掌握简单染色法和革兰氏染色法的原理及操作步骤

BEIJING SOLARBIO SCIENCE &TECHNOLOGY CO.,LTD细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察1.基本原理（1）简单染色法用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。

常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。

常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。

（2）革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。

碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染BEIJING SOLARBIO SCIENCE &TECHNOLOGY CO.,LTD 液一般是结晶紫。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。

实验三简单染色法和革兰氏染色法实验三简单染色法和革兰氏染色法（一）细菌的简单染色法1实验目的1.1熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能1.2学习微生物涂片、染色的基本技术1.3掌握细菌的简单染色法1.4初步认识细菌的形态特征，学习油镜的使用方法和无菌操作技术2 实验原理细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。

细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。

利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。

此法操作简单，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。

用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。

一般使用碱性染料进行简单染色。

碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。

因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。

经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。

常用作简单染色的燃料有美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等。

酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。

当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。

染色前必须固定细菌，其目的有二：一是杀死细菌并使菌体黏附于玻片上；二是增加对染料的亲和力。

常用的有加热和化学固定两种方法。

固定时尽量维持细胞原有的形态。

3实验材料3.1菌种金黄色葡萄球菌约18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物。

3.2染色剂草酸铵结晶紫染液，番红染液。

3.3仪器或其他用具显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签等。

4 流程涂片干燥固定染色水洗干燥镜检5 步骤5.1涂片在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴生理盐水或无菌蒸馏水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1～1.5cm2。

细菌的简单染色和革兰染色实验报告生32 程雨婧2013012406一、实验目的1、学习无菌操作技术，掌握细菌涂片的制备方法。

2、巩固显微镜油镜的使用方法。

3、掌握细菌简单染色法和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。

二、实验原理细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。

当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电荷的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。

简单染色法就是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法。

革兰氏染色法（Gram Staining）由丹麦病理学家Christian Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别分类为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）这两种类型，是细菌学中最常用的鉴别性染色法。

革兰氏染色法之所以能够将细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是因为这两类菌的细胞壁结构和成分不同。

一般认为革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色，再经番红复染就染成了红色；革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色。

除此之外，革兰染色的差异还应考虑物理结构的不同，例如酵母菌虽然是不是细菌，既不是革兰氏阴性菌，也不是革兰氏阳性菌，但具有革兰染色阳性反应。

三、实验器材1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、酵母菌、待鉴定的未知菌S1和S2。

2、仪器及其他用品：显微镜、酒精灯、打火机、接种环、载玻片、盖玻片、擦镜纸、擦镜液、吸水纸、镜油、无菌牙签。

3、简单染液：结晶紫染液、番红染液。

4、革兰染液：结晶紫染液、革氏碘液、95%乙醇溶液、番红染液四、实验步骤（一）简单染色1、载玻片的处理：从乙醇溶液中取出洗干净的载玻片，用吸水纸擦干，将要涂菌的部位在酒精灯火焰上烤一下，可以去除油脂，冷却待用。

实验三细菌的简单染色和革兰染色一．实验目的1．学习并熟练局部无菌操作2. 学习细菌涂片的制法，掌握细菌简单染色和革兰氏染色的方法3. 进一步熟悉显微镜的使用。

二．实验原理细菌生长时常带负电，所以常用带正电的碱性染料染色。

简单染色就是用一种染料染色的方法。

革兰氏染色可把细菌根据细胞壁成分和结构分为阳性和阴性，阳性菌细胞壁中脂类物质多，染色为紫色；阴性菌细胞壁中脂类物质少，染色为红色。

三．实验材料、仪器与试剂1.菌种：金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌、未知菌，酵母。

2.仪器用品：显微镜、载玻片，盖玻片，擦镜纸，接种环，酒精灯，火柴，镊子，擦镜液，吸水纸，牙签3.试剂：简单染液：草酸铵甲紫染液，蕃红染液革兰氏染液：1) 草酸铵甲紫染液；2) 革氏碘液；3) 脱色液；4) 蕃红染液实验前准备（助教完成）将菌种培育24h。

四．实验步骤（一）简单染色1.取载玻片用纱布擦干，在涂菌面反面画直径2mm左右的小圈，把涂菌部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2.涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从EP管中沾取菌液一滴，在洁净无脂的载玻片上涂涂膜。

取菌过程要在酒精灯附近的无菌环境中进行。

3.晾干：让涂片自然晾干。

4.固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。

5.染色：将固定过的涂片放吸水纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。

6.水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液7.镜检。

（二）革兰染色。

1.制片：取菌液制成涂片：干燥，固定。

2.初染：滴加1滴结晶紫色染液，1min，水洗。

3.媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。

4.脱色：吸去残留水，滴加脱色液至流出液无紫色，立即水洗。

5.复染：滴加蕃红复染3min，水洗。

6.镜检：用吸水纸吸干，盖上盖玻片，从低倍镜到油镜依次观察。

注意细菌形态、大小、排列、颜色。

7.拍照。

（三）选做实验往干净的载波片上滴加半滴水，用无菌牙签取一点牙垢，涂抹在水滴上，制成涂片，革兰染色。

细菌的简单染色与革兰氏染色实验报告(共4篇)细菌的简单染色和革兰氏染色实验细菌的简单染色和革兰氏染色实验实验目的1. 学习微生物涂片，染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。

、2. 巩固显微镜的使用方法。

基本原理1. 简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。

此法操作简单，适用于一般形态的观察。

在中性，碱性或酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以用碱性染料进行染色。

碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌结合而是细菌着色。

带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。

通常的碱性染料除了美蓝外，还有结晶紫，碱性复红，番红等。

细菌体积较小，较透明，如未经染色常不易识别，而经染色后与背景形成鲜明的对比，是易于在显微镜下观察。

2. 革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌上最常用的鉴别染色法。

该染色法所以将细菌分为G+和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。

G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透，结果细菌被脱色，在经复红染色后就成了红色。

G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时颜色。

革兰氏染色需要四种不同的溶液，碱性染料初染液，煤染剂，脱色剂和复染液。

碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力，即已某种方式帮助染料固定在细胞上，是不易脱落，碘是常用的媒染剂。

脱色剂是被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精。

复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染剂，复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的染色液是复红。