植物组织培养-外植体的选择与建立

外植体选择的原则外植体选取的原则是什么?1、选择优良的种质无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质或特殊的基因型。

对材料的选择要有明确的目的，具有一定的代表性，以提高成功的几率，增加其实用价值。

2、选择健壮的植株选取发育正常的器官或组织，再生能力强，组培易成功。

组织培养用的材料，最好是从生长健壮的无病虫的植株上选取发育正常的器官或组织。

因为这些器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后比较容易成功。

此现象可能是由于外植体内部的植物激素水平能够在接种后得以维持所致。

3、选择适宜的部位植物组织培养几乎在植物体的各个部位都获得了成功，这些部位包括茎尖、茎段、皮层及维管组织、髓细胞、表皮、块茎的储藏薄壁细胞、花瓣、根、茎、子叶、鳞茎、胚珠和花药等。

但是不同种类的植物以及同一植物的不同器官对诱导条件反应是不一致的，有的部位诱导分化率高，有的部位很难脱分化，或者再分化频率很低。

4、选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。

若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。

花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。

百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。

叶子花的腋芽培养，如果在1～2月采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3～8月采集，萌发的数目多，萌发速度快。

对于大多数植物而言，应在其生长季节开始时采样。

在生长末期或已进入休眠期时取样，外植体可能对诱导反应迟钝或无反应，较难成活。

5、考虑器官的生理状态和发育年龄一般认为，生理年龄小的幼嫩组织较生理年龄大的成熟衰老组织具有较高的形态发生能力。

随着组织年龄的增加，器官的再生能力逐渐减弱甚至完全失去再生能力。

植物组织培养的完整过程1.选择适宜的母体植物：选择具有优良性状和抗病虫害能力的母体植物，从中选择健康的叶片、茎段等组织作为外植体。

2.外植体的准备：将母体植物采集的叶片或茎段进行无菌处理，去除表面杂菌和泥沙，然后用75%酒精或漂白粉消毒外表。

3.外植体的切割：将无菌环境下的外植体切割成小片，大小约为0.5-1cm，同时尽量保持外植体的干燥，以防止外植体内部水分过多。

4.外植体的接种：将切好的外植体小片接种在含有植物生长激素的无菌培养基上。

培养基通常由无机盐溶液、有机源、糖和植物生长激素等组成，植物生长激素的种类和浓度会影响到后续培养过程中的分化和增殖。

5.分化：外植体接种到培养基后，会经历分化阶段，外植体的组织逐渐增殖和分化为不同种类的细胞，形成生长点。

6.增殖：通过定期的次级培养，子培养、分生器、病毒消除等手段，将外植体中的细胞不断分化和增殖，以便大量生产幼苗。

7.再分化：经过增殖后的外植体，可以再次进行分化，形成茎尖、腋芽或花蕾等器官，以便进一步培养和繁殖。

8.根的诱导：在合适的培养条件下，外植体可以诱导生成根系，这是为了使外植体脱离体外培养环境，继续生长的必要步骤。

9.移栽：当幼苗的根系已经发达足够，可以将外植体移栽到含有适宜营养成分的固体培养基上或直接移植到土壤中，进行实地管理和生长。

10.过程控制：在整个培养过程中，要控制好环境条件，例如温度、湿度和光照等，以保证培养的成功率。

11.病毒清除：植物组织培养中经常伴随着病毒感染问题，可以通过不同的方法对外植体和培养基进行检测和清除，以保证获得健康的植株。

总的来说，植物组织培养是一个复杂的过程，需要严格的无菌操作和合适的培养条件。

它广泛应用于植物的繁殖、遗传改良、新品种选育以及病毒和细菌的清除工作中，对推动植物学研究和农业生产具有重要的意义。

简述外植体的采集与处理操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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植物组织培养的工作流程
植物组织培养是一种常用的植物繁殖和研究方法，其工作流程包括以下几个主要步骤：
1.材料准备：选择适宜的原植物材料，如茎段、叶片、种子等作为外植体。

确保材料的新鲜性和无病原体污染。

2.表面消毒：将外植体进行表面消毒，以去除表面的微生物和杂质。

这可以通过在消毒剂（如酒精、次氯酸钠等）中浸泡、搅拌等方法进行。

3.分离和切割：根据实验需求，将外植体切割成适当大小的组织片段。

可以使用手工切割、离心分离或显微镜下的操作等方法进行。

4.培养基制备：制备适合植物生长和繁殖的培养基。

培养基通常包括基本盐、有机物、维生素、植物激素和其他添加剂。

根据实验需求可以调整培养基成分。

5.外植体接种：将分离和切割好的外植体进行培养基中的接种。

接种可以通过将外植体直接放置于培养基上或将其插入培养基中的凝胶（如琼脂）中进行。

6.培养条件控制：对培养的温度、光照、湿度和气体条件进行控制。

这些条件可以根据不同植物的生长习性和实验要求进行调整。

7.植物增殖和分化：在培养基中，外植体会通过分裂、再生和分化等过程进行植物增殖和不同类型的器官分化。

植物激素的添加和培养条件的调整可以影响生长和分化的过程。

8.增殖体移栽：将培养的增殖体转移到新的培养基或固体培养基中，以促进继续生长和发育。

9.实验分析：通过观察、记录和分析培养组织的生长情况、形态特征、遗传表达等参数，进行实验结果的分析和研究。

植物组织培养重点名词解释：1、植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。

又称为植物离体培养2、外植体（explant）：用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞。

3、愈伤组织（callus）：是指外植体因受伤或在离体培养时，其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。

4、离体生态学（in vitro ecology）：是指研究离体培养环境条件控制的科学，其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件。

5、植物细胞全能性（totipotency）：是指任何携带完整遗传信息的植物活细胞都具有表达其所有遗传信息的能力，能够发育成完整的植株。

胞需经过脱分化和再分化过程才能表现其全能性。

6、脱分化（dedifferentiation）：成熟细胞或分化细胞转变为分生状态（即形成愈伤组织）的过程。

7、再分化（redifferentiation）：成熟细胞或分化细胞脱分化转变为愈伤组织后重新分化成异质细胞的过程。

8、植物茎段培养是指对植物的带有一个以上定芽或不定芽的外植体（包括块茎、球茎、鳞茎在内的幼茎切段）进行离体培养的技术。

9、茎尖培养（shoot tip culture or apical meristem culture）是指对植物顶端的原分生组织和它衍生的分生组织的培养。

10、叶培养的意义：研究叶形态建成、光合作用、叶绿体形成等；叶细胞全能性；原生质体融合；无性繁殖系；诱变育种。

11、离体叶组织发育途径：直接产生不定芽，由愈伤组织产生不定芽，胚状体和其他。

12、植物器官培养是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。

13、植物胚胎培养是指对植物的胚、胚乳、胚珠和子房等进行离体培养，使其发育成完整植株的技术。

包括：胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

14、胚乳培养是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术15、胚珠培养是将胚珠从母体分离出来，无菌条件下让其进一步生长发育，使其形成植株的技术。

植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。

从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。

但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。

为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。

（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。

尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。

（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。

若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。

花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。

百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。

叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。

（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。

通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。

如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。

材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。

（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。

因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。

（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。

一、实验目的1. 了解外植体培育的基本原理和操作步骤；2. 掌握外植体消毒、接种和培养的方法；3. 学习观察和记录外植体的生长和发育过程；4. 分析影响外植体生长和发育的因素。

二、实验原理外植体培育是植物组织培养技术的重要组成部分，其原理是利用植物细胞的全能性，将植物体上的器官、组织或细胞分离出来，在人工控制的条件下进行培养，使其分化、生长、发育，最终形成完整的植株。

三、实验材料1. 植物材料：选取生长旺盛、无病虫害的植物器官或组织作为外植体，如叶片、茎尖、根尖等；2. 培养基：MS培养基；3. 消毒剂：70%乙醇、75%酒精、氯化汞；4. 培养容器：无菌培养皿、无菌试管；5. 培养箱：光照培养箱；6. 其他工具：剪刀、镊子、无菌滤纸、无菌水、酒精灯等。

四、实验步骤1. 外植体消毒：将外植体放入70%乙醇中浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3次；再用75%酒精浸泡30秒，取出后用无菌水冲洗3次；最后用氯化汞浸泡5-10分钟，取出后用无菌水冲洗5次。

2. 外植体接种：将消毒后的外植体剪成约1-2cm长的段，接种到MS培养基上。

3. 培养基配置：将MS培养基母液与蒸馏水按比例混合，加入适量的蔗糖和琼脂，搅拌均匀后分装到无菌培养皿中，灭菌冷却备用。

4. 培养条件：将接种好的外植体放入光照培养箱中，温度控制在25-28℃，光照强度为1000-2000勒克斯，每天光照12-16小时。

5. 观察和记录：定期观察外植体的生长和发育情况，记录外植体的形态变化、生长速度、分化情况等。

6. 数据分析：对外植体的生长和发育数据进行分析，探讨影响外植体生长和发育的因素。

五、实验结果与分析1. 外植体形态变化：在培养过程中，外植体逐渐生长、分化，形成愈伤组织、芽和根。

2. 生长速度：外植体的生长速度受多种因素影响，如外植体种类、培养基成分、培养条件等。

3. 分化情况：外植体的分化情况受培养基中植物激素的种类和浓度、光照强度等因素影响。