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天津药学 Tianjin Pharmacy 2021年 第33卷 第1期93 刘睿，段金廒,李友宾，等•水牛角主要药效学评价及解热活性物质 基础研究[J ].南京中医药大学学报,2007,23(5):297-301.4耿笑雁•犀角地黄汤加减治疗小儿过敏性紫瘢47例[J ].河北中医， 2002,24(3)：196.5韩世荣，张小琴，张玉梅•犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢60例[J ].陕西中医,2002,23(11)： 996-997.6 康景华.犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢35例[J ].天津中医，2001,17(3)：47.7王文兰•犀角地黄汤治疗顽固性皮肤瘙痒症[J ].四川中医,2002,20( 1) 67.7丛培华.犀角地黄汤加减治疗带状疱疹[J ].山东中医杂志,2002,21( 6): 370.9郑建本，王光富•加味犀角地黄汤治疗座疮70例[J ].实用中医药杂志，2004，20(1):17-19.10蔡之幸，王重卿•水牛角治头痛作用初探[J].上海中医药杂志,016,50( 9): 69-71.11吴飞，张继全，阮克锋，等.三七生粉入药灭菌工艺的选择[J ].中国医药导报,2016,13(19):35-37.反相高效液相色谱法测定盐酸普蔡洛尔片中盐酸普蔡洛尔的含量郑风敏，王繁华，李彬(鹤壁市食品药品检验检测中心，河南458030)摘要目的:建立反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量。
方法:Waters e2695高效液 相色谱仪,waters 2998二极管阵列检测器，Agilent 20Rbax C j 7色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5 "m ),流动相为乙睛-水(含1%庚烷磺酸钠)(45 : 55),检测波长为290 nm ，进样体积:20 "1,流速：1.0ml/min ,柱温：35 $。
结果：盐酸普萘洛尔在5.84~246.47 "g/ml 浓度范围内线性关系较好(r = 0.999 9),平均回收率99.92%,RSD 为0.17%。
盐酸普萘洛尔（propranolol hydrochloride ，PNH ）非选择性竞争抑制肾上腺素β受体阻滞剂，临床上常用于高血压、心绞痛、心肌梗死等心血管疾病的防治。
其口服效果好、作用温和、不良反应小，但其半衰期（t 1/2）较短，需每日多次服药，给长期服用带来不便［1］，因此制成稳定、安全、有效的缓控释制剂是十分必要的。
根据心血管疾病的时辰药理学研究发现，高血压、心绞痛、心肌梗死等多在凌晨发作［2⁃4］，患者此时服药顺应性较差。
而口服迟释制剂可根据疾病时辰节律变化，定时释药。
也就是说，通常在服药后暂不释药，之后迅速［5］或缓慢释药［1］。
本课题组制备了盐酸普萘洛尔口服迟释型缓释片，使其在睡前服用，经一定时滞后缓慢释放药物，血药浓度在凌晨达到并维持治疗浓度。
本研究以Beagle 犬口服盐酸普萘洛尔迟释型缓释片（自制制剂）后进行体内药动学研究，以市售“盐酸普萘洛尔片”为参比制剂，并对其生物等效性进行评价。
【摘要】目的研究盐酸普萘洛尔迟释型缓释片在Beagle 犬体内的药动学特征，并评价其生物等效性。
方法6只Beagle 犬随机分成2组，采用双周期交叉试验，分别灌胃120mg 盐酸普萘洛尔迟释型缓释片（受试制剂）和盐酸普萘洛尔片（参比制剂），在相应采血点取静脉血测定盐酸普萘洛尔血药浓度。
采用DAS 软件分别计算2种制剂的药动学参数及相对生物利用度。
通过统计学分析方法进行生物等效性评价。
结果受试制剂和参比制剂的t 1/2分别为（5.9±2.0）h 和（2.9±0.5）h ，c max 分别为（191±29）mg/ml 和（587±45）ng/ml ，t max （8.8±0.4）h 和（2.0±0.0）h ，AUC 0-t （1480±242）和（1733±214）ng ·h/ml ，AUC 0-∞（1758±209）和（1780±229）ng ·h/ml ，受试制剂的相对生物利用度为（99±7）%。
基因毒性杂质研究专栏㊀基金项目:中国食品药品检定研究院关键技术研究基金(Ｎｏ.ＧＪＪＳ－２０２２－４－１)ꎻ＃同为第一作者ꎬ∗同为通信作者作者简介:黄海伟ꎬ男ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｈｕａｎｇｈｗ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ袁松ꎬ男ꎬ助理研究员ꎬ研究方向:化学药品质量控制研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙｕａｎｓｏｎｇ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎ通信作者:刘阳ꎬ男ꎬ研究员ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１５７１ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇｌｉｕ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ张庆生ꎬ男ꎬ主任药师ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１３７５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｑｓ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔黄海伟＃ꎬ袁松＃ꎬ张娜ꎬ张龙浩ꎬ刘阳∗ꎬ张庆生∗(中国食品药品检定研究院ꎬ国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室ꎬ北京１０２６２９)摘要:目的㊀建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱－串联质谱(ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)检测方法ꎮ方法㊀ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８色谱柱(３.０ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.７μｍ)ꎬ１０ｍｍｏｌ Ｌ－１甲酸铵的水溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ａꎬ乙腈溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ｂꎬ梯度洗脱ꎬ流速为０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温为５０ħꎬ进样器温度为５ħꎬ进样体积为１０μＬꎬ采用多反应监测(ＭＲＭ)模式ꎬ对盐酸普萘洛尔缓释片中的Ｎ－亚硝基普萘洛尔进行定量检测ꎮ结果㊀Ｎ－亚硝基普萘洛尔在１~２０ｎｇ ｍＬ－１范围内具有良好的线性关系ꎮ低㊁中㊁高３个浓度的加样回收率(ｎ＝３)在９８.４％~１０３.２％之间ꎬＲＳＤɤ２.７％ꎮ检测限和定量限分别为０.０９ｎｇ ｍＬ－１和０.３ｎｇ ｍＬ－１ꎮ检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量为１.８μｇ ｇ－１ꎮ结论㊀该方法灵敏度高㊁专属性强ꎬ可用于测定盐酸普萘洛尔缓释片中的Ｎ－亚硝基普萘洛尔ꎬ为盐酸普萘洛尔缓释片的质量控制提供参考ꎮ关键词:Ｎ－亚硝基普萘洛尔ꎻ基因毒杂质ꎻ盐酸普萘洛尔缓释片ꎻ含量测定ꎻ超高效液相色谱－串联质谱中图分类号:Ｒ９２７.１㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)０７－０４８１－００４ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.０７.００９ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓｂｙＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳＨＵＡＮＧＨａｉｗｅｉ＃ꎬＹＵＡＮＳｏｎｇ＃ꎬＺＨＡＮＧＮａꎬＺＨＡＮＧＬｏｎｇｈａｏꎬＬＩＵＹａｎｇ∗ꎬＺＨＡＮＧＱｉｎｇｓｈｅｎｇ∗(ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌｉｔｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＤｒｕｇｓꎬＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０２６２９ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐ￣ｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８ｃｏｌｕｍｎ(１５０ｍｍˑ３.０ｍｍꎬ１.７μｍ)ｗｉｔｈ１０ｍｍｏｌ Ｌ－１ａｍｍｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅａｑｕｅｏｕｓｓｏ￣ｌｕｔｉｏｎ(ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ)ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡａｎｄａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎ(ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ)ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢｕｎｄｅｒａｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ａｎｄａｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ５０ħ.Ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉ￣ｔｏｒｉｎｇ(ＭＲＭ)ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｔｒｉｐｌｅｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｍｏｄｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗａｓｉｎｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１~２０ｎｇ ｍＬ－１.Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ(ｎ＝３)ａｔｌｏｗꎬｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｓｐｉｋｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｗｉｔｈｉｎ９８.４％~１０３.２％ｗｉｔｈＲＳＤｕｎｄｅｒ２.７％.Ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ０.０９ｎｇ ｍＬ－１ꎬａｎｄｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓ０.３ｎｇ ｍＬ－１.ＵｓｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄꎬｗｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓ￣ｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓｗａｓ１.８μｇ ｇ－１.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅꎬｗｈｉｃｈｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓꎬｐｒｏｖｉｄｉｎｇｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄＲｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌꎻＧｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙꎻＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓꎻＡｓｓａｙꎻＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ㊀㊀盐酸普萘洛尔化学名称为１－异丙基－３－(１－萘氧基)－２－丙醇盐酸盐(见图１Ａ)ꎬ盐酸普萘洛尔为非选择性竞争抑制β受体阻滞剂[１]ꎬ临床上常用于高血压㊁心律失常和心绞痛的治疗[２－３]ꎮ２０２２年３月加拿大卫生部(ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ)发布通告ꎬ辉瑞制药公司自愿召回６０㊁８０㊁１２０㊁１６０ｍｇ４种规格共２９批次盐酸普萘洛尔缓释胶囊ꎬ此次召回是因为在这些批次中检测出超过每天允许摄入量的Ｎ－亚硝基普萘洛尔(见图１Ｂ)[４－５]ꎮＮ－亚硝基类化合物具有直接或间接的致癌作用ꎬ长期小剂量接触或单次较大剂量接触都可能致癌[６－８]ꎬ亚硝胺类化合物是由于药物生产过程中发生了某些副反应而产生ꎮ自２０１８年缬沙坦中Ｎ－二甲基亚硝胺(ＮＤＭＡ)检出以来ꎬ又有Ｎ－二乙基亚硝胺(ＮＤＥＡ)㊁Ｎ－亚硝基－Ｎ－甲基－４－氨基丁酸(ＮＭＢＡ)等杂质陆续在药品中检出ꎬ国家药品监督管理局㊁美国食品药品监督管理局(ＦＤＡ)以及欧洲药品管理局(ＥＭＡ)都发布了有关药品中遗传毒性杂质控制策略㊁检测方法以及限度要求等指导原则ꎬ多个药品因Ｎ－亚硝基类化合物超出每日允许摄入量被召回[９－１１]ꎮ已报道的Ｎ－亚硝基类化合物主要分为两类ꎬ一类与药物本身结构无关ꎬ在药品生产过程中由残留溶剂等引入ꎬ例如ＮＤＭＡ㊁ＮＤＥＡ等ꎻ一类则直接与药物本身相关ꎬ通常是原料药中的仲胺结构与微量残留的亚硝酸盐反应生成相应的杂质[１２－１４]ꎮＮ－亚硝基普萘洛尔属于上述的第二类杂质ꎬ只在普萘洛尔相关制剂中被发现ꎮ目前尚无该基因毒性杂质检测及限度的相关报道ꎬ本文拟采用超高效液相色谱－串联质谱(ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)建立盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的检测方法ꎬ为盐酸普萘洛尔中遗传毒性杂质检查和质量控制提供参考依据ꎮ１㊀材料１.１㊀仪器㊀Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０－６４７０液相色谱－串联三重四级杆质谱仪(美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司)ꎬ配备电喷雾离子源(ＥＳＩ)和Ｍａｓｓｈｕｎｔｅｒ数据处理系统ꎻＸＰ２０５ＤＲ型电子分析天平(瑞士Ｍｅｔｔｌｅｒ公司)ꎬＭｉｌｌｉ－Ｑ超纯水纯化系统(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀甲醇(质谱级ꎬ美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎ￣图１㊀盐酸普萘洛尔(Ａ)及Ｎ－亚硝酸普萘洛尔(Ｂ)的结构式ｔｉｆｉｃ公司)ꎬ乙腈(质谱级ꎬ美国Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ公司)ꎬ甲酸(质谱级ꎬ德国Ｍｅｒｃｋ公司)ꎬ甲酸铵(质谱级ꎬ美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司)ꎬ水为超纯水ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔对照品(批号:ＰＮ２０２２０３１２ꎬＰＥＲＩＤＡ公司ꎬ纯度９６.８％)ꎬ盐酸普萘洛尔缓释片(市场采购)ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀溶液制备㊀２.１.１㊀标准曲线对照品溶液制备㊀精密称取Ｎ－亚硝基普萘洛尔对照品１０.４３ｍｇꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ加甲醇使溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为对照品储备液ꎮ精密量取对照品储备液０.１ｍＬꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ用甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ精密量取１.０㊁２.０㊁５.０㊁７.０㊁１０.０㊁１０.０ｍＬ上述溶液分别置１００㊁１００㊁１００㊁１００㊁１００㊁５０ｍＬ量瓶中ꎬ用甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为浓度分别约为１.０㊁２.０㊁５.０㊁７.０㊁１０.０㊁２０.０ｎｇ ｍＬ－１的系列线性溶液ꎮ２.１.２㊀供试品溶液制备㊀取本品１０片ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取约相当于盐酸普萘洛尔２０ｍｇ的细粉ꎬ置１５ｍＬ离心管中ꎬ精密加入甲醇５ｍＬꎬ涡旋３ｍｉｎꎬ滤过ꎬ取续滤液作为供试品溶液ꎮ２.２㊀色谱及质谱条件㊀２.２.１㊀色谱条件㊀采用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８(１５０ｍｍˑ３.０ｍｍꎬ１.７μｍ)色谱柱ꎻ以１０ｍｍｏｌ Ｌ－１甲酸铵的水溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ａꎬ乙腈溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ｂꎬ梯度洗脱:０.０~５.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂꎻ５.０~７.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂң７０％Ｂꎻ７.０~９.０ｍｉｎꎬ７０％Ｂꎻ９.０~９.０ｍｉｎꎬ７０％Ｂң５０％Ｂꎻ９.０~１３.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂꎻ流速为０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温为５０ħꎬ进样器温度为５ħꎬ进样体积为１０μＬꎮ２.２.２㊀质谱条件㊀采用电喷雾离子源(ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＳｏｕｒｃｅꎬＥＳＩ)ꎬ正离子检测模式ꎬ干燥气温度为３００ħꎬ干燥气流量为６Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ喷雾电压为３５ｐｓｉꎬ鞘气温度为３５０ħꎬ鞘气流量为１０Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ毛细管电压为４５００Ｖꎮ采集方式为多反应监测(ＭｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒꎬＭＲＭ)模式ꎬ以ｍ/ｚ２８９.２ң７２.２作为定量离子对ꎬ碎裂电压为７８Ｖꎬ碰撞电压为１２Ｖꎬ以ｍ/ｚ２８９.２ң１４５.１作为定性离子对ꎬ碎裂电压为７８Ｖꎬ碰撞电压为１２Ｖꎮ２.３㊀方法学考察㊀２.３.１㊀专属性试验㊀取甲醇作为空白溶剂和 ２.１.１ 项下１ｎｇ ｍＬ－１的对照品溶液ꎬ分别进样ꎬ记录色谱图(见图２)ꎬ在所建立的色谱和质谱条件下ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔的保留时间为６.７４ｍｉｎꎬ峰型良好ꎬ空白溶剂对检测无干扰ꎮＡ.甲醇溶液ꎻＢ.对照品溶液图２㊀甲醇和对照品溶液提取离子流色谱图２.３.２㊀检测限与定量限试验㊀取 ２.１.１ 项下１ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液ꎬ以甲醇为稀释剂逐步稀释ꎬ分别在信噪比(Ｓ/Ｎ)为１０ʒ１和３ʒ１时作为定量限和检测限ꎬ测得Ｎ－亚硝基普萘洛尔的定量限和检测限分别为０.３㊁０.０９ｎｇ ｍＬ－１ꎮ２.３.３㊀线性关系考察㊀精密量取 ２.１.１ 项下系列线性溶液ꎬ进样检测ꎬ记录色谱图ꎮ以Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积Ｙ为纵坐标ꎬ以质量浓度Ｘ(ｎｇ ｍＬ－１)为横坐标进行线性回归ꎬ得Ｎ－亚硝基普萘洛尔的线性回归方程为Ｙ＝２５６３.３８Ｘ－１６１.３８(ｒ＝０.９９９９)ꎬ结果表明在１.０１~２０.１９ｎｇ ｍＬ－１浓度范围内ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系ꎮ２.３.４㊀精密度和重复性试验㊀取 ２.１.１ 项下５.０ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液连续进样６次ꎬ得Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的ＲＳＤ为１.１３％ꎬ结果表明系统精密度良好ꎮ取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ按 ２.１.２ 项下方法平行制备６份供试品溶液ꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量ꎬ计算得６份供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量的ＲＳＤ为３.５８％ꎮ结果表明方法具有良好的重复性ꎮ２.３.５㊀稳定性试验㊀取 ２.１.１ 项下５.０ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液ꎬ放置于进样盘ꎬ分别在０㊁８ｈ进样检测ꎬ结果Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的相对偏差为２.９６％ꎬ结果表明５ħ条件下对照品溶液在８ｈ内稳定ꎻ取 ２.３.４ 项下１份重复性试验供试溶液ꎬ放置于进样盘ꎬ分别在０㊁２㊁５㊁７ｈ进样检测ꎮ结果Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的ＲＳＤ(ｎ＝４)为２.６６％ꎬ结果表明５ħ条件下供试品溶液在７ｈ内稳定ꎮ２.３.６㊀提取效率试验㊀取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ按 ２.１.２ 项下方法平行制备２份供试品溶液ꎬ其中１份涡旋３ｍｉｎꎬ另一份涡旋１０ｍｉｎꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量ꎬ计算得２份供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量相对标对偏差为３.７７％ꎮ结果表明涡旋３ｍｉｎ可提取完全ꎮ２.３.７㊀回收率试验㊀取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取细粉约５７ｍｇ(约相当于盐酸普萘洛尔２０ｍｇ)ꎬ置１５ｍＬ离心管中ꎬ精密加入 ２.１.１ 项下１０ｎｇ ｍＬ－１(高浓度)㊁５ｎｇ ｍＬ－１(中浓度)㊁２ｎｇ ｍＬ－１(低浓度)的线性溶液５ｍＬꎬ涡旋３ｍｉｎꎬ滤过ꎬ取续滤液作为回收率溶液ꎬ每个浓度点平行制备３份ꎬ进样检测ꎬ结果见表１ꎬ低㊁中㊁高浓度点的回收率分别为９８.４％(ＲＳＤ２.７％ꎬｎ＝３)㊁１０１.６％(ＲＳＤ１.１％ꎬｎ＝３)㊁１０３.２％(ＲＳＤ１.５％ꎬｎ＝３)ꎬ结果表明回收率良好ꎮ表１㊀加样回收率结果编号加入量检测量本底回收率平均回收ＲＳＤ５２６.１０６１.７４３５.１８１０１.７６１０１.６１.１２.４㊀样品测定㊀按 ２.１ 项下制备盐酸普萘洛尔缓释片供试品溶液ꎬ照 ２.２ 项下条件进样检测ꎬ记录色谱图ꎬ以峰面积按标准曲线法计算供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的含量ꎬ测得盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量为１.８μｇ ｇ－１ꎮ３㊀讨论由于盐酸普萘洛尔供试品溶液浓度较高ꎬ普萘洛尔峰与Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰需要达到较大的分离度ꎬ才能将普萘洛尔峰切入废液不至于干扰杂质的检测ꎬ所以首先对不同类型的色谱柱进行了考察ꎬ最终选用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８色谱柱ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰型良好ꎬ且可与普萘洛尔峰完全分离ꎬ但两者洗脱时间较长ꎬ为提高实验效率在此基础上对色谱条件进行优化ꎬ增加有机相比例以缩短分析时间ꎻ不同流动相系统对色谱保留和杂质的质谱响应影响非常大ꎬ对流动相系统进行了考察ꎬ当采用乙腈为流动相时体系ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔出峰较快ꎬ且质谱响应增强ꎬ可满足分析的分离度要求ꎮ前期的试验显示Ｎ－亚硝基普萘洛尔在甲醇中易溶ꎬ在乙腈中微溶ꎬ以甲醇－水作为溶剂为较优选择ꎬ但缓释片加极少量水后即成凝胶状无法进样检测ꎬ为保证提取完全和样品检测的准确性ꎬ选择了以甲醇作为溶剂ꎬ以甲醇作为溶剂时ꎬ存在一定的溶剂效应ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰前沿ꎬ峰形变宽ꎬ灵敏度降低ꎬ为此ꎬ采用较大内径的色谱柱ꎬ并增加进样体积至１０μＬꎬ即可满足Ｎ－亚硝基普萘洛尔检测灵敏度的要求ꎮ目前未见Ｎ－亚硝基普萘洛尔的毒理学数据ꎬ暂无明确控制限度ꎬ提示药品研发生产㊁相关科研机构应对杂质进行深入的毒理研究以建立合理的控制限度ꎬ保障用药安全ꎮ４㊀结论本研究建立了盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ检测方法ꎬ并进行了相关方法学验证ꎬ结果表明ꎬ所建立的方法具有良好的专属性㊁灵敏度和准确度ꎬ可准确测定盐酸普萘洛尔缓释片中潜在的Ｎ－亚硝基普萘洛尔的含量ꎬ有助于盐酸普萘洛尔缓释片的市场监管ꎬ保障药品质量安全ꎮ参考文献:[１]㊀ＧＲＥＣＯＡꎬＤᶄＥＲＭＥＡＭꎬＧＡＬＬＡＲＡＴＩＢＺꎬｅｔａｌ.Ａｆｕｒ￣ｔｈｅｒｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｏｆｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｆｏｒｓｅｖｅｒｅｉｎｆａｎｔｉｌｅｈｅｍａｎ￣ｇｉｏｍａｓｏｆｔｈｅｆａｃｅ:ａｎｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＤｅｒｍａｔｏｌＴ￣ｈｅｒꎬ２０１４ꎬ２７(４):１９８－２０２.[２]ＣＨＯＢＡＮＩＡＮＡＶꎬＢＡＫＲＩＳＧＬꎬＢＬＡＣＫＨＲꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｓｅｖｅｎｔｈｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅＪｏｉｎｔｎａｔｉｏｎａｌｃｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎｐｒｅｖｅｎ￣ｔｉｏｎꎬｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎬｅｖａｌｕａｔｉｏｎꎬａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｉｇｈｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ－ＴｈｅＪＮＣ７ｒｅｐｏｒｔ[Ｊ].ＪＡＭＡꎬ２００３ꎬ２８９(１９):２５６０－２５７２.[３]汪传辉.普萘洛尔在临床上的合理应用[Ｊ].中国药业ꎬ１９９７(１０):２７－２８.[４]ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ.Ｐｆｉｚｅｒｒｅｃａｌｌｓｄｅｒａｌ－ＬＡ(ＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏ￣ｃｈｌｏｒｉｄｅ)ｃａｐｓｕｌｅｓｄｕｅｔｏａｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｙ[Ｊ/ＯＬ].[２０２１－０３－０１].ｈｔｔｐｓ://ｒｅｃａｌｌｓ－ｒａｐｐｅｌｓ.ｃａｎａｄａ.ｃａ/ｅｎ/ａｌｅｒｔ－ｒｅｃａｌｌ/ｐｆｉｚｅｒ－ｒｅｃａｌｌｓ－ｉｎｄｅｒａｌ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ－ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ－ｃａｐｓｕｌｅｓ－ｄｕｅ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕｒｉｔｙ＃ｗｂ－ａｕｔｏ－２. [５]ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ.Ｉｎｄｅｒａｌ－ＬＡ:ＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅＩｍｐｕｒｉｔｙ[Ｊ/ＯＬ].[２０２１－０３－０２].ｈｔｔｐｓ://ｒｅｃａｌｌｓ－ｒａｐｐｅｌｓ.ｃａｎａｄａ.ｃａ/ｅｎ/ａｌｅｒｔ－ｒｅｃａｌｌ/ｉｎｄｅｒａｌ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕｒｉｔｙ. [６]ＡＮＤＲＺＥＪＥＷＳＫＩＰꎬＫＡＳＰＲＺＹＫ－ＨＯＲＤＥＲＮＢꎬＮＡＷＲＯＣＫＩＪ.ＴｈｅｈａｚａｒｄｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ(ＮＤＭＡ)ｆｏｒｍａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｗａｔｅｒｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇｏｘｉｄａｎｔｓ[Ｊ].Ｄｅｓａｌｉｎａｔｉｏｎꎬ２００５ꎬ１７６(１/２/３):３７－４５. 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盐酸普萘洛尔片原研处方工艺分析1.概述20世纪60年代英国科学家詹姆斯?布莱克开发了普萘洛尔，后因此及其他工作而获得诺贝尔奖。
本品1965年由ICI公司（即阿斯利康公司）以商品名心得安上市销售。
用于（1）作为二级预防，降低心肌梗死死亡率。
（2）高血压(单独或与与其它抗高血压药合用)。
（3）劳力型心绞痛。
（4）控制室上性快速心律失常、室性心律失常，特别是与儿茶酚胺有关或洋地黄引起心律失常。
可用于洋地黄疗效不佳的房扑、房颤心室率的控制，也可用于顽固性期前收缩，改善患者的症状。
（5）减低肥厚型心肌病流出道压差，减轻心绞痛、心悸与昏厥等症状。
（6）配合a受体阻滞剂用于嗜铬细胞瘤病人控制心动过速。
（7）用于控制甲状腺机能亢进症的心率过快，也可用于治疗甲状腺危象。
原料药性质解离常数：pKa = 9.45在各pH值溶出介质中的溶解度：pH1.2：0.04g/mlpH4.0：0.06g/mlpH6.8：0.1g/ml水：0.1g/ml在各溶出介质中的稳定性：水：未测定；在各pH值溶出介质中：未测定。
光：遇光略有变色。
BCS分类：Ⅰ类2.上市情况国内盐酸普萘洛尔片有75个文号，规格均为10mg。
无进口药品。
无进口本地化产品。
在美国、加拿大和日本等国已上市。
国外有多个规格，包括10mg、20mg、40mg、60mg和80mg。
3.原研情况FDA参比制剂为PLIVA公司的盐酸普萘洛尔片，规格为80mg：阿斯利康的原研产品在日本上市，商品名为INDERAL，规格10mg，为日本的参比制剂：盐酸普萘洛尔片，国内无进口产品，无进口本地化产品。
原研制剂在日本上市，规格为10mg。
国内一致性评价建议选择日本的INDERAL作为参比制剂。
4.处方工艺分析制剂处方处方来源：日本，阿斯利康公司的INDERAL规格：10mg；片芯组成：甘露醇，明胶，硬脂酸和硬脂酸镁。
制剂工艺为湿法制粒、压片。
国内处方工艺名称 86.25万片盐酸普萘洛尔 34.5kg淀粉 47.5kg糖粉 8.6kg糊精 4.3kgL-HPC 8.6kg6%淀粉糊60kg±干混3--5分钟结合剂 6%淀粉糊70~80℃干燥，18目整粒外加干燥滑石粉： 2% 微粉硅胶： 1% 羧甲基淀粉钠 2% 片重 0.130g片型 7mm圆。
仿制药一致性评价一：背景信息1) 2016年2月6日，国务院颁布了国办发【2016】8号文件“国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见”，随后国家又在短时间内连续颁布了一系列关于仿制药一致性评价工作的相关文件和指南，真正拉开了仿制药产品质量和疗效一致性评价工作的序幕。
2) 根据国家仿制药一致性评价政策和时限要求，289种基本药物要求在2018年底完成评价，其他仿制药产品若能成为“首名”或“前三名”，对市场和经济意义重大。
否则，则存在较大风险失去市场甚至文号不保。
二：认识与建议虽然国家提出了明确的时间要求和评价原则，但当前的法规并不具体，企业左右为难。
公司基于长期从事药政法规研究的工作经验，我们对本轮要求的认识如下：1) 不等不靠、主动研究。
2) 要充分重视对产品的信息回顾与整理，重视仿制药评价的整体策划，为开展研究工作打基础。
3) 重视药学研究。
仿制药研究的重点是药学部分，也是国家评价仿制药质量的重要内容，CMC是重中之重，必须先行。
4) 时间紧迫仿制药一致性评价，尤其是基本药物的评价看起来还有2年多时间，实际分解后留给企业的时间已经非常紧张，即使一切顺利也需要20-25个月。
5) 逐步开展，分段进行。
仿制药一致性评价是一个综合工程，链条长，费用高。
尤其是早年完成注册的产品，注册研究与申报资料更加薄弱，适合先初步摸索产品质量现状再进行系统深入的研究。
6) 仿制药一致性评价应分为四个阶段开展三：优势与业绩仿制药一致性评价工作是一个系统工程，需要完整的服务链条和资源配置，包括CMC研发实验室、动物GLP实验室、BE临床实验基地、生化分析实验室和注册服务团队，以及良好的公共资源，并且各个环节都要有经验丰富的技术团队与完善的质量管理体系，要经得起注册现场核查与临床现场核查。
1) 咨询拥有的优势包括以下几方面：✔建立了高水平配置的国家级CMC研发实验室，拥有专业的研发人员和十多年药品研发经验，为中国三大医药技术研究成果转化平台之一，国家基本药物标准溶出度曲线制作承担单位之一；✔合作动物GLP实验室，比格犬等大动物试验不是问题；✔集团内拥有BE临床试验基地与通过FDA审计的生化分析实验室（海口、长春、南京3个BE基地），BE试验优先快速安排；✔18年丰富经验的注册团队，轻松化解技术难题。
国家药监局关于修订普萘洛尔片剂说明书的公告文章属性•【制定机关】国家药品监督管理局•【公布日期】2021.07.15•【文号】国家药品监督管理局公告2021年第94号•【施行日期】2021.07.15•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】药政管理正文国家药品监督管理局公告2021年第94号国家药监局关于修订普萘洛尔片剂说明书的公告根据药品不良反应评估结果，为进一步保障公众用药安全，国家药品监督管理局决定对普萘洛尔片剂说明书【注意事项】等项目进行统一修订。
现将有关事项公告如下：一、上述药品的上市许可持有人均应依据《药品注册管理办法》等有关规定，按照相应附件要求修订说明书（见附件1、2），于2021年10月14日前报省级药品监督管理部门备案。
修订内容涉及药品标签的，应当一并进行修订；说明书及标签其他内容应当与原批准内容一致。
在备案之日起生产的药品，不得继续使用原药品说明书。
药品上市许可持有人应当在备案后9个月内对已出厂的药品说明书及标签予以更换。
二、药品上市许可持有人应当对新增不良反应发生机制开展深入研究，采取有效措施做好药品使用和安全性问题的宣传培训，指导医师、药师合理用药。
三、临床医师、药师应当仔细阅读上述药品说明书的修订内容，在选择用药时，应当根据新修订说明书进行充分的获益/风险分析。
四、患者用药前应当仔细阅读药品说明书，使用处方药的，应严格遵医嘱用药。
五、省级药品监督管理部门应当督促行政区域内上述药品的药品上市许可持有人按要求做好相应说明书修订和标签、说明书更换工作，对违法违规行为依法严厉查处。
特此公告。
附件：1.已通过一致性评价的普萘洛尔片剂说明书修订意见2.未通过一致性评价的普萘洛尔片剂说明书修订意见国家药监局2021年7月15日。
反向解析法在盐酸普萘洛尔片一致性评价中的应用柏植政1，周卫2，丁逸梅1，3*1南京工业大学药学院，南京210009;2中国药科大学，南京210009；3南京工业大学江苏省药物研究所有限公司，南京210009盐酸普萘洛尔是一种合成的β-肾上腺素能受体阻断剂，于1966年由阿斯利康公司开发上市，广泛用于治疗高血压、心绞痛、心律失常，作为辅助治疗甲状腺毒症，以及降低心肌梗死急性期的心血管死亡风险。
根据国家食品药品监督管理总局（CF -DA ）对于仿制药一致性评价的要求，盐酸普萘洛尔属于CFDA 发布豁免生物等效性（BE ）的药品。
药物辅料的种类及用量可能会影响药物的吸收速率和吸收程度，特别对低渗透性药物的吸收影响更显著。
因此，仿制制剂研究者通常采用与参比制剂保持相同的辅料组成和用量的策略。
根据前期对盐酸普萘洛尔片原研产品的处方研究，获知硬脂酸/硬脂酸镁比例为体外溶出一致的关键参数。
本研究旨在利用衍生化气相色谱和原子吸收测定硬脂酸与硬脂酸镁比例，反向解析原研产品处方，为盐酸普萘洛尔仿制药通过一致性评价提供参考。
1仪器与试药气相色谱仪（岛津GC-2014）；溶出仪（RC806，紫外分光光度计）。
硬脂酸对照品（批号：BCBP3246V ，纯度≥98.5%），棕榈酸对照品（批号：SLBQ8869V ，纯度≥99%），镁对照溶液（批号：BCBL4523V ）均为Sigma公司产品；盐酸普萘洛尔总混颗粒（批号：20170301），盐酸普萘洛尔自制片[0301-1批（0.5+2.0），0302-1批（0.5+1.5），0302-2批（0.4+2.0）]均由中国药科大学药剂教研室提供；盐酸普萘洛尔参比片（日本AstraZeneca 公司，10mg ，04360）；甲醇为色谱纯；正己烷、氯化钠、硫酸钠及三氟化硼-甲醇均为分析纯。
2方法与结果2.1衍生化气相色谱法（测定总硬脂酸含量）[1，2]2.1.1溶液配制对照品溶液的配制：精密称取硬脂酸对照品约10mg 、棕榈酸对照品约10mg ，置锥形瓶中，精密加入三氟化硼-甲醇溶液5mL ，振荡溶解，水浴回流20min ，放冷，加入正己烷15mL ，完全转移至分液漏斗中，加入10mL 水，加入10mL 饱和氯化钠溶液，振摇至分层，弃去下层（水层），正己烷层加入无水硫酸钠6g ，振摇，静置3min ，正己烷层完全转移至25mL 量瓶中，用正己烷稀释定容。
供试品溶液的配制：精密称定原研片粉约800mg ，置锥形瓶中，精密加入三氟化硼-甲醇溶液5mL ，振荡溶解，水浴回流20min ，放冷，加入正己烷15mL ，完全转移至分液漏斗中，加入10mL 水，加入10mL 饱和氯化钠溶液，振摇至分层，弃去下层（水层），正己烷层加入无水硫酸钠6g ，振摇，静置3作者简介柏植政,男,在读硕士生E-mail:2656397589@ 通讯作者丁逸梅,女,研究员E-mail:jsyws@ 收稿日期2017-04-19修回日期2018-03-15*179min ，正己烷层完全转移至25mL 量瓶中，用正己烷稀释定容[3，4]。
2.1.2色谱条件色谱柱：HP-INNOWAX （30m ×0.32mm ，0.25μm ）；载气：氮气；流速：1.0mL ·min -1；进样口温度为250℃，检测器温度为260℃，升温程序：起始温度为170℃，维持2min ，以每分钟10℃的速率升温至240℃，保持，使色谱图记录至除溶剂峰外第二个主峰保留时间的3倍，硬脂酸甲酯峰与棕榈峰甲酯峰分离度应大于5.0；进样体积：1μL 。
[5]2.1.3专属性试验取对照品溶液和供试品溶液，在“2.1.2”色谱条件下进样。
见图1。
2.1.4线性范围分别精密称定硬脂酸与棕榈酸对照品各7、8、10、12、13mg ，置锥形瓶中，按照“2.1.1”项下操作配制成含硬脂酸与棕榈酸56~104μg ·mL -1系列浓度对照品溶液。
分别以硬脂酸、棕榈酸浓度C （μg ·mL -1）为横坐标，以峰面积A 为纵坐标，进行线性回归。
结果表明，该方法检测的硬脂酸与棕榈酸均在56~104μg ·mL -1范围内，峰面积线性关系良好[2]，见表1。
为最低检测限，信噪比为S/N=10为定量限。
结果表明硬脂酸、棕榈酸在本色谱条件下最低检测限为0.2μg ·mL -1。
2.1.6进样精密度、稳定性和重复性试验取对照品溶液，连续进样5次，计算得硬脂酸峰面积的RSD 为3.68%，棕榈酸峰面积的RSD 为4.15%。
取对照品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8h 进样，计算得硬脂酸面积的RSD 为4.36%，棕榈酸面积的RSD 为4.65%，结果表明，本品溶液在8h 内稳定。
取供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8h 进样，计算得硬脂酸峰面积的RSD 为5.87%，棕榈酸峰面积的RSD 为5.71%，结果表明，本品溶液在8h 内稳定。
精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉（04360批）6份，按“供试品溶液制备”方法操作，分别进样测定，计算得硬脂酸含量的RSD 为4.89%，棕榈酸含量的RSD 为3.62%。
2.1.7回收率试验精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉约400mg 共9份，分别精密加入硬脂酸、棕榈酸对照品适量，配制成低、中、高浓度溶液（70%、2.1.8样品的含量测定精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉（10mg/片）约800mg ，按照“2.1.1”项下操作，测得硬脂酸含量为1.253%，棕榈酸含量为1.24.%。
从硬脂酸和棕榈酸的比例可以判断本品采用的是硬脂酸50。
图1棕榈酸及硬脂酸HPLC 图(A )对照品;(B )供试品;(C )空白组溶液180图2不同处方的溶出结果2.2原子吸收法（测定镁离子的含量）2.2.1光学参数镁灯，波长（nm）：285.2；狭缝宽（nm）：0.7；点灯方式：BGC-D2；原子化器/气体流量设定：燃气流量（L·min-1）：1.8；助燃气流量（L·min-1）:15.0；火焰类型：Air-C2H2；燃烧头高度（mm）：7.0[6]。
2.2.2溶液配制对照品溶液的配制：精密量取1mg·mL-1镁离子标准溶液适量，用0.01mol·L-1盐酸分别稀释配制成0.5、2.0、5.0、10、20μg·mL-1的系列标准溶液。
供试品溶液的配制：精密称取样品粉末约12mg，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5~1.0mL恰使润湿，低温加热至硫酸除尽，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500~600℃炽灼至完全灰化，放冷，用0.01mol·L-1盐酸完全转移至50mL量瓶中，稀释定容[7]。
2.2.3线性范围取镁离子系列标准溶液，依法测定，以镁离子浓度C为横坐标，以吸收值A为纵坐标，进行线性回归。
结果表明，该方法检测的镁离子在0.5~20μg·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为A=1.2527×C+3.6714×10-3，γ=0.9992。
2.2.4镁离子的含量测定精密称取盐酸普萘洛尔参比片粉约12mg，依法制备供试品溶液，测定镁离子含量为0.02125%。
由硬脂酸、棕榈酸及镁含量测定结果判断，辅料硬脂酸50使用为1.5%~2.0%，硬脂酸镁的使用量为0.4%~0.5%。
2.3不同硬脂酸与硬脂酸镁比例处方溶出曲线的比较2.3.1不同比例处方设计根据反向解析结果，设计不同硬脂酸与硬脂酸镁比例处方进行压片。
见表3。
2.3.2溶出曲线的测定选择日本橙皮书“盐酸普萘洛尔片”项下最具区分力的pH1.2溶液为溶出介质条件，对上述处方片剂进行溶出曲线比较。
溶出条件为：桨法，50r·min-1；500mL介质；37℃水温；溶出介质：pH1.2溶液（精密称取氯化钠14.01g，加水7000mL，加盐酸49mL），分别于5、10、15、20、30、45min取样，以紫外分光光度法进行测定，波长为290nm。
2.3.3溶出曲线比较分别测定盐酸普萘洛尔参比片（04360批）、盐酸普萘洛尔自制片（中国药科大学药剂教研室提供）0301-1批（0.5+2.0）、0302-1批（0.5+1.5）、0302-2批（0.4+2.0）溶出曲线，计算f2值。
f2值分别为：83.74、77.31和90.0。
拟合度均大于50，其中0302-2批处方最佳，溶出行为与参比制剂基本一致。
溶出曲线见图2。
2.44种介质条件下0302-2（0.4+2.0）批自制片与原研片溶出曲线的比较pH1.2溶液：桨法，50r·min-1；900mL介质；37℃水温；溶出介质：pH1.2溶液（精密称取氯化钠14.01g，加水7000mL，加盐酸49mL，即得）。
pH4.0溶液：桨法，50r·min-1；900mL介质；37℃水温；溶出介质：pH4.0溶液（取3.0g乙酸，用水稀释至1000mL，称取三水乙酸钠3.4g用水稀释至500mL，用该溶液调节乙酸液pH4.0±0.05，即得）。
pH6.8溶液：桨法，50r·min-1；900mL介质；37℃水温；溶出介质：pH6.8溶液（取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水溶解并定容至1000mL，测定pH值，调节pH值至pH6.8±0.05，即得）。
水：纯水900mL，37℃；桨法，50r·min-1。
分别于5、10、15、20、30、45min取样，以紫外分光光度法进行测定，波长为290nm。
分别测定盐酸普萘洛尔参比片、盐酸普萘洛尔自制片溶出曲线，见图3，f2值见表4。
拟合度均大于50，溶出行为与参比制剂基本一致。
3讨论与小结实验中甲酯化试剂三氟化硼-甲醇溶液在空气中遇湿气立即水解，分解时生成剧毒的氟化物烟雾，毒性大、配制过程中须在毒气柜中操作。
硬脂酸镁呈疏水性，颗粒表面是凸凹不平的，硬脂酸镁会填充到小坑中，包裹在药物的表面，起到了润滑的作用。
由于其疏水性，混合时间过长，阻滞药物从固体剂型中溶出，影响药物崩解和溶出。
本文以反向解析法确定参比制剂中硬脂酸与硬脂酸镁的比例，181图3不同介质条件下自制片与原研片的溶出曲线(A )pH1.2;(B )pH4.0;(C )pH6.8;(D)水Application of Reverse Analytical Method in the Evaluation of Propranolol Hydrochloride Tablets ConsistencyBAI Zhizheng 1,ZHOU Wei 2,DING Yimei 1,3*1School of Pharmacy,Nanjing University of Technology,Nanjing 210009,China ;2China Pharmaceutical U 鄄niversity,Nanjing 210009,China ;3Jiangsu Institute of Pharmaceutical Research,Nanjing University of Technology,Nanjing 210009,ChinaABSTRACT Objective :To determine the ratio of magnesium stearate/stearic acid in the prescription of propranolol hydrochloride tablets by a reverse analytical method,and to guide the consistency evaluation of prescription.Methods:A derivative gas chromatography -atomic absorption method was used to reversely analyze the original prescription.The ratio of magnesium stearate/stearic acid was determined and the prescription was studied.Results:The specificity of the derivatized gas chromatography was good.The linearity was good for stearic acid in the range of 56-104μg ·mL -1(γ=0.9991)with the average recovery at 90.06%(RSD=4.02%),and for palmitic acid in the range of 56-104μg ·mL -1(γ=0.9992)with the average recovery at 90.12%(RSD=3.97%).With the atomic absorption method,magnesium ion concentration was linear in the range of 0.5-20μg ·mL -1.The dissolution profile of self-made tablets based on the reversely analyzed ratio of stearic acid/magnesium stearate was comparable to that of the original ones with f 2value up to 90.0.Conclusion:The reverse analysis of the key indicators of stearic acid/magnesium stearate ratio can effectively guide the prescription of propranolol hydrochloride tablets.KEY WORDS reverse analytical method;propranolol hydrochloride;derivatization gas chromatography;AAS;stearic acid;magnesium stearate此方法可运用于仿制药的处方工艺摸索,为其处方制定开拓新的思路。
