维生素B12注射液的定性鉴别及含量测定2

实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。

二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。

维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。

通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。

维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。

药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。

361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。

药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。

三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。

2．试样维生素B12注射液。

四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。

2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。

五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。

2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。

按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。

紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B 12注射液【目的要求】1．掌握紫外分光光度计的基本结构及使用方法；2．掌握维生素B 12注射液的鉴别和含量测定方法。

【实验原理】1. 紫外分光光度计的组成与结构紫外分光光度计主要由光源（D 灯、W 灯）、单色器（棱镜、光栅、滤光片）、吸收池、检测器（光电管、光电倍增管、光电池）以及信号放大处理和显示系统等部分组成，其基本结构和工作流程如同21-1所示。

图21-1 单光束紫外分光光度计的基本结构2. 维生素B 12的定性鉴别由于物质的性质和结构不同，物质对光的吸收是具有选择性的。

维生素B 12的吸收曲线反映了其化学结构的基本特征，分别在278nm 、361nm 和550nm 波长处有三个吸收峰，因此可通过它的吸收光谱的特征，利用其特征吸收值之间的比值A 361/A 278和A 361/A 550进行定性鉴别，并了解维生素B 12的纯度，药典规定：A 361/A 278和A 361/A 550的比值应分别在1.70~1.88和3.15~3.45之间。

3. 维生素B 12注射液的定量分析由于维生素B 12在361nm 处的溶液吸收最强（2071%1cm,361nm =E ），且干扰因素少，因此以361 nm 作为测量波长，在此波长下测量其溶液的吸光度A ，采用吸光系数法直接测定浓度，按下式计算维生素B 12的百分含量：由 Cl E A 1%1cm = 则 g/ml)( 31.481020741%1cm μA A l E AC ×=×== %1005.031.48(%)VitB 12×××=∴n A （n 为稀释倍数） 【仪器与试剂】１. 仪器光闸TU1810紫外-可见分光光度计，1 cm石英比色皿。

２. 试剂维生素B12对照品，维生素B12注射液（标示量0.5 mg/ml）。

【实验内容】1. 对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。

《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。

但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。

我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。

采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。

三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。

1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。

实验十一 维生素B 12注射液的定性鉴别及含量测定实验者：李丽贝 合作者：倪佳琴一、实验目的1.1掌握722G 型分光光度计的操作方法 1.2熟悉定性鉴别及定量测定方法二、实验原理维生素B 12注射液为含钴的有机药物，为粉红色至红色的澄明液体，用于治疗贫血等疾病。

维生素B 12在278±1mm 、361±1mm 与550±1mm 波长处最大吸收，根据其吸收光谱的形状和最大吸收波长下吸光度比值，可进行定性鉴定。

测量最大吸收波长下吸光度，可算出供试品浓度。

三、实验仪器与试剂仪器 722G 型分光光度计，玻璃洗手池，容量瓶（10ml ），吸量管（1ml ） 试剂 维生素B 12注射液（1ml ：0.5mg ）四 、操作步骤4.1定性鉴别 根据中国药典（1995年版）规定，取含量测定项下的溶液，在361±1nm 与550±1nm 处测得的吸光光度比值应为3.15~3.45，即为合格。

4.2定量分析 精密量取本品适量，加水定量稀释成1ml 含维生素B 1225ug 的溶液，在361±1nm 处测得吸光度，维生素B 12的吸光系数（E 1%1cm ）按207计算，即得可求得样品的含量五、实验结果 1.（1）定性鉴别（吸光度比值）结果=3.357(规定为3.15~3.45)1% E 1cm 1% E 1cm 361nm 361nm = A 361nm A 550nm（2）定量分析（吸光系数法）A/E1%1cm x1/100x稀释因子标示量%= x100% =90.821标示量（g/ml）(规定为90.0~110.0)六、实验体会这个实验要求我们能正确使用分光光度计，所以还得提前捉摸一下，在这个实验过程中出现了与实际不符合的情况，应该是由于我们的操作失误，又因为数据与数据之间相差很小，所以更加需要细心，在老师的帮助下，顺利的得到了较为准确的数据，体会到自己仍应该更用心地去学习。

VB 12注射液的鉴别及含量测定
一、实验目的
1、掌握紫外-可见分光光度计的使用方法；
2、掌握维生素B 12注射液的鉴别和含量测定的原理和方法；
3、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。

二、实验原理
1、鉴别
利用VB 12注射液在361±1nm 、550±1nm 处的特征吸收峰，进行定性鉴别：A 361/A 550=3.15~3.45。

2、含量测定
根据朗伯-比尔定律，用吸光系数法来测定。

对某一确定的物质，在一定波长下，其吸光系数为一定值（可从手册中查得，如VB 12，1%
1,361cm nm E =207），测得溶液吸光度A 后，即可用下式计算浓度：207
100/%
11样
样
）（A l E A mL g C cm =⨯= 将单位换算成（μg/mL ）：31.48100
102076
⨯=⨯=样样A A C 标示百分含量：标示量%=48.31100n A ⨯⨯⨯样标示量
三、实验步骤
1、精密移取VB 12注射液1.00ml 于25ml 容量瓶，以蒸馏水定容；
2、用上述稀释液在250 ~ 600nm 扫描，记录特征峰的波长，详见操作说明；
3、以E 361/E 550的比值做定性鉴别；
4、以最大吸收峰处（361nm ）的吸光度计算VB 12的含量及标示百分含量。

注：VB 12标示百分含量在90.0% ~ 110.0%内均为合格（本实验VB 12标示量：500μg/ml ）。

四、数据处理要求
五、思考题
p98 2，3。

实验四 紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量一、实验目的1、理解紫外—可见分光光度法定性分析、定星分析的原理。

2、掌握紫外—可见分光光度法测定维生素B12含量的原理。

3、掌握UV—7502PC紫外—可见分光光度计的结构、原理与操作。

二、原理分子中的电子发生跃迁需要的能量约在1~20eV之间，其对应的吸收光的波长范围大部分处于紫外和可见光区域，通常将分子在这一区域的吸收光谱称为电子光谱或紫外—可见吸收光谱。

物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律，即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。

在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。

1. 紫外-可见分光光度计的基本结构紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录系统组成。

图1 紫外—可见分光光度计基本结构图2.透光率和吸光度如图2所示：入射光强度I0，吸收光强度I a，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0═ I a + I t + I r被测溶液和参比的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为I0═ I a + I t透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；反之，透光率愈小，溶液对光的吸收愈多透光率的负对数称为吸光度，用符号A 表示。