骨髓基质细胞移植冶疗大鼠脑缺血的实验研究

临床医学研究与实践2021年2月第6卷第6期综述DOI :10.19347/ki.2096-1413.202106064基金项目：国家自然科学基金委员会资助项目（No.81903949）；浙江省基础公益研究计划项目（No.LQ19H290004）。

作者简介：戚亚钦（1999-），女，汉族，浙江绍兴人。

研究方向：临床医学。

*通讯作者：方燕，E -mail :fangyan@.间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs ）是具有自我更新能力并表现出多向分化潜能的成体非造血干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪、外周血、脐带、胎儿组织、肌肉等中。

MSCs 具有来源丰富、获取方便、增殖率高等特点，已成为组织工程和临床研究的理想种子细胞[1]。

近年来，随着国内外对MSCS 的研究越来越深入，以MSCs 为基础的细胞移植替代治疗显现出良好的效果，MSCs 在临床试验中的安全性和有效性也已得到了更好的证明[2]。

1MSCs 的临床应用1.1MSCs 在神经系统疾病中的临床研究与应用目前，许多神经系统疾病如缺血、缺氧性脑病、恶性脑胶质瘤、神经系统退行性病变等仍无有效治疗方法，预后较差。

脑缺血后神经元的坏死将导致永久性神经功能缺陷，现有治疗手段尚不能逆转神经元和神经胶质细胞变性引起的神经功能障碍[3]。

MSCs 通过旁分泌作用，增加神经生长因子和脑源性神经营养因子的释放，促进神经障碍中丢失或损坏的神经元的恢复，减少神经元细胞的凋亡[4]。

MSCs 还可通过增加血管生成因子的分泌，促进病灶区新生血管生成；通过抑制血管内皮的凋亡和氧化应激，减少血管炎性损伤，增加脑血管的完整性[5]。

Xu 等[6]通过建立缺血缺氧性脑病的大鼠模型，证实MSCs 的脑内移植可减小脑梗塞体积，有效改善神经损伤，进而改善大鼠运动功能，为临床进一步研究提供实验依据。

但研究发现，缺血区局部不利的微环境使得能够迁移并存活在损伤区的MSCs 数量很少，严重限制了MSCs 的应用前景[7]。

骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化的研究进展
张在金;董艳;卢亦成
【期刊名称】《中华国际医学杂志》
【年(卷),期】2003(3)5
【摘要】骨髓基质细胞,与胚胎干细胞一样具有多向分化潜能,在一定条件诱导下,可以跨谱系分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝脏细胞、神经干细胞,并可生成神经元及神经胶质细胞等,脑内移植骨髓基质细胞能改善帕金森病大鼠模型的旋转和缺血小鼠的功能恢复.骨髓取材方便,骨髓基质细胞体外扩增后,进行基因工程修饰或诱导分化为神经干细胞进行自体移植,不存在免疫排斥反应,是干细胞移植治疗脑损伤和神经退行性变的理想材料,有广阔的应用前景.
【总页数】3页(P431-433)
【作者】张在金;董艳;卢亦成
【作者单位】第二军医大学长征医院神经外科,中国,上海,200003;第二军医大学长征医院神经外科,中国,上海,200003;第二军医大学长征医院神经外科,中国,上海,200003
【正文语种】中文
【中图分类】Q421
【相关文献】
1.骨髓基质细胞在传代与诱导分化为神经细胞过程中hes1和mash1基因的表达变化 [J], 蔚洪恩;王春芳;李鹏飞;王晓霞;李静;王晋丽;索耀君
2.骨髓基质细胞分离培养、体外向神经细胞诱导分化及其在中枢神经系统疾病中的研究进展 [J], 刘巧云;易黎
3.大鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究 [J], 郭闻师;任甫;罗俊生;关宁
4.骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的研究进展 [J], 王倩;于娜;黄瑾
5.骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化的研究进展 [J], 李苏;王顺和
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《丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及机制研究》篇一一、引言脑缺血再灌注损伤是临床常见的神经系统疾病，其病理机制复杂，涉及多种细胞因子和信号通路的相互作用。

丁苯酞作为一种具有广泛药理活性的化合物，近年来在神经保护领域备受关注。

本研究旨在探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其潜在机制。

二、材料与方法1. 实验动物与分组实验选用健康成年SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、丁苯酞预处理组和对照组。

2. 脑缺血再灌注模型建立采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型。

3. 丁苯酞预处理及给药方式在模型建立前，丁苯酞预处理组大鼠接受丁苯酞预处理。

4. 神经功能评分及指标检测通过观察大鼠的神经功能评分、脑组织病理学检查、神经元凋亡检测等指标，评估各组大鼠的神经功能恢复情况。

5. 实验设计与统计学分析实验设计遵循随机、对照、重复的原则，数据采用SPSS软件进行统计分析。

三、实验结果1. 神经功能评分丁苯酞预处理组大鼠的神经功能评分明显低于模型组，提示丁苯酞预处理能够显著改善大鼠的神经功能。

2. 脑组织病理学检查丁苯酞预处理组大鼠的脑组织病理学改变较模型组轻微，提示丁苯酞预处理对脑组织具有保护作用。

3. 神经元凋亡检测丁苯酞预处理组大鼠的神经元凋亡率较低，表明丁苯酞预处理能够抑制神经元凋亡。

4. 机制研究通过检测相关信号通路及细胞因子的表达，发现丁苯酞预处理可能通过抑制炎症反应、抗氧化、调节细胞凋亡等途径发挥神经保护作用。

四、讨论本研究结果表明，丁苯酞预处理能够显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，减轻脑组织病理学改变，抑制神经元凋亡。

机制方面，丁苯酞可能通过抑制炎症反应、抗氧化、调节细胞凋亡等途径发挥神经保护作用。

这些发现为丁苯酞在神经保护领域的应用提供了理论依据。

然而，本研究仍存在一定局限性。

首先，实验样本量较小，可能影响结果的稳定性。

其次，实验未对丁苯酞的最佳预处理时间及剂量进行深入探讨。

骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血的疗效评价目的：观察静脉注射骨髓基质细胞（BMSC）治疗大鼠局灶性腦缺血的疗效。

方法：取健康Wistar大鼠45只，雌雄不限，随机分为骨髓基质细胞组（治疗组），生理盐水组（实验对照组）和空白对照组。

Fridenshtein方法分离培养骨髓基质细胞，免疫细胞化学法鉴定骨髓基质细胞，改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）1 h模型。

栓塞24 h后，治疗组股静脉注射经BrdU标记的终浓度为3×106个/ml骨髓基质细胞1 ml，实验对照组股静脉注射1 ml生理盐水，空白对照组股静脉不注射。

采用免疫组化法检测脑内BrdU阳性细胞的表达，神经功能损伤评分（NSS）检测大鼠神经系统功能，进行疗效评价。

结果：免疫细胞化学方法鉴定骨髓基质细胞为CD34（-），CD54 （+）、CD106（+）、CD44（+）。

栓塞后3，7，14 d在缺血侧半球可以发现大量BrdU阳性细胞，对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。

治疗组和两个对照组相比各时间点的神经功能评分均偏小，在栓塞14 d时有显著性差异(P＜0.05)。

结论：骨髓基质细胞（BMSC）静脉注射后大鼠的神经功能明显得到了恢复，故认为静脉注射骨髓基质细胞治疗局灶性脑缺血简便易行，并且有效。

标签：骨髓基质细胞；静脉注射；大鼠局灶性脑缺血；疗效评价脑血管病是严重危害人类健康和生存质量的常见病和多发病。

近年来，随着人们生活水平的提高，饮食习惯的改变，脑血管病的患病率和死亡率均明显上升。

其中，脑梗死占很大比例。

然而，迄今为止，脑梗死的临床治疗方法虽然繁多，但效果却都不理想，即便是存活，也常常遗留偏瘫、功能障碍等严重残疾，极大地影响了患者的生存质量，也给家庭、社会带来了沉重的负担。

因此，如何提高脑梗死的治疗效果，已成为当前一个重要的临床课题。

而骨髓基质细胞（BMSC）作为一种非造血干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能。

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。

在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。

本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。

因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。

近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。

细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。

其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。

具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。

通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。

经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。

在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。

这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。