细菌鞭毛染色及运动型观察

1. 学习并掌握鞭毛染色法。

2. 观察鞭毛的形态和分布。

3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。

二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。

鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。

本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。

三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。

2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。

3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。

四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。

2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。

3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。

4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。

5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。

6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。

7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。

8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。

9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。

10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。

11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。

1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。

2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。

3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。

六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。

这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。

2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。

3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。

七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。

实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。

实验七细菌运动力观察[实验目的]1、了解检查细菌运动力的方法。

2、掌握悬滴法检测细菌的运动力。

[实验原理]鞭毛是细菌的一种特殊结构，是细菌运动器官。

细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定中的重要特征之一。

采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法较复杂烦琐。

采用悬滴法或水封片法（压滴法）直接在光学显微镜下检查活菌是否具有运动能力来判断细菌是否具有鞭毛则快速、简便。

具有运动能力的细菌，可以独立运动，在显微镜下观察时，细菌的真正运动(自动运动)表现为能离开原来位置，不断改变方向的自由地游动。

水的分子运动(布朗运动)也能见于细菌个体，但只能使其在原地摆动，不能远离原来的位置移动。

这种情况，都是外力作用的结果，不是细菌本身的真正运动。

检查细菌的运动力，应用幼年培养物，最好刚从温箱中取出，并在温暖的环境下从速进行。

此外，这种方法也可用来检查微生物对各种化学物质的趋化性。

[实验材料]1、菌种2003Y1，2003Y2(为本实验室分离的菌种)的肉汤培养物2、仪器及其他物品显微镜、接种环、酒精灯、凹玻片、盖玻片、蒸馏水等[实验内容]1、悬滴检查法采用不染色活菌标本来检查其运动能力。

a.不染色标本片的制备取洁净盖玻片一张，用接种环各勾取蒸馏水1-2环于盖玻片四个角，灭菌接种环，再勾取2003Y1或2003Y2幼龄肉汤培养物1-2环于盖玻片中央；另取一干净凹玻片，凹面朝下对角扣于盖玻片上，再将玻片翻转，使菌液液滴向下，即可进行镜检。

若为固体培养物，则需在盖玻片中央先滴上一小滴生理盐水或透明肉汤，再用接种环取待检固体培养物少量(不要过多)，混匀于液滴内即可。

盖玻片四角的蒸馏水起到粘附（使凹玻片和盖玻片紧密吸附）、防止液滴干燥的目的。

b. 镜检因细菌无色透明，与背景无明显的色差，故在观察时视野要稍暗。

10倍镜对光后调整光线使视野变暗。

放上悬滴标本片，先用低倍镜找到液滴边缘（因表面张力的作用，液滴边缘有大量的菌体，便于观察），然后再转换高倍镜对焦观察，一般不必使用油镜观察，必须用时，注意防止压坏盖玻片。

细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。

鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。

关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。

除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。

故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。

通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。

材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。

2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。

3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。

4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。

2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。

3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。

2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。

4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。

在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。

主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。

细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。

采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。

如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。

此法较快速、简便。

悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。

水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。

大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。

有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。

1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。

2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。

3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。

4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。

若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。

5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。

由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。

镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。

细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。

结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。

文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。

细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）2、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征二、实验简介鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。

细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。

压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。

细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。

但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。

于是，便产生了鞭毛染色法。

1958年Rhodes根据Fontana 的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。

试剂分为媒染剂和银染剂。

但是试剂的稳定性低，容易变质。

2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。

该法将媒染剂分为A、B两种。

A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。

这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。

通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。

有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。

三、实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。

1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。

2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。

3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。

二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。

鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。

常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。

三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。

2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。

4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。

四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。

活化后菌种备用。

2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。

将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。

3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。

用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。

将残水沥干或用B液冲去残水。

滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。

待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。

4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。

菌体为深褐色，鞭毛为褐色。

注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。

1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。

2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。

3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。

六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。

2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。