实验八 霉菌形态观察
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实验八 霉菌的形态观察
一、实验原理
霉菌的营养体是分枝的菌丝体。霉菌在潮湿条件下生长繁殖长出丝状、绒毛状或蜘蛛网
状的菌丝体。菌丝分为营养菌丝与气生菌丝，营养菌丝匍匐于培养基的表面或生于培养基内
吸收养料，从营养菌丝上长出伸于空中的菌丝为气生菌丝系，可分化出产生孢子的结构。菌
丝的直径一般比细菌和放线菌大得多。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的有横隔膜将菌丝分
割为多个细胞，有的菌丝无横隔膜整个菌丝体为1个单细胞。霉菌的菌落形态较大，质地较
疏松，颜色各不相同。霉菌无性繁殖或有性繁殖可形成不同类型的孢子。菌丝、孢子及菌落
等特征，因霉菌的种类而异，因而为种类鉴定非常重要的依据。
由于霉菌的菌丝体较粗，而且孢子容易飞散，若在水中溶易变形，显微测量时与实际值
存在人为偏差，故观察时将其置于棉蓝乳酚油中，既有保持其正常的形态、使细胞不易干燥
及杀菌防腐作用，还因棉蓝染料的存在而对菌丝与孢子具有染色作用，真菌的显微观察时常
用棉蓝乳酚油作为浮载剂。
二、主要仪器及设备
曲霉(Aspergillus sp．)，青霉(Penicillium sp．)，根霉(Rhizopus sp．)；
棉蓝乳酸油染色液，载玻片，盖玻片，解剖针，滤纸，显微镜等。
三、操作步骤
1、取95%酒精浸泡的载玻片1块，火焰烧去酒精；
2、冷却后在载玻片中央滴棉蓝乳酚油1滴；
3、以解剖针从霉菌菌落上挑少许菌丝体置于染液中；
4、以解剖针使菌丝体在染液中充分展开；
5、将1洁净的盖玻片盖于染液上，以滤纸吸去盖玻片边缘过剩的染液；
6、显微镜下20X、40X物镜观察绘图。
四、注意事项
1、菌丝体在浮载剂中必须充分展开；
2、盖盖玻片时必须斜着缓慢放下，否则在盖上异形成气泡。
五、实验报告
1、绘制有隔菌丝与无隔菌丝图
2、绘制青霉菌及曲霉菌的分生孢子梗图。
3、霉菌显微观察制片与细菌有何不同？
实验八 霉菌形态观察
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II 四大类细胞型微生物的菌落特征比较观察
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
一 目的要求
1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二 实验原理
1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。因此，在观察时要注意菌 丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？
3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养 基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌
的重要依据。
三 实验材料
1．菌种
（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;
（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;
（3）白色链霉菌、红色链霉菌
2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四 内容与步骤
1．酵母菌
(1)菌落特征和菌苔特征的观察。观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色 等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。取斜面培养的啤酒酵母、面包酵母、热带假 丝酵母观察菌苔特征。
从富含淀粉质的土壤中筛选到1株耐酸性α-淀粉酶的产生菌株ZY8，经初步鉴定为黑曲霉。。并对其液态发酵条件进行了研究，产酶适宜培养基为可溶性淀粉50g/L，柠檬酸氢二铵20g/L，KH2PO43g/L，CaCl20.1g/L，FeSO·47H2O0.01g/L，MgSO·47H2O
1g/L。以2%的接种量在30℃、120r/min、初始pH4.0的条件下培养72h，酶活力达到19.86U/mL。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1分离样品
富含淀粉质的土壤。
1.1.2培养基
富集培养基：可溶性淀粉20g/L，KNO3
2g/L，MgSO4·7H2O1.2g/L，KH2PO42.7g/L，青霉素5×104单位，链霉素5×104单位，pH3.0。
分离培养基：可溶性淀粉20g/L，KNO3
2g/L，MgSO4·7H2O1.2g/L，KH2PO42.7g/L，琼脂15g/L~20，pH3.0。 鉴定培养基：采用察氏培养基。
产孢子培养基：马铃薯200g/L，蔗糖（或葡萄糖）20g/L，琼脂15g/L~20g/L，pH值自然。
产酶基础培养基：可溶性淀粉40g/L，柠檬酸铵10g/L，KH2PO4 3g/L，CaCl20.1g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，
MgSO·47H2O1g/L。
1.2实验方法
1.2.1耐酸性α-淀粉酶产生菌的筛选
初筛：称5g采集的土样加入盛有50mL无菌水的三角瓶中，振荡均匀后，取1mL悬浮液加入100mL富集培养基中，30℃、120r/min振荡培养5d后，转入新鲜培养基，重复操作数次。将培养好的1mL富集培养液经适当稀释后涂布在分离培养基平板上，30℃恒温箱中培养。选择生长快、透明圈直径（H）与菌落直径（C）之比大于1者为初选菌株。
复筛：将初筛菌种接入产酶基础培养基中，30℃、120r/min摇床发酵72h，离心取上清液测酶活。 1.2.2菌种的鉴定
实验七 霉菌的培养和观察
摘要
通过在一定固定环境下培养根霉，毛霉，曲霉，青霉四种霉菌，先通过菌种的外形对其有一个“宏观”的认识，然后再在显微镜低倍或高倍镜下分别观察四种菌的形态，孢子囊及孢子形态，菌丝形态等方面。发现根霉，曲霉和青霉菌丝均有横隔；青霉的分生孢子小梗呈扫帚状等现象。
关键词
土豆培养基（PDA） 分生孢子梗（Conidiophore） 载片培养
一、 实验目的
（1） 学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。
（2） 了解四类霉菌（根霉、毛霉、黑曲霉、青霉）的基本形态。
二、 实验原理
霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色，盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可防腐，乳酸可保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干燥，能防止
孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。
三、 实验器材
1、菌种
根霉（Rhizopus），毛霉（Mucor），黑曲霉（Aspergillus niger），青霉（Penicillium）
2、试剂
马铃薯20g，蔗糖2g，琼脂2g，水100mL，20%甘油等。
3、仪器
分析天平，玻璃棒，三角瓶，小烧杯，加热器，漏斗，纱布，培养皿，载玻片，盖玻片，U 型玻棒，解剖刀，镊子，接种环，移液管，酒精灯，显微镜等。
四、 实验内容
（1） 配制马铃薯培养基
配制200ml马铃薯培养基（PDA），其成分配比及配制方法见附录。灭菌后无菌操作，取培养基分别倒少量于灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。再将这一层培养基用解剖刀切割为若干1cm²左右的琼脂块。
