：F=2.303ΦT0Ebc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc【仪器与试剂】1.仪器：荧光分光光度计（型号：F2500HITA[H));1cm石英比色皿l:50mL容量瓶2.试剂：维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)(已加乙酸)》【实验内容与步骤】1.系列标准溶液和待测溶液的配制取维生素B2(10.0μg/mL)标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。

取2.00mL待测溶液于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。

维生素B12 pH值测定实验报告摘要维生素B12是一种重要的水溶性维生素，对人体的健康发挥着重要的作用。

本实验旨在通过测定不同pH下维生素B12的吸收光谱，探究其在不同环境条件下的稳定性和溶解度。

实验结果表明，维生素B12在酸性环境下溶解度较低，而在中性环境下溶解度较高。

同时，维生素B12在酸性环境下也更容易分解，失去活性。

因此，为了充分利用维生素B12的营养价值，应注意维生素B12的储存和烹饪条件。

1. 引言维生素B12，也被称为腺苷胺钴胺素，是一种含有金属钴的复合物，是人体必需的一种维生素。

维生素B12在人体内参与DNA合成、红细胞形成和神经系统的正常运作等重要生理过程。

由于人体无法自主合成维生素B12，因此需要通过食物摄取来满足身体的需求。

然而，维生素B12容易受到环境因素的影响，如pH值的改变会影响其溶解度和稳定性。

2. 实验材料和方法2.1 实验材料•维生素B12标准品•pH调节缓冲溶液（酸性、中性和碱性）•高纯度水•紫外可见分光光度计•量筒和移液管等实验仪器2.2 实验方法1.准备不同pH值的缓冲溶液，并调节至所需的pH值。

2.取不同pH值的缓冲溶液各10 mL，加入维生素B12标准品1 mL，制备维生素B12的不同浓度溶液。

3.使用紫外可见分光光度计，分别在不同波长下测量不同pH值下的维生素B12溶液的吸光度，并记录数据。

4.根据标准曲线，计算不同pH值下维生素B12的浓度。

5.分析不同pH值下的维生素B12溶解度和稳定性。

3. 实验结果3.1 不同pH值下的维生素B12溶解度根据实验数据计算得出不同pH值下的维生素B12浓度，如下表所示：pH值维生素B12浓度 (mg/L)2 5.214 11.857 26.4510 13.36从表中可以看出，在pH值为2的酸性环境下，维生素B12的溶解度较低，为5.21 mg/L。

而在pH值为7的中性环境下，维生素B12的溶解度较高，为26.45 mg/L。

《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。

但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。

我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。

采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。

三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。

1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。

维生素B12注射液的含量测定维生素B12是人体必需的营养素之一，它参与脂肪代谢、细胞DNA合成以及神经系统功能的维持等重要生理功能。

因此，维生素B12在医药、保健品和食品等领域中得到了广泛应用。

维生素B12注射液是治疗缺乏维生素B12症状的一种有效途径，适用于恶性贫血、营养不良性贫血、神经系统疾病等疾病的治疗。

维生素B12注射液的主要成分为羟基钴胺素，其品质的好坏对治疗效果十分关键。

因此，对于维生素B12注射液中羟基钴胺素含量的准确测定显得尤为重要。

1.实验仪器和试剂（1）分光光度计（2）枸磺酸和磷酸二氢钾混合液（3）硫酸氢钠溶液（4）含有维生素B12的标准品（5）无水氢氧化钠（6）乙醇2.实验方法（1）标准曲线法准备一系列不同浓度的含有维生素B12的标准品溶液，分别为 2、4、6、8 和 10μg/mL。

取相应浓度的标准品溶液 1.0 mL，加入混合溶液 3.0 mL，用 0.1 mol/L 硫酸氢钠溶液调节溶液 pH 值至 4.2 左右。

最后，用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液稀释至 10 mL，并用分光光度计在 361 nm 波长下测定吸光度。

绘制标准曲线，横坐标为不同浓度的标准品溶液浓度，纵坐标为对应的吸光度值。

利用标准曲线计算样品中维生素B12的含量。

（2）内标法计算维生素B12含量的公式为：维生素B12含量=（样品吸光度-双内标吸光度）/标准曲线斜率。

3.实验注意事项（1）所有试剂应使用纯化和高质量的试剂。

（2）稀释过程要求温度稳定不变，否则会影响结果的准确性。

（3）为确保测定结果准确，对于同一种方法应进行多次实验并取平均值。

总之，维生素B12是人体必需的营养素，维生素B12注射液的含量准确测定对于治疗效果的提高至关重要。

在实验过程中，要严格控制实验基质环境和检测仪器的精准性，以保证测定结果的准确性和可重复性。

维生素B 12的定性定量检测一、实验目的和要求1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2. 掌握吸收曲线的绘制；3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。

二、实验原理维生素B 12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B 12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B 12的含量。

三、实验步骤 1、溶液配制用加样器移取维生素B 12注射液500μl ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B 12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B 12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B 12，即为合格药品。

EE %1nm 550cm 1%1)nm 361cm 1）（（=AA nm 550nm 360）（）（=136.0467.0=3.432、定量检测根据浓度25μg/ml 维生素B 12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B 12注射液含量，结果在90.0~110.0之间，表明维生素B 12注射液含量合格；其中207维生素B 12为在波长的吸收系数，20为稀释因子。

维生素B 12含量=）标示量（ml /g 20207Anm361⨯x100％=100)/(5.020207467.0x ml mg ⨯=90.2五、实验体会1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。

误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。