第四章 外植体的选择、消毒和接种
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⑴外植体的选择和消毒处理:以羌活的幼叶为外植体,经流水冲洗10~20 分钟,再用体积浓度为75% 的酒精浸泡灭菌15~30 秒,然后以无菌去离子水冲洗2~3 次,再将冲洗后的外植体置于质量浓度为0.1%~0.2% 的升汞中,浸泡灭菌5~8 分钟,并用无菌去离子水冲洗3~6次,即得消毒后的外植体;⑵外植体接种:将所述消毒后的外植体切成0.1~0.5cm2 的小块,接种在愈伤组织诱导培养基上,其中每25ml 所述愈伤组织诱导培养基中接种3 小块所述消毒后的外植体;在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m-2. s-1、光照时间为12 h .d-1 的条件下培养10~25 天,在幼叶切口处膨大形成愈伤组织;⑶愈伤组织增殖:将所述愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上,其中每25ml 所述愈伤组织增殖培养基中接种2 块所述愈伤组织;在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m-2. s-1、光照时间为12 h .d-1 的条件下愈伤组织增殖20~35 天,长出乳白色、颗粒状致密性的愈伤组织;⑷愈伤组织的芽诱导:将所述步骤⑶所得到的愈伤组织接种到诱芽培养基上,其中每25ml 所述诱芽培养基中接种2 块所述愈伤组织;在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m-2. s-1、光照时间为12 h .d-1 的条件下培养30~35 天,形成丛生羌活苗;⑸生根诱导:将所述丛生羌活苗分株后转入生根培养基中,其中每25ml 所述生根培养基中接种1 棵所述丛生羌活苗;在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol .m-2. s-1、光照时间为12 h .d-1 的条件下培养20~30 天后,小苗基部出现白色、粗壮短根,并长出完整根系,即得完整再生小苗;⑹育苗基质消毒:将育苗基质在115~121℃温度下进行高温消毒,15~20min 后即得消毒后的育苗基质;所述育苗基质是指腐殖质与珍珠岩按2 :1 重量比混合而成的混合基质;⑺植株移栽:将所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基质中,炼苗后即长成正常羌活植株;所述一棵完整再生小苗种植在所述消毒后的育苗基质10cm2 的范围内。
简述外植体的采集与处理操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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一、实训目的本次实训的主要目的是通过实际操作,掌握外植体的消毒、切割、接种等基本技能,了解植物组织培养的基本原理和操作流程,提高无菌操作能力,为后续植物繁殖和育种工作打下基础。
二、实训时间2023年11月1日三、实训地点植物组织培养实验室四、实训内容1. 外植体的选取与消毒- 选取生长健壮、无病虫害的植物材料作为外植体,如茎段、叶片、芽等。
- 使用70%的酒精对外植体进行表面消毒,时间约30秒。
- 使用无菌水冲洗消毒后的外植体,去除残留的酒精。
2. 外植体的切割- 根据不同的外植体类型,采用不同的切割方法。
- 茎段:将消毒后的茎段切割成1-2cm的小段,保留1-2个腋芽。
- 叶片:将消毒后的叶片切割成0.5-1cm²的小块,背面朝下接种。
- 芽:将消毒后的芽切割成0.5-1cm的小段,保留1-2枚叶原基。
3. 外植体的接种- 将切割好的外植体接种到装有培养基的培养皿中。
- 接种过程中注意保持无菌操作,避免污染。
4. 培养条件的控制- 将接种好的培养皿放置在适宜的温度、光照和湿度条件下进行培养。
- 定期观察外植体的生长状况,调整培养条件。
五、实训结果与分析1. 外植体的生长状况- 经过一段时间培养,大部分外植体成功诱导出愈伤组织或芽。
- 部分外植体由于污染或切割不当等原因未能成功诱导。
2. 原因分析- 污染:在消毒、切割、接种等过程中,如操作不当,可能导致外植体污染。
- 切割:切割不当,如切割过深或过浅,可能导致外植体死亡。
- 培养条件:培养条件不适宜,如温度、光照、湿度等,可能导致外植体生长缓慢或死亡。
六、实训体会1. 无菌操作的重要性- 在植物组织培养过程中,无菌操作至关重要。
任何污染都可能导致外植体死亡或培养失败。
2. 操作技巧的掌握- 在实训过程中,掌握了外植体的消毒、切割、接种等基本操作技巧,为后续的植物繁殖和育种工作打下了基础。
3. 理论与实践相结合- 通过本次实训,将所学理论知识与实际操作相结合,提高了自己的动手能力和实践能力。
《植物组织培养技术》知识清单一、什么是植物组织培养技术植物组织培养技术是在无菌的条件下,将植物的离体器官、组织、细胞或原生质体等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,使其生长、分化并发育成完整植株的技术。
这一技术的核心在于利用植物细胞的全能性,即植物的每个细胞都具有发育成完整植株的潜在能力。
通过特定的培养条件和激素调控,诱导细胞分裂、分化和器官形成。
二、植物组织培养技术的发展历程植物组织培养技术的发展可以追溯到 20 世纪初。
早期的研究者们在探索植物细胞的生理特性时,偶然发现了植物细胞在适宜条件下能够再生出完整植株的现象。
在 20 世纪中叶,随着生物技术的不断进步,植物组织培养技术逐渐成熟。
科学家们能够更精确地控制培养条件,提高培养的成功率,并将其应用于植物的快速繁殖、品种改良等领域。
近年来,随着基因工程技术的发展,植物组织培养技术与基因工程相结合,为植物的遗传改良开辟了新的途径。
三、植物组织培养技术的基本步骤1、外植体的选择与消毒外植体是指用于培养的植物组织或器官。
常见的外植体包括茎尖、叶片、花药等。
在选择外植体时,要考虑其生理状态和来源,通常选择生长旺盛、无病虫害的部位。
选择好外植体后,需要进行严格的消毒处理,以去除表面的微生物,常用的消毒方法有酒精浸泡、次氯酸钠溶液消毒等。
2、培养基的配制培养基是植物组织培养的基础,为外植体提供生长所需的营养物质和激素。
培养基通常包含大量元素、微量元素、有机成分、植物生长调节剂等。
常用的培养基有 MS 培养基、White 培养基等。
在配制培养基时,要按照配方准确称量各种成分,并调节 pH 值至适宜范围。
3、接种将消毒后的外植体接种到培养基上,操作过程要在无菌环境中进行,以防止污染。
4、培养接种后的培养物需要放置在适宜的环境中进行培养。
培养条件包括温度、光照、湿度等。
温度一般在 25℃左右,光照强度和光照时间根据不同的植物和培养阶段进行调整,湿度通常保持在较高水平。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲,植物细胞都具有全能性,能够再生新植株,任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上,不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异,培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功,选择合适的外植体是非常重要的。
(1)选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗,还是进行生物技术研究,培养材料的选择都要从主要的植物入手,选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁,只有选取优良的种质和基因型,离体快繁出来的种苗才有意义,才能转化成商品;生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛,再生能力强,培养后容易成功。
(2)选择适当的时期组织培养选择材料时,要注意植物的生长季节和生长发育阶段,对大多数植物而言,应在其开始生长或生长旺季采样,此时材料内源激素含量高,容易分化,不仅成活率高,而且生长速度快,增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样,则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材,这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片,在不加生长素的培养基中,可自由地生长、分化;而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养,如果在1月至翌年2月间采集,则腋芽萌发非常迟缓;而在3-8月间采集,萌发的数目多,萌发速度快。
(3)选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下,快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2,其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料,则应更小。
材料太大,不易彻底消毒,污染率高;材料太小,多形成愈伤组织,甚至难以成活。
(4)外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系,往往需要反复实验,并要求实验结果具有可重复性。
因此,就需要外植体材料丰富并容易获得。
(5)外植体要易于消毒在选择外植体时,应尽量选择带杂菌少的器官或组织,降低初代培养时的污染率。