胎牛血清,小牛血清,新生牛血清之间的区别,保存及用法

细胞培养的一些问题1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。

故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~ 一年。

2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。

加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。

每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。

包装为粉红色，-24◦C保存。

3.培养用液pH对细胞生长的影响由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。

各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。

但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。

因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。

液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。

4.常用培养基及培养用液的渗透压范围培养基名称渗透压范围（mOSM）DMEM（高糖）315 ~ 350DMEM（低糖）270 ~ 330RPMI-1640 260 ~ 290MEM-EBSS 280 ~ 310MEM-NEAA 280 ~ 310McCoy5a 280 ~ 310MEM-a 280 ~ 310M—199 275 ~ 305IMDM 270 ~ 300DMEM/F-12 280 ~ 310F—10 270 ~ 300F—12 275 ~ 300培养基名称渗透压范围（mOSM）L—15 280 ~ 320D-Hanks 280 ~ 300Hanks 280 ~ 300PBS 275 ~ 3005.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。

细胞培养基础知识细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。

2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。

血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。

3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。

在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。

因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。

4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。

5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。

细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。

干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。

1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。

不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。

其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。

但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。

已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。

碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。

主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。

细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。

营养成分：1.氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。

2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。

细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。

体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。

3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。

4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。

5.促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。

有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。

有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。

6.渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。

人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。

鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。

对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围都适宜。

7.pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。

氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。

一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。

在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。

二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。

动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2 ～7.4 ，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。

牛血清使用说明本使用说明适用于下列产品系列：胎牛血清(FBS) 、新生牛血清和小牛血清产品介绍动物细胞离体培养需要营养丰富的培养基。

动物血清通常添加在合成培养基里用于促进动物细胞的正常生长。

血清是一种天然的促进细胞生长营养物质，它含有极为丰富、并且生物利用率很高的蛋白质、氨基酸、脂肪、生长引子、维生素、激素、蛋白酶抑制因子以及各种无机微量元素。

这些成分可有效地促进细胞的生长。

目前普遍使用的血清种类有胎牛血清(FBS)、新生牛血清、马血清、猪血清和人血清。

根据血清应用范围和采集后加工方法的不同，每类动物血清又可制备成不同的血清产品类型，用于各种动物和人细胞的培养。

然而，胎牛血清(FBS)被广泛认为是最适于细胞培养的动物血清，补充所必需的营养成分。

主要是因为FBS富含平衡的天然生长因子和较低γ球蛋白。

除此之外，FBS还可以防止细胞由于pH变化、重金属离子、内毒素和蛋白酶而引起对细胞的损害。

贮存方法麦迪捷生产的血清是分装在无菌的塑料瓶内，之后冰冻保存。

在运输过程中仍保持在冰冻状态。

如将血清存放在-10到-40o C度的在冰柜里，可连续保存数年，对血清的植板率没有明显的影响。

血清不应存放在无霜冰箱里。

反复冰冻融化过程会使血清中的某些物质沉淀，降低血清的使用效果。

不适当的贮存将迅速降低血清制品的有效成分和稳定性。

解冻方法血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。

最好在4o C低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。

如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法：1. 将血清从冰箱里取出后，在室温下放置15-20分钟。

2. 然后将血清放置在37o C水浴槽里。

过高温度会导致血清出现浑浊现象。

不要让水淹没装有血清的瓶子。

3. 每隔5分钟左右适当摇晃瓶子，直到完全地解冻为止。

血清解冻后要立即使用。

解冻的血清可以在2-8o C条件下存放达2个星期。

为了避免多次解冻/融化血清和长期冷藏,我们建议将没有用完的血清立即分装，然后再冰冻保存，方便以后使用。

细胞培养血清使用方法一、细胞培养血清的选择1.获取合适的细胞培养血清：在选择细胞培养血清时，应根据细胞类型和培养需求来选择适合的血清种类。

常见的细胞培养血清包括胎牛血清(FBS)、小牛血清(CS)、羊血清(GS)等。

2.质量检测：在使用细胞培养血清前，应进行必要的质量检测。

常见的检测项目包括细胞毒性检测、内毒素检测、抗体检测等，以确保细胞培养血清的质量符合要求。

二、细胞培养血清的保存与预处理1.储存温度：细胞培养血清应保持在-20℃以下的低温环境中保存，避免冻融过程中引起的细胞因子等成分的损失。

2.解冻方法：在使用前，需要将细胞培养血清从冷冻状态解冻。

解冻时应将血清瓶或管直接放入37℃的水浴中，待完全解冻后再使用。

避免频繁冻融对细胞培养血清质量造成影响。

3.灭菌处理：为防止细胞培养血清中的微生物污染细胞培养系统，使用前应对血清进行灭菌处理。

常见的方法有过滤灭菌和紫外线灭菌等。

三、细胞培养血清的使用方法1.添加量：在培养基中添加适量的细胞培养血清，通常按照5%-20%的比例添加，视细胞类型、生长阶段和实验要求而定。

同时，将血清的添加量逐渐减少，有助于维持细胞类型和稳定细胞表型。

2.血清浓度试验：在初始阶段的细胞培养中，可以进行不同浓度细胞培养血清的试验，以确定最适合细胞生长和增殖的血清浓度。

3.细胞分配与传代：在细胞传代过程中，应根据细胞的生长情况和实验要求，精确计算和添加细胞培养血清的量。

通常情况下，传代时应先将细胞离心，去除老化的细胞和细胞碎片，再将新鲜培养基补充到细胞中，继续传代和培养。

四、细胞培养血清的注意事项1.避免重复冻融：频繁冻融对细胞培养血清质量会有影响，因此在使用前需要根据实验需求，将血清储存和使用合理安排，避免过多的冻融过程。

2.避免污染：在使用细胞培养血清时，应注意防止污染对细胞培养的影响。

避免细菌、真菌和其他微生物的污染，同时在操作过程中注意无菌操作，避免引入外源性污染。

3.使用正常生长因子替代：部分细胞类型在一定条件下可以使用无血清培养基进行培养，无血清培养基中含有正常生长因子的替代物，能够促进细胞的生长和增殖。

细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。

有时泛指所有的体外培养。

器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。

无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。

接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。

无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。

注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。

但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。

不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。

原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。

原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。

培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。

传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。

2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3）体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化（脱分化）②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放2、平衡盐溶液（BBS）：（1）成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。

牛血清使用说明范文牛血清是从奶牛血液中提取并经过多道纯化和过滤处理得到的纯净蛋白质溶液，具有丰富的营养物质和生物活性成分，被广泛应用于医疗、生物研究、工业生产等领域。

以下是牛血清的使用说明。

一、储存与保管1.储存温度：牛血清最适宜的储存温度为-20℃或以下。

在此温度下储存，可以有效保持蛋白质的活性和稳定性。

2.储存方式：将牛血清保存在干燥、阴凉的地方，远离阳光直射和高温环境。

应避免频繁反复冷冻和融化，以免对蛋白质造成损伤。

3.包装完好：使用前应检查牛血清包装是否完好，如有破损或渗漏现象应停止使用。

二、使用前准备1.澄清处理：打开牛血清瓶后，应该轻轻摇晃或轻轻转动瓶子，使澄清透明的牛血清完全悬浮。

2.操作环境：在无菌条件下操作，避免任何可能导致污染的情况。

建议在无菌操作台上进行操作，并确保所有仪器和工具已经过严格的清洁和消毒。

三、常见应用领域及使用方法1.细胞培养牛血清常常用于细胞培养中，提供必需的营养物质和生长因子，促进细胞生长和繁殖。

（1）细胞培养基配制：按照细胞培养基配方准确称取细胞培养基粉末，加入适量的牛血清搅拌均匀，最后加入适量的抗生素，经过滤净化即可使用。

（2）细胞传代：将细胞培养物转移到新鲜的培养基中，适量添加牛血清，使细胞继续生长和传代。

2.蛋白质纯化（1）酚（树脂）胶柱层析：将经过预处理的样品加入酚胶柱中，牛血清可以用作洗脱缓冲液，帮助背景蛋白的有效清除。

（2）亲和层析：使用具有特异亲和性的树脂或沉淀剂，结合特定的蛋白质分别和目标蛋白质或其他附属物之间的相互作用，牛血清可以用作洗脱缓冲液或用于阻断非特异性结合。

3.抗感染治疗牛血清具有丰富的免疫球蛋白和抗体，可以用于抗感染治疗。

（1）抗菌和抗病毒：将牛血清溶液直接注射或局部涂抹于感染部位。

要根据具体病原体的类型和感染程度来确定用药方法和剂量。

（2）免疫治疗：将牛血清免疫球蛋白注射到患者体内，使机体产生抗体，增强免疫力。

用于治疗一些传染性疾病和免疫系统功能低下的患者。

动物血清的区分比较与作用血清主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最pu遍的试剂的基础。

市面上的牛血清产品名称虽然五花八门，但根据其不同的特性，追其根本，但大致可分为以下四种。

根据牛的取血年龄可以区分：胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心脏穿刺采血得来的血清。

国产胎牛血清（并无明确定义，但通常用此命名）指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的新生牛，有时还称作国产新生牛血清。

适用于常规细胞培养、细胞株保存和单抗研制等方面。

新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS，或称小牛血清）指的是出生14天-3个月进行取血的牛血清。

适用于培养或对环境要求低的细胞。

成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛血清。

适用于多种动物体外培养，包括：克隆细胞、单层细胞、悬浮细胞等。

以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。

几种血清的比较：提取血清体积/只牛：成年牛血清(5-8L) > 小牛血清(2L) > 国产胎牛血清(1L) > 胎牛血清(0.5L)培养细胞的效果：胎牛血清> 国产胎牛血清> 小牛血清> 成年牛血清价格：胎牛血清> 国产胎牛血清> 小牛血清> 成年牛血清这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。

常规来说，年龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。